生物化学课程实验指导书

《生物化学》实验指导书适用专业：生物技术、生物工程、食品科学与工程

生物与食品工程学院生物科学系

生物化学实验细则

为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。

1.实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。

2.严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。非本实

验组的同学不准进入实验室。

3.进入实验室必须穿实验服。各位同学进入各自实验小组实验台后，

保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。

绝对禁止用实验仪器或药物开玩笑。

4.实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入

垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。

5.实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，

使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。

6.使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。

7.做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。

8.实验后，要及时完成实验报告。

2006年1月

目录

生物化学实验细则 (1)

目录 (2)

实验1 蛋白质的沉淀、变性反应 (3)

实验2 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 (6)

实验3 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (11)

实验4 凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (16)

实验5 DNA的琼脂糖凝胶电泳 (20)

实验6 唾液淀粉酶的性质和活力测定 (24)

实验7生物氧化与电子传递 (25)

实验8 植物体内的转氨基作用 (27)

实验1 蛋白质的沉淀、变性反应

（3学时）

目的要求

1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。

2. 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。

3. 了解蛋白质变性与沉淀的关系。

4.了解蛋白质两性性质

原理

在水溶液中，蛋白质分子表面形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，则以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质的沉淀反应。这种反应可分为以下两种类型：

1．可逆沉淀反应

在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子内部、空间结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去后，能再溶于原来的溶剂中。这种作用称为可逆沉淀反应。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质以及利用等电点的沉淀，提纯蛋白质时，常利用此类反应。

2．不可逆沉淀反应

在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。这种变性蛋白质的沉淀不能再溶解于原来溶剂中的作用称为不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂，强酸、强碱、加热、震荡、超声波、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。

蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷）并不析出，因此，变性蛋白质不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。

试剂和器材

一、试剂

1. 蛋白质溶液：

取5ml鸡或鸭蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后用4—8层纱布过滤，新鲜配置。

2. 蛋白质氯化钠溶液：

取20ml蛋清，加蒸馏水200ml和饱和氯化钠溶液100ml，充分搅匀后，以纱布滤去不溶物（加入氯化钠的目的是溶解球蛋白）。

3. 其余试剂：

硫酸铵粉末，饱和硫酸铵溶液(150ml)，3%硝酸银（280ml），0.5%乙酸铅（200ml），浓硫酸（5ml/组），5%磺基水杨酸（100ml），0.1%硫酸铜（100ml），饱和硫酸铜溶液（400ml），0.1%乙酸（500ml），10%乙酸（500ml），饱和氯化钠溶液（25ml），10%氢氧化钠溶液（500ml）。

二、器材

试管，过滤漏斗，试管架，玻璃棒，沸水浴，量筒，烧杯，试剂瓶，移液管，滤纸，洗瓶，废液缸，药匙，移液管架。

操作方法

一、蛋白质的可逆沉淀反应—蛋白质的盐析作用(分级盐析)

3ml饱和硫酸铵

过滤滤液

球蛋白沉淀

硫酸铵粉末

搅拌至饱和

静置

混匀静置10min

3ml蛋白质

氯化钠溶液

滤液

清蛋白沉淀

弃去清液

水

观察

现象

二、蛋白质的不可逆沉淀反应

1. 重金属沉淀蛋白质

2. 酸沉淀蛋白质

1）

2）

10滴浓硫酸

6滴蛋白质

溶液观察两液

界面

不要摇动

观察现象

3. 加热沉淀蛋白质

蛋白质溶液0.1%乙酸10%乙酸饱和氯化钠10%氢氧化钠蒸馏水1

2

3

4

5

10

10

10

10

10

—

5

—

—

—

—

—

5

5

—

—

—

—

2

—

—

—

—

—

2

7

2

2

—

5 将各管混匀，观察记录各管现象后，放入沸水浴中加热10min，比较各管的沉淀情况。

试剂

管号

思考题

1. 名词解释：水化层；双电层；蛋白质变性；盐溶与盐析；蛋白质等电点沉淀。

2. 将实验结果写在实验报告中操作方法的对应位置上并就实验现象作简要解释。

3. 根据实验现象，讨论下列问题：

1）蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的本质区别是什么？

2）简述蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的相互关系。

4. 作为杀菌剂，氯化汞是怎样起作用的？

实验2 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白

（4学时）

目的要求

1.学习蛋白质电泳的一般原理及方法。

2.掌握用醋酸纤维素薄膜电泳分离蛋白质的操作技术。

原理

带电颗粒在电场的作用下，向着与其电性相反的电极移动，这种现象称为电泳。带电颗粒之所以能在电场中向一定的方向移动，并具有一定的迁移速度，是取决于带电颗粒本身性质的影响，以及电场强度、溶液的pH值、离子强度及电渗等因素的影响。蛋白质具有两性性质，在溶液中可解离的基团除肽链末端的α—氨基和α—羧基外，还有很多侧链基团在一定的pH条件下能解离而使蛋白质带电。当溶液的pH>pI（等电点）时，蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动，而的pH

式中：m为迁移率（cm2/V·s）；v为颗粒的泳动速度（cm/s）；E为电场强度（V/cm）；ｄ为颗粒泳动的距离（cm）；ｌ为支持物的有效长度（cm）；V为实际电压（V）；t为电泳时间（s）。

各种蛋白质的等电点、分子量及颗粒大小各不相同，在某一指定的pH值溶液中，各种蛋白质所带的电荷不同，因而在电场中迁移的方向和速度不同。根据这个原理，就可以从蛋白质混合物中将各种蛋白质分离出来。因此，电泳技术在生物化学与分子生物学研究中被广泛用于生物大分子或小分子（如蛋白质、核酸、氨基酸等）的分离纯化与分析鉴定等。同时此项技术也普遍用于临床诊断和工农业生产实践中，并已发展成为这些部门的重要分析分离手段。

醋酸纤维素薄膜电泳是以醋酸纤维素薄膜为支持物的一种区带电泳。这种薄膜具有均一的泡沫状结构，厚度为120μm，渗透性强，对样品无吸附作用，用它作支持物进行电泳，电泳效果比纸电泳好，具有样品用量少，分离速度快，电泳图谱更为清晰，灵敏度也较高（5μg/m l 以上）等优点。目前已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、同工酶的分离和测定等方面。

本实验以醋酸纤维素薄膜为电泳支持物，分离各种血清蛋白。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及形状不同（如图2-1），在电场中迁移速度不同。分子量小、等电点低、在相同碱性pH缓冲体系中、带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。例如，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳1h左右，染色后可显示5条区带。清蛋白泳动最快，其余依次为α1，α2，β-及γ-球蛋白（如图2-2）。这些区带经洗脱后可用分光光度法定量，也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。临床医学常利用它们间相对百分比的改变或异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。

蛋白质名称

等电点（pI）分子量

清蛋白

α-球蛋白

β-球蛋白γ-球蛋白

4.88

5.06

5.12

6.85——

7.50

69000

α1-200000

α2-300000

90000——150000

156000——300000 图2-2 正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图

1为清蛋白（或称为白蛋白），2、3、4、5分别为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白，6为点样原点

试剂和器材

一、测试材料

未溶血的人或动物血清。

二、试剂

1.巴比妥—巴比妥钠缓冲液（PH8.6，0.07mol/L，离子强度0.06）：

称取1.66g巴比妥（AR）和12.76g巴比妥钠（AR），置于三角烧瓶中，加蒸馏水约600ml，稍加热溶解，冷却后用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存，备用。

2. 染色液（0.5%氨基黑10B）：

称取0.5g氨基黑10B，加蒸馏水40ml，甲醇（AR）50ml，冰乙酸（AR）10ml，混匀溶解后置具塞试剂瓶内贮存。

3.漂洗液：

取95%乙醇（AR）45ml，冰乙酸（AR）5ml和蒸馏水50ml，混匀置具塞试剂瓶内贮存。

三、器材

醋酸纤维素薄膜（2×8cm），培养皿，镊子，直尺和铅笔，电泳仪及电泳槽，试管及试管架，普通滤纸。

操作方法

一、薄膜与仪器的准备

1. 醋酸纤维素薄膜的润湿与选择

用镊子取一片薄膜，小心地平放在盛有缓冲液的平皿中。若漂浮于液面的薄膜在15—30s 内迅速润湿，整条薄膜色泽深浅一致，则此膜均匀可用于电泳；若薄膜润湿缓慢，色泽深浅不一或有条纹及斑点等，则表示薄膜不均匀应弃去，以免影响电泳结果。将选好的薄膜用镊子轻压，使其完全浸泡于缓冲液中约30min后，方可用于电泳。

2.电泳槽的准备

根据电泳槽膜支架的宽度，裁剪尺寸合适的滤纸条。在两个电极槽中，各倒入等体积的电极缓冲液，在电泳槽的两支架上，各放一层滤纸条，使滤纸一端的边与支架前沿对齐，另

一端侵入电极缓冲液内。当滤纸条全部润湿后，用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡，使滤纸的一端能紧贴在膜支架上。滤纸条是两个电极槽联系醋酸纤维素薄膜的桥梁。用平衡装置连接两个电泳槽，使两个电极槽内的缓冲液彼此处于同一水平状态。

