小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

小鼠骨髓细胞染色体标

本的制备

LG GROUP system office room 【LGA16H-LGYY-LGUA8Q8-LGA162】

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

【目的要求】

1.掌握小鼠细胞染色体标本制备方法。

2.计数并观察小鼠骨髓细胞分裂中期染色体的数目及特点

【基本原理】

在骨髓细胞中，有丝分裂旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到中期细胞。骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。

【实验用品】

1．器材：解剖刀、剪刀、镊子、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、冰冷载玻片、酒精灯、大培养皿、显微镜、纱布,标签纸，记号笔等；

2．试剂

%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、 mol / L KCI溶液、Giemsa染液等。

3．材料：65-90天健康小鼠（生技09级72人，新华09生物技术36人，生科08级75人，生技08级70人，共253人，需购小鼠110只）

【方法与步骤】1．前处理取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异，一般每克体重注射2～6μg，注射总量不宜超过2 ml（例如一只体重50 g的蟾蜍，若按4μg / g注射，需注射浓度为％的秋水仙素溶液 ml ）。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。

2．取骨髓细胞处死动物，用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞，并用注射器筒轻轻吹打，使细胞团块分散，静置片刻、待大组织团块沉淀后，用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中，以1000 r / min 离心5~10 min，弃去上清液。

3．低渗根据骨髓细胞液的多少，加 mol / L的 KCI液5～6 ml，在37℃水浴箱中或室温下低渗20～30 min。低渗时间过长，易造成细胞破裂；时间过短，则染色体难以分散。

4．预固定低渗完毕，立即加入1 ml 新配制的预冷Carnoy’s固定液，用吸管将细

胞轻轻吹打均匀，进行预固定。然后以1000 r / min 离心8 min。

5．固定弃去上清液，加5～6 ml Carnoy’s液，轻轻吹打细胞，静置固定20 min。离心弃去上清液，再加5～6 ml Carnoy’s液，固定20 min。

6．制备细胞悬液离心弃去上清液，再加少许新鲜Carnoy’s固定液，用吸管将固定后的细胞吹散，并反复吹打混匀，制成浓集的细胞悬浊液。

7．准备载玻片滴片前1～2 h，将洁净的载玻片放在0～4℃冰水中，使其表面附有一层水膜。这样在滴片时，细胞悬液遇到载玻片上的冷水，染色体会迅速分散开来。

滴片法制备染色体标本

8．滴片取出预冷的载玻片，将其倾斜约30°放置。吸取细胞悬液，从距离载玻片40 cm 以上高度处滴至载玻片上2～3滴；滴片后立即用嘴或洗耳球对准滴片处轻微吹气；也可用镊子夹住载玻片、在酒精灯火焰上迅速过几下（见图），这样都有助于染色体分散和展开。

9．干燥使滴片在室温下自然干燥，或在酒精灯火焰上烤干，也可用吹风机冷风吹干。

10．染色待滴片充分干燥后，用pH 的磷酸盐缓冲液稀释的Giemsa染液（Giemsa原液：缓冲液＝1：10）染色30 min。然后自来水冲洗，空气干燥。镜检。

【结果观察】

1.在低倍镜下观察Giemsa染色后的中期分裂相形态。

2.选择分散适度不重叠染色体的分裂相，在高倍镜下进行观察。

3.观察小鼠染色体的端着丝粒的特征，识别着丝粒，染色单体，染色体，计算染色体数目，寻找雌雄小鼠之间在核型上的差别。

【作业】

交一张已染色的骨髓细胞染色体标本片，绘制图。

滩母羊促卵泡素受体FSHR基因PCR-RFLP分析

【实验目的】1．熟悉PCR—RFLP分析技术原理及实验步骤。2．掌握琼脂糖凝胶电泳检测方法。3．了解PCR—RFLP在遗传病基因诊断中的作用。

【实验原理】

聚合酶链式反应（PCR）是模拟体内DNA复制条件在体外酶促合成特异DNA片段的循环反应，可使目的DNA片段得以迅速扩增。其主要步骤是：将待扩增的模板DNA置于高温(约93℃-95℃)下使之变性解链；人工合成的两个寡核苷酸引物在低温(约50℃-70℃)下分别与目的DNA片段两侧的互补序列复性结合；引物在DNA聚合酶作用（约70℃-75℃）下沿模板按5’→3’方向延伸，合成目的DNA片段的新互补链。如此经过n个周期，理论上扩增2n倍,一般PCR经30-40周期后可获得百万倍以上的目的DNA。

聚合酶链式反应—限制性片段长度多态（PCR-RFLP）分析技术是在PCR技术基础上发展起来的。DNA碱基置换正好发生在某种限制性内切酶识别位点上，使酶切位点增加或者消失，利用这一酶切性质的改变，PCR特异扩增包含碱基置换的这段DNA，经某一限制酶切割，再利用琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物，与正常比较来确定是否变异。应用PCR-RFLP，可检测某一致病基因已知的点突变，进行直接基因诊断，也可以此为遗传标记进行连锁分析进行间接基因诊断。

本实验以滩母羊外周血DNA为模板，PCR扩增促卵泡素受体FSHR基因的306bp特异片段产物，其中包含AluⅠRFLP多态位点，经AluⅠ酶切后，琼脂糖凝胶电泳检测等位片段的长度（243bp或193bp+50bp），以此为遗传标记进行连锁分析，判断滩母羊是否得到了带有缺陷FⅧ基因的染色体，从而做出间接基因诊断。

【实验用品】

1．DNA（50ng/μl）、引物Ⅰ和Ⅱ（20μΜ）、TaqDNA聚合酶（5U/μl）、10×PCR 反应缓冲液、dNTP（）、灭菌蒸馏水、液体石蜡、限制性内切酶AluⅠ（20U/μl）、10×酶切缓冲液。

