YYT 1182-2010 核酸扩增检测用试剂(盒

YY/T 1182-2010 核酸扩增检测用试剂（盒）

核酸扩增检测用试剂（盒）

1范围

本标准规定了核酸扩增检测试剂（盒）【以下简称“试剂（盒）”】的术语和定义、命名和分类、技术要求、试验方法、标识、标签和说明书、包装、运输和贮存等。

本标准适用于核酸扩增检测试剂（盒）的质量控制。核酸扩增检测试剂（盒）应包括核酸提取、核酸扩增及产物分析试剂组份，如核酸扩增检测试剂（盒）内不含有核酸提取组份，应由生产企业说明或指定提取试剂（盒）。

本标准不适用于基因分型、基因芯片和病毒基因分型/突变检测用试剂（盒）及血源筛查的试剂（盒）。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T21415-2008 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性

3术语和定义

以下术语和定义适用于本文件。

3.1 聚合酶链反应polymerase chain reaction,PCR

聚合酶链反应或多聚酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。

3.2 PCR杂交（膜上、板上）PCR hybridization

具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA）可以通过氢键的方式，按碱基互补配对原则相结合，探针结合于特定核酸序列或PCR产物的杂交过程可以在液相中进行，也可以将其中一个固定在固相载体上进行。

3.3 PCR 电泳PCR electrophoresis

根据PCR产物分子质量和所带电荷的不同在电场中进行分离的技术。

3.4 实时荧光PCR real-time polymerase chain reaction,PCR

在PCR过程中利用荧光染料释放的荧光定量的变化直接反映出PCR扩增产物量的变化，荧光信号变量与扩增产物变量成正比，并通过对荧光的采集和分析以达到对原始模板量进行分析的PCR。

注：在每个循环中检测扩增产物是否可被检测。

3.5测量系统的线性linearity of a measuring system

给出的测量结果与样品中被测量的值直接成比例的能力。

注1：对与体外诊断医疗器械，线性相关于测量结果在一给定测量范围经校正或线性化以后的测量示值。

注2：线性通过测量包含被测量已知配方或其间相对关系（不必绝对知道）的样本来评估。当测量结果相对被测量绝对或相对数值作图时，所画曲线对直线的符合程度及线性度的量度。

3.6样本线性linearity of series diluted samples

对高浓度样本进行系列稀释，得到的检测浓度对数值与稀释比例之间相关。

3.7分析特异性analytical specificity

测量程序只测量被测量的能力。

3.8测量精密度precision of measurement

在规定条件下，相互独立的测量结果间的一致程度。

注1：测量精密度不能用于被测量有关的数字值表示，在指定目的下只能以“足够”或“不足”进行描述。

注2：精密度的程度通常与精密度相反的测量不精密度统计量表示，如标准差和变异系数。注3：给定测量程序的“精密度”可以根据特定的精密度条件进行分类。“重复性”与基本不变的条件有关，常称为“序列内精密度”或“批内精密度”。“重现性”与条件改变有关，如：时间、不同实验室、操作者和测量系统（包括不同校准和试剂批号）。

3.9计量学溯源性metrological traceability

通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。

注1：通过校准传递方案确定的（参考）测量程序实现每一步比较。

注2：溯源性有几种类型。本标准使用术语“计量学溯源性”。

3.10检测限detection limit,limit of detection

样品中以一定概率可被申明与零有差异的被测量的最低值。

注1:也被描述为“最低检测限”（minimum detectable concentration）(或剂量或值)。

注2：有时被不正确地指作分析灵敏度。

注3：本标准中的最低检测限为区别于零的不低于95%可信区间的最低浓度。

3.11定量限limit of quantitation

给定分析程序能定量检测分析物的最小浓度或量。

3.12阈值循环数Ct（Cp）cyclethreshold,crossing point

实时监测扩增过程中，反应管内的荧光信号到达指数扩增时经历的循环周期数。主要的计算方式是以扩增过程前3到15个循环的荧光值的10倍标准差为阈值，当荧光值超过阈值时的循环数则为阈值循环数（Ct）。

3.13基因型genotype

一个有机体的遗传组成，即明确界定具体等位基因位点的基因组。

3.14内标internal control

在同一反应管中与靶序列共同扩增的一段非靶序列分子，其目的是鉴别仪器故障、试剂因素、聚合酶活性因素或样本中存在抑制物等造成的结果不理想的原因。

4命名和分类

4.1命名

***核酸（DNA或RNA）扩增检测试剂（盒）(方法学)。

4.2分类

可按如下方式分类：

a) 根据核酸扩增检测分析采用的方法学原理分为：实时荧光PCR试剂（盒）、RT-PCR试剂（盒）、PCR杂交检测试剂（盒）、PCR-电泳法检测试剂（盒）等。

b) 根据对试验结果的判定可分为：定量和定性。

5技术要求

5.1外观

外观应满足以下条件：

a) 试剂（盒）应符合生产企业规定的外观要求；

b) 试剂（盒）应组份完全，包装外观清洁、无泄漏、无破损；标志、标签字迹清楚。

5.2溯源性

生产企业应根据GB/T 21415-2008及有关规定提供所用核酸标准品的来源、溯源的赋值过程和相应要求，以及测量不确定度等内容。

5.3 测量系统的线性

5.3.1样本线性

线性相关系数︱r︱≧0.980。

5.3.2试剂（盒）系列标准品线性

试剂（盒）标准品应不少于4个浓度，宜包含线性范围上限和下限，线性相关系数︱r︱≧0.980。

5.4准确度

5.4.1定性试剂

对阳性参考品进行测定，检测结果应为阳性。

5.4.2定量试剂

准确度应符合如下要求之一：

a) 检测国家标准品（或参考品）/国际标准品（或参考品），绝对偏差不超过±0.5个对数数量级；

b) 回收试验：回收率在85%~115%范围内。

5.5分析特异性

分析特异性应满足以下要求：

a) 检测一定数量的不含被测物的样本，结果应为阴性；

b) 检测可能引起非特异反应的样本，如与被测物种属相近、感染部位相同或感染症状相似的其他样本，结果应为阴性。

5.6亚型检测能力

检测生产企业规定试剂检测范围内国内常见亚型，应能检出。

注：只有当分析物具有不同亚型时应满足此项要求。

5.7 精密度

5.7.1定性试剂

批内精密度应符合Ct值的变异系数（CV,%）≦5%

5.7.2定量试剂

批内精密度应符合检测浓度对数值的变异系数（CV,%）≦5%。

5.8 检测限/定量限

5.8.1定性试剂

检测限应符合生产企业声称的值。

5.8.2定量试剂

定量限应符合生产企业声称的值。适用时，检测限应符合生产企业声称的值。

5.9 干扰物质

对血液样本，检测含有生产企业规定浓度的干扰物质如血红素及其代谢产物、脂血等样本，及含过量EDTA抗凝剂的样本，应符合生产企业规定的要求。

5.10稳定性

可选用以下方法进行验证：

a) 效期稳定性：生产企业应规定产品的有效期。取到效期后的样品检测测量线性、准确度、分析特异性、亚型检测能力、精密度、检测限/定量限、干扰物质，应分别符合5.3、5.4、5.5、