二、点样

1.制备点样模板

取一张干净滤纸（10×10cm），在距纸边1.5cm处用铅笔划一平行线，此线为点样标志区。

2.点样

用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层滤纸间轻轻按压，吸去多余的缓冲液。无光泽面向上平放在点样模板上，使其底边与模板底边对齐。点样区距阴极端1.5cm处。点样时，先用玻片一端截面沾取一定量的血清，然后将沾有样品的玻片截面垂直地与纤维素薄膜点样区处轻轻接触，样品即呈一条线“印”在薄膜上，（如图2-3）使血清完全渗透至薄膜内，形成细窄而均匀的直线。此步是实验的关键，点样前应在滤纸上反复练习，掌握点样技术后再正式点样。

图2-3 醋酸纤维素薄膜规格及点样位置示意图。虚线处为点样位置

三、电泳

用镊子将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上，如图所示。要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直，中间不能下垂。如一电泳槽中同时安放几张薄膜，则薄膜之间应相隔几毫米。盖上电泳槽盖，使薄膜平衡10min。

图2-4 电泳装置剖视示意图

1.滤纸桥

2.电泳槽

3. 醋酸纤维素薄膜

4.电泳槽支架

5.电极室中央隔板

用导线将电泳槽的正、负极分别连接，注意不要接错。在室温下电泳，打开电源开关，用电泳仪上细调节旋扭调到每厘米膜宽电流强度为0.3mA（8片薄膜则为 4.8 mA）。通电10—15min后，将电流调节到每厘米膜宽电流强度为0.5mA（8片共8mA），电泳时间约50—80min。电泳后调节旋扭使电流为零，关闭电泳仪切断电源。

四、染色与漂洗

用解剖镊子取出电泳后的薄膜，放在含0.5%氨基黑10B染色液的培养皿中，浸染5min。取出后再用漂洗液浸洗、脱色，每隔10min换漂洗液一次，连续数次，直至背景蓝色脱尽。取出薄膜放在滤纸上，用吹风机的冷风将薄膜吹干。

注意事项

1．醋酸纤维素薄膜的预处理

市售醋酸纤维素薄膜均为干膜片，薄膜的浸润与选膜是电泳成败的重要关键之一。将干膜片漂浮于电极缓冲液表面，其目的是选择膜片厚薄均匀，如漂浮15—30s时，膜片吸水不均匀，则有白色斑点或条纹，这提示膜片厚薄不均匀，应弃去不用，以免造成电泳后区带扭曲，界限不清，背景脱色困难，结果难以重复。由于醋酸纤维素薄膜亲水性比纸小，浸泡30min 以上是保证膜片上有一定量的缓冲液，并使其恢复到原来多孔的网状结构。最好是让漂浮于缓冲液的薄膜吸满缓冲液后自然下沉，这样可将膜片上聚集的小气泡赶走。点样时，应将膜片表面多余的缓冲液用滤纸吸去，以免缓冲液太多引起样品扩散。但也不能吸得太干，太干则样品不易进入薄膜的网孔内，而造成电泳起始点参差不齐，影响分离效果。吸干的程度以不干不湿为宜。为防止指纹污染，取膜时，应戴指套或用夹子。

2．缓冲液的选择

醋酸纤维素薄膜电泳常选用pH8.6巴比妥缓冲液，其浓度为0.05—0.09mol/L。选择何种浓度与样品及薄膜的厚薄有关。在选择时，先初步定下某一浓度，如电泳槽电极之间的膜长度为8—10cm，则需电压25V/cm膜长，电流强度为0.4—0.5mA/cm膜宽。当电泳时达不到或超过这个值时，则应增加缓冲液浓度或进行稀释。缓冲液浓度过低，则区带泳动速度快，并由于扩散变宽；缓冲液浓度过高，则区带泳动速度慢，区带分布过于集中，不易分辨。

3. 加样量

加样量的多少与电泳条件、样品的性质、染色方法与检测手段灵敏度密切相关。作为一般原则，检测方法越灵敏，加样量越少，对分离更有利。如加样量过大，则电泳后区带分离不清楚，甚至互相干扰，染色也较费时。如电泳后用洗脱法定量时，每厘米加样线上需加样品0.1—5μL，约相当5--1000μg蛋白。血清蛋白常规电泳分离时，每厘米加样线加样量不超过1μL，相当于60--80μg蛋白质。但糖蛋白和脂蛋白电泳时，加样量则应多些。对每种样品加样量应先作预实验加以选择。

点样好坏是获得理想图谱的重要环节之一，以印章法加样时，动作应轻、稳，用力不能太重，以免将薄膜弄破或印出凹陷而影响电泳区带分离效果。

4. 电量的选择

电泳过程应选择合适的电流强度，一般电流强度为0.4—0.5mA/cm膜宽为宜。电流强度高，则热效应高，尤其在温度较高的环境中，可引起蛋白质变性或由于热效应引起缓冲液中水分蒸发，使缓冲液浓度增加，造成膜片干涸。电流过低，则样品泳动速度慢且易扩散。

5. 染色液的选择

对纤维素薄膜电泳后应根据样品的特点加以选择。其原则是染料对被分离样品有较强的着色力，背景易脱色；应尽量采用水溶性染料，不宜选择醇溶性染料，以免引起醋酸纤维素薄膜溶解。

应控制染色时间。时间长，薄膜底色深不易脱去；时间太短，着色浅不易区分，或造成条带染色不均匀，必要时可进行复染。

思考题

1．通过本次实验，讨论下列问题：

（1）简述醋酸纤维薄膜电泳原理。

（2）根据人血清中血清蛋白各组分等电点，如何估计它们在pH8.6的巴比妥—巴比妥钠电极缓冲液中，移动的相对位置。

（3）醋酸纤维素薄膜与滤纸相比较，有哪些优点？

(4)电泳时为什么要将点样的一端靠近负极端？

实验4 葡聚糖凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量

(4学时)

目的要求

1. 初步掌握利用凝胶层析法测定蛋白质分子量的原理。

2. 学习用标准蛋白质混合液制作V e , K av 对r M lg 的“选择曲线”以及测定未知蛋白质样品分子量的方法。

原 理

凝胶是由胶体溶液凝结而成的固体，它们的内部有很细微的多孔网状结构。目前关于凝胶层析的原理有许多假设和理论，普遍接受的是分子筛效应。凝胶颗粒在合适的溶剂中浸泡，充分吸液膨胀，然后装入层析柱内，加入欲分离的混合物后，再以同一溶剂洗脱。在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的空隙最先流出柱外，而小分子可以进入凝胶颗粒内部的多孔网状结构，流速缓慢，以至最后流出柱外，从而使样品中分子大小不同的物质得到分离。对凝胶层析分离的简单过程可用图4-1表示。

图4-1 小分子由于扩散作用进入凝胶颗粒内部而被滞留，

大分子被排阻在凝胶颗粒外面，在颗粒之间迅速通过。

外水体积、内水体积、柱床体积 、洗脱体积

外水体积（V o ）是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积内水体积（V i ）是指凝胶颗粒中孔穴的体积。柱床体积 是（V t ）凝胶柱所能容纳的总体积

洗脱体积（Ve ）是指将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积。它包括自加入样品时算起，到组分最大浓度出现时所流出的体积。 Ve 一般是介于V o 和Vt 之间的。

对于完全排阻的大分子由于其不进入凝胶颗粒内， 故其洗脱体积

Ve ＝ Vo

对于完全渗透的小分子由于它可以存在于凝胶柱整个体积内，故其洗脱体积

Ve ＝ Vt

分子量介于二者之间的分子，它们的洗脱体积也介于二者之间。

洗脱容积V e 是自加入样品时算起，到组分最大浓度峰出现时所流出的容积，它与V 0,V i 的关系为：

i d e V K V V +=0

式中K d 为分子量不同的溶质在凝胶内部和外部的分配系数，只与被分离物质分子的大小和凝胶颗粒空隙的大小分布有关。上式可改写成：

i

e d V V V K 0-= Kav 是有效分配系数，对交联度小的凝胶Kav 与Kd 差别较小，而对交联度大的凝胶二者差别较大。Kav 可用下式表示：

0V V V V K t e av --= 根据凝胶层析原理，对同一类型化合物的特征与组分的分子量有关。流过凝胶柱时，按分子大小顺序流出，分子量大的走在前面。洗脱容积Ve 是该物质分子量对数的线性函数：

r e M K K V lg 21-=

式中，21,K K 为常数，r M 为分子量。

e V 也可以用av K （有效分配系数）代替，与分子量的关系同上式，只是常数不同。通常多以av K 对分子量的对数作图得一曲线，称为“选择曲线”。如图4-2所示。选择曲线的斜率说明凝胶性质的一个很重要的特征。在允许的工作范围内，曲线愈陡，则分级愈好，而工作范围愈窄。凝胶层析主要决定于溶质分子量大小，每一类型的化合物如球蛋白类等都有自己特殊的选择曲线，可用于测定未知物的分子量，测定时以使用曲线的直线部分为宜。

