胶回收及要点心得体会
胶回收的心得体会
胶回收
1. 提高胶回收量的办法：
1) 增加电泳时的上样量。
2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。
3) 切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。
4) 把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。
5) 溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。
6) 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L的NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。
7) 加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以使乙醇充分挥发。
8) 最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的DNA。
9) 可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜，第二天再离心回收，效果不错。
10) 将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。
2. 几种PCR 产物回收的详方法和步骤
1) 普通胶回收
如果要胶回收，最好还是用试剂盒，方便，回收率也略高，实在要手工回收，可以切胶后加入3倍体积TE，水浴熔化后，酚、酚／氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可。另外好像还有冷冻法，没作过，不是很清楚。
2) 从低熔点凝胶回收DNA
纯化DNA片段加与凝胶体积相等的TE（10mmol/l Tris-HCl pH8.0，0.1mmol/l EDTA），置65℃水浴5分钟保温，使凝胶完全溶解。待放至室温，加等量酚（TE饱和，TE封在上层，取下层酚），轻轻混匀（不用混匀），12000rpm，3分钟离心。反复1-2次。取上层液，加0.1体积3mol/L醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积无水乙醇，进行乙醇沉淀。将纯化的DNA加适量TE溶解，测定含量，备用（可用于目的基因结构分析，探针制备等）。
3) 扩增特异性好的PCR回收
如果PCR扩增特异性好，只是简单的PCR产物纯化回收，可以在PCR产物中加入50ug／ml 的蛋白酶K，37度1h，酚／氯仿抽提一次，氯仿抽提一次，上清加入0.1体积的醋酸钠，
2.5体积的无水乙醇沉淀回收。
3. 不需胶回收就可直接连接的方法
1) 低温冷冻析出法
跑电泳时用低熔点的agarose胶，跑到一定时候，将目的条带所在的那一段胶切下，尽量切干净，让核酸直接暴露在胶的表面，并且，把底下没有脱氧核酸的那点胶也尽量切掉，然后放入1.5ml EP管中，然后放在负75度冰箱中10－30分钟，接着1，300rpm离心5－10分钟，取10ul上清，加入连接体系中。将其余的液体也吸出，储存在另一个管子中，做好标记，放在－20度备用。
2) 酶切后的直接连接
在你酶切后可以直接的加入连接酶和另外的片断进行连接是可以筛选出连接好的片断的
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1.琼脂糖对回收率有一定影响，如果琼脂糖较多，可以增加溶胶液，保证体系盐浓度。影响回收率的因素主要是柱子填料必须在适宜的缓冲环境中（如果用柱子的话）。对于小于１００ｂｐ的片段回收，可加至30%异丙醇。
2.如果是用PAGE回收，用水或TE溶解，枪头捣碎，过夜浸泡，即可。当然你要将100bp 在胶中位置定好切下。已标记的探针用X片，未标记的用EB。
3.选用回收效率较高的柱子，比如进口的Qiaquick spin column。
4.参照分子克隆用低熔点胶回收。除低熔点凝胶回收法外，如用一般凝胶可用透析带短暂电泳，离心管低部加玻璃棉，高速离心等方法回收DNA片段。
提高煤炭回收率的几点建议
影响资源回收率的原因探讨 放顶煤开采的资源损失与其他采煤方法类似，同样包括采区布置的损失和采煤工作面的损失两大部分。采区布置的损失包括护巷煤柱损失和构造煤损失。采煤工作面损失包括放煤损失、端头损失、初采损失和末采损失，它是放顶煤开采特殊而重要的损失。 放顶煤工作面资源损失分析： 1、放煤损失（主要损失） 根据顶煤冒落的空间位置不同，顶煤放落区可分为可放区和不可放区，可放区指打开放煤口，煤块可滚落到放煤口的范围，不可放区指打开放煤口，煤块始终不能滚落到放煤口的范围。可放区内的放煤损失主要是煤矸混合损失，因为放煤过程中不可能见矸就停放，也不可能不见矸全部停放，为了限制含矸率，总要损失部分顶煤。不可放区的顶煤损失包括两部分，一部分为煤安息角（安息角大的损失多，安息角小的损失少）之外靠采空区内的冒落顶煤，主要有放煤口至底板的落煤损失，或后部输送机槽帮至底板的浮煤损失，仰采时损失多，俯采时损失少；放煤步距过大，冒落在采空区的放煤损失，以及顶煤悬臂冒落滞后的落煤损失。另一部分为开窗式放煤支架的架门天窗与天窗间的脊背损失，对于低位插板式放煤支架，这部分损失为零，可见影响放煤损失的主要因素为：因放煤方式影响的煤矸混杂区的形成时间和形态；顶煤顶板的冒落形态和块度；支架选型和放煤步距。 人为影响因素为主的顶煤损失，我国综放工作面放煤损失统计，平均放煤损失率达12.1﹪，它是工作面顶煤的主要损失，如果认真研究不同条件下的放煤规律，合理选择放煤步距和支架形式，采区有效的放煤方式，是可以大大减少放煤损失的。放煤步距是影响顶煤放出率的主要因素，放煤步距过大，将有部分煤丢失在采空区内，放煤步距过小，将因过早混矸而含矸率增大。放煤步距除与顶煤冒放结构有关之外，还与液压支架的架型有关，一般高位与中位放煤支架均为开天窗式，放煤口大小与顶煤冒落块度有关，变化在0.7×0.9m到 2.0×0.9m 之间，因此放煤步距应与放煤口纵向尺寸相当。低位放煤支架一般为插板尾梁摆动式放煤机构，放煤口是敞开式，因此其放煤步距取决于顶煤的冒放性（顶煤冒放性是指放顶煤工作面的顶部煤体在支承压力作用下冒落的放出难易程度，亦即