5.6、5.7、5.8、5.9的要求。

b) 热稳定性试验：测量线性、准确度、分析特异性、亚型检测能力、精密度、检测限/定量限、干扰物质，应分别符合5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9的要求。

注1：热稳定性不能用于推导产品有效期，除非是采用基于大量的稳定性研究数据建立的推导公式。

注2：根据产品特性可选择a),b)方法的任意组合，但所选用方法宜能验证产品的稳定性，以保证有效期内产品性能符合标准要求。

6试验方法

6.1外观

在自然光下目视检查外观，结果应符合5.1的要求。

6.2溯源性

生产企业提供的溯源性资料应符合5.2的要求。

6.3测量系统的线性

6.3.1样本线性

在生产企业规定的线性范围内，取接近线性范围上限的高值样本按一定比例（例：5倍或10倍）稀释为至少5种浓度，其中低值浓度样本需接近线性范围的下限。按试剂（盒）说明书进行操作，将每一浓度样本重复检测3孔，计算每一浓度的对数值和Ct均值，以浓度的对数值为Y，Ct均值为X,进行线性拟合，计算其线性相关系数r,结果应符合5.3.1的要求。6.3.2试剂（盒）系列标准品线性

按试剂（盒）说明书进行操作，试剂（盒）中每一标准品重复检测3孔，计算每一标准品的标示浓度的对数值与Ct值的均值，以浓度的对数值为Y, Ct均值为X,进行线性拟合，计算其线性相关系数r，结果应符合5.3.2的要求。

6.4准确度

6.4.1定性试剂

对阳性参考品进行测定，检测结果应符合5.4.1的要求。

6.4.2定量试剂

建议按如下优先顺序，采用下列方法之一测试定量试剂（盒）的准确度，应符合5.4.2的要求。

a) 绝对偏差

用试剂盒对参考物质或有证参考物质（CRM）和相应的参考测量程序按照符合GB/T 21415-2008规定的溯源顺序进行测试，重复测定3次，取测试结果均值（M）,按公式（1）计算绝对偏差（B）,结果应符合5.4.2a)的要求。

或用有参考方法定值的高、中、低3个浓度的样本（可参照EP6-A的要求适当添加被测物，以获得高浓度的样品）对试剂（盒）进行测试，每个浓度样品重复测定3次，分别取测试结果均值，按公式（1）计算绝对偏差，结果应符合5.4.2a)的要求。

B=M-T (1)

式中：

B-绝对偏差；

M-测试结果均值；

T-参考物质标示值，或各浓度人血清定值。

b)回收试验

在样品中加入一定体积标准溶液（标准溶液体积与样本体积比应不大于1:20，或其体积比不会产生基质的变化，加入标准溶液后样品总浓度必须在试剂（盒）测定线性范围内），重复测定3次，取平均值，按公式（2）计算回收率，结果应符合5.4.2b)的要求。

R=c×(V0+V)-c0×V0×100% (2)

V×cs

式中：

R-回收率；

V-加入标准溶液的体积；

V0-样品的体积

c-样品加入标准溶液后的测定浓度

c0-样品的测定浓度

cs-标准溶液的浓度

6.5分析特异性

检测可能引起非特异反应的样本，如与被测物种属相近、感染部位相同或感染症状相似的其他样本，结果应符合5.5的要求。

6.6亚型检测能力

检测生产企业规定实际检测范围内国内常见亚型样本，样本个数应至少一个亚型有一个样本，检测结果应符合5.6的要求。

6.7精密度

6.7.1定性试剂（盒）

用至少高、低2个浓度水平的样本各重复检测10次，计算Ct值变异系数（CV,%）,结果应符合5.7.1的要求。

6.7.2定量试剂（盒）

用至少高、低2个浓度水平的样本各重复检测10次，其浓度对数值变异系数（CV,%）应符合5.7.2的要求。

6.8检测限/定量限

6.8.1定性试剂

检测生产企业生产浓度值的样本20次，至少17次检测结果符合5.8.1要求。

6.8.2定量试剂

检测生产企业声称浓度值的样本25次，至少22次检测结果符合5.8.2要求。

6.9干扰物质

按照生产企业规定的方法进行检测，结果应符合5.9的要求。

6.10稳定性

可选用以下方法进行验证：

a)效期稳定性：取到效期后的样品进行检测，应符合5.10a)的要求。

b)热稳定性试验：取有效期内样品按生产企业规定的方法进行检测，应符合5.10b)的要求。7标识、标签和使用说明书

7.1标识、标签

试剂（盒）外包装上的标识、标签应至少包括以下内容：

a)产品名称、型号或规格；

b)生产企业名称、地址、联系方式；

c)医疗器械注册证书编号；

d)产品标准编号；

e)主要成份；

f)产品用途、适用范围；

g)贮存方法；

h)生产日期或批号，有效期限。

7.2使用说明书

试剂（盒）包装内应放置使用说明书，使用说明书应至少包括以下内容：

a)产品名称、型号或规格；

b)生产企业名称、地址、联系方式及售后服务单位；

c)《医疗器械生产企业许可证》编号、医疗器械注册证书编号；

d)产品标准编号；

e)主要成份；

f)产品用途、适用范围；

g)注意事项；

h) 详细使用说明；

i) 贮存方法；

j)生产日期或批号，有效期限。

8包装、运输和贮存

8.1试剂（盒）应采用适宜的包装容器。

8.2试剂（盒）的包装应能满足合同规定的要求，保证产品包装在长途运输中不受损坏，不泄漏。

8.3试剂（盒）应在符合规定的条件下贮存。

附录A

(规范性附录)

对体外诊断用HIV、HBV、HCV核酸扩增检测试剂盒产品设计要求

体外诊断用HIV、HBV、HCV核酸扩增检测试剂盒产品设计要求：

a)在产品设计中，应加入全程参与的内标；

b)在扩增检测前，样品（含质控品、标准品）应进行核酸提取、纯化；

c)核酸加样体积不小于20ul;总反应体积不小于40ul.