图4-2 球蛋白分子量选择曲线

为了测定分子量，就必须知道一根特定柱的V t ，V 0和V i ，从而计算出K d ，K av 等。V 0可用不被凝胶滞留的大分子物质的溶液，如血红蛋白，印度黑墨水，分子量约200万的蓝色葡聚糖—2000等有颜色的溶液，通过测定大分子物质的洗脱曲线，洗脱峰峰顶洗出的体积就是该柱的V 0值。选一种分子量小于凝胶工作范围下限的化合物，测出其洗脱体积V e ，减去V 0就是V i ，常用硫酸铵来测定。V t 可用下式计算：

h D V t 2

2??? ??=π π为常数3.14，D 为柱直径，h 为凝胶床的高度。

试剂和器材

一、试剂

1. 标准蛋白质混合液：1ml/组

3mg/ml 蓝色葡聚糖，8mg/ml 肌红蛋白。溶剂为含15%（V/V ）甘油的洗脱缓冲液。

2. 洗脱液[0.05mol/LTris —盐酸溶液(pH7.5)，内含0.1mol/LNaCl]：

50ml 0.1mol/L Tris 溶液与40.3ml 0.1mol/L 盐酸混匀后，溶解0.585克NaCl ，加水稀释至100ml ，即得洗脱液

3. Sephadex G-75

二、器材

层析柱：柱管（直径1.0~1.3cm ；管长50cm ）1个/组，试管，玻璃棒，滤纸，移液管，（721分光光度计）试管架、铁架台

操作方法

一、一般操作方法

1. 凝胶的处理（教师准备）

将称好的干粉倾入过量的洗脱液中，在室温下放置，使之充分溶胀。为了缩短时间，可在沸水浴中加热将近100℃，这样可缩短溶胀时间至几小时，而且可以杀死细菌和霉菌，并排除

凝胶内气泡。

2. 装柱

装柱前将凝胶上面过多的溶液倾出，用真空干燥器抽尽凝胶中空气。

关闭层析柱出水口，并向柱管内加入约1/3柱容积的洗脱液，然后在缓

慢搅拌下，将浓浆状的凝胶连续地倾入柱中，使之自然沉降，待凝胶沉

降约2—3cm后，打开柱的出口，调节合适的流速，使凝胶继续沉集，

待沉集的胶面上升到离柱的顶端约5cm处时停止装柱，关闭出水口。接

着通过2—3倍柱床容积的洗脱液使柱床稳定，然后在凝胶表面上放一

张滤纸片或一团脱脂棉，以防将来在加样时凝胶被冲起，并始终保持凝

胶上端有一段液体。

3. 加样

加紧上、下进出水口夹子，以防止操作压改变。用1ml移液管吸取

1ml样品混合液，将移液管尖端小心插入柱中液面下方1cm处，小心释

放样品，使其在脱脂棉上端形成一个层面，过程大约需要2分钟完成。看到样品层刚好完全流入凝胶床时，向柱上小心的添加缓冲液至合适高度（约5cm左右），以保证流速的稳定。（注意：不能使胶床上端无充裕的缓冲液，以防干裂）

4. 洗脱

洗脱时，打开上、下进出口夹子，先收集10ml流出液，用洗脱液以每管4ml/管流速洗脱，用试管收集流出液，并对每管编号。当所有有色物质洗脱下来后，关闭螺旋夹停止洗脱。然后在对应的波长下读各管的光吸收值。

二、蛋白质分子量的测定

1. 测定V0和Vi

将0.5ml蓝色葡聚糖—2000和硫酸铵混合液（2mg/ml）上柱、洗脱，分别测出蓝色葡聚糖的洗脱体积Ve即为该柱的V0，硫酸铵的洗脱体积Ve即为该柱的Vi。蓝色葡聚糖的洗脱峰可根据颜色判断，硫酸铵的洗脱峰用Ba(Ac)2判断。

2. 标准曲线的制作

按上述方法将1ml标准蛋白质混合液上柱、洗脱，用试管收集。`收集后，于以下对应波长下读各管的光吸收值：

蓝色葡聚糖（蓝色）：650nm

肌红蛋白（琥珀色）：500nm

以洗脱体积为横坐标，光吸收值为纵坐标作洗脱曲线。根据洗脱峰位置，量出每种蛋白质的洗脱体积（Ve），然后以蛋白质分子量的对数lgMr为纵坐标，Ve为横坐标，作出标准曲线。同时根据已测出的V0和Vi以及计算出的Vt，求出Kav。也可以Kav为横坐标，lgMr为纵坐标作出标准曲线。

3. 未知样品分子量的测定

将未知样品按标准曲线的条件操作。根据洗脱峰的位置，量出洗脱体积，也可以计算出Kav，分别由标准曲线查得样品的分子量。

思考题

1.根据实验中遇到的各种问题，概述做好本实验的经验与教训。

2.凝胶过滤的介质有哪些，各过滤介质的异同是什么？

3.通过本次实验学习，讨论SDS—PAGE和凝胶过滤法测定蛋白质分子量的异同。

实验5 DNA的琼脂糖凝胶电泳

（4学时）

目的要求

1. 掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法。

2. 学习利用琼脂糖电泳方法测定DNA片段大小。

3. 学习有关建立DNA限制性内切酶图谱的基本技术。

原理

DNA分子在碱性环境中（pH8.3缓冲液）带负电荷，外加电场作用下，向正极泳动。不同的DNA片段由于其电荷、分子量大小及构型的不同，在电泳时的泳动速率就不同，从而可以区分出不同的区带，电泳后经溴乙锭染色，在波长254nm紫外光照射下，DNA显橙红色荧光。

琼脂糖凝胶电泳对DNA的分离作用主要依据DNA的分子量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系。一定大小的DNA 片段在不同浓度的琼脂糖凝胶中，电泳迁移率不相同。不同浓度的琼脂糖凝胶适宜分离DNA片段大小范围见表1。因而要有效分离大小不同的DNA 片段，主要是选用适当的琼脂糖凝胶浓度。不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的电泳速度差别较大。在分子量相当的情况下，不同构型的DNA移动速度次序如下：共价闭环DNA＞直线DNA＞开环的双链环状DNA。在同一浓度的凝胶中，分子量较小的DNA片段比较大的片段快。DNA片段的迁移距离（迁移率）与它的大小（分子量）的对数成反比。将未知DNA的迁移距离与已知分子大小的DNA标准物的电泳迁移距离进行比较，即可计算出未知DNA片段的大小。

表5-1 DNA大小范围与琼脂糖凝胶浓度的关系

本实验采用限制性内切酶HindⅢ或EcoRⅠ酶解λDNA的片段为标准物，建立其酶切图谱，同时以酶解各片段的分子量为纵坐标，以它们对应的迁移率为横坐标，在半对数坐标纸上，连接各点绘制出测定DNA分子量的标准曲线。共价闭环质粒pBR322DNA只有一个EcoR Ⅰ酶切位点，酶解后成为一条线状DNA，通过琼脂糖凝胶电泳，测量酶解后线型DNA的迁移距离，可以直接在分子量标准曲线上得出其分子大小。

试剂和器材

一、试剂

1.限制性内切酶HindⅢ、EcoRⅠ试剂盒

2.标准λDNA：按使用说明配制

3.标准pBR322：按使用说明配制

4.酶反应终止液（10×0.1mol/L EDTA，20%Ficoll，0.25%溴酚蓝）：10μL/组

称取3.72克EDTA·Na2·2H2O，20克Ficoll，0.25克溴酚蓝，溶解后定容至100ml。5.电极缓冲液（5×TBE）：用前稀释10倍

称取10.88克Tris，5.52克硼酸，0.74克EDTA·Na2·2H2O，溶解后用蒸馏水定容至200ml。使用前用蒸馏水稀释10倍，称为TBE稀释缓冲液（0.5×TBE）。

6.溴乙锭（EB）染色贮存液（1mg/ml）或者gold view溶液：

将100mg溴乙锭溶于蒸馏水或电极缓冲液100ml，棕色瓶内封好，避光保存。EB是诱变剂，配制和使用时应戴手套，并且不要将该溶液洒在地面或桌面上。凡是沾污过EB的器皿或物品，必须经专门处理后，才能进行清洗或弃去。

gold view溶液按照说明书配制

7.1%琼脂糖

二、器材

Eppendorf离心管，电泳槽，电泳仪，凝胶塑料托盘，小烧杯，移液器，一次性塑料手套，胶头滴管，紫外反射投射仪，洗瓶，大烧杯，量筒。

操作方法

一、DNA的酶解（参考）

取2只清洁、干燥、无菌的Eppendorf管，编号，按照限制性内切酶HindⅢ、EcoRⅠ试剂盒说明书用量，用微量注射器加入各种试剂\质粒λDNA和pBR322，最后用双蒸水补足至20μL，小心混匀。37℃水浴保温1—2h，然后各小管内加入2μL的酶反应终止液，混匀，终止酶促反应，冰箱内保存备用。操作前各试剂用量要反复核对，保证准确无误，所加试剂用量很少，必须认真操作。实验中有DNA标样做对照