汽车维修工程复习题及答案
《汽车维修工程》复习及答案题 一、名词解释 （1）汽车产品：包括整车、部件、零件。 （2）可靠性：产品在规定条件下，在规定时间内，完成规定功能的能力。 （3）可靠度：产品在规定条件下，在规定时间内，完成规定功能的概率。 （4）失效度：也称不可靠度，是指产品在规定条件下，在规定时间内丧失规定功能的概率。（5）汽车故障：是指汽车部分或完全丧失工作能力的现象。 （6）汽车的技术状况：是指定量测得的表征某一时刻汽车外观和性能的参数值的总和。（7）磨损：零件摩擦表面的金属在相对运动过程中不断损失的现象。 （8）黏着磨损：当金属表面的油膜被破坏，摩擦表面间直接接触而发生黏着作用，使一个零件表面的金属转移到另一个零件表面引起的磨损。 （9）疲劳磨损：在交变载荷作用下，零件表面产生疲劳剥落的现象。 （10）腐蚀磨损：零件摩擦表面由于外部介质作用，产生化学或电化学的反应而引起的磨损。（12）修理尺寸法：将待修配合副中的一个零件利用机械加工的方法恢复其正确的几何形状并获得新的尺寸，然后选配具有相应尺寸的另一配合件与之配合，以恢复配合性质的一种修理方法。 （13）附加零件修理法：也称镶套修理法。是通过机械加工的方法将磨损部分切去，恢复零件磨损部位的几何形状，然后加工一个套并采用过盈配合的方法将其镶在被切去的部位，以代替零件磨损或损失的部分，恢复到基本尺寸的一种修复方法。 （14）喷涂：是用高速气流将被热源熔化的金属雾化成细小的金属颗粒，以很高的速度喷敷到已准备好的零件表面上。 （15）喷焊：是用高速气流将氧-乙炔火焰加热熔化的自融合金粉末喷涂到准备好的零件表面上，并经再一次重熔处理形成一种薄而平整呈焊合状态的表面层-喷焊层。 （16）电镀：将金属工件浸入电解液中，以工件为阴极，通以直流电，在电流作用下，电解液中的金属离子析出，向工件表面扩散，并沉积在工件表面，形成金属镀层。 （17）汽车维护：采用相应的技术措施预防故障发生的作业。 （18）修理工艺过程：汽车修理可分为许多工艺作业，按规定顺序完成这些作业的过程称为汽车修理工艺过程。 （19）磁力探伤：是利用电磁原理检查铁磁性零件表面及近表面缺陷的一种无损探伤检测方法。 （20）静不平衡：是由于零件的质心偏离了其旋转轴线而引起的旋转振动现象 （21）动不平衡：是由于零件的质心偏离了其旋转轴线，或零件的惯性主轴与其旋转轴线不重合且不平衡质点还产生有力偶，从而引起的旋转振动现象 （22）汽车大修：是指发动机主要零件出现破损、断裂、磨损、变形，在彻底分解后，用修理或更换零件的方法，使其达到完好技术状况和使用寿命的恢复性修理。 （23）汽车小修：是指用修理或更换个别零部件的方法来消除发动机在运行中临时出现的故障，或针对维护作业中发现的隐患所进行的运行性修理。 （24）自动变速器失速工况：在前进档或倒档时，踩住制动踏板，并完全踩下加速踏板，发动机处于最大转矩工况，而变速器输入、输出轴静止，涡轮也是静止不动的，只有变矩器壳与泵轮随发动机转动，此工况就称为失速工况。 (25) 全面质量管理：全面的（全方位的）全员参加的，全过程的质量管理简称"三全"管理，又叫全面质量管理。
胶回收DNA注意事项
胶回收DNA注意事项 ①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。 ②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。 ③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。 ④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。 ⑤可以改用去离子水洗脱。但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。 ⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。 ⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。 ⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，
其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。 ⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。 关于胶回收切胶的一点注意事项 1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。 2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。 3. 关于防护，在一般有机玻璃后就足够了，戴上防护面具以保护眼睛，如果戴树脂眼镜就可以了。要是非常害怕紫外照射，或者对于胶有特殊要求，例如要求不含EB，可以采用点marker和带刻度的尺子一起照相的方法来确定目的条带在胶上的位置进行切胶。 4. 按照正常程序点marker跑胶，然后切下有marker的胶，EB染色，紫外灯下与带刻度的尺子一起照相。由于要回收的带与marker间的相对位置已知，根据尺子来衡量未染色胶上目的带的位置即可。如果觉得很难判断，可以直接在marker边点少量的样，这样位置就容易确定了。 胶回收
promega 胶回收完整说明书