UU核酸检测试剂盒产品使用说明书

解脲脲原体（UU）核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法）说明书 【产品名称】通用名称：解脲脲原体（UU）核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 英文名称：Detection Kit for Nucleic Acid of Ureaplasma urealyticum (PCR-fluorescence probing) 【包装规格】 32人份/盒 【预期用途】本试剂盒用于定性检测尿道、生殖道分泌物拭子样本中的解脲脲原体核酸成分，主要用于解脲脲原体感染的临床辅助诊断。根据相关文献研究，解脲支原体有14 株脲原体标准血清型可分为微小脲原体（Ureaplasma parvum，UP）1、3、6、14 和解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum，UU）2、4、5、7、8、9、10、11、12、13，其中UP为条件致病菌，致病性与其含量有关，且普通人也有携带少量UP。UU是引起非淋球菌性尿道炎、阴道炎等病症的主要致病菌之一，也是引起输卵管炎、盆腔炎、慢性前列腺炎、流产、产后热等的重要病原菌之一。目前，临床上常用的脲原体检测方法有液体培养和核酸检测，但其并不能鉴别出其病菌是UP还是UU。 【检验原理】本试剂盒选用针对解脲脲原体（UU）特异性基因片段设计特异引物及特异Taqman荧光探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA摸板发生特异性结合，在PCR延伸反应过程中，Taq酶的外切酶活性将5′端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3′端荧光淬灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从而实现在全封闭反应体系中对解脲脲原体（UU）核酸的自动检测，发出荧光信号的强度与UU-DNA的量呈正相关。 【主要组成成份】 注：不同批号试剂盒中各组份不能互换。 【储存条件及有效期】试剂应储存在-20℃保存，产品有效期为12个月，未使用完的试剂继续冷冻保存不影响其稳定性，但试剂反复冻融不得超过3次。 生产日期、有效期至：见标签字样。 【适用仪器】具有FAM、JOE荧光检测通道的ABI 7300/7500、ABI 7500 Fast、LightCycler 480等实时荧光定量PCR仪。 【样本要求】 1．使用藻酸钙拭子、普通棉拭子或涤纶拭子采集尿道、生殖道部位带柱状上皮细胞的分泌物样本，应当选用国家批准生产的一次性使用的男性拭子或女性拭子，拭子应当包括套管、棉签杆、塞子，棉签杆与塞子都应连接牢固。 1.1尿道：对男性患者，先用生理盐水清洗尿道口，将男用取材拭子插入尿道内1-2cm，稍用力转动，保留数秒钟再取出，以采集到粘膜上皮细胞。 对女性患者，可低着耻骨联合轻轻按摩尿道后，用同男性相似的方法取材。 1.2宫颈：取材前用温水或生理盐水湿润扩阴器，应避免使用防腐剂和润滑剂。如果宫颈口外面的分泌物较多，先用无菌棉拭清除过多的分泌液， 将女用取材拭子插入宫颈管内2-3cm，稍用力转动，保留数秒，采集阴道分泌物。 1.3阴道：对于子宫切除的妇女和青春期前女孩可采用阴道样本。将取材拭子置于阴道后穹窿10-15s，采集阴道分泌物。如果处女膜完整，则从 阴道口取材。

检验科试剂与校准品管理规定

检验科试剂与校准品管理规定 一、成立质控管理小组,协助科主任规范试剂管理过程中各个环节。并指定专人做好试剂的登记入库、出库、清点盘存、保管、报废等工作，做到账册实物相符。 二、请购试剂在《中心仓库》进行申请，科主任审核签字，然后交院设备科统一采购。 三、各专业组组长要按实际用量，以保证检验质量和节约开支为原则，有计划地请购试剂，以免造成试剂的无故浪费。 四、试剂进货要做到来源渠道正规、货物优质、有批准文号、生产日期及供货单位加盖红印的《经营许可证》、《生产许可证》、《注册证》复印件和法人委托书及业务员的身份证明。以上资料统一由设备科登记保管。 五、验收试剂时，须核对规格、批号、数量，保质期。发现试剂盒破损、试剂溢出及过期试剂一律给予退回。验收人须在货单上签字，并在《检验科试剂采购计划本》上详细记录，然后将货单交设备科。 六、需要更换试剂品牌时，专业组长填写《检验科试剂更换申请表》应向科主任说明理由，由科主任上报设备科，经招标、论证择优选用。 七、自配试剂必须经过质量检测或比对后方可使用。试剂标签清楚，整齐，标签上要写明试剂名称、浓度、配制日期，配制人、有效期等，特殊保存要注明。实验用纯水每天要检查仪器显示纯水电导率(要求≤1μS/cm)，不合格纯水不能用于任何实验。 八、各专业组组长要做好试剂使用和保存工作，每月底要检查库存试剂，防止变质、过期和浪费，并及时请购，以保证日常工作。 九、不定期的召开质控小组会议，对近期试剂使用中的问题进行讨论解决，属试剂质量问题应及时反馈给设备科，或及时与厂家沟通解决，必要时更换试剂品牌。 十、试剂必须与化学药品分开存放，存放试剂的冰箱内严禁存放个人物品，并每天检查冰箱温度、做好记录。剧毒、易燃、易爆品要按要求保管并由专人负责、强酸强碱试剂要单独保存。具体参照《易烯、易爆、剧毒等危险品管理制度》。 十一、新项目需核算试剂成本，选择优质试剂品牌。 十二、试剂外借一律经科主任同意并履行手续（出具借条）方可执行。

化学试剂的纯度分类及标准.

化学试剂的纯度分类及标准 国标试剂：该类试剂为我国国家标准所规定，适用于检验、鉴定、检测 基准试剂（JZ，绿标签）：作为基准物质，标定标准溶液。 优级纯（GR，绿标签）（一级品）：主成分含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究工作，有的可作为基准物质。 分析纯（AR，红标签）（二级品）：主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。 化学纯（CP，蓝标签）（三级品）：主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。 实验纯（LR，黄标签）：主成分含量高，纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。 教学试剂（）：可以满足学生教学目的，不至于造成化学反应现象偏差的一类试剂。 指定级（ZD），该类试剂是按照用户要求的质量控制指标，为特定用户订做的化学试剂。 高纯试剂（EP）：包括超纯、特纯、高纯、光谱纯，配制标准溶液。此类试剂质量注重的是：在特定方法分析过程中可 能引起分析结果偏差，对成分分析或含量分析干扰的杂质含量，但对主含量不做很高要求。 色谱纯（GC）：气相色谱分析专用。质量指标注重干扰气相色谱峰的杂质。主成分含量高。 色谱纯（LC）：液相色谱分析标准物质。质量指标注重干扰液相色谱峰的杂质。主成分含量高 指示剂（ID）：配制指示溶液用。质量指标为变色范围和变色敏感程度。可替代CP,也适用于有机合成用。 生化试剂（BR）：配制生物化学检验试液和生化合成。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂，可用于有机合成 生物染色剂（BS）：配制微生物标本染色液。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂，可用于有机合成 光谱纯（SP）：用于光谱分析。分别适用于分光光度计标准品、原子吸收光谱标准品、原子发射光谱标准品 电子纯（MOS）：适用于电子产品生产中，电性杂质含量极低。