二、1.0%琼脂糖凝胶板的制备

1.用配套挡板将凝胶塑料托盘短边缺口封住，置水平玻板或水平工作台面上，将样品槽模板（梳子）插进托盘长边上的凹槽内（距一端约1.5cm），梳齿底边与托盘表面保持0.5—1mm 的间隙，安置好后保持静置状态。（挡板与托盘缝隙处可用胶带或者琼脂糖溶液封住）。

2.称取0.3克琼脂糖置于小锥形瓶中，加入30mlTBE稀释缓冲液，在电炉上加热融化，一定要煮沸两次排尽气泡。

3.待琼脂糖冷却至放在手背不觉太烫手（约60℃）后，滴一滴EB或gold view，然后将琼脂糖溶液在靠近挡板一侧连续地倒入托盘内（注意中间不要间断），使凝胶缓慢而连续地展开直至在托盘表面形成一层约3mm厚均匀胶层（7.1×9.0cm）。胶内不要存有气泡，室温下静置约20分钟。

4.待凝固完全后，用小滴管在梳齿附近加入少量TBE稀释液润湿凝胶，双手均匀用力轻轻拔出样品槽模板（注意勿使样品槽破裂），则在胶板上形成相互隔开的样品槽。

5.取下封边的挡板，将凝胶连同托盘放入电泳槽平台上，倒入大量TBE稀释缓冲液直至浸没过凝胶面2—3mm，要防止样品槽内窝存气泡，可以用微量注射器挑除。

图5-1 凝胶托盘的组装

1. 托盘

2. 挡板

3. 梳子

三、加样

用微量注射器或移液枪将经酶切的样品液和未经酶切的样品液（要加2μL的酶反应终止液）分别加入到胶板的不同加样槽内，每个槽（5×2×2.5mm）容积约为25μL，因此加样量不要超过15μL，避免因样品过多而溢出，污染邻近样品。加样时，注射器针头或枪头穿过缓冲液小心靠近加样槽底部，但不要损坏凝胶槽，然后缓慢地将样品推进槽内，让其集中沉于槽底部。加完一个样品后的微量注射器应反复洗净后才能用以加下一个样品，加完一个样品后移液器需要更换枪头。

四、电泳

加样完毕，将靠近样品槽一端连接负极，另一端连接正极（千万不要搞错），接通电源，开始电泳。在样品进胶前可用略高电压，防止样品扩散，样品进胶后，应控制电压降不高于5V/cm。当染料带移动到距离凝胶前沿约1cm时，停止电泳。

五、观察

小心地取出凝胶置托盘上，将胶板推至预先浸湿并铺在紫外灯观察台上的玻璃纸内，在波长245nm紫外灯下进行观察。DNA存在的位置呈现橘红色或绿色荧光，可观察到清晰的条带。观察时应带上防护眼镜，避免紫外灯对眼睛的伤害。

六、制作测定分子量标准曲线

用卡尺量出λDNA—HindⅢ酶解各片段的迁移距离（cm），以DNA酶解各片段分子量为纵坐标，它们的迁移距离为横坐标，在半对数坐标纸上连结各点划出曲线，即为DNA分子量

片段碱基对数目（kb）道尔顿（×106）

1 2 3 4 5 6 7 23.130

9.419

6.557

4.371

2.322

2.028

0.564

15.0

6.12

4.26

2.84

1.51

1.32

0.37

注意事项

1.溴乙锭（EB）是诱变剂，配制和使用时应带乳胶手套，并且不要将该溶液洒在桌面或地面

上。凡是沾污过EB的器皿或物品，必须经过专门处理后，才能进行清洗或弃去。

2.DNA酶解过程中，使用的器具都应干净，并经消毒。配制时急需用灭菌的双蒸水，还要

防止限制性内切酶被污染。

3.加样量的多少取决于加样槽最大容积。可以采用大小不同的样品槽模板以形成容积不同的

加样槽，加入样品的体积应略小于加样槽容积，为此，对于较稀的样品液应设法调整其浓度或加以浓缩。

4.λDNA—HindⅢ酶解后应有8条带，但实际上只能看见6条，分子量小的2条带由于其荧

光弱，往往看不见。

思考题

1. 名词解释：λDNA；限制性内切酶；Marker

2. 根据实验结果，解释琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段大小的根据，聚丙烯酰胺凝胶电泳能否

测定DNA分子的大小，它们的区别是什么？

3. 说明DNA限制性内切酶图谱的构建在核酸研究和遗传工程等方面的应用价值。

实验6 唾液淀粉酶的性质和活力测定

（8学时）

目的要求

通过唾液淀粉酶性质的测定，了解酶的专一性和多种因素对酶促反应速度的影响，如：底物浓度、酶浓度、温度、pH值、激活剂和抑制剂等。通过对唾液淀粉酶活力的测定，学习酶活力、蛋白质含量的测定方法，及酶活力和比活力的计算方法。

试剂和器材

主要器材：可见光分光光度计、试管、漏斗、移液管、恒温水浴锅、pH试纸等。

主要试剂：可溶性淀粉、葡萄糖、3，5-二硝基水杨酸、酚、NaOH、HCl、乙醇、醋酸、醋酸钠、牛血清白蛋白溶液、考马斯亮蓝G—250等。

要求涉及的实验操作：

1.用考马斯亮蓝法制作蛋白质浓度标准曲线。

2.用3，5-二硝基水杨酸试剂法或Benedict试剂法制作葡萄糖浓度标准曲线。

3.至少测定底物浓度、温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响。

时间内容安排

1.实验前六周，教师向学生介绍实验目的、实验条件、实验材料，学生查阅文献资料。

2.实验前五周，学生提交具体实验方案和所需仪器、药品清单，实验室负责相关实验药品、

设备的准备工作。

3.实验开出。

4.提交一份实验报告，内容包括：实验的目的、实验的原理、实验试剂和器材、操作方法、

实验结果与分析、讨论和实验情况总结。

参考书目（仅供参考，另外可以查阅期刊杂志）

1.高级生化实验教程，王重庆等编

2.生化实验方法和技巧，张龙翔等编

3.生物化学实验，中国科学技术大学出版社

实验8 植物体内的转氨基作用

(3学时)

目的要求

1. 掌握转氨基作用的特点，了解转氨酶的作用；

2. 学习纸层析基本技术。

原理

植物体内通过转氨酶的作用，α-氨基酸上氨基可转移到α-酮酸原来酮基的位置上，结果形成一种新的α-酮酸和一种新的α-氨基酸，所生成的氨基酸可用纸上层析法检出。

试剂和器材

一、试剂

绿豆芽子叶及胚轴，0.1mol/L丙氨酸溶液，0.1mol/Lα-酮戊二酸溶液（用NaOH中和至pH7），含有0.4mol/L蔗糖的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH8.0），磷酸缓冲液（pH7.5），正丁醇，甲酸，0.1mol/L谷氨酸溶液，0.1%～0.25%茚三酮丙酮溶液。

二、器材

研钵，10ml量筒，离心机，试管，移液管，恒温箱，漏斗，层析缸，层析纸，毛细管，吹风机。

操作方法

一、酶液的提取

取发芽2～3天的绿豆芽5g，放入研钵中，加2ml磷酸缓冲液（pH8.0）研磨成匀浆，转入离心管。研钵再用该1ml缓冲溶液冲洗，并入离心管中，以3000r/min的转速离心10min，取上清液备用。

二、酶促反应

取3支试管编号，按下表分别加入试剂和酶液（单位ml）

管号0.1mol/Lα-酮戊二酸溶液0.1mol/L丙氨酸溶液酶液磷酸缓冲液（pH7.5）

1 0.5 0.5 0.5 1.5

2 0.5 —0.5 2.0

3 —0.5 0.5 2.0

将试管摇匀后置于37℃恒温箱中保温30min。取出后各加3滴30%三氯乙酸溶液终止酶反应，于沸水浴中加热10min，使蛋白质完全沉淀，冷却后离心或过滤，取上清液或滤液备用。

三、层析

取层析纸一张（手尽量不接触滤纸），在距底线2cm处用铅笔划一水平线，在线上等距离确定5个点，作为点样位置，相邻各点间距2.5cm。取上述上清液或滤液及谷氨酸、丙氨酸标准液分别点样，反应液点5～6滴，标准液点2滴。每点一次用吹风机吹干后再点下一次。最后沿垂直于基线的方向将滤纸卷成圆筒，以线缝合，注意纸边不能叠在一起或接触。