Promega Corporation ·2800 Woods Hollow Road ·Madison, WI 53711-5399 USA Toll Free in USA 800-356-9526·Phone 608-274-4330 ·Fax 608-277-2516 ·https://www.sodocs.net/doc/bb13053062.html, Printed in USA.Part# TB308Revised 11/09Page 1 1. Description ..........................................................................................................12. Product Components and Storage Conditions ............................................33. General Considerations ....................................................................................44.Gel Slice and PCR Product Preparation .. (4) A.Preparing the Membrane Wash Solution (4) B.Dissolving the Gel Slice (5) C. Processing PCR Amplification Products (6) 5.DNA Purification (6) A.DNA Purification by Centrifugation (6) B.DNA Purification by Vacuum............................................................................76. Troubleshooting .................................................................................................97. References .........................................................................................................118.Appendix .. (11) https://www.sodocs.net/doc/bb13053062.html,position of Buffers and Solutions (11) B. Related Products (12) 1.Description The Wizard ?SV Gel and PCR Clean-Up System is designed to extract and purify DNA fragments of 100bp to 10kb from standard or low-melt agarose gels in either Tris acetate (TAE) or Tris borate (TBE), or to purify PCR products directly from a PCR amplification. Up to 95% recovery is achieved depending upon the DNA fragment size (see Table 1). PCR products are commonly purified to remove excess nucleotides and primers. This membrane-based system, which can bind up to 40μg DNA, allows recovery of isolated DNA fragments or PCR products in as little as 20 minutes, depending on the number of samples processed and the protocol used. The purified DNA can be used for automated fluorescent DNA sequencing, cloning, labeling, restriction enzyme digestion or in vitro transcription/translation without further manipulation.?Clean-Up System All technical literature is available on the Internet at https://www.sodocs.net/doc/bb13053062.html,/tbs Please visit the web site to verify that you are using the most current version of this Technical Bulletin. Please contact Promega Technical Services if you have questions on use of this system. E-mail techserv@https://www.sodocs.net/doc/bb13053062.html,.
各种胶黏剂的分类以及优缺点的介绍
白乳胶（其主要成分： 聚醋酸乙烯） a普通型白乳胶： 广泛用于木器、胶合板、水泥砂浆、纸张、布、皮革等的黏结。 b新型复合白乳胶： 用于木器、胶合板、水泥砂浆、纸张、布、皮革等的黏结。 优点： 可常温固化、固化速度较快、粘接强度较高，粘接层具有较好的韧性和耐久性且不易老化；安全、无毒、不燃、清洗方便；对木材、纸张和织物有很好的黏着力，胶接强度高；固化后的胶层无色透明，韧性好，不污染被粘接物。 缺点： 耐水性和耐湿性差，易在潮湿空气中吸湿；在高温下使用会产生蠕变现象，使胶接强度下降；在-5℃以下储存易冻结，使乳液受到破坏。 淀粉胶黏剂 代替水玻璃黏合工业用纸箱等。（但目前淀粉胶仍高于水玻璃胶价格。） 优点： 无毒、无味、对环境无污染。施胶方便，不需专门设备，一次性涂布量低。 缺点： 易霉变、虫蛀；黏度偏低，流动性较大，胶黏剂剂量不稳定；干燥速度较慢，大批量机械化作业有—定难度；储存稳定性较差，易凝胶；粘接性能偏低。 水玻璃（俗称泡花碱）