细菌感染性疾病的直接核酸诊断试验

细菌感染性疾病的直接核酸诊断试验 Florence Paillard, PhD, and Craig S. Hill, PhD 准确和快速的诊断是及时采取治疗措施和防止感染性疾病扩散的关键。理想的感染性疾病的诊断试剂应该能够给临床医生提供快速、灵敏度高和特异性强的实验结果。检测试剂如果灵敏度不高则可能导致疾病的漏检，使患者不能得到及时的治疗，还可造成疾病的扩散；同样，试剂如果特异性较差则可能出现假阳性结果，假阳性的出现不仅会导致不必要的治疗，还可能给人们带来心理上的阴影。不论对个人还是公共卫生部门，因检测方法的不可靠所导致的错误诊断都有可能造成严重的后果。令人欣慰的是，近年来分子诊断技术的发展已使得人们可以研制出比传统方法更为灵敏、特异和快速的用于感染性疾病的诊断试剂。 一、细菌感染性疾病诊断方法述评 数十年来，检测细菌的的标准方法是培养（液体和/或固体培养基）和染色，如用于结核分枝杆菌的抗酸染色和淋病奈瑟菌的革兰染色。其它一些方法还包括采用抗体技术检测细菌抗原的酶免疫测定（EIA）和直接荧光抗体技术（DFA）等。 采用分子生物学技术检测微生物核酸成分的核酸检测（NATs）技术的发展为临床诊断方法带来了革命性的变化。目前用于微生物鉴定的NA Ts主要有两种类型：培养确认检测试剂和直接检测试剂。培养确认的NA Ts试剂主要用来对培养基上生长的微生物进行确认；直接NA Ts试剂可以直接检测标本中的微生物，无需培养。与培养确认探针试剂相比，由于直接NATs试剂完全不需要培养这一步骤，所以可以更快地给出检测结果；直接NATs试剂一般来说其准确性也高于直接免疫检测方法。美国FDA批准的第一个非放射性直接NA Ts试剂是Gen-Probe PACE试剂，用来检测衣原体和淋球菌感染。 对直接NATs试剂而言，一个至关重要的改进在于加入了目标扩增步骤，即探针检测前将目标序列进行扩增。第一个用于沙眼衣原体检测的核酸扩增试剂（NAA Ts）于1993年获得了FDA的批准。此后，随着核酸扩增技术的不断改进，出现了可以将样品成分的抑制作用降为最小的第二代NAA Ts，它的操作流程也得到了相应改进。 本文将就已经商品化并得到FDA批准的用于检测五种细菌感染的直接NATs试剂进行述评。这五种感染为：链球菌性咽炎、肺结核（TB）、阴道炎、衣原体（CT）和淋球菌（GC）感染。 二、直接NAT方法学 非扩增直接NATs（表1）：大多数商品化的直接NA Ts试剂都采用特异性针对出现在被测生物体内的一段独有的核酸序列（目标序列）的核酸探针。这种探针通常采用荧光或化学发光标记。所测样品需进行处理以使其能够释放出核酸。检测时，标记的DNA探针可以和靶序列特异性结合，形成一个稳定的探针-目标序列杂交体。该杂交体被从非杂交探针中分离或区别开后，标记物散发出信号。 在直接检测临床标本中的微生物时，NATs可以采用不同的方式来提高试剂的灵敏度。Gen-Probe采用的一项专利技术是将rRNA作为检测目标，rRNA在大多数微生物体内是以数以千计的拷贝量存在的。例如，沙眼衣原体中的rRNA可达2000拷贝，而DNA中有用的靶序列在每个细菌体内的量仅有一个或数个拷贝。因此以rRNA为检测目标可以大大提高试剂的灵敏度。除此之外，Gen-Probe由于在杂交检测中还采用了杂交保护检测（HPA）方法，使其试剂的灵敏度得以进一步提高。检测rRNA和HPA技术的结合使得第一个DNA探针检测试剂被临床实验室广泛用于培养的确定和直接检测。 第二个用于提高DNA探针检测灵敏度的方法是对信号分子进行放大，如杂交捕获试剂（Hybrid Capture assay）。它采用针对RNA:DNA杂交体的抗体来检测杂交形成，每个抗体都带有酶标记物。每个酶分子都会产生多种着色分子用于与之结合的每个杂交分子。这种从

YYT核酸扩增检测用试剂盒

YY/T1182-2010 核酸扩增检测用试剂（盒） 1范围 本标准规定了核酸扩增检测试剂（盒）【以下简称“试剂（盒）”】的术语和定义、命名和分类、技术要求、试验方法、标识、标签和说明书、包装、运输和贮存等。 本标准适用于核酸扩增检测试剂（盒）的质量控制。核酸扩增检测试剂（盒）应包括核酸提取、核酸扩增及产物分析试剂组份，如核酸扩增检测试剂（盒）内不含有核酸提取组份，应由生产企业说明或指定提取试剂（盒）。 本标准不适用于基因分型、基因芯片和病毒基因分型/突变检测用试剂（盒）及血源筛查的试剂（盒）。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T21415-2008体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性 3术语和定义 以下术语和定义适用于本文件。 3.1聚合酶链反应polymerasechainreaction,PCR 聚合酶链反应或多聚酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。 3.2PCR杂交（膜上、板上）PCRhybridization 具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA）可以通过氢键的方式，按碱基互补配对原则相结合，探针结合于特定核酸序列或PCR产物的杂交过程可以在液相中进行，也可以将其中一个固定在固相载体上进行。 3.3PCR电泳PCRelectrophoresis 根据PCR产物分子质量和所带电荷的不同在电场中进行分离的技术。 3.4实时荧光PCRreal-timepolymerasechainreaction,PCR

核酸检测实验室应急预案SICOLAB

核酸检测实验室应急预案SICOLAB SICOLAB主要分7个步骤： 织织体系建设、生物安全事件分类、事件报告、应急处置方案、应急措施、预案管理 一、参考依据 《中华人民共和国传染病防治法》 《中华人民共和国国境卫生检疫法》 《中华人民共和国突发事件应对法》 《突发公共卫生事件应急条例》 《病原微生物实验室生物安全管理条例》 《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》 《人间传染的病原微生物名录》、《医疗机构临床实验室管理办法》 《国家突发公共卫生事件应急预案》 《广州市突发公共卫生事件应急预案》 各地区卫生系统病原微生物实验室生物安全事件应急预案相关标准 二、预案基本内容及建设程序 1、织织体系建设 医务部：对感染者进行医疗救治及生物安全事件的应急处理工作。 预防保健科、医院感染管理科：医学观察及预防用药，并上报卫生行政部门及CDC机构。 感染科：对感染者和可疑接触者进行临床诊治、实施医学观察及预防用药。 临床检验中心及各实验室：成立生物安全应急小分队；检测工作；现场清洁消毒工作。保卫科：对发生泄漏的现场进行封锁，并按有关规定向公安部门报告。 总务科、设备科、药学部：储备、提供相应的防护用品、设备、必备的救助、消毒药品，协助有关科室进行环境的清洁、消毒工作等。 2、生物安全事件分类 重大生物安全事件：实验室人员确诊感染《人间传染的病原微生物名录》规定的第一、