07级共134人，共需要TaqDNA聚合酶（250U）、dNTP（1ml）、限制性内切酶AluⅠ250U三支试剂。

2．2%的琼脂糖凝胶、5×TAE、6×上样缓冲液、DNA Marker、Goldview染料。3．PCR仪、凝胶成像系统、微量加样器（5μl、20μl、200μl）、枪头（20μl、200μl）及离心管(1ml、、容器盒、恒温水浴箱、琼脂糖凝胶电泳装置、烧杯、保鲜膜、封口膜、微波炉、250ml三角烧瓶、透明胶带、托盘天平、台式高速离心机。

【实验步骤】

一．PCR反应

PCR反应体系20μl，其成分如下：

按以上次序，将各物质加入到一只无菌的离心管中。轻轻混匀后，离心5秒钟，加入一滴液体石蜡盖于反应混合液的表面，然后放入PCR仪中进行循环反应。

PCR 反应循环温度：

94℃预变性3分钟，然后进行以下循环30次

最后经72℃再充分延伸7分钟。

反应结束后置4℃冰箱保存。

二．PCR产物的AluⅠ酶切

反应体系15μl其成分如下：

PCR产物 6μl

AluⅠ（10U/μl） 1μl

无菌水 8μl

置37℃水浴消化1小时，4℃保存。

三．琼脂糖凝胶电泳检测1．胶板的准备取有机玻璃内槽，洗净晾干。取透明胶带将有机玻璃内槽的两端边缘封好（注意，将透明胶带紧贴于有机玻璃内槽的两端边上，不要留空隙）。将有机玻璃内槽置于一水平位置，在距离底板~的位置放入梳子。2．2%的琼脂糖凝胶的制备

称取1克琼脂糖，置于锥形瓶内，加入50ml 1×TAE，瓶口用保鲜膜封盖，在微波炉中加热直至琼脂糖全部溶解，得到2%琼脂糖凝胶液，待其冷却至65℃左右，加入μl 溴化乙啶贮存液（10mg/ml），使溴化乙啶终浓度为μg/ml。小心混匀并倒在有机玻璃内槽中，控制灌胶速度，使胶液缓慢展开，避免产生气泡，直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。室温下静置1小时左右，待胶凝固完全后，轻轻拔出梳子，在胶板上即形成相互隔开的样品槽。3．将凝胶放入电泳槽中，加入恰好没过胶面1mm深的足够电泳缓冲液，预电泳10min。4．每份限制酶切产物取10μl，加2μl 6×上样缓冲液，混匀后加入到样品孔中，以100V 电泳50分钟。5．断电后取出凝胶，放在紫外透射仪中观察并记录PCR—RFLP结果。

【实验结果与分析】

观察并记录琼脂糖凝胶电泳分离的DNA片段长度，绘制出滩母羊各成员FSHR基因Alu Ⅰ RFLP等位片段与系谱相关图。

实验十人类染色体g显带技术及g带核型分析

实验十人类染色体G显带技术及G带核型分析 实验目的 1、初步掌握染色体G带标本的制备技术。 2、了解人类染色体的G显带的带型特征。 实验用品 1、材料：常规方法制备的中期人类染色体标本（标本片龄不超过30天为宜）。 2、器材：显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、染色缸、小镊子、玻片架、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。 3、试剂：％胰蛋白酶溶液、％EDTA溶液、胰蛋白酶一EDTA混合液、％生理盐水、蒸馏水、Giemsa原液、Giemsa稀释液、1／15mol ／L磷酸缓冲液。 实验原理 人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。本世纪70年代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带），G带是目前被广泛应用的一种带型。因为它主要是被Giemsa染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用Giemsa 染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee等（1973）认为染色体上与DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和DNA结合牢固的区段可被染成深带。有人认为，染色体显带现象是染色体本身存在着带的结构。比如用相差显微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带的出现又与染料特异结合有关。一般认为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段，相反，含GC多的染色体段则不易着色。总的来说，G显带的机理还未搞清。 内容与方法 一、人类染色体G显带标本制备 1、胰蛋白酶法 ①将常规制备的人染色体玻片标本（未染色的白片）置70℃烤箱中处理2小时，然后转入37℃培养箱中备用，一般在第3～7天进行显带。 ②取％的胰蛋白酶原液加生理盐水至50ml，配成％的工作液并用NaHCO3调pH值至7左右。 ③将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热。 ④将玻片标本浸入胰蛋白酶中，不断摆动使胰蛋白酶的作用均匀，处理1～2分钟（精确的时间自行摸索）。 ⑤立即取出玻片，放入生理盐水中漂洗两次。 ⑥染色。将标本浸入37℃预温的Giemsa染液（1:10的Giemsa原液和的磷酸缓冲液）

动物遗传学【试题+答案】

试题 21、肺炎双球菌的转化试验表明，起__转化_作用的物质是_DNA______而不是ＲＮＡ。44、果蝇唾液腺含有 4 对染色体，在实验中加入1NHCl目的是对剥离出的唾液腺染色体进行解离。 47、在有DNA的生物，其遗传物质是DNA ，而在没有DNA的生物，则其遗传物质是RNA 。 48、染色体的化学组成是核酸蛋白，其中主要是DNA、非组蛋白和组蛋白，现已肯定DNA 是最主要的遗传物质。 65、据测定，一个核小体及其连接丝约含200 个碱基对的DNA，其中146 个碱基对盘绕在核小体表面 1.75 圈，其余50～60 个碱基对连接两个核小体。66、由染色质到染色体的四级结构是核小体、螺旋体、超螺旋体、___染色体___. 67、某生物有三对同源染色体，在减数分裂中能形成3 个二价体和12 个染色单体。 68、减数分裂前期Ⅰ可分为细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期五个时期。 69、许多生物染色体的次缢痕部位一般具有组成核仁的功能，因而称为核仁组织中心。 70、染色体经碱性染料处理后，它的臂部位被染色，而着丝粒部位几乎不被染色。 71、真核生物的染色体主要是有DNA 、组蛋白、非组蛋白和少量RNA 组成的。 80、在减数分裂形成配子时，每对同源染色体上的每一对等位基因发生分离，而位于非同源染色体上的基因之间可以重组。