粘结力强、强度较高，耐酸性、耐热性好； 缺点： 耐碱性和耐水性差；具腐蚀性、强刺激性，可致人体灼伤。 酚醛树脂胶黏剂 a水溶性酚醛树脂胶黏剂（未改性）： 用于胶合板制造。 b醇溶性酚醛树脂胶黏剂： 用于胶合板制造、木器的粘接修补。 c改性间苯二酚-甲醛树脂胶黏剂： 适用期约16h，对木材、尼龙有一定的粘结力，主要用于粘接木材与塑料、橡胶、金属等。 d酚醛-xx腈胶黏剂： 广泛用于汽车和飞机工业中。 优点： 胶接强度高；较好的耐热、耐老化性；耐水、耐化学介质和耐霉菌，特别是耐沸水性能；尺寸稳定性好；电绝缘性能优良。 缺点： 脆性大，剥离强度低，不适于作结构胶粘剂使用；固化时间较长，固化温度高。 脲醛树脂胶黏剂 广泛用于制造胶合板、压层板、装饰板、木结构家具和碎木板等。
DNA胶回收中常见问题和解答
1、如何计算提取率 1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率； 2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比； 3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。 2、如何简易测算提取率 取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10，与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳，肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度，粗略测算回收率（如亮度只有一半时，其回收率可粗略为50%）。 3、如何看待提取得率 影响回收率的因素很多，如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等，所以不能单凭1-2次的实验来判断其质量好坏，最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验，结果相对真实。 4、回收率为什么与点样量和片段大小有关 DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。 5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因 1）胶块溶解不完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例；
2）胶块体积太大，应使用枪头捣碎，还不能充分溶解则先将其切为小块，分多次回收； 3）紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内； 4）洗涤液使用后未及时盖严瓶盖，乙醇挥发，影响回收效率； 5） TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好； 6）回收前的样品量太少，加大点样量； 7）洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。 6、加入溶胶液温浴后，液体仍很粘稠或后续步骤有堵柱子现象 1）胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并增加上下颠倒次数帮助溶胶； 2）胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，分几次回收； 3）水浴温度是否达到规定温度65℃，用温度计检测。 7、琼脂糖凝胶块不溶 1）琼脂糖质量不好； 2）含目的片断的凝胶在空气中放置过久，使胶块失水干躁，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存于4 ℃或-20℃； 3）制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
胶回收方法全攻略
胶回收方法全攻略 说到电泳凝胶的片断回收，想来在实验室久已的“老手”们都会不屑一顾。确实，一般在各个和分子生物学沾到一点边儿的实验室里，从琼脂糖凝胶中回收DNA，仅仅是一种简单不过的常规实验操作。虽说早期的凝胶电泳片断回收没有1—2个小时是搞不定的，每个实验室也有自己的独门秘诀，可后来各大品牌纷纷推出了了多种不同用途，不同价钱的快速凝胶回收试剂盒，一下子将胶回收的时间缩短到10多分钟，操作也大大简化，胶回收就变成“小菜一碟”了。然而，从bbs逛上一圈下来，发现实际上还是有不少人为胶回收这种看似简单的操作而 烦恼。到底是什么导致了实验新手，甚至是老手在这个已经发展近40年的常规性实验中卡壳?由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验——比如 酶切连接、转化筛选、测序或者PCR 扩增、标记乃至显微注射等等，为大家搜罗各种产品和方法的优缺点，注意事项，做一个胶回收全攻略篇。 一、胶回收的关键参数 胶回收的质量直接影响后继实验的成功与否。要想做好胶回收，无论是自己亲力亲为还是借助目前五花八门的胶回收试剂，最基本的评定标准无外乎这么几个:质量( 回收产物的纯度和浓度)，回收效率，操作方便(速度)，柱子的载量等等。 回收产物质量：回收产物的质量主要指纯度。常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，会强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。从凝胶中回收DNA片断，产物的纯度自然是我们考虑的第一要务。对于大片断DNA回收，质量还包括了产物的完整与否，如果机械剪切力使得回收产物大小不一致，后果决不是你希望碰见的。而对于较小片断回收，质量其实还包括了回收产物的浓度。因为产物浓度太小，对后继实验同样也有影响，比如连接、标记实验等等就很不爽，往往不得不再浓缩一次，增加了操作的复杂性。此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。 