二类病原微生物，或出现有关症状、体征，临床诊断为疑似感染《人间传染的病原微生物名录》规定的第一、二类病原微生物及样本漏失、流失事件。 一般生物安全事件：实验室人员确诊感染《人间传染的病原微生物名录》规定的第三类病原微生物，或出现有关症状、体征，临床诊断为疑似感染《人间传染的病原微生物名录》规定的第三类病原微生物及样本漏失、流失事件。 生物恐怖事件：病原微生物实验室设施被蓄意破坏；感染性样本或其他感染性材料被盗；在实验室内故意播撒高致病性病原微生物菌(毒)种或样本；病原微生物实验室出现不明原因或人为造成的火灾、断电、爆炸事故。 3、事件报告 报告单位：医院各科室 时限：2小时内向同级卫生局 报告内容：医院名称、实验室名称、事件发生地点、发生时间、涉及病原体名称、涉及的地域范围、感染或暴露人数、发病人数、死亡人数、密切接触者人数、发病者主要症状与体征、可能原因、已采取的措施、初步判定的事件级别、事件的发展趋势、下一步应对措施、报告单位、报告人员及通讯方式等。 4、应急处置方案 即关闭事件发生的实验室； 对周围已经污染或可能污染的环境进行封闭、隔离； 组织专业消毒人员消毒现场； 核实在相应潜伏期时间段内进出实验室人员及密切接触感染者人员的名单； 对被感染人员进行医学观察，对在事件发生时间段内、相应潜伏期时间段内进出实验室人员进行医学观察，必要时进行隔离和预防接种；提供微生物实验室布局、设施、设备、实验人员等情况；配合有关部门做好感染者救治及现场调查和处置工作。 如怀疑生物恐怖事件，要立即同时上报天河区卫生局、天河区公安局和国家安全部门。 5、应急措施 实验室生物安全事件发生后，立即组织生物安全应急小分队成员和相关专家穿用防护装进入现场了解事件信息、处理污染、评估危害。离开现场时，必须脱去防护装、严格手消毒，不得将污染、可疑污染物带离控制区域，消除污染扩散可能性。

检验用试剂管理规范

检验用试剂管理规范 1、目的： 建立检验用试剂管理规程，确保接收、贮存、发放符合要求。 2、范围： 适用于本公司检验用试剂的管理。 3、责任： 试剂管理员、QC负责人、质量部负责人对此规程的实施负责。 4、内容 4.1 普通试剂 4.1.1试剂保管人员对接收的试剂名称、规格、数量进行复核，并检查试剂的外包装有无泄漏和损坏，试剂一定要保证标签完整，外包装清洁。 4.1.2 领来的试剂应放在专用的试剂室或柜内。 4.1.3 试剂室的所有试剂应归类存放，并备有试剂分类记录，并注明品名、数量、规格等。 4.1.4 定期查看试剂标签是否完整，如标签腐蚀，应及时更换。 4.1.5 经常保持试剂室通风。 4.1.6 试剂使用后，应放回原处，标签朝外放置，当试剂用完时，应及时提出购买计划。

4.2易制毒试剂 4.2.1易制毒化学品由采购部负责购买，由化验室负责单独建帐。 4.2.1.1在质量部负责人批准审核后，化验室易制毒管理员在《新锐易制毒化学品管理信息系统软件》上提出购买申请，经公安部门批准后，将《易制毒化学品购买备案证明》交由采购部购买。 4.2.2易制毒化学品购买时卖方应持合法证照，在确认证照合法时才予购买。 4.2.3易制毒管理人员每年向公安部门以书面形式报告当年购买数量，审批合格后方可购买。 4.2.4易制毒化学品管理由双人管理，二人同时到场后才能领取药品。 4.2.5检验室在使用易制毒化学品做实验时必须建立台帐，注明使用量、存余量、使用人。 4.2.6需销毁的易制毒化学品，经质量负责人批准后由化验室二人以上共同处理。 4.2.7严格执行操作程序，造成易制毒化学品外流的，将查找责任人，按照国家有关法律、法规进行处罚。 4.3毒性试剂 4.3.1 剧毒试剂的种类： 4.3.1.1氰化物 4.3.1.2砷盐

SICOLAB核酸检测实验室设计建设重点

SICOLAB核酸检测实验室设计建设重点核酸检测实验室在系统运行中必须保证实验室内的负压和压力梯度稳定，为防止任何一个误动作或故障的发生，在极短的时间内诊断故障和应急处理尤为重要。 1、电源保证。为确保安全，实验室在工作期间不得停电，应考虑多线（源头）供电，并充分考虑最大供应量和有足够的负荷余量，设置应急电力供应系统，做到三路以上电源 保障。 ①双路供电：应确保供电来自2个不同的上级变电站。 ②备用发电机组：在双路供电发生故障或断电时提供电力保障。主要保障实验室通风空调系统、负压通风设备、自动控制系统、压缩空气系统、实验室关键工艺仪器设备等用电， 在双路供电断开时可自动切换。 ③UPS：保障在主供电源断电而备用发电机启动和电压稳定前（约10～30s）的不间断供电，与主供电源并联设置。 2、通风系统保障。通风系统是生物安全实验室最核心的设备，维持稳定的负压和压力梯度与通风系统的性能密切相关，通风系统一旦出现故障，稳定的负压和压力梯度很快就会被打破，导致实验室正压或超负压，造成危害生物因子的外逸，甚至围护结构的损坏，导致意外事故的发生。因此，送排风机组均需一用一备，送排风机的容量一定要有余量，当出现防压力故障时，可通过电动风量调节阀以及调节送排风量，维持稳定的负压和压力梯度。 3、（必要时）生命维持系统。为实验人员提供稳定、舒适的呼吸空气；一旦断供，正压服压力将失衡，实验人员将出现头晕、憋气症状；一旦出现负压，实验人员将可能遭受危害生物因子的污染。因此，生命维持系统压缩空气供应装置必须为2套独立的双空气气源，保持可靠的一用一备运行状态和应急供应状态，并有压力报警装置，压缩空气储罐容量要考虑在压缩机故障情况下保证实验人员至少维持15min的用量（正常退出实验室的时间）。

YY-T1182-2010核酸扩增检测用试剂(盒)

YY/T 1182-2010 核酸扩增检测用试剂（盒） 1围 本标准规定了核酸扩增检测试剂（盒）【以下简称“试剂（盒）”】的术语和定义、命名和分类、技术要求、试验方法、标识、标签和说明书、包装、运输和贮存等。 本标准适用于核酸扩增检测试剂（盒）的质量控制。核酸扩增检测试剂（盒）应包括核酸提取、核酸扩增及产物分析试剂组份，如核酸扩增检测试剂（盒）不含有核酸提取组份，应由生产企业说明或指定提取试剂（盒）。 本标准不适用于基因分型、基因芯片和病毒基因分型/突变检测用试剂（盒）及血源筛查的试剂（盒）。 2规性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 21415-2008 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性 3术语和定义 以下术语和定义适用于本文件。 3.1 聚合酶链反应polymerase chain reaction,PCR 聚合酶链反应或多聚酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。 3.2 PCR杂交（膜上、板上）PCR hybridization 具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA）可以通过氢键的方式，按碱基互补配对原则相结合，探针结合于特定核酸序列或PCR产物的杂交过程可以在液相中进行，也可以将其中一个固定在固相载体上进行。 3.3 PCR 电泳 PCR electrophoresis 根据PCR产物分子质量和所带电荷的不同在电场中进行分离的技术。 3.4实时荧光PCR real-time polymerase chain reaction,PCR

xxx实业发展公司核酸诊断试剂项目立项申请书(总投资14160万元)