在层析缸中放入40ml推动剂，推动剂的成分是正丁醇、甲酸、水三种溶液按（15:3:2）的

2015高级生物化学及实验技术试题答案

高级动物生化试题 问答题： 1. 简述非编码RNA（non-coding RNA）的种类、结构特点及其主要功能。 非编码RNA的种类结构和功能 1tRNA转运RNA（transfer RNA，tRNA） 结构特征之一是含有较多的修饰成分，核酸中大部分修饰成分是在tRNA中发现的。修饰成分在tRNA分子中的分布是有规律的，但其功能不清楚。5’末端具有G（大部分）或C。3’末端都以ACC的顺序终结。有一个富有鸟嘌呤的环。有一个反密码子环，在这一环的顶端有三个暴露的碱基，称为反密码子（anticodon）.反密码子可以与mRNA链上互补的密码子配对。有一个胸腺嘧啶环。tRNA具有三叶草型二级结构以及“L”型三级结构，tRNA 的不同种类及数量可对蛋白质合成效率进行调节。tRNA负责特异性读取mRNA中包含的遗传信息，并将信息转化成相应氨基酸后连接到多肽链中。 tRNA为每个密码子翻译成氨基酸提供了结合体，同时还准确地将所需氨基酸运送到核糖体上。鉴于tRNA在蛋白质合成中的关键作用，又把tRNA称作第二遗传密码。tRNA还具有其他一些特异功能，例如，在没有核糖体或其他核酸分子参与下，携带氨基酸转移至专一的受体分子，以合成细胞膜或细胞壁组分；作为反转录酶引物参与DNA合成；作为某些酶的抑制剂等。有的氨酰-tRNA还能调节氨基酸的生物合成。 2rRNA核糖体RNA（ribosomal RNA, rRNA） 核糖体RNA是细胞中最为丰富的RNA，在活跃分裂的细菌细胞中占80%以上。

他们是核糖体的组分，并直接参与核糖体中蛋白质的合成。核糖体是rRNA 提供了一个核糖体内部的“脚手架”，蛋白质可附着在上面。这种解释很直接很形象，但是低估了rRNA在蛋白质合成中的主动作用。较后续的研究表明，rRNA并非仅仅起到物理支架作用，多种多样的rRNA可起到识别、选择tRNA以及催化肽键形成等多种主动作用。例如：核糖体的功能就是,按照mRNA的指令将氨基酸合成多肽链。而这主要依靠核糖体识别tRNA 并催化肽键形成而实现。可以说核糖体是一个大的核酶( ribozyme)。而核糖体的催化功能主要是由rRNA来完成的,蛋白质并没有直接参与。 3 tmRNA tmRNA主要包括12个螺旋结构和4个“假结”结构，同时还包括一 个可译框架序列的单链RNA结构。tmRNA中H1由5’端和3’端两个末端形成，与tRNA的氨基酸受体臂相似。H1和H2的5’部分之间有一个由10-13nt 形成的环，类似tRNA中的二氢尿嘧啶环，称为“D”环。H3和H4，H6和H7，H8和H9，H10和H11之间分别形成Pk1，pK2，pK3，pK4。H4和H5之间则由一段包含编码标记肽ORF的单链RNA连接。H12由5个碱基对和7nt 形成的环组成，类似tRNA中的TΨC臂和TΨC环，称为“T”环。tmRNA 结构按照功能进行划分可分为tRNA类似域（TLD）和mRNA类似域（MLD），TLD主要包括H1,H2,H12,“D”环和“T”环，MDL则包括ORF和H5，这两部分分别具有类似tRNA和mRNA的功能。tmRNA是一类普遍存在于各种细菌及细胞器（如叶绿体，线粒体）中的稳定小分子RNA。它具有mRNA分子和tRNA分子的双重功能，它在一种特殊的翻译模式——反式翻译模式中发挥重要作用。同时，它与基因的表达调控以及细胞周期的调控等生命过程密切相关，是细菌体内蛋白质合成中起“质量控制”的重要分子之一。识别翻译或读码有误的核糖体，也识别那些延迟停转的核糖体，介导这些有问

生化室作业指导书

生化室作业指导书 文件编号：ZTGRY-1-SH-01~61 第1版 审核： 批准：

生效日期：2014年1月1日 梓潼县工人医院检验科

目录

修订页

血清总胆红素(T-BIL)测定 1. 实验原理 血清中的胆红素分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。大多数方法是在1883年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法1，一些改良的方法已被用来增进反应。这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行反应。 英诺华总胆红素试剂是钒酸氧化法，PH接近于3时，在钒酸盐及表面活性剂的作用下，总胆红素被氧化成胆绿素。此时，胆红素特有的黄色减少，通过测定钒酸作用前后的吸光度的差可求得样品中总胆红素的浓度。 胆红素钒酸胆绿素 2. 标本： 2.1 病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。 2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。 3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。 4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。 5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：英诺华总胆红素试剂盒（试剂1: 4×32ml；试剂2：8ml） 6.1.1 试剂组成 试剂1： 柠檬酸缓冲液88mmol/L 试剂2： 磷酸盐缓冲液50mmol/L 偏钒酸钠3mmol/L SID 见瓶签 6.1.2 试剂准备：液体试剂，直接使用，无需配制。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为12个月。试剂2必需避光保存。试剂不可冰冻。

生物化学实验内容

《生物化学实验》内容 课程类型：制药工程专业必修 实验总学时：32课时 开设实验项目数：8个 适用对象：2017制药工程1、2班 实验教师：段志芳 一、实验目标及基本要求 生物化学实验是一门独立的实验课程，培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事求是的科学态度。 二、实验内容

三、成绩 包括实验时的表现（实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%）及实验报告的完成情况和完成质量（占50%），每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。 四、要求 （1）实验过程中同组人可以配合进行； （2）实验报告独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他组数据；（3）实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做； （4）对实验结果进行简单的分析. 实验一植物组织中可溶性总糖的提取 一、实验目的 1. 掌握可溶性总糖的概念和性质。 2. 掌握可溶性总糖提取的基本原理。

3．掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。 二、实验原理 可溶性糖是指易溶于水的糖，包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。可溶性总糖提取方法包括：热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。本实验利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知溶液体积和原料重量，可以求出总糖含量。 三、实验用品 1.仪器设备：电子天平（精确到0.0g，配称量纸若干）；可控温电 加热板或电炉或电热套或水浴锅均可。可共用。 2.玻璃器皿：研钵1套；100mL锥形瓶1个；25mL量筒1个；玻 璃棒1根；100mL烧杯2个；胶头滴管1支；过滤装置1套（铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个）； 不锈钢刮勺1个；剪刀1把。此部分为每组所用，集中到小框里，放置各实验台上。 3.药品试剂：新鲜植物叶片；蒸馏水。 4.其他：9cm滤纸若干（与玻璃漏斗配套）；纸巾若干；标签纸若

生物化学课程实验指导书

〈〈生物化学》实验指导书适用专业：生物技术、生物工程、食品科学与工程 生物与食品工程学院生物科学系

生物化学实验细则 为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。 1. 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。 2. 严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。非本实 验组的同学不准进入实验室。 3. 进入实验室必须穿实验服。各位同学进入各白实验小组实验台后， 保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。 绝对禁止用实验仪器或药物开玩笑。 4. 实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入 垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。 5. 实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法, 使用时要严格遵守操作规程，不得擅白移动实验仪器。否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。 6. 使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。 7. 做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。 8. 实验后，要及时完成实验报告。 2006年1月

生物化学实验细则 (i) 目录 (2) 实验1蛋白质的沉淀、变性反应 (3) 实验2醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 (6) 实验3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子虽- --11实验4 凝胶过滤层析法测定蛋白质分子虽 (16) 实验5 DNA的琼脂糖凝胶电泳 (20) 实验6唾液淀粉酶的性质和活力测定 (24) 实验7 生物氧化与电子传递 (25) 实验8植物体内的转氨基作用 (27) 实验1 蛋白质的沉淀、变性反应 （3学时） 目的要求 1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 2. 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 3. 了解蛋白质变性与沉淀的关系。 4. 了解蛋白质两性性质 原理 在水溶液中，蛋白质分子表面形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，则以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质的沉

第一人民医院生化检验作业指导书

第一人民医院生化检验作业指导书 1.0 目的 规范管理，保证生化检验质量。 2.0 适用范围 本科室人员。 3.0 职责 3.1科主任和生化组长负责仪器维护和试剂管理。 3.2生化当班人员负责生化项目的检脸。 3.3生化当班人员负责仪器使用情况记录和检验结果记 录。 4.0 工作程序 4.1 仪器和试剂管理 按照中文操作手册，科主任和生化检验组长负责调试、管理和维护仪器，使之处于备用状态。根据仪器要求选用有批准文号合格的试剂，并按试剂要求合理保存试剂。 4.2生化项目和检验时间的安排