112、DNA分子双螺旋结构是由沃森和克里克提出的。 114、DNA双螺旋的直径是20 ?，各对碱基上下之间的距离为 3.4 ?，每个螺旋距是34 ?，每个螺旋包括10 对碱基。 120、猪正常体细胞内含有19对染色体。其脑细胞中含有38 条染色体；初级精母细胞中含有38 条染色体；极体中含有19 条染色体；受精卵中含有38 条染色体；精子中含有19 条染色体。 121、电镜下观察细胞分裂中期染色体，根据着丝点位置和形态可呈V 、L 和棒形型。 134、细胞有丝分裂的后期，每个染色体的着丝点分裂，每个染色单体成为一个子染色体。 140、每条染色单体是由 2 条DNA分子，与蛋白质结合形成的染色质线。 141、基因的侧翼序列是指每个结构基因在（第一个外显子）和（最后一个外显子）的外侧，都有一段不被转录和翻译的非编码区。 142、某DNA的核苷酸中，A的含量为30%，则G的含量为20% 。 143、在染色体上可以转移的基因，称为跳跃基因。 144、减数分裂过程中时间持续最长的时期是分裂前期I ，这个时期被细分为 5 个时期。 146、细胞有丝分裂的分裂过程，一般以前期时期的时间最长。 147、信号肽序列是指在（分泌）蛋白基因的编码序列中，在（起始密码子）之后，有一段编码富含疏水氨基酸的多肽序列。 148、开放阅读框是指结构基因中从（起始密码子）到（终止密码子）这一段核苷酸区域，可编码完整的多肽链。

实验七 植物染色体标本的制备与观察实验报告

细胞及遗传学实验报告陈香燕201008030103 生科1班 实验七植物染色体标本的制备与观察 （一）实验目的 学习植物染色体标本的制备技术，掌握染色体的技术方法，了解染色体的生物学意义。 （二）实验原理 植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。由于秋水仙素可以阻断细胞在分裂中期纺锤体（微管二聚体）的形成，以至于不能拉动染色体分开向细胞两极，因此可以使细胞分裂停止在分裂中期，再经过染色，压片，镜检之后便可观察到细胞的染色体形态。 （三）实验用品 一、材料：蚕豆 二、试剂

1.Carnoy固定液 2.0.1%秋水仙素溶液 3.1mol/L HCl 4.Schiff试剂 5.亚硫酸水溶液（漂洗液） 6.Carbor fuchsin （卡宝品红）染液 配方1：原液A：称取3g碱性品红，溶于100ml 70%酒精中（此液可无限期保存）。 原液B：取10ml 原液A，加入90ml 15%石炭酸（苯酚）水溶液（两周内使用）。 染色液：55ml 原液B加6 ml冰醋酸和6 ml 37%甲醛（此液适用于植物原生质体培养中细胞核和核分裂的染色）。 配方2：取配方1中的染色液2~10 ml，加90~98ml 45%醋酸和1.8g 山梨醇（此液适用于核和染色体的一般形态观察，具有广泛适用性）。 （四）实验方法步骤 1.取材：将蚕豆种子培养在培养皿内的湿滤纸上，室温或28°C 下发芽，待胚根长达1~2cm时，切取0.5cm长的根尖部分。 2.预处理：将切下的根尖浸入0.1%秋水仙素液中，室温下处理 3~4h。 3.水解：把根尖投入预热的58~60°C 1mol/L热HCl中，恒温条 件下水解14~15min 4.染色：倒去热HCl,滴加卡宝品红少许，染色5~10分钟。

染色体标本的制作及组型观察

染色体标本的制备及组型观察 【实验目的】 1. 掌握染色体标本制作的基本方法； 2. 认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。 【制作染色体标本的意义】 了解染色体的特征（形态、大小、数目）一一绘制染色体组型图 【染色体组型图的应用】 ①生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条; 鸡78条；猫38条；狗78条；人46条；马64条 ②临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断和研究： 十21三体综合症：是21对常染色体多一条，此种人“先天愚型”，或称“伸舌样白痴” J卵巢退化症：45 XO,外貌表现为女性，卵巢发育不全或无， 1.5米以下，不能生育。 .睾丸退化症：47 XXY，外貌为男性，比一般男性高，睾丸发育不全，有女性样乳房， 智力低下或超常，不能生育，发声尖高。 因此，染色组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽羊水做组型） 【染色体标本制作的原理】 ------------------ 选择活跃的组织：胸腺，骨髓，睾丸，小肠“ 细胞具有旺盛尸 _________________ 的分裂能力卞 制作染色体标彳J施加药物使细胞分裂：PHA 本的先决条件 设法得到大量的分裂中期细胞：秋水仙素 1. PHA促进细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变成淋巴母细胞。 2. 秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停在分裂中期。 3. 空气干燥：使细胞与染色体展开。 4. 低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离变大，易于染色体分散开。 5. 固定：用Camoy s solution,作用使蛋白变性，对染色体内的组蛋白讲，变形后硬度增力口，保持了染 色体的“即时形态”对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢 和丢失。 【实验用品】