核酸诊断试剂项目立项申请书 第一章基本信息 一、项目承办单位基本情况 （一）公司名称 xxx实业发展公司 （二）公司简介 顺应经济新常态，需要公司积极转变发展方式，实现内涵式增长。为此，公司要求各级单位通过创新驱动、结构优化、产业升级、提升产品和 服务质量、提高效率和效益等路径，努力实现“做实、做强、做大、做好、做长”的发展理念。 公司依托集团公司整体优势、发展自身专业化咨询能力，以助力产业 提高运营效率为使命，提供全方面的业务咨询服务。 上一年度，xxx投资公司实现营业收入25671.47万元，同比增长 24.59%（5066.89万元）。其中，主营业业务核酸诊断试剂生产及销售收入为21614.10万元，占营业总收入的84.20%。

根据初步统计测算，公司实现利润总额6749.35万元，较去年同期相比增长827.69万元，增长率13.98%；实现净利润5062.01万元，较去年同期相比增长885.01万元，增长率21.19%。 二、项目概况 （一）项目名称 核酸诊断试剂项目 （二）项目选址 某某新区 （三）项目用地规模 项目总用地面积37425.37平方米（折合约56.11亩）。 （四）项目用地控制指标 该工程规划建筑系数65.60%，建筑容积率1.17，建设区域绿化覆盖率7.31%，固定资产投资强度180.95万元/亩。 （五）土建工程指标 项目净用地面积37425.37平方米，建筑物基底占地面积24551.04平方米，总建筑面积43787.68平方米，其中：规划建设主体工程27226.49平方米，项目规划绿化面积3199.98平方米。 （六）设备选型方案 项目计划购置设备共计138台（套），设备购置费3701.11万元。 （七）节能分析

核酸检测实验室装修关键要点和要求

RT-PCR是检测新型冠状病毒核酸最广泛、最准确的筛选和确认方法。大规模的核酸检测将不可避免地引起相关机构和单位重视建立标准化的临床PCR实验室。 如何避免污染是临床基因扩增实验室装修设计的关键问题，因此实验室的布局、空调通风系统设计、风量控制等都是围绕这一核心问题展开的。 核酸检测实验室装修要求： 核酸检测实验室有设计理念、装修要求、净化空调系统、通风、自控、工艺设备等几个关键点。 材质：隔墙及吊顶——净化彩钢板、地面——同质透芯PVC地板、净化实验室专用门、观察窗要求： 1.墙面：光洁、不产尘积尘、耐腐蚀，易清洁消毒、无缝隙。 2.地面：防静电、耐腐蚀、无缝隙、无渗漏。 3.阴阳角：均用圆弧角密封处理。 4.门：必须设置自动互锁(机械或电子)。 净化空调、通风系统、自控系统要求： 1.避免交叉污染，采用全新风空调系统。 2.样品制备区严格按照BSL-2设计施工。 3.排风系统全部按照要求采用高效过滤器净化。 4.气流组织：采用上送下排形式。 5.压力梯度控制通过微压差计及精密自控系统控制。 6.实验室入口处显示房间内各项指标参数，并设置偏离报警。

工艺设备要求： 1.实验台下部均留空，无死角。 2.全部采用不锈钢304制作。 3.样品制备区设置洗眼装置，必要时应有应急喷淋装置。 4.非接触式操作理念(感应式水龙头、感应式自动门、互锁传递窗等)。 核酸检测实验室装修关键点： 1.平面布局：不论是组合式还是分散式布置的PCR实验室，各功能房间均宜设置独立缓冲间 2.区域空气流向：为避免交叉污染，PCR实验室空气流向必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。 3.通风空调：为避免交叉污染，各功能用房内空气不能掺混。混合式PCR实验室应采用新风直流空调系统，当采用新风系统有困难时，各区域的空气只能在自己的房间内循环。 4.生物安全：按照新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）的规定，2019-nCoV病原体暂按照第二类病原微生物进行管理，则样本植被区宜为负压或加强型P2实验室，核酸操作应在生物安全柜内进行。 核酸检测关键技术措施包括： 绝对负压（避免室内潜在污染外泄） 气流组织（室内定向流，从低污染风险区流向高污染风险区）

《抗人球蛋白检测试剂技术审查指导原则》

《抗人球蛋白检测试剂技术审查指导原则》 （征求意见稿） 本指导原则旨在指导注册申请人对抗人球蛋白检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本指导原则是对抗人球蛋白检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。如申请人认为有必要增加本指导原则不包含的研究内容，可自行补充。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其它方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

一、范围 抗人球蛋白检测试剂可进行直接抗人球蛋白试验和间接抗人球蛋白试验，主要用于不规则抗体筛查、交叉配血、抗体致敏红细胞的检测等。 本指导原则适用于抗人球蛋白检测试剂，同时适用于不同的检测方法,如试管法、柱凝集法等，但不适用于血源筛查用抗人球蛋白检测试剂。 本指导原则仅包括对抗人球蛋白检测试剂注册申报资料中部分项目的要求，适用于进行产品注册和相关许可事项变更的产品。其他未尽事宜，应当符合《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）（以下简称《办法》）等相关法规要求。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料的撰写应符合《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（总局2014年第44号公告）（以下简称“44号公告”）的相关要求。内容主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性的说明、有关产品主要研究结果的总结和评价以及同类产品在国内外批准上市的情况介绍等内容，其中同类产品上市情况介绍部分应着重从灵敏度、特异性、浓度/效价、重复性等方面写明拟申报产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的异同。

体外诊断试剂的分类

体外诊断试剂（IVD）分类 1 根据产品风险程度的高低，依次分为三类、二类、一类产品。 （一）第三类产品： 1．与致病性病原体、抗体以及核酸等检测相关的试剂； 2．与血型、组织配型相关的试剂； 3．与人类基因检测相关的试剂； 4．与遗传性疾病相关的试剂； 5．与麻醉药品、精神药品、医疗用毒性药品检测相关的试剂； 6．与治疗药物作用靶点检测相关的试剂; 7．与肿瘤标志物检测相关的试剂; 8．与变态反应（过敏原）相关的试剂。 （二）第二类产品：除已明确为第三类、第一类的产品，其他为第二类产品，主要包括： 1．用于蛋白质检测的试剂； 2．用于糖类检测的试剂； 3．用于激素检测的试剂； 4．用于酶类检测的试剂； 5．用于酯类检测的试剂； 6．用于维生素检测的试剂； 7．用于无机离子检测的试剂； 8．用于药物及药物代谢物检测的试剂； 9．用于自身抗体检测的试剂；

10．用于微生物鉴别或药敏试验的试剂； 11．用于其他生理、生化或免疫功能指标检测的试剂。 （三）第一类产品： 1．微生物培养基（不用于微生物鉴别和药敏试验）； 2．样本处理用产品，如溶血剂、稀释液、染色液等。2 按药品进行管理的体外生物诊断试剂 一、按药品进行管理的体外生物诊断试剂包括： 1．血型、组织配型类试剂； 2．微生物抗原、抗体及核酸检测类试剂； 3．肿瘤标志物类试剂； 4．免疫组化与人体组织细胞类试剂； 5．人类基因检测类试剂； 6．生物芯片类； 7．变态反应诊断类试剂。 按医疗器械管理的体外试剂 1．临床基础检验类试剂； 2．临床化学类试剂； 3．血气、电解质测定类试剂； 4．维生素测定类试剂； 5．细胞组织化学染色剂类； 6．自身免疫诊断类试剂； 7．微生物学检验类试剂。