回收率：回收得率，是我们考虑的另一个重要参数。由于上电泳的样品量通常都很少，电泳的过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低;又比如说，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。值得注意的是，由于样品的大小和多少对回收率都有显著的影响，所以回收率并非是一成不变的。 其他：操作方面，相信大家都会比较喜欢操作简单，快速，应用起来方便的方法或者产品。比如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计;离心过柱就比离心沉淀要简单方便。载量，就是每次回收最多能回收的产物的量。这个自然是越大越好了，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质，过量的产物吸附不了就是被浪费掉的。难免有时你需要回收比较大量的产物，大载量就很有优势——同一个片断你要用2个柱子，多郁闷啊。
厌氧胶比较常见问题及处理
厌氧胶比较常见问题及处理 随着工业的快速发展，厌氧胶已成为机械行业不可缺少的液体工具，而且厌氧胶在航空航天、军工、汽车、机械、电子、电气等行业有着很广泛的应用。在广泛的应用中，我们总会遇到关于厌氧胶各种各样的问题，如它的固化时间、它的包装、它的颜色等，下面我们一起来看看比较常见的问题，并解决这些问题。 1、可以用什么溶剂来清除液态厌氧胶产品？ 回答：大多数有机溶剂都对去除厌氧类和丙烯酸类产品有效。氯类溶剂是最常用的。 2、厌氧胶类产品需要多长的固化时间？ 回答：厌氧胶不含溶剂（溶剂需要干）。厌氧胶的固化必须接触到金属离子并且在缺氧状态。在粘接点外部，厌氧材料无法完全固化。粘接点内部，固化速率取决于产品和促进剂的种类，加热可以加速固化过程。 3、为什么50ml和250ml的厌氧胶其瓶子仅装一半？ 回答：实际上其瓶子里已经有50ml和250ml的产品。仅装一半的瓶子是为了让空气起到隔绝的作用，以防止厌氧胶固化。50ml和250ml 瓶子设计同时让空气渗入以让厌氧胶进行呼吸作用。 4、颜色代表什么意义？ 回答：厌氧胶经常被称为“红色或蓝色物品”。对于螺纹锁固胶，颜色代表强度。通常红色代表高强度，蓝色代表中强度，紫色代表低强度。其他颜色在不同产品领域中代表不同强度。 5、厌氧胶在冬季变得很稠，固化速度也比较慢？ 回答：这是缺氧胶的固有特性，气温降低，粘度变大，固化时间延长。在-5℃以下如用于非活性金属，会出现固化不完全；气温升高，粘度变小，固化时间缩短。如将操作地点改在温暖的环境，问题可解决。 6、有用户反应经常使用的缺氧胶突然锁紧强度下降？ 回答：经调查，有的客户为防止库存螺纹件生锈而涂上防锈油或其它油，或要求供货商所供螺纹件涂上油脂，装配时又未作除油处理所致。经除油处理后问题解决。
琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法
琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法 琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法20世纪70年代是一个奠定现代分子生物学的时代，1973年冷泉港实验室的Joseph Sambroo k和Phillip Sharp发明了利用琼脂糖凝胶分离DNA 和EB染料观测DNA 相结合的技术。现在，琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。这里首先介绍的是琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法： 1.柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上包埋有纯化填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲液洗脱。全程不过10多分钟，得到的产物溶液可以直接用于后继实验。这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果，也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。但是这个方法不适合用于大片断的回收。 2.玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒：这个方法比前面的方法更为灵活，可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量，使得实验不受限于柱子的载量，也不会造成浪费。前面的操作步骤和上者一样，将电泳凝胶的条带切下，Buffer溶解，（区别在于这里）加入纯化填料填料吸附混合，快速离心沉淀去上清，洗涤沉淀后，干燥沉淀，最后用洗脱液纯化介质中吸附的片断释放出来，离心，取上清，
就是回收的产物。这个方法适合各种不同大小的片断，特别是大片断的回收，但是操作就较前者复杂一些，涉及到多次离心沉淀和取上清，有可能会误吸了微量的沉淀；另外干燥的程度也有点技巧，干过了不好洗脱，没干透又影响结果。后来的改进版本有将混合了纯化介质后的凝胶溶解液加入到一种离心过滤柱上，这种柱子不带纯化填料，只有一层过滤膜，离心过滤后，填料在柱子里，溶液被甩掉，这样就避免了上述的问题。 3.低熔点琼脂糖：传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，由于乙醇沉淀需时较长，现在用的人已经不多了。想当年经费紧张的时候，低熔点琼脂糖贵，不舍得这么浪费的，比较取巧省钱的法子就是常规琼脂糖电泳后，在目的条带前方挖槽，灌入低熔点琼脂糖，凝胶后再电泳一小会儿，等条带进入低熔点琼脂糖区域再将那块家伙切出来，就可以非常非常节约了。除了直接酚抽低熔点琼脂糖凝胶，还有人用琼脂糖酶来消化琼脂糖凝胶，条件也相当温和，只是那酶价格并不便宜（光那酶的成本就至少5-6块，还不算其他的麻烦事），多数的酶只适合用低熔点琼脂糖，问题是我不用酶也可以直接酚抽，费时间还特长，所以，并不觉得特别好用。后来据说T家的琼脂糖酶可以用于常规琼脂糖，前提是你有办法在65度把那胶化了。但那需要极好的耐心。