表1 常见实验动物的一般生物血数据参考值

表1 常见实验动物的一般生物血数据参考值 小鼠大鼠兔豚鼠犬猴 成年体重♂20～40 ♂200～280 ♂2500～3000 ♂500～750 ♂13000～18000 ♂4500～5500 （g）♀18～35 ♀180～250 ♀2000～2500 ♀400～700 ♀12000～16000 ♀4000～5000 寿命（年）2～4 3～5 5～12 5～8 10～20 15～25 染色体2n=40 2n=42 2n=44 2n=64 2n=78 2n=42 体温（℃）37～37.5 37.8～38.7 38.5～39.7 37.8～39.5 38.5～39.5 38.3～38.9 呼吸频率（次/分） 163 （84～230） 85.5 （66～114） 51 （38～60） 90 （69～104） 18 （15～30） 40 （31～52） 耗氧量 mm3/g体重 1530 2000 640～850 816 580 通气量（ml/min） 24 （11～36） 73 （50～101） 1070 （800～1140） 160 (100～380) 5210 （3300～7400） 860 （310～1410） 潮气量（ml） 0.15 （0.09～0.23） 0.86 (0.60～1.25) 21.0 （19.3～24.6） 1.8 （1.0～3.9） 320 （251～432） 21 （9.8～29.0） 心率（次/分） 625 （470～780） 475 （370～580） 205 （123～304） 280 （200～360） 80～120 140～200 心博量 （ml/博） 1.3～2 47 ———— 收缩压（kPa） 14.79 （12.67～18.40） 13.07 （10.93～15.99） 14.66 （12.66～17.33） 10.67～12.53 12.66～18.15 18.6～23.4 舒张压（kPa） 10.80 (8.93～11.99) 10.13 （7.99～11.99） 10.66 （8.0～12.0） 7.33～7.73 6.39～9.59 12.2～14.5 血浆容量ml/100g 3.15 4.04 （3.63～4.53） 3.88 （2.78～5.14） 4.04 （3.63～4.53） 5.52 （4.37～7.30） 3.64 （3.0～4.84） 全血容量ml/100g 5.85 6.41 （5.75～6.99） 5.73 （4.78～6.95） 6.41 （5.75～6.99） 9.41 （7.65～10.7） 5.41 （4.43～6.66） 血浆Ph 7.2～7.4 7.35 （7.26～7.44） 7.58 7.35 (7.26～7.44) 7.36 （7.31～7.42） — 血浆CO2 （mol） 21.9 ————— 血浆CO2分压（Pa） 5331.6 ±719.8 ————— 表2常见实验动物的平均寿命及最长寿命参考值 动物种类最长寿命（年）平均寿命（年） 猴30 10 犬20 10 猫30 12 家兔15 8 豚鼠7 5 大鼠 5 4 小鼠 3 2

染色体标本的制作及组型观察

染色体标本的制作及组型 观察 Revised by Jack on December 14,2020

染色体标本的制备及组型观察 【实验目的】 1.掌握染色体标本制作的基本方法； 2.认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。 【制作染色体标本的意义】 了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图 【染色体组型图的应用】 ①生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类：兔44条；小鼠40条；大 鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；人46条；马64条 ②临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断和研究： 21三体综合症：是21对常染色体多一条，此种人“先天愚型”，或称“伸舌样白痴” 卵巢退化症：45 XO，外貌表现为女性，卵巢发育不全或无，米以下，不能生育。 睾丸退化症：47 XXY ，外貌为男性，比一般男性高，睾丸发育不全，有女性样乳房，智力低下或超常，不能生育，发声尖高。 因此，染色组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽羊水做组型） 【染色体标本制作的原理】 施加药物使细胞分裂：PHA

设法得到大量的分裂中期细胞：秋水仙素 1.PHA：促进细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变成淋巴母细胞。 2.秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停在分裂中期。 3.空气干燥：使细胞与染色体展开。 4.低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离变大，易于染色体分散开。 5.固定：用Camoy’s solution,作用使蛋白变性，对染色体内的组蛋白讲，变形后硬度增加，保 持了染色体的“即时形态”对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。 【实验用品】 1.实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、 离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯 2.实验药品：蒸馏水、% NaCl溶液、% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸 =3:1）、秋水仙素 3.实验材料：小鼠 【实验步骤】 1.取雄性小鼠，以每克体重4微克注射秋水仙素（约1mL），14-16h后，用断头法处死小鼠，取 出睾丸用生理盐水（% NaCl溶液）洗去血污，置于解剖盘中。 2.将睾丸放入装有1mL % KCl溶液的小烧杯中剪碎（液体呈乳白色）。 3.用铜网过滤到刻度离心管中，再加% KCl溶液至4mL。 4.37℃静置30mins，进行低渗处理。 5.以800-1000r/min离心8分钟。 6.弃上清液，加入2mL甲醇·冰醋酸固定液。用吸管至管底吹气，轻轻打散细胞，固定8mins。 7.再以800-1000r/min离心8分钟。 8.弃上清液，加入1mL甲醇·冰醋酸固定液，再制成细胞悬液，固定5mins。 9.取去洁净的低温预冷载片，距载片10-15cm的高度滴下2-3滴细胞悬液，从载片一边向另一边轻 轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。 10.用滤纸擦去载片上的多余液体，空气干燥或文火干燥。 11.用染液染色20——30分钟，细水冲洗玻片背面，去除多余染液，气干。 12.镜检：低倍镜下寻找分散良好，染色适中的分裂相，高倍镜或油镜下观察染色体形态并计数。【实验结果】 精子头部 精子鞭毛分裂中期的染色体未破碎的细胞

动物的多倍体现象

动物的多倍体现象 高二生物教材指出，几乎全部动物和过半数的高等植物都是二倍体(P48）。多倍体在植物中很常见，被子植物中至少有三分之一的物种是多倍体，在动物中却比较少见。 虽然“几乎全部动物”是二倍体，然而单倍体动物却是有的，比如雄蜂（书上已举了这个例子），由于是没有受精的卵细胞直接发育而成，因而雄蜂的染色体只有体细胞的一半（16条），属于单倍体。 那么自然界中有多倍体动物吗？ 经过查证，动物也同样存在多倍体现象。首先发现多倍体动物的，是比利时生物学家凡·培内登。他在研究了欧洲和美洲的马蛔虫后提出，马蛔虫有二倍体和四倍体的不同亚种。后来，科学家在我国发现了马蛔虫的北京三倍体亚种。人蛔虫与马蛔虫的亲缘关系十分接近，正常的人蛔虫有24条染色体，可是四倍体蛔虫却有48条染色体。根据科学家的研究报告，蜗牛中有四倍体，家蚕、果蝇、蝾螈和蛙等动物中，也有三倍体和四倍体。如在扁形动物的涡虫、软体动物的蜗牛也有四倍体。昆虫中有一种蝴蝶，其二倍体染色体数为64条；单性生殖时常为四倍体变种，染色体数为128条。家蚕和果蝇中也有四倍体和八倍体的。在蝾螈和蛙等两栖动物中都发现过三倍体和四倍体。据报道，最高等的多倍体动物，是一种金仓鼠，其体细胞中有46条染色体，构成了四倍体，它是普通仓鼠（染色体数为22条）与花被仓鼠（染色体数为24条）的杂交种，经染色体加倍后形成的。 颇为有趣的是，有时候动物的躯体上会出现染色体倍数不同的情况。有一种蝌蚪在28天时，身体的一边是二倍体，另一边却是三倍体，甚至还有少数是四倍体。我国已故生物学家朱冼曾发现，有一种蚊蛹消化道竟有数目为9、18、72的异常染色体。 国内和国外的一些报道也发现，人的性染色体组成，也有加倍的异常现象。如ＸＸＹ、ＸＸＸＹ等男性的Ｘ染色体多出了1条或2条，据研究，具有这样染色体组成的男性，都或多或少有心理异常现象出现。 动物多倍体是怎样形成的呢？一般有两种情况：一种是体细胞在进行有丝分裂时，染色体已经复制了，着丝点分裂了，但细胞没有分裂，造成细胞内染色