核酸检测试剂盒(定磷法)

核酸检测试剂盒(定磷比色法) 简介： 核酸(nucleic acid)是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命的基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，根据化学组成不同，核酸可分为脱氧核糖核酸(简称DNA)和核糖核酸(简称RNA)。核酸分子中含有一定比例的磷，DNA 中磷含量为9.2%，RNA 中磷含量为9.0% Leagene 核酸检测试剂盒(定磷比色法)检测原理是在强酸条件下，核酸分子中的有机磷转化为无机磷，后者与钼酸铵形成黄色的磷钼酸铵，随后还原剂把高价钼离子还原成低价钼离子，进而形成蓝色的钼蓝，在一定浓度范围蓝色深浅与磷含量成正比，通过分光光度计检测吸光度，通过检查标准曲线，获得磷含量，如果待测样品中有无机磷，应予以扣除，否则结果偏高。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、 蒸馏水、浓硫酸 2、 离心管或试管 3、 容量瓶 4、 凯氏烧瓶 5、 水浴锅 6、 722型分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 1、 稀释标准品：取磷标准(1mg/ml)，按磷标准(1mg/ml)：蒸馏水稀释标准品。取干净离 心管或试管，按下表进行标准品浓度的依次稀释，获得不同浓度的多个磷标准。 编号 名称 TC1351 50T Storage 试剂(A): 磷标准(1mg/ml) 1ml 4℃ 试剂(B): 玻璃珠 50粒 RT 避光 试剂(C): H 2O 2 2×1ml RT 试剂(D): 定磷试剂 E1：定磷试剂A 50ml RT E2：定磷试剂B 20ml RT E3：定磷试剂C 20ml 4℃ 避光 临用前，按E1：E2：E3混合，配制定磷试剂，即配即用。 使用说明书 1份

新城疫病毒(NDV)核酸检测试剂盒(RT-PCR 荧光探针法) 使用说明

新城疫病毒（NDV）核酸检测试剂盒(RT-PCR荧光探针法)使用说明 【包装规格】48份/盒 【预期用途】 新城疫病毒（NDV）核酸检测试剂盒(RT-PCR荧光探针法)适用于检测的肺、脾、脑等组织、活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物、全血等标本中新城疫病毒RNA，适用于新城疫病毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。 【检验原理】 新城疫病毒（NDV）核酸检测试剂盒(RT-PCR荧光探针法)用一对新城疫病毒特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技朮对新城疫病毒RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。 【试剂组成】 名称规格 酶液50μl×1管 NDV反应液 1.0mL×1管 NDV阳性质控品50μl×1管 阴性质控品250μl×1管 说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。 【储存条件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于5次，有效期12个月。 【适用仪器】 ABI7300、7500、ABI stepone/stepone plus、安捷伦MX3000P/3005P、MJ Opticon2等其他荧光定量PCR检测仪。 【标本采集】 病死或扑杀禽，取肺、脾、脑等组织；待检活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物，放于1mL50%甘油生理盐水中；用注射器取血5mL至EDTA-2Na抗凝管。

【保存和运输】 上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。 【使用方法】 1.样品处理（样本处理区） 1.1样本前处理 每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手朮剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100uL于1.5mL灭菌离心管中。 1.2RNA提取 推荐采用广州维伯鑫生物科技有限公司生产的RNA提取试剂盒（离心柱提取法），请按照试剂盒说明书进行操作。 2.试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满7份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表： 试剂NDV反应液酶液 用量20μl1μl 【使用方法】 1.样品处理（样本处理区） 1.1样本前处理 每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手朮剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100uL于1.5mL灭菌离心管中。

《定性检测体外诊断试剂(盒)产品的技术审评规范(2012版)

定性检测体外诊断试剂(盒)产品技术审评规范 （2012版） 根据《医疗器械注册管理办法》（国家食品药品监督管理局令第16号）的要求并结合定性检测体外诊断试剂(盒)产品的特点，为规范定性检测体外诊断试剂(盒)（以下简称试剂（盒）产品的技术审评工作，特制定本规范。 一、适用范围 本规范适用于依据《体外诊断试剂注册管理办法》（试行）管理类别为Ⅱ类的、在医学实验室进行定性检测所使用的体外诊断试剂(盒)，其中所述“定性”是指只给出阴性或阳性（有反应或无反应、是或非、有或无、正常或异常）两种可能的结果。 定量以及半定量检测试剂（盒）不适用于本规范，已有中华人民共和国国家标准和行业标准的产品不适用于本规范。 二、技术审查要点 （一）试剂（盒）命名的原则 试剂（盒）名称由三部分组成。第一部分：被分析物的名称；第二部分：用途；如检测试剂盒、检测试纸；第三部分：方法或原理，如酶联免疫吸附试验法、胶体金免疫层析法等。 例：肌钙蛋白I检测试纸（胶体金免疫层析法）、抗角蛋白抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）。 （二）试剂（盒）的组成 试剂（盒）的组成形式：如单试剂，双试剂，多试剂；试纸；微孔板等。 （三）工作原理 试剂（盒）通过各自不同的反应原理，最终通过仪器检测或肉眼观测，对被分析物做出是或不是、有或无、阳性或阴性、有反应或无反应、检出或未检出的结果判定。 （四）产品适用的相关标准

试剂（盒）适用以下相关标准： 1.GB/T 191 包装储运图示标志； 2.YY/T 0316 医疗器械风险管理对医疗器械的应用； 3.YY 0466 医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号。 注：以上标准适用最新版本。 （五）产品的预期用途 试剂（盒）的预期用途为对临床样本中被分析物的定性检测。 （六）产品的主要技术指标 1. 外观 目测检查，符合生产企业规定的正常外观要求（一般要求试剂无杂质，外包装完整无破损；标签清晰可辨）。 2. 净含量（适用时） 用通用量具测量，液体试剂的净含量应不少于标示值。 3. 膜条宽度（免疫层析法适用） 随机抽取一条试纸，使用游标卡尺测量其宽度，应不低于2.5 mm。 4. 液体移行速度（免疫层析法适用） 按说明书进行操作，从试纸浸入样本液开始用秒表计时，直至液体达到图1所示的C区和D区之间的交界线时停止计时，所用的时间记为t，用游标卡尺测量A+B+C区的长度，记为L，则L/t为移行速度，结果应不低于10 mm/min。 图1 免疫层析试纸结构示意图