E.Z.N.A Gel Extraction Kit 琼脂糖凝胶回收试剂盒 中文 说明书
琼脂糖凝胶回收试剂盒E.Z.N.A Gel Extraction Kit 适合于D2501-**,D2500-**&D2502-** 准备工作 1. 浓缩的SPW Buffer需用乙醇按如下稀释: D2500-00&D2501-00&D2502-00 加入20ml 100%的乙醇; D2500-01/02&D2501-01/02&D2502-01/02 每瓶加入100ml 100%的乙醇; 注意:稀释后的DNA Wash Buffer需室温保存;所有步骤必须在室温下进行. 操作方案 配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段.任何类型或等级的琼脂糖都可以使用. 我们强烈的推荐使用新鲜的TAE/TBE电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液,旧的电泳缓冲液PH会增加而降低DNA的回收产量; 2. 电泳足够时间后,在紫外灯下小心地把所需的DNA片段切下来.并尽量去除多余的凝胶. 注意:DNA在紫外灯下的曝光的时间不要超过30秒,同时在紫外灯下操作的时候一定要戴保护眼镜. 3.称取空离心管的重量,切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量,求出凝胶块的重量,近似地确定其体积.一般情况下,凝胶的密度为1g/ml,于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算:凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml;加入等倍凝胶体积的Binding Buffer,把混合物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶完全融化,其间每隔2-3分钟混匀一次; 重要提醒:在凝胶完全溶解之后,注意凝胶-Binding Buffer混合物的pH值.如果其pH值大于8的话,DNA的产量将大大减少.观察混合物的颜色,如果是橙色或红色,则要加入5μl 浓度为5 M,pH为5.2的醋酸钠,以调低其pH值.经过这一调节,该混合物的颜色将恢复为正常的浅黄色.一般情况下,使用新鲜的电泳缓冲液,凝胶-Binding buffer混合物的PH值的不会升高; 4.转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个HiBindTM DNA柱子,并把柱子装在一个干净的2ml收集管内,室温下,10,000×g离心1min,弃去液体. 一个HiBind DNA柱子最多可容纳700μl的溶液,如果DNA-琼脂糖混合物的体积大于700μl,可先转移700μl溶液至柱子,离心完后,将余下的溶液继续加上柱子上.但是每一个HiBindTM柱子最多可以结合25~30μg DNA.如果预期产量较大,则把样品分别加到合适数目的柱中. 5. 将柱子重新套回收集管中,加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中;室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;这一步相当关键,不要忽略此步. 6.将柱子重新套回收集管中,加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;注:SPW Wash buffer在使用前必须按瓶子标鉴要求用无水乙醇进行稀释. 7. 将柱子重新套回收集管中,重复加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟, 弃去滤出液;,将空柱子重新套回收集管中,10,000×g离心1min以甩干柱基质残余的液体. 这步可以去除柱子基质上残余的乙醇,不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的. 8. 把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上,10,000×g离心1分钟,离心管中的溶液就是纯化的DNA产物,保存于-20度. 如果再洗脱一次的话可以把残余的DNA洗脱出来,不过那样的浓度就会较低. DNA的产量及质量:把纯化产物的样品稀释一定的倍数后,分别在260nm和280nm下测其光吸收值,回收得到的DNA的浓度可按以下公式来计算: DNA浓度=光吸收260×50×稀释倍数μg/ml长度大于500bp的片段通常能纯化得到80%的产量. 而50bp~500bp的带则可达到55%~80%的回收率.(光吸收260/光吸收280)的比率是核酸纯度的一个标记.如果此值1.8,则意味着核酸的纯度>90%.另一方面,如果纯化产物的产量较低时,可以用琼脂糖EB电泳估算产物的浓度.载体
加强采掘工程管理提高煤炭回收率的管理规定-最新范文
加强采掘工程管理提高煤炭回收率的管理规定 第一项管理规定 1、优化采区设计,减少煤炭损失。采区设计前,地质测量部门必须按《规程》要求提供采区地质说明书,设计部门根据地质资料,制定优化采区设计方案,经充分论证后,在煤柱尽可能减少的前提下,确定合理的采区主要巷道布置形式和采区边界。 2、在采区设计的基础上,根据现有的回采工艺,确定合理的采面参数和回采巷道布置方式,采面切巷长度在便于组织正规循环作业的前提下适当加长。回采巷道必须沿底布置,采面运输巷在地质构造变化时,为保证运输设备正常运转,运输巷允许留适当底煤,所有丢底煤区都要及时上图,为回采时落底提供依据。采区内区段之间应采用沿空送巷布置,不留煤柱,减少煤炭损失。 3、加强回采巷道的施工管理,保证严格按设计施工。掘进队在施工过程中,地质测量部门要每20～30米对顶底煤厚进行一次钻探,有地质构造时适当加密,并及时上图（1:500平剖面图）做好记录。 4、采面初采初放期间,综采工作面顶煤尽量放净,炮采工作面顶煤厚度小于2米,老塘侧未充填梁头以上,严禁放顶煤;顶煤厚度大于2米且直接顶能及时垮落充填老塘侧梁头以上时,老塘侧应进行放顶煤,减少采面初采期间的煤炭损失。 5、采面正常生产期间,切巷每向前推进5米,采煤队至少探一次底煤厚度,矿地测部门每旬组织一次对切巷顶底煤厚度探