实验五 人类染色体标本制备

实验五人类染色体标本制备 【目的要求】 1．熟悉人外周血淋巴细胞培养的原理。 2 3 【实验原理】 人类间期细胞核中的遗传物质染色质，在细胞进入分裂期时，经逐级螺旋形成染色体。 在分裂期的中期，染色体达到最大程度的凝集，表现为短而粗的典型结构。人外周血的有形 成分中，只有白细胞有核，而白细胞中只有淋巴细胞(主要是小淋巴细胞)具有潜在的细胞分 裂能力。 培养液中加入有丝分裂刺激剂植物血凝素(PHA)可使处于G0期、具有潜在分裂能力的淋 巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞，并进入旺盛的有丝分裂周期；加入纺锤体抑制剂 秋水仙素可使处于分裂过程的淋巴细胞停滞在分裂中期，在收获细胞时，用低渗剂0.075 mol/L KCl对细胞进行低渗处理，可使胞膜胀破，染色体均匀分散；经离心、固定、制片等 过程，最终可获得便于观察分析的染色体标本。 制备的染色体标本片，不经特殊处理，直接染色，在显微镜下观察识别，并进行核型分 析的过程称为染色体非显带核型分析。 【实验用品】 (一) 材料：人外周静脉血。 (二) 器材：吸管、刻度离心管、量筒、5ml注射器、6号针头、台式离心机、试管架、 冷藏载玻片（一端磨砂）、铅笔、酒精灯、超净工作台、恒温水浴箱、载玻片、止血带、酒 精棉球、显微镜、废液缸。 (三)试剂 1. RPMI1640培养液 (1) RPMI1640：RPMI1640固体培养基10.4 g,溶于1000 ml双蒸水中，抽滤除菌。 (2) RPMI1640培养液：每100 ml RPMI1640培养液中含RPMI 1640 80 ml、灭活的小牛血 清20 ml、PHA 50 mg、青霉素(终浓度100 U/ml)、链霉素10000 μg (终浓度100 μg /ml)， 15磅、20min高压灭菌的NaHCO3调pH至7.2～7.4，分装20小瓶，每瓶5 ml。 (3) 配制方法 配制过程所需的玻璃器具先用浅水洗刷干净，烘干，放入清洁液中浸泡2 d，取出后用自来水冲洗15次，蒸馏水冲洗3次，双蒸水冲洗1次，烤干后包装，15磅20 min高压灭菌。 新瓶塞等橡胶类制品用水洗刷后，用0.5mol/L NaOH煮沸20min，自来水冲洗；用0.5mol/L HCl煮沸20 min，自来水冲洗，蒸馏水冲洗，在双蒸水中浸泡24h；浸泡后取出晾干，包装后高

去壁低渗法制备植物染色体标本实验

去壁低渗法制备植物染色体标本实验 方法步骤： 1、材料培养：将高粱的种子充分浸种后，摆在铺有滤纸的培养皿内，在25℃温 箱发芽培养 2、预处理：待根长至0.5-1cm时,切取根尖立即放入盛有0.2%秋水仙素和 0.002mol/L 8-羟基喹啉水溶液等量混合液的小瓶中预处理2-3小时3、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（1mm），放入0.075mol/L氯化钾低渗液中， 在25℃条件下处理30分钟。以下可分两种方法进行处理 4、（1）吸去前低渗液，立即加入甲醇：冰醋酸（3：1）固定液固定不少于1h。（2）水洗：将固定好的材料用蒸馏水洗三次，除去材料中的固定液，在1mol/L 的HCl于60℃处理15分钟。 （3）酶解去壁：在小瓶内加入混合酶液（酶液量以浸过材料为合适），在25℃下酶解30-60分钟 （4）后低渗：吸去酶液，慢慢加入(25±0.5) ℃的双蒸水,轻轻洗一次,然后在双蒸水中浸泡10分钟。 5、悬液法： （1）制备细胞悬液：倒去双蒸水，用镊子立即将材料夹碎形成细胞悬液 （2）固定：向细胞中加入新配制的甲醇：冰醋酸（3：1）固定液1-2ml，使成细胞悬液时间在10分钟到数小时不等。 （3）去沉淀：静置片刻使大块组织沉淀，然后取上层细胞悬液于另一个小瓶中。（4）去上清夜：将上层细胞悬液静置30分钟左右，即可见细胞沉淀，用吸管轻轻吸去上清夜，留约0.5ml左右细胞悬液置备标本 (5)标本制备:在一张经过充分洗净脱脂,并预先在蒸馏水中冷冻的清洁载玻片 上,用吸管滴2-3滴细胞悬液,立即将载玻片一端抬起,并轻轻吹 气，使细胞迅速分散，然后在酒精灯火焰上微微加热烤干。 （6）染色：经干燥的玻片标本，用Giemsa染色液染色30分钟，然后用自来水细流冲洗，甩干水珠空气干燥 6、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意观察中期染色体的长臂、短臂和着丝粒位置，并尽可能找到具随体染色体。