由本科室根据临床需要和我院实际情况安排项目和时间， 原则上要求急诊项目能随时检验，其它项目能定时检验。 4.3 检验的实施 4.3.1首先医生应根据患者状况和实际病情开各种检验申请单。 4.3.2护士应按检验申请单的项目要求严格收取合格的标本并及 时送检验科。 4.3.3生化检验人员对标本再进一步确认无误后签名，然后对标 本进行分检、离心等处理，使标本处于待检状态。 4.3.4生化检验人员每天在上机前应检查仪器状态，如果仪器处 于“ stand by ”状态，且无红色报警等异常情况，并确 认正常后才能正式运转，如发现断电或死机等问题应及时 向生化组长或科主任汇报，待排除故障，确认仪器正常， 需重新定标，待通过后方可开机检测。 4.3.5生化检验人员根据标本不同、项目不同，按照《全国临床检验操作规程》和试剂说明书及仪器操作规程对标本进行及时，准确检验。 4.3.6生化检验人员正式测定标本前应做质控，质控通过后方可 上机测标本，并将质控结果记录在检验科室内质控记录本

中。生化组长负责项目的编程设定、定标、质控。 4.3.7生化检验人员对检验结果应进行认真核对，审核无误后方 签发报告，对严重异常结果应通知开单医生或科室，及时 了解患者情况，如果病情与结果相一致，基本可以排除操 作中的偶然误差，及时签发报告，如果病情与结果不一 致，应严格检查操作步骤，排除各种操作误差后方可签发 报告，并尽可能要求患者复查。对人为引起标本结果严重 异常者应及时总结经验，防止下次再出现，对仪器引起结 果异常时应及时调校仪器，保证准确检测。凡急诊申请应 在60 分钟内出报告。 4.3.8门诊报告单在发报告单窗口发放，由患者或其亲属 凭发票领取；住院部报告单由科内专人在上午11 点左 右和下午5 点左右发送各临床科室，并由当班医 务人员签收。凡门诊患者非主观原因造成报告单丢 失者，可凭发票到检验科补发报告单，住院患者由主管医 生提出申请，方可补发报告单。 4.4在使用仪器时，使用者应及时记录，发现仪器或结果

工业控制网络技术课程实验指导书2013

实 验 一 Automation Studio 的使用和基本程序编程及调试 一、实验目的 1、掌握Automation Studio 的基本使用技巧和方法 2、熟悉Automation Studio 的基本命令 3、学会和掌握Automation Studio 程序的调试方法 二、实验设备 PC机一台，装有Automation Studio编程软件；贝加莱PLC-2003一台； 各PC机与PLC-2003通过RS232电缆连接进行通信。 详见附录一。 三、实验内容 熟悉并练习Automation Studio的使用，用选定的编程语言编制、调试控制程序。Automation Studio是贝加莱公司为其自动化控制设备PLC（可编程计算机控制器）开发的一种可使用多种编程语言的PLC开发环境，如附录二所示。 1．PLC硬件配置： 根据所给实验装置，使用Automation Studio对系统硬件进行配置。 配置方法见本指导书附录B。 2．实验程序1： 使用Automation Basic或其它PLC编程语言，编制一段小控制程序，实现以下功能：利用实验装置上的第一个模拟量旋钮（电位器），来控制模拟量输

出，当旋转该电位器时，第一个模拟量输出随之变化，旋钮逆时针旋到底时（模拟量输入为最小值0），要求模拟量输出为0（光柱无显示），当旋钮顺时针旋到底时（模拟量输入为最大值32767），要求模拟量输出为最大值（光柱全显示）； 同时，第二个模拟量输出的状态正好与第一个模拟量输出相反。 3．实验程序2： 使用Automation Basic或其它PLC编程语言，编制一段小控制程序，实现以下功能：利用实验装置上的两个开关，来控制模拟量输出，当接通（合上）其中一个开关（另一个应处于断开状态）时，第一个模拟量输出从0开始随时间逐渐增大，达到其最大值后，再从0开始…，周而复始；当接通（合上）另一个开关时，第二个模拟量输出从0开始随时间逐渐增大，达到其最大值后，再从0开始…，同时，第二个模拟量输出从其最大值开始随时间逐渐减小，达到0后，再从其最大值开始…，周而复始。 四. 思考题 1．在Automation Studio中为什么要对PLC系统硬件进行配置？ 2．为什么要为用户编制的控制程序命名？ 3．为用户程序选择循环周期的原则是什么？ 4．Automation Studio为用户提供多种编程语言有什么好处？

生化企业化验室设备操作规程概要

化验室设备操作规程

SH220石墨消解仪 一、设备参数 二、操作方法 1、接通电源，打开仪器开关。 2、通过控制面板设定所需温度并按确认键。 3、当实际温度显示屏达到所需温度时，放入样品即可。 4. 实验结束后，关闭仪器电源，等待冷却。 K9840凯氏自动定氮仪 一、设备参数 二、操作方法 1、化学试剂的准备 (1)将蒸馏水加入到蒸馏水桶中，并将瓶盖拧紧。 (2)配置30%~40%的氢氧化钠溶液，加入到碱液桶内，并将桶盖拧紧。 (3)配置2%的硼酸溶液，加入到硼酸桶内，并将瓶盖拧紧。 2、调试 将冷却水管接在水龙头上，并打开自来水，检查设备是否漏水。打开设备，换上一个空的消解管和三角瓶，关闭防护门后，选择自动，连续确认三次后，观察设备运行是否正常。

3、检测 设备试运行正常后，关闭防护门，选择＂自动＂，连续确认三次后，对样品进行蒸馏。 三、注意事项 1、仪器使用前首先确认蒸馏水桶、碱液桶、硼酸桶内液体是否充足，如不足需补充。 2、排废液的管路出口要比仪器安放的高度要低，以便排液通畅。 3、仪器长期不用，应将碱液管路中的碱液排除，并加入清水。 YP202N型电子天平 一、设备参数 二、操作方法 1、调水平。 2、开机，按开机键开机，预热30min。 3、样品称量。 4、关机 称量完毕，按关机键关机，拔下电源。 三、注意事项 1、将天平置于稳定的工作台上，避免振动，阳光直射和气流。 2、经常使用天平时，应使天平连续通电以减少预热时间，使天平处于相对稳定状态，如果天平长期不用应关闭电源。

3、天平以保持清洁，谨防灰尘等无钻入天平。不应该放在有腐蚀性气体的环境中。 4、根据天平的使用程度，应作周期性的检查校准。 AL204电子分析天平 一、仪器参数 二、操作方法 1、调水平。 2、开机，按开机键开机，预热30min。 3、样品称量。 4、关机 称量完毕，按关机键关机(或一段时间不用后自动关闭显示器)，拔下电源。 三、注意事项 1、将天平置于稳定的工作台上，避免振动，阳光直射和气流。 2、经常使用天平时，应使天平连续通电以减少预热时间，使天平处于相对稳定状态，如果天平长期不用应关闭电源。 3、天平应保持清洁。不应该放在有腐蚀性气体的环境中。 4、根据天平的使用程度，应作周期性的检查校准。 JA2003N电子天平 一、仪器参数

生物化学实验

生物化学实验讲义 化学工程与技术学院 基础部

实验一酪蛋白的制备 一、目的 学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。 二、原理． 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 三、器材 1 、离心机2、．抽滤装置 3、精密pH试纸或酸度计 4、电炉 5、烧杯 6、温度计． 四、试剂与材料 1、牛奶2500mL 2、95％乙醇1200mL 3、无水乙醚1200mL

4、0.2mol／L pH 4.7醋酸—醋酸钠缓冲液3000mL 5、．乙醇—乙醚混合液2000mL 五、操作 1、将100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入 预热至40℃、pH 4.7的醋酸缓冲液100 mL。用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟(3 000r／min)。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 2、用水洗沉淀3次，离心10分钟(3000r／min)， 弃去上清液。 3、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬 浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 4、将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯晶。 5、准确称重，计算含量和得率。 含量：酪蛋白g／100mL牛乳(g％)

得率： 测得含量 100 % 理论含量 思考题 1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？ 实验二小麦萌发前 后淀粉酶活力的比较 一、目的 1.学习分光光度计的原理和使用方法。 2.学习测定淀粉酶活力的方法。 3.了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。 二、原理 种子中贮藏的糖类主要以淀粉的形式存在。淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。 2（C6H10O5）n +nH2O nC12H22O11 麦芽糖有还原性，能使3，5---二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基-5-硝基水扬酸。后者可用分光光度计测定。