测,根据采面送巷时的探煤厚记录,如有底煤,必须制定措施,及时落底,提高煤炭回收率。 6、坚持实行分段间隔多轮放煤方法。根据不同的煤厚条件,确定合理的放煤步距、放煤顺序、间距、轮次数,严格控制每轮次的放煤量,保证均匀放煤,顶板均衡垮落。在搞好工程质量的前提下必须放净端头处的顶煤。 7、制定煤炭回收率考核管理办法。地测科根据已掌握的顶底煤厚度,每月计算一次回采率,回采率低于85%时,要组织分析原因,回收率的高低必须和采煤队的吨煤单价挂钩,充分调动采煤队的生产积极性,回收率的统计、计算、填写三量报表由地测科负责。 8、采区、工作面未按设计要求提前结束及工作面遇地质变化迁巷时,地测科应对损失量做出统计,并写出书面报告,按《规程》规定权限报损。 第二项责任划分及处罚 1、生产矿长、总工程师对认真贯彻上级部门及国家有关政策规定,正确开采,保证回收率到达要求,负直接责任,回收率达不到规定的,对生产矿长、总工程师给予警告处分,根据情节轻重处予500～1000元罚款。 2、技术科（总工程师室）对采区,工作面开采设计的先进性和合理性负责。设计时要充分考虑矿井的地质条件和已揭露的地质资料,选择合理的巷道布置方式。因设计不当造成的不合理损失,对设计者和审查者给予通报批评,并处予200～500元的罚款。
不锈钢及金属管道密封胶
密封胶又名无氧胶、厌氧胶、机械胶，它与氧气或空气接触时不会固化，一旦隔绝空气后就迅速聚合变成交联状的固体聚合物，可以作用于不锈钢及金属管道。下面由螺纹密封胶产品销售中心曼伦自动化为大家介绍一下这款产品的主要类型有哪些，帮助大家对该产品有正确的把握。 密封胶粘剂是由多种成分组成，特别是单体千变万化，其中每种成分的变化都有可能获得新的性能，因此厌氧胶的品种甚多，其分类方法也不统一。一般情况下可按单体的结构、单体的类别和强度、粘度分类，也有按用途分类的。较常见的分类方法是按单体的结构和用途分类法具体地说，按其结构可分为四类。
（1）醚型以双甲基丙烯酸三缩四乙二醇酯为代表的结构。 （2）醇酸酯常见的有双甲基丙烯酸多缩乙二醇酯；甲基丙烯酸羟乙酯或羟丙酯。 （3）环氧酯其由各种结构的环氧树脂与甲基丙烯酸反应的产物。常见的有双酚A环氧酯（如国产Y-150、GY-340等是环氧酯与多缩乙二醇酯的混合物）。 （4）聚氨醋其由异氰酸酯、甲基丙烯酸羟烷基酚和多元醇的反应产物。实际上厌氧胶的产品很多是混合物或是复杂的组成物，是难以简单分类的。 还有一种分类方法，按用途可分为紧固件锁紧和密封、法兰面和
管接头的密封、粘接固持和浸渗堵漏等。这种分类方法简单明了，易记易用，特别容易为用户所接受。尽管胶种有多种用途，但总有一种主要的用途可以作为分类的依据。 安徽曼伦自动化设备有限公司是一家专业代理经销品牌工业电气自动化产品服务商，集科工贸于一体的系统集成商，公司代理汉高旗下经营汉高旗下乐泰Loctite、泰罗松teroson等厌氧胶、快干胶、聚氨酯、硅橡胶等粘合剂。 同时，该公司广泛服务于汽车、电力、电子、冶金、化工、太阳能、水泥、造纸、船舶、卷烟、纺织、机床、包装机械、印刷机械、橡胶机械、物流设备等行业，以货期快，服务好，价格优惠等优势赢得了广大客户的支持与信任。如果您想进一步了解，可以直接点击官网曼伦自动化进行在线咨询。
胶回收
除了选择合适的方法外,实验中还要注意以下几点: (1)防止抽提过程中污染DNA酶 与回收片段接触的试剂与器皿等都应进行灭菌(酶)处理,即使是不能用干热或湿热法灭菌的器皿也要用乙醇浸泡以灭杀活菌与DNA酶,不然可能发生回收片段部分降解的现象,有时甚至一无所获.即使是轻微的降解反应——当发生在粘性末 端时也会导致严重的连接困难. (2)紫外照射选择长波段 回收过程往往需在紫外等监测下进行,与一般观察电泳结果不同的是这时应用长波紫外灯.因为短波紫外线(254nm)会引起DNA的断裂或是形成TT二聚体,前者会使以后的连接与转化等实验失败,后者可能造成基因突变,给克隆工作带来麻烦.即使是使用了长波紫外照射,回收DNA时也要尽量短时照射,避免连续长时间照射. (3)实验操作要轻柔 特别在处理较大片段时应防止机械剪切作用DNA对的破坏,如吸取液体,转动离 心管等操作均应缓慢,轻柔. 综上所述,只有在合适的回收方法基础上注意具体操作步骤是才能有效回收所需片段,为以后的酶切,连接,标记等工作打下良好基础. 3 实验步骤 一、试剂盒法(Kit回收法,以上海申能博彩生物科技有限公司生产的试剂盒为例) (1)从电泳板上切割含目的DNA片段的凝胶块(割胶尽可能的小,提供后续回收效率) (2)凝胶称重后并将其放入1.5ml管中,将其适当切小,加速溶解.每100mg凝胶加入400μl solution SN.(若称重省略,一般加入400μl SN) (3)凝胶溶解:55-60℃,保温5-10分钟,每2分钟混匀一下,使凝胶溶解,胶完全融化后每400μl solution SN中加入solution B 100μl,混匀. (4)将3S柱装入2ml洗管,将上述混合液转移至3S柱,室温放置2min.室温10 000 rpm离心1分钟,稳定45秒. (5)取下3S柱,倒掉收集管中的废液,将3S柱放入同一收集管中,加入600μl Wash Solution,室温10 000 rpm离心1分钟. (6)重复步骤5一次. (7)取下3S柱,倒掉收集管中废液,将3S柱放入同一收集管中,室温10 000 rpm 离心2分钟. (8)将3S柱放入新的离心管中,在3S柱子膜中央加30μl ddH2O,不加盖室温放 置2分钟. (9)盖上离心管,室温10 000 rpm离心1分钟,离心管中的液体即为回收的DNA 片段. 胶回收 一. 提高胶回收量的办法： 1) 增加电泳时的上样量。 2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。
PCR产物胶回收实验