小白鼠染色体标本的制作染色与观察

小白鼠染色体标本的制作、染色与观察 姓名：学号：实验时间： 1.实验目的 （1）初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。（2）了解常用实验动物染色体的数目及特点。 （3）认识不同生物染色体的特征。 2.实验原理 凡处于活跃增殖状态或者经过各种处理，任何动物组织的细胞都可进入分裂时期，均可用于染色体分析。在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。 对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点：①用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处；②用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上；③空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。 Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。3.实验材料和用品 （1）材料：小白鼠 （2）试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液 （3）器材：解剖盘、解剖镊、解剖剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水浴锅、离心机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等 4.实验步骤 （1）小白鼠染色体标本制作 ①取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl）洗去血污。 ②放入装有1ml 0.3%KCl液的小烧杯中剪碎至呈乳白色。 ③用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3%KCl液至4ml。 ④37℃静置30分钟，进行低渗处理。 ⑤以800～1000转/分离心8分钟。 ⑥弃上清液，加入2ml甲醇·冰醋酸固定液（3：1），并用吸管至管底吹气，轻轻打散细胞，固定8分钟。 ⑦再以800～1000转/分离心8分钟。 ⑧弃上清液，加1ml固定液，再制成细胞悬液，固定5分钟。 ⑨取洁净的低温预冷载片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液，从载片一边向另一边轻轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。

人体外周血淋巴细胞染色体制备与观察实验方案

实验方案 实验外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备，染色体组型分析 一、实验目的 1、了解动物细胞培养的方法。掌握人体外周血淋巴细胞培养与染色体标本制备。 2、初步掌握人类染色体G－带的显示方法及人类染色体G－带在染色体识别中的意义。 3、熟悉人类染色体的镜下检查和核型分析方法。初步掌握人类染色体G带的特征及其 识别。 二、实验原理 所谓外周血培养即是将外周血接种在适当的培培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液（一般是0.075mol/L的KCl）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可获得较好的染色体养基中进行培养。人类外周血细胞本来是终末分化细胞，一般没有分裂能力，但经PHA（植物血球凝集素）或ConA等药物刺激后，转变成可分裂的转化细胞。 染色体显带是将染色体标本经过一定程序处理，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴显现明暗或深浅相间的横行带纹――染色体带，这种技术，称为染色体显带技术。通过显带，人们可以准确地识别每一条染色体及染色体上的各个区段，并可发现染色体上较细微的结构变化。 在所有的显带技术中，G显带（G banding）是最常见的显带技术，它是将染色体标本用碱、胰蛋白酶或其它盐溶液处理后，再用Giemsa染液染色，在普通显微镜下，可见深浅相间的带纹，称G带（G band）。G显带方法简便，带纹清晰，染色体标本可以长期保存，因此被广泛用于染色体病的诊断和研究。 正常人类染色体的数目为46条(23对)，1960年的Denver会议和1963年的London会议制定了统一的人类染色体命名体制：按照染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数，将常染色体（22对）按大小用阿拉伯数字标记，顺次排列为1～22号，性染色体用X和Y标记；并按染色体大小和着丝粒位置，把人类染色体分为七个组，用大写字母A～G表示。 染色体经显带处理后，每条染色体都显示出其特定的带纹特征（见下表）。根据这些特征，可以准确地识别每条染色体，检出染色体数目或结构畸变。 表1 人染色体组型及其特征

植物细胞染色体标本的制作与观察

普通生物学实验课须知 1.新生进实验室之前要认真阅读实验室基本知识。 2.每次进入实验室的时间为以课表为准，提前10分钟进入实验室。 3.应严格按照实验平台上预约时间进入实验室进行实验，不来者，视为旷课。如因特殊情况请假，需在实验开始前至少三天向指导教师说明，在选课平台系统中取消原预约时间，重新预约，一次不做实验或一次不交报告，即按不及格论处。 4.预习实验内容和有关知识，写好预习报告（手写）,前四部分内容（一、实验目的，二、实验原理，三、实验器材与试剂，四、实验步骤与操作方法），无预习报告者扣10分。 5. 实验过程中应认真操作，仔细观察实验现象，做好原始记录(三个实验需要用相机或手机拍照，DNA指纹图谱实验需用U盘拷贝实验结果，请自备拍照工具和U盘)。 6. 预习、课堂操作、课堂纪律、善后处理、实验报告是评分的依据。 7. 实验完毕，要将自己使用的仪器刷洗干净，药品按序恢复原位，台面擦净，把自己做实验的一套东西找齐，经指导老师检查合格并签字后方可离开。 8. 值日生要认真清扫地面、水槽、台面，检查水、电、门窗是否关好。 9. 实验讲义：实验预约系统中可以下载，也可到生命科学与技术学院网站下载。 10. 实验报告模板见附件，需注明姓名、学号、组号、做实验具体时间。

植物细胞染色体标本的制作与观察 上课地点：化学楼120 上课时间：选课时 任课教师：陈丽杰办公地点：生化楼215 电话：84706308 课程要求： 预习实验内容，掌握实验目的及原理、仪器和试剂、实验步骤； 手写完成预习报告（实验名称、实验目的、实验原理、实验器材与试剂、实验方法与步骤），课堂检查预习报告情况。 实验注意事项： 1、实验台上物品按实验室管理老师要求摆放整齐； 2、实验废物按实验室管理老师要求收集； 3、实验结束后，经老师检查后方可离开。 实验纪律： 1、按时上课 2、穿实验服（白大衣） 3、不许吃东西，课堂严禁大声喧哗 4、手机静音 实验成绩： 预习报告：20分 实验操作：40分 报告内容：结果和讨论40分