数学实验课程实验指导书Word版

《数学实验》课程实验指导书 2006-4-29

目录 实验一、微积分基础 3实验二、怎样计算 5实验三、最佳分数近似值 6实验四、数列与级数 7实验五、素数 8实验六、概率 9实验七、几何变换 11实验八、天体运动 13实验九、迭代（一）——方程求解 15实验十、寻优 16实验十一、最速降线 18实验十二、迭代（二）——分形 20实验十三、迭代（三）——混沌 21实验十四、密码 22实验十五、初等几何定理的机器证明 23附表（实验报告） 24

实验一、微积分基础 一、实验目的及意义：1、熟悉Mathematic软件常见函数图形 2、通过作图，进一步加深对函数的理解，观察函数的性质 3、构造函数自变量与因变量的对应表，观察函数的变化。 二、实验内容： 1．1函数及其图象 1．2数e 1．3 积分与自然对数 1．4调和数列 1．5双曲函数 三、实验步骤 1.开启软件平台——Mathematics ，开启Mathematics编辑窗口； 2.根据各种问题编写程序文件 3.保存文件并运行； 4.观察运行结果(数值或图形)； 5.根据观察到的结果写出实验报告，并浅谈学习心得体会 四、实验要求与任务 根据实验内容和步骤，完成以下具体实验，要求写出实验报告（实验目的→问题→数学模型→算法与编程→计算结果→分析、检验和结论→心得体会） 1、1函数及图形 (1)在区间[-0.1,0.1]上作出 y = sin(x)/x 的图象,观察图象在 x = 0 附近的形状 (2)在同一坐标系内作出函数y = sin(x) 和它的展开式的前几构成的多项式函数y = x-x^3/3!,y = x-x^3/3!+x^5/5! . . . 的图象,观察这些多项式函数图象对 y = sin x 的图象逼近的情况. (3)分别取n =10,20,画出函数 y = sin(2k-1)x/(2k-1),k=1,2,...,n求和} 在区间[-3PI,3PI]上的图象.当N 趋向无穷时函数趋向什麽函数? (4)别取n = 5,10,15, 在同一坐标系内作出函数f(x) = sin x 与p(x) = x * (1-x^2/PI^2)*(1-x^2/(2^2*PI^2))*...*(1-x^2/n^2*PI^2))在区间[-2PI,2PI]上的图象,观察 p(x) 图象对 y = sin x的图象逼近的情况. 1、2数e 观察当n趋于无穷大时数列a n=(1+1/n)n和A n=(1+1/n)n+1的变化趋势: （1）n=10m,m=1,2,. . . ,7时的值,a n,A n观察变化趋势. （2）在同一坐标系内作出三个函数地图象y=(1+1/10x)10^x , y=(1+1/10x)10^x , y=e观察当 x 增大时

操作系统_课程实验指导书

《—操作系统—》 实验指导书 洪朝群编写 适用专业：计算机(嵌入式) 厦门理工学院计算机科学与信息工程学院 2015年9 月

实验指导书前言内容要求 前言 本课程的基本内容介绍，通过学习学生需要掌握的基本知识。 为了使学生更好地理解和深刻地把握这些知识，并在此基础上，训练和培养哪些方面的技能，设置的具体实验项目，其中哪几项实验为综合性、设计性实验。 各项实验主要了解、掌握的具体知识，训练及培养的技能。 本指导书的特点。 对不同专业选修情况说明。

实验一：Linux操作系统的安装过程与界面 实验学时：4 实验类型：验证 实验要求：必修 一、实验目的 通过本实验的学习，使学生掌握Linux操作系统的安装方法，并且了解Linux 界面的基本使用方法。 二、实验内容 实验内容：用vmware workstation安装Ubuntu12.10系统。 三、实验原理、方法和手段 无 四、实验组织运行要求 以学生自主训练为主的开放模式组织教学 五、实验条件 无 六、实验步骤 1、下载Ubuntu12.10桌面版安装镜像， https://www.sodocs.net/doc/e63576364.html,/download/desktop 2、打开vmware，建立虚拟机镜像 3、安装过程参考（“VMWare8.0安装Ubuntu12.04教程.pdf”文件），注意使用虚拟机的时候把镜像文件放在最后一个盘。 4、（可选步骤）如果本机上的wmware版本在安装系统的过程中出现问题，可下载新版进行安装。https://www.sodocs.net/doc/e63576364.html,/d/FWACAQQFRTZQ?p=09122 七、思考题 Linux与Windows有何不同？

TBA-40FR全自动生化分析仪标准化操作规程

芜湖县中医院检验科第 1 页共 4 页全自动生化分析仪标准化操作规程 【目的】 描述东芝TBA-40FR全自动生化分析系仪的使用和维护，以保证检验质量。 【适用范围】 适用于TBA-40FR 全自动生化分析仪的操作和维护。 【开机前准备】 1．打开去离子水机电源开关，确认去离子水的设施运转正常； 2．确认废水管道的软管接到下水道；倒空高浓度废液桶； 3．打开系统前面的板，检查泵、水路系统是否漏水，特别注意管道顶端，弯 曲处和连接处。检查后请关好系统前面板； 4．确认在试剂仓的1号位置放入未稀释的恒温槽添加剂；2号和56号位置放入1%稀释的碱性清洗液； 5．检查样品针、试剂针、搅拌器、清洗针有无裂缝、折断和弯曲。 6．确认放置了足够数量的打印纸 【开机】 按下[POWER]电源开关，初始化后出现启动状态的画面，按下[POWER]电源开关。初始化后出现启动状态的画面，启动结束后按下确认键，仪器开始自动清洗。 ），检查各试剂瓶中的剩余体积，添加不足在主菜单下打开画面12（REAGENT MAP 试剂。 【关机】 当一天所有的测试完成的时候，按维护和保养第一条“清洗试剂和样品管路 清”先管路。清洗结束后检查并确认各部件无异常，按[POWER]电源开关，关闭仪器。 【项目参数设置】 主菜单画面下→4→2进入参数设置，根据试剂厂家提供的参数输入相应位置。设置好参数后按EXIT退出。

芜湖县中医院检验科第 2 页共 4 页 【校准】 在主菜单→[13][确认]，显示标准界面扫方向键移动光标至要校准的项目。 1．终点法：直接按ENTER键选中，然后在参数设置界面中设置校准物放置位 置及标准物浓度，将标准品放入样品盘中圈相应校准位。按START键开始校准 2. 因数法：先按PF6然后再按ENTER键选中，按START键开始校准 【质控】 将中值质控样品设置成1号样本号，高值质控样品设置成2号样本号，质控 品当成普通样品进行检测，检测结果自动在LIS系统生成质控图。质控结果处理 参照《生化室内质控标准操作程序》。 【样品检测步骤】 1．常规样品的测定 （1）将待测样品放入样品盘中。主菜单画面下→[15][ENT]，按PF3键光标在样品位置处闪烁，输入样品位置号（1-40），按[ENT]确认，输入样品编号 （1-32000），按[ENT]确认，按PF8或向下的方向键，在项目菜单中选择实验： ①单个实验选择：将光标移到欲选择的实验位置，按[ENTER]键，如同一样品需选择2个或更多实验，重复上述步骤。 ②选择项目组合中的组合编号（1-48），按[ENTER]键。 ③批量输入相同实验项目：按上述①或②选择好实验项目后，按PF5键此时在屏幕右下角光标闪烁，输入要结果的样品编号按[ENTER]键 （2）设定下一个样品时，按[PF8]将光标移到下一个样品位置，重复上述步 骤 2．急诊样品测定 按[STAT]急诊键，出现急诊画面。如果此时正进行其他测试，当按下[STAT]键后，[PAUSE]键指示灯亮。显示急诊画面时，选择实验项目方法同常规样品①～③，按[PAUSE]急诊样品开始测定 3．样品信息录入 在样品检测前打开LIS系统，输入工号和密码登记LIS系统，根据申请单录 入被检者信息，包括姓名、年龄、性别、科别、类型、医生姓名。录入完毕核对

《计算机应用基础》课程实训指导书(第三版)

广东轻工职业技术学院 《计算机应用基础》课程实训指导书 （第三版） 计算机基础教研室 2009年3月

《计算机应用基础》课程实训指导书 一、目的 通过为一周的实训，巩固本学期所学习的知识，强化的各种基于工作的过程的各种操作技能，进一步培养学生熟练处理Word文档的综合应用、Excel高级数据管理、PowerPoint演示文稿高级制作技巧及Internet网络综合应用能力，并为学生参加计算机水平考试及办公自动化考试作好准备。 二、实训内容提要 1.Word中文处理的综合应用 2.Excel电子表格的综合应用 3.PowerPoint演示文稿的综合应用 4.申请邮箱、收发邮件、Outlook Express的使用 5.信息检索与信息的综合应用 6.利用Serv-U 软件创建与配置FTP站点，实现文件的上传与下载。 7.Web 站点的创建与配置，网页的浏览（选） 三、考核 1．考核方式 操作部分由各部分指导老师现场打分，最后由负责指导老师汇总。 2．成绩评定标准 考核内容包括：成绩评定为100分制。Word 高级应用25％，电子表格综合应用25％，PPT综合应用 10%，Internet操作10％，实操报告（心得体会，遇到的问题，解决办法，收获等）20%（包括考勤）,模拟题试题10%. 四、提交实训成果 1．实训成果（作业、作品等） 2．实训报告：按照实训报告模板的格式去写，包括实训中遇到的问题，解决办法，包含一些截图，一周实训的体会、收获及今后努力方向等，文字要在2500字以上。篇幅在4页左右（含截图）。