核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则

核酸检测试剂生产及质量控制 技术指导原则（征求意见稿） 核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段，从而筛查特定基因的检测技术，如聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应（LCR）、转录依赖的扩增反应（TMA）等。核酸检测试剂是基于核酸扩增检测技术的体外诊断试剂，目前已经用于病原体检测、特定疾病的早期诊断和体内物质的型别鉴定等不同领域。为规范核酸检测试剂的生产及质量控制，特制定本技术指导原则，并将根据核酸检测技术的发展状况适时进行修改。 一、基本要求 1、核酸类检测试剂的生产企业应获得《医疗器械生产许可证》。 2、核酸类检测试剂的生产企业应具有与其技术要求相适应的人员、环境、设施和仪器设备等条件，建立专用实验室，配备满足核酸提取和扩增检测以及操作人员防护所需的设备。实验室应当严格分区，人员和物品应当单向流动，以最大限度地防止实验过程中样品之间的污染和避免扩增产物的污染。 3、核酸类检测试剂的生产企业应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求，建立相应的质量管理体系，并应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。

4、核酸类检测试剂的生产单位应当对试剂的使用范围作出明确规定，并经国家药品管理部门批准。引物设计应当符合核酸检测设计的要求，扩增体系应设定合理的内标和外标，试剂须设置抗污染的特定措施，扩增产物须进行确证研究。 5、核酸类检测试剂的原材料应制订相关质量标准，应符合现行《中国药典》或《中国生物制品主要原辅料质控标准》的要求。使用未列入上述标准的化学试剂，应不低于分析纯。 二、原材料 应提供主要原材料如引物、探针、企业参考品或标准品等的选择与来源、制备过程、质量分析和质量标准等的相关研究资料。如果主要原材料来自市场（从其他单位购买），应提供的资料包括：对物料供应商审核的相关资料、购买合同、供货方提供的质量标准、出厂检定报告，以及该原材料到货后的质量检验资料。 核酸类检测试剂的包装材料和耗材应无DNase和RNase污染。 1、dNTP 脱氧三磷酸核苷，核酸的组成成分，包括：dATP、dUTP、d GTP、dCTP和dTTP。应为HPLC纯、PCR级，无DNase和RNase 污染。-20℃保存。 2、引物 由一定数量的核苷酸构成的特定序列，通常采用DNA合成仪人工合成，合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化。

核酸检测试剂技术要求

核酸检测试剂 一、基本要求： 1.试剂名称：核酸检测试剂(进口) 2.用途：对献血者血液标本进行乙肝病毒DNA、丙肝病毒RNA，人类免疫缺陷病毒RNA检测。要 求HBV/HCV/HIV单管联检试剂。 3.数量：65000人份。[乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒人类免疫缺陷病毒（1+2）型核酸检测试剂盒 （PCR-荧光法）：乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒人类免疫缺陷病毒（1+2）型核酸质控试剂（PCR-荧光法）]。 4.★试剂适用设备：可以在现有S201设备上使用。 5.适用检测样本种类：血清及EDTA、ACD抗凝血浆。 6.★试剂原理基于荧光PCR技术的汇集模式或基于TMA技术的单检模式。 二、技术要求： 1.试剂必须通过美国FDA批准或欧洲CE（IVD）认可，以保证产品技术和质量达到国际认可水 平，投标试剂的注册标准应具有进字号的注册许可，投标人需在投标文件中提供相关证明文件。 2.试剂可检测到的基因亚型要求覆盖：HBV A-H所有亚型；HCV 1-6亚型；HIV－1 M组A－G所 有亚型、O组、N组；HIV-2组。 3.检测灵敏度(≥95%可信限)：HBV DNA≤20 IU/ml；HCV RNA≤50 IU/ml；HIV RNA≤51 IU/ml； 临床特异性≥99.7%。 4.★根据国家相关机构质控要求进行质控，试剂含有内标质控（Internal Control），为RNA内标 或RNA\DNA双内标，全程监控检测过程，包括核酸提取，扩增及检测步骤，以防止技术性的假阴性。系统内部有UNG酶防扩增污染控制。 5.试剂使用时操作简便，不需要用专用设备进行孵育融化。不需要人工配制或分装，不需要开盖， 试剂封闭操作，能有效防止交叉污染。试剂包装容器需带条形码，满足检测设备自动扫描、自动读取判断试剂组分的需要。 6.装载样本及对应耗材试剂后，无需人工值守，直至试验结束接收结果，避免试验污染。 7.实验结束后，试剂架等材料无需84消毒液浸泡处理，方便操作人员对实验室的维护。 三、配套要求： 1.成交方无偿提供核酸检测正常运转的相关配套设备(包括2台混匀器)。 2.成交方无偿提供所有核酸检测正常运转的相关检测仪器（加样、核酸提取、纯化、扩增、检测） 以及配套实验台等，以进行自动核酸提取、扩增、检测和鉴别；成交方无偿提供设备、安装、调试、培训和维修的服务。 3.检测设备需求量：满足常规8小时至少完成600个标本检测的需求。 4.成交方无偿提供核酸检测正常运转的所有配套耗材，其中须包括一次性带滤芯移液头、一次性 使用核酸检测专用真空采血管、KIMTECH擦拭纸。

GBT 602-2002 《化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备》

化学试剂杂质测定用标准溶液的制备 1.丙酮1 mg/ml 称取1.000克丙酮，溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 2.甲醇1 mg/ml 称取1.000克甲醇，溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 3.甲醛1 mg/ml 称取m 克甲醛溶液，精确至0.001克，置于1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 甲醛溶液的称取质量m，数值以克表示，按式（2）计算： M=1.00/w （2） 式中：w----甲醛溶液的实测质量分数的数值，以“%”表示。 制备前应按GB/T 685--1993的方法测定乙醛（40%）的质量分数。 4.草酸盐0.1 mg/ml 称取0.143克草酸（H2C2O4·2H2O），溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 5.苯酚1 mg/ml 称取1.000克苯酚，溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 6.葡萄糖1 mg/ml 称取1.000克葡萄糖（C6H12O6·H2O），溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。 7.缩二脲1 mg/ml

称取1.000克缩二脲，溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 8.羰基化合物1 mg/ml 称取10.43克丙酮（相当于5.000克CO）置于含有50毫升无羰基的甲醇的100毫升容量瓶中，用无羰基的甲醇稀释至刻度，充分混均。量取20毫升此溶液，置于1000毫升容量瓶中，用无羰基的甲醇稀释至刻度。临用前制备。 9.乙酸酐1 mg/ml 称取0.100克乙酸酐，置于100毫升容量瓶中，用无乙酸酐的乙酸（冰醋酸）稀释至刻度，临用前制备。 无乙酸酐的乙酸（冰醋酸）的制备：将乙酸（冰醋酸）回流30分钟，蒸馏制得。 10.乙酸盐10 mg/ml 称取23.050克乙酸钠（CH3COONa·3H2O），溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。 11.乙醛1 mg/ml 称取m 克乙醛（40%），精确至0.001克，置于1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 乙醛（40%）的称取质量m，数值以克表示，按式一计算： M=1.00/w （1） 式中：w----乙醛（40%）的实测质量分数的数值，以“%”表示。 置备前应按本标准附录A1规定的方法测定乙醛（40%）的质量分数。 12.水杨酸0.1 mg/ml 称取0.100克水杨酸，加少量水和1毫升冰醋酸溶解，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。 13.糠醛1 mg/ml 称取1.000克新蒸馏的糠醛（C5H4O2），置于1000毫升容量瓶中，溶于水，稀释至刻度。临用前制备。