实验八 植物染色体标本的制备与观察

实验八 植物染色体标本的制备与观察 一、实验目的 1、掌握常规压片法制备植物染色体标本。 2、了解中期染色体的形态和结构以及染色体的生物学意义。 二、实验原理 染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定形式，是染色质紧密包装的结果，对染色体的观察在研究生物进化、发育、遗传和异变中有十分重要的作用。 植物染色体标本的制备，常用分生组织如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是当今观察植物染色体常见的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，简单易操作，但是染色体易变形、难分散开。 三、实验仪器、材料和试剂 （一）仪器、用具：显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、滤纸、吸水纸、青霉素瓶、染色缸、载玻片、盖玻片、玻璃板、酒精灯。 （二）材料：蚕豆(Vicia faba , 2n=2x=12)、黑麦(Secale cereale , 2n=2x=14)、大麦(Hordeum sativum, 2n=2x=14)、普通小麦(Triticum aestivum , 2n=2x=42)、玉米(Zea mays , 2n=2x=20)、豌豆(Pisum sativum , 2n=2x=14)、洋葱（Aillum cepa ，2n ＝16）等根尖。 （三）试剂 1、 Carnoy 固定液、1%秋水仙素(或对二氯苯)。 2、苯酚品红染色液。 四、实验方法与步骤压片法制备染色体标本： (1) 取材：把蚕豆种子预先浸泡12h ，然后转入垫有湿润滤纸的培养皿中上面蒙上湿纱布，置25℃温箱中暗培养发根，经过48h 后幼根长至1—2cm 左右，于上午9—11时剪下根尖。 (2) 预处理：将剪下的根尖置于对二氯苯饱和水溶液或0.1％秋水仙素溶液中，浸泡处理2-4 h 。 (3) 固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy 固定液中固定2-4h ，转入70％乙醇中，4℃保存备用。 (4) 解离：取出根尖，用蒸馏水洗净，放入l M HCl 中60℃解离8－10min ，再用蒸馏水洗净。 (5) 染色：改良苯酚品红 染色5—10min 。 (6) 压片：把根尖放在载玻片上、切取分生区部分、加一滴45 %醋酸，盖上盖玻片，用力垂直猛压，盖玻片上放上一滤纸，用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 （7）镜检 五、实验结果

植物染色体标本的制备和观察

植物染色体标本的制备和观察 摘要：植物染色体标本的制备，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。本实验主要是介绍了解常规压片法和去壁低渗法制备植物染色体标本的基本原理和方法 关键词：大蒜、洋葱、染色体、去壁低渗法、压片、标本 【实验目的】 掌握常规压片法和去壁低渗法制备植物染色体标本的基本原理和方法。 【实验原理】 植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是 当今观察植物染色体常用的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。但压片法的不足之处是染色体很难分散开，染色体容易变形和断裂。而去壁低渗法则能较好地克服这弊端，方法也较简单，不需要特殊设备。它是借助纤维素酶和果胶酶将细胞间的果胶质和组成细胞壁的α-纤维素、半纤维素溶解掉，使植物细胞只有质膜，然后按哺乳类动物染色体标本制备的方法——低渗、火焰干燥法制备植物染色体标本。实验证明，这一技术可以显著提高染色体的分散程度，现已广泛应用于植物染色体显带，妹染色单体交换等研究，大大促进了植物细胞遗传学研究的发展。 【实验仪器、材料和试剂】 （一）仪器、用具培养箱、显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、滤纸、吸水纸、青霉素瓶、染色缸、载玻片、 盖玻片、玻璃板、酒精灯 （二）百合根尖，大蒜 （三）试剂1．Giemsa 母液：原液的配制：Giemsa 粉0.5g 甘油（AR）33ml 甲醇（AR）33ml 先将少量甘油加入研鉢中，将Giemsa 粉充分研细，再倒入剩余甘油，并在56℃温箱中保温2 小时，然后再加入甲醇混匀，贮存在棕色瓶内。 2．磷酸缓冲液、甲醇、冰醋酸、混合酶液、秋水仙素（或对二氯苯） 3．改良苯酚品红染色液。 【方法与步骤】 （一）压片法制备染色体标本 1．取材把大蒜（百合）根尖茎置于盛水的小烧杯上，放在25℃温箱中发根，待根长至2cm 左右，于上午9～11 时剪下根尖。 2．预处理将剪下的根尖0.02%秋水仙素溶液中，浸泡处理4 小时。(对照组不做处理) 3．固定用水洗净处理过的根尖，经甲醇-冰醋酸（3∶1）固定6～12 小时，再经95%、85%酒精各半小时，最后转入70%酒精中，4℃保存备用。 4．解离取出根尖，用蒸馏水洗净放入1N HCl中60℃解离8～10min，再用蒸馏水洗净。5．染色改良苯酚品红染色液染色5～10min 。 6．压片 把根尖放在载玻片上，切取分生区部分，加一滴染液，用镊子捣碎，盖上盖玻片，然后在盖玻片上放上一滤纸，用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 7．镜检。 实验结果与分析

染色体标本制作和观察实验报告

【实验题目】 染色体标本制作与观察 【实验目的】 1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。 2、了解常用实验动物染色体的数目及特点。 3、认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。 【实验材料与用品】 1.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、 小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等 2.材料：小鼠 3. 试剂：蒸馏水、0.9%NaCl溶液、0.3%KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、 秋水仙素 【实验原理】 一、制作染色体标本的先决条件 ①细胞具有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使 细胞分裂（PHA） ②设法得到大量的分裂中期细胞：利用秋水仙素 二、染色体 染色体是基因的载体。真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传特性之一。制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。

染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培养的细胞中制备染色体。本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。 染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨认和区分。因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。 染色体特征：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒位置（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和位置、带型分析 描述染色体的四个参数： ①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以 用来表示每条染色体的长度。 ②臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数可以用来确定臂的长度。 ③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位 置。 ④染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定。 三、操作原理 小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可）利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但基本程序并不复杂。在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂，将其注入到小鼠腹腔中，可以阻止分裂细胞纺锤体的形成。 由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本次实验通过前处理、低渗、固定、制片染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。