实验六 PCR产物胶回收实验 一、实验目的 1. 掌握胶回收的常规操作 2. 了解胶回收PCR产物的目的 二、实验原理 利用胶回收试剂盒纯化PCR产物。本试剂盒提供一个从TBE或TAE电泳缓冲液配制的琼脂糖凝胶中提取高质量DNA的简单、快速、有效的技术，适合从浓度≤3%，高，低熔点琼脂糖凝胶中，回收长度为60bp~23Kb的DNA片段，小于100bpDNA片段回收率为10%~55%，0.1~10kbDNA片段回收率最大为99%，大于10kbDNA片段回收率为20~70%。回收的基因组DNA可以应用到克隆，测序，限制性酶切等各类下游分子生物学实验。 三、试剂及配套设备和材料 3.1 试剂 Extraction buffer Wash buffer Elution buffer 3.2 配套设备和材料 无菌1.5ml离心管各种规格移液器和无菌移液器吸头 无水乙醇异丙醇可能需要3M KAc (pH 5.0) 离心机 四、基本技术参数 五、操作步骤 1. 用干净、锋利的手术刀，将含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶切下，并放入1.5或 2.0 ml离心管中。 请尽量切去不包含DNA片段的凝胶。一般情况下，电泳的DNA上样量≥50 ul （50ul为最终洗脱体积）。
2. 按1：3的比例（凝胶质量毫克数：融胶液体积微升数）加入Extraction buffer。 例如：100mg凝胶应加入300ul Extraction Buffer。对于每人份试剂用量，凝胶质量不能超过400mg。 3. 于恒温水浴或金属浴中50℃温育，直到凝胶融化。 一般温育时间为10分钟，温育过程中没隔2-3分钟混匀一次。如果温育后，混合液体颜色变紫，请加入10 ul 3M KAc （pH 5.0），使混合液颜色变回黄色。 4. 可选：按1：1的比例（凝胶质量毫克数：异丙醇体积微升数）加入异丙醇，并混合均匀。 如DNA片段大于500bp/小于4kb，不需要加异丙醇。 5. 将混合液全部转移到Spin column内，于6,000g离心1分钟，并弃去接液管内液体。 如混合液体积大于750ul可先转移750ul，其余的液体待离心弃液后，再转移。 6. 向Spin column内加500ul Extraction Buffer，于12，000g离心30~60秒，并弃去接液管内液体。 7. 向Spin column内加750ul Wash Buffer，于12，000g离心30~60秒，并弃去接液管内液体。 如果回收的DNA片段将用于盐浓度敏感的实验，请在加入Wash buffer后静置2~5分钟，再离心。 8. 再次于12,000 rpm离心1分钟，然后将spin column转移到无菌的1.5ml离心管中。 如不进行该步离心，则无法保证离心柱内残液被彻底清除。 9. 向Spin column内加50ul Elution Buffer、水或TE溶液，并于室温静置1分钟。 可根据实验的实际需要决定Elution Buffer用量。但不要低于20ul。 10. 于12，000g离心1分钟，微量离心管内溶液中含有目的DNA片段。 回收的DNA可直接用于各类下游分子生物学实验，如果不立即使用，请保存于-20℃。 六、注意事项 1. 为了保证没有外源DNA的污染，电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌。 2. 为了减少胶的体积，我们可以用相对比较薄的胶来跑电泳，这样可以减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
提高煤炭资源回收率
山西XX有限公司多措并举提高煤炭资源回收率煤炭是不可再生的资源，提高煤炭资源回收率具有重要的意义。近几年来，山西XX煤业有限公司全体干部职工牢固树立安全发展、节约发展理念，在煤炭生产中，从各环节和流程入手，着力提高煤炭资源回收率，努力实现资源回收最大化。 近年来，随着煤炭资源的不断开采，我矿面临采场深，通风系统复杂，生产接续紧张、现场条件恶劣等不利因素。生产过程中我们坚持2#与3#薄煤层联合布置、交替开采、正规开采与边角回收相结合，采用边采边撤三角煤布置、窄条带采、跳眼开采、梯形开采等多种技术工艺，煤炭资源回采率达到了96%。 一、以科技创新提高煤炭资源回收率。 加强新型技术工艺的推广应用，提高科技贡献率。积极发挥地测技术管理的作用，采取先进手段超前探测和预报，为开拓布局和掘进施工提供全面准确的地质资料信息，减少无效进尺；积极推广无煤柱开采工艺，合理选取支护方式，减少煤柱损失； 我矿为了使极薄煤层节约开采，最大限度减少资源浪费，对0.5－1米的极薄煤层推广使用薄煤层综采设备，突破了1.3米以下厚度煤层无法使用综采的技术难题；为提高资源回收率，创新推行了工作面带采煤柱法，掘进头推行分打分装制度，加强回采工作面的浮煤管理，回采工作面根据现场实际制订回收标准，并严格验收，达不到标准的不允许回采推进，对边角煤采用炮采及时回收，使煤炭资源实现最大开采利用。每年多回收煤炭在6万吨左右。
二、强化教育，树节约意识。 我矿成立了以总工程师为组长的资源回收领导小组，先后制定完善了《加强煤炭资源管理的实施办法》、《关于工作面浮煤回收的规定》等管理措施，为日常管理提供了制度保证。矿上常年利用广播、电视及板报、组织矿区职工开展宣讲等形式，在全矿深入宣传《矿产资源法》、《煤炭法》等法律法规，帮助广大干部职工树立爱惜资源、保护资源的意识。在实际管理中，我矿充分运用经济杠杆的调节作用，成立煤质专项检查组，对井下各采煤工作面采高、清理浮煤、挖底煤、采顶煤等工作纳入检查范围。检查结果与采煤区队效益直接挂钩，有效调动了职工深挖资源的积极性。 三、精打细算，优化设计。 从源头上抓好资源开采。在工作面设计布置上，本着“长、多、大、高”的原则，加大走向长度和倾斜长度，改变综采工作面两巷始终平行布置的传统做法，采取直角梯形、折线形、沿断层和工作面不等长布置等灵活多样的形式。我矿2009年工作面倾斜长度为130米，走向长度为650米，2010年工作面倾斜长度增加到220米，走向长度增加到800米。有效减少了工作面留设煤柱的个数和掘进进尺。按每个工作面留煤柱800×10×2×1.3=2.08万吨计算，每年回采2个工作面计算，每年多采煤炭资源4万多吨。