人外周血染色体标本制备

人外周血染色体标本制备 一、培养基的选择与接种 培养基主要的作用是为培养的细胞提供营养，以让其更好的生长。其基本成分有双抗（青霉素和链霉素）、水、PHA、小牛血清、酚红等。小牛血清和植物血凝素偏高或偏低，以及PH值均会影响染色体的分裂。反复冻融的培养基对培养的效果也不好，一因PHA随着不断的解冻其效价也不断降低，二是因为含有细胞DNA生长必须的氨基酸，而此氨基酸会随不断的解冻而消失。培养基颜色改变及浑浊均不能再用。 接种血液时，视不同年龄群的人而异。小孩或者新生儿接种量比成人少，因为小孩和新生儿的白细胞比成人的高很多。血液太少，细胞稀薄并且生长速度减慢；血液太多，会造成培养细胞生长时营养成分不够，影响细胞的生长状态。 二、秋水仙素 其作用是阻断纺锤体拉向两级，使正在分裂的细胞停留在分裂中期，以便获得大量中期的分裂相以分析染色体之用。使用秋水仙素时应注意使用时间、作用时间、浓度、量等。一般而言，在收获细胞前1.5-2h加入。加入过多，染色体太短；反之，染色体瘦长或无中期分裂相。 三、低渗 这是染色体制备中关键的环节，目的是使淋巴细胞吸收水分而膨胀和中期染色体分散铺展。低渗效果与处理的时间、低渗的温度，低渗时吹打混匀细胞的力度有关。一般用 0.075mol/L的KCL。低渗时间不够，染色体分散不好，细胞粘连，呈团状；低渗时间过长，可是细胞破碎，染色体丢失，甚至会因染色体胀大得过分和使其形态结构模糊不清，变得难以消化及染色。一般加入8毫升，于37度水浴箱中低渗20-30min为好。 四、固定 为了维持染色体的固有形态。固定液可使细胞脱水，蛋白变性而使染色体粗大适中。注意：固定液需要现配现用，因为固定液所含的水分与固定效果有关。吹打细胞时，要注意用力，以免细胞丢失过多，因为低渗后的细胞很脆弱。 五、滴片 先制成细胞悬液，浓度适中，随个人喜好。但不因太浓，因其会使染色体分散程度受限。也不宜太淡，以免滴片时细胞分裂相稀少。一定要注意好温度、湿度的关系，这是要点。一般制片两张，然后置于75摄氏度烤箱中烘烤3h。

人类染色体G显带标本的制备

人类染色体G显带标本的制备 一、原理 常规制备的染色体标本经烤片后，用热碱、各种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等预处理再以Giemsa 染色，在油镜下可看到染色体两臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰蛋白酶法。 可能的机理是：G带区含有较丰富的A-T 对，在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之一。Giemsa染料在G带区是与DNA结合，而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。Giemsa染料是噻嗪--曙红染料，染色体的着色有赖于在原位形成噻嗪--曙红（2∶1）的沉淀物。着色首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合，在此基础上再结合一个曙红分子，其次取决于一个疏水环境，以利于染料沉淀而着色。通过胰酶的显带预处理可除去阴性G带区的疏水蛋白，或使它们的结构变成更亲水状态。由此可知，在G显带中抽取的蛋白往往是疏水的，且主要来自阴性G带区。 二、试剂及器材 （一）试剂：胰蛋白酶、0.4%酚红、5% NaHCO3、Giemsa原液、pH7.4磷酸盐缓冲液，0.85%生理盐水 （二）器材：37℃恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴头 三、实验步骤 1、取胰酶25mg，溶解于盛有50 ml0.85%生理盐水的染色缸中，置37℃恒温水浴箱中，加入0.4%酚红2滴，混匀，以5% NaHCO3调节pH为6.6-7.0。 2、待胰酶液温度升至37℃后，将染色体标本片（37℃烘箱烤片3-7天）放入胰酶液中，并轻轻摆动，3-7秒后取出，立即自来水冲洗。 3、染色： pH7.4磷酸盐缓冲液 4.5 ml Giemsa原液0.5 ml 染色8-10分钟。 自来水冲洗，空气干燥，镜检。 四、注意事项 1、良好的培养效果为，标本片上中期分裂相要多，且染色体分散要好。 2、染色体长度应能适应显带分析技术的要求。 3、G显带成败之关键取决于胰酶液的浓度和处理时间之搭配。 五、实验结果 低倍镜下可看到中期分裂相，进而转至高倍镜及油镜下观察，可见23对染色体较为饱满，分布均匀，着色较好，沿染色体长轴可显出深浅不同的G带横纹。

染色体标本制作与观察 实验报告

姓名班级 13级生命基地班学号同组者 科目细胞生物学实验实验题目染色体标本制作与观察 【实验题目】 染色体标本制作与观察 【实验目的】 1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。 2、了解常用实验动物染色体的数目及特点。 3、认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。 【实验材料与用品】 1. 器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、 小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等 2. 材料：小鼠 3. 试剂：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、 秋水仙素 【实验原理】 一、制作染色体标本的先决条件 ①细胞具有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使 细胞分裂（PHA） ②设法得到大量的分裂中期细胞：利用秋水仙素 二、染色体 染色体是基因的载体。真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传特性之一。制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培养的细胞中制备染色体。本实验采用的方法是

姓名班级 13级生命基地班学号同组者 科目细胞生物学实验实验题目染色体标本制作与观察 从小鼠的睾丸细胞中获取。 染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨认和区分。因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。 染色体特征：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒位置（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和位置、带型分析 描述染色体的四个参数： ①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以 用来表示每条染色体的长度。 ②臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数可以用来确定臂的长度。 ③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位 置。 ④染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定。 三、操作原理 小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可）利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但基本程序并不复杂。在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂，将其注入到小鼠腹腔中，可以阻止分裂细胞纺锤体的形成。 由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本次实验通过前处理、低渗、固定、制片染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。 Giemsa染色法的染色结果：细胞核染成紫红色、细胞质和核仁染成蓝紫色 四、制作染色体标本的意义 了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图 染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。 染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。