说明： 1．由于各个班级教学学时及专业的差异性相差很大，而实训内容丰富且有一定难度，而实训的时间较短且集中，因此实训指导老师根据班级实际情况与水平，在指训指导书中挑选实用性强且与计算机水平考试有一定关联的题目进行实训。 2．选择实训的原则： ●在1～10中选择8题 ●11～17中选择5至6题 ●18～21必选，22根据机房情况选择 ●模拟题选择一套 3.带实训的老师一定要认真负责，结束后及时登记实训成绩，收齐学生的实训成果，并写出该班的实训总结，记录成光盘交到计算机基础教研室。 第1部分实训内容 实训1 制作用户调查表 [操作要求] 按照下面的步骤编排出如图1样文所示，并以“实训一.doc”为文件名保存。 1．输入文字 ●在文档中，输入表格的标题及最后一行的文字。 2．插入表格 ●插入“样文”的表格及输入其中的字符； ●表格的前三行高固定值1厘米，各列宽3.5厘米，表格中的字符设为宋体、四号， 水平左对齐，垂直居中； 3．设置文本 ●表格标题设为黑体、二号字，居中对齐； ●表格末行设为幼圆、小四号字，其中，“回函请寄：”几字设为加粗; ●表格外边框的线宽为1.5磅。 4．编排格式 ●在文档头部插入一行由“剪刀”和“-”号组成的字符串； ●按“样文1”所示位置，插入艺术字库中第1行第2列式样的艺术字； ●艺术字设为隶书、36磅、红色，无环绕。

生化实验五大技术

生化实验五大技术 一.分光光度技术 1.定义:根据物质对不同孩长的光线具有选择性吸收,每种物质都具有其特异的吸收光语。而建立起来的一种定t 、定性分析的技术。 2.基本原理:（图1-1光吸收示意） 透光度T=It/lo 吸光度A=lg(lo/ I1) 朗伯-比尔(lambert-Beeri)定律:A=KLc K 为吸光率，L 为溶液厚度(em), c 为溶液浓度 (mol/L)] 摩尔吸光系数日ε:1摩尔浓度的溶液在厚度为 I.cm 的吸光度。 c=A/ε 3. 定量分析: (1)标准曲线(工作曲线)法 (2) 对比法元-KCLCx (3)计算法: e=A/ε (4)差示分析法(适用于浓度过浓成过稀) (5) 多组分湖合物测定 4.技术分类 分子吸收法&原子吸收法:

可见光(400-760 nm) &紫外光(200~ 40m) &红外光(大于760 nm)分光光度法； 5.应用方向 有机物成分分析&结构分析红外分光光度法测定人体内的微量元囊原子吸收分光光度法 二电脉技术 1.定义:带电荷的供试品在情性支持介质中，在电场的作用下，向其对应的电 极方向按各自的速度进行脉动。使组分分离成族窄的区带，用透宜的检洲方法记录其电泳区带图请或计算其百分含量的方法。 2.基本原理: 球形质点的迁移率与所带电成正比，与其半径及介质粘度成反比。v=Q/6xrη 3.影响电泳迁移率的因素: 电场强度电场强度大，带电质点的迁移率加速 溶液的PH值: 溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移幸越大 溶液的离子强度:电泳液中的高子浓度增加时会引起质点迁移率的降低 电渗:在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗 4:技术分类: 自由电泳(无支持体) 区带电泳(有支持体):法纸电泳(常压及高压)，博层电泳(薄膜及薄板).凝波电泳(琼脂，琼脂糖、淀粉胶、柔丙烁配胶凝胶)等 5. 电泳分析常用方法及其特点: 小分子物质滤纸、纤维素、硅胶薄膜电泳复杂大分子物质凝胶电泳 ⑴醋酸纤维素薄膜电泳 ①这种薄顺对蛋白质样品吸阴性小，消除纸电沫中出现的“拖尾”现象 ②分离理应快，电泳时间短 ③样品用最少: ④经过冰最酸乙醉溶液或其它看明液处理后可使膜透明化有利丁对电泳图潜的光吸收措测店和爱的长期保 ------别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测(胰岛素、游菌酶、胎儿甲种球

6.生化培养箱期间核查作业指导书

生化培养箱期间核查作业指导书 1. 期间核查的目的： 为了检查生化培养箱的温度示值偏差、温度均匀度、波动性，确认仪器的可靠性，使其保持良好的运行状态，从而保证本实验室所得到的测量结果准确可靠。 2. 期间核查的条件： 2.1环境条件：温度5~30℃，相对湿度≤80%，大气压86kPa~106kPa 。 2.2 控制温度范围及精度：0~65℃，温度均匀性允差：±0.8℃，温度波动性允差：±0.3℃。 3. 期间核查的频率：生化培养箱使用频繁时，每季度一次，仪器使用不频繁时，可适当减少核查的频次。 4. 核查项目和核查方法： 4.1 外观核查：外观完好；铭牌上标有仪器的名称、型号、制造厂名（或厂标）、出厂编号、玻璃毛刺回流管无破损。 4.2核查方法： 核查温度点一般选择在设备的中层的四个角落与中心点（共5个点），测试点与内壁的距离不小于各边长的1/10。中心测试点应在恒温培养箱的几何中心。 将已检定的精确度为0.2℃温度计分别放置在测试点上，打开电源，将恒温设备的温度值设定值核查值。 待设备工作室温度稳定后，开始记录温度计的温度，每隔2min 记录一次数据，连续进行10次。 4.3 温度示值偏差计算公式：d X ?=d X —0X 。 式中：d X ?—温度偏差，℃； d X —设备显示的温度值，℃； 0X —中层测试温度的10次平均值，℃。 4.4温度均匀度：n X X X n i i i u ∑-= ?)2/)((min max 式中：u X ?—温度均匀度，℃； m a x i X —各测试点在第i 次测得的最高温度，℃； min i X —各测试点在第i 次测得的最低温度，℃； n —测定次数。 4.5温度波动性：X ?=±（X max -X min ）/2

网络安全课程实验指导书

网络安全课程实验安排及指导书 2009-10-21

实验安排1、推荐必做实验 网络扫描 计算机病毒及恶意代码 防火墙实验 入侵检测系统 2、推荐选作实验 VPN配置 证书的申请和使用 windows安全配置实验

实验一：网络扫描实验 【实验目的】 了解扫描的基本原理，掌握基本方法，最终巩固主机安全 【实验内容】 1、学习使用Nmap的使用方法 2、学习使用漏洞扫描工具 【实验环境】 1、硬件PC机一台。 2、系统配置：操作系统windows XP以上。 【实验步骤】 1、端口扫描 1）解压并安装ipscan15.zip，扫描本局域网内的主机 2）解压nmap-4.00-win32.zip，安装WinPcap 运行cmd.exe，熟悉nmap命令(详见“Nmap详解.mht”)。 3）试图做以下扫描： 扫描局域网内存活主机， 扫描某一台主机或某一个网段的开放端口 扫描目标主机的操作系统 试图使用Nmap的其他扫描方式，伪源地址、隐蔽扫描等 2、漏洞扫描 解压X-Scan-v3.3-cn.rar，运行程序xscan_gui.exe，将所有模块选择扫描，扫描本机，或局域网内某一台主机的漏洞 【实验报告】 1、说明程序设计原理。 2、提交运行测试结果。 【实验背景知识】 1、扫描及漏洞扫描原理见第四章黑客攻击技术.ppt 2、NMAP使用方法 扫描器是帮助你了解自己系统的绝佳助手。象Windows 2K/XP这样复杂的操作系统支持应用软件打开数百个端口与其他客户程序或服务器通信，端口扫描是检测服务器上运行了哪些服务和应用、向Internet或其他网络开放了哪些联系通道的一种办法，不仅速度快，而且效果也很不错。 Nmap被开发用于允许系统管理员察看一个大的网络系统有哪些主机以及其上运行何种服务。它支持多种协议的扫描如UDP，TCP connect(),TCP SYN (half open), ftp proxy (bounce attack),Reverse-ident, ICMP (ping sweep), FIN, ACK sweep,X mas Tree, SYN sweep, 和Null扫描。你可以从SCAN TYPES一节中察看相关细节。nmap 还提供一些实用功能如通过tcp/ip来甄别操作系统类型、秘密扫描、动态延迟和重发、平行扫描、通过并行的PING侦测下属的主机、欺骗扫描、端口过滤探测、直接的RPC扫描、分布扫描、灵活的目标选择以及端口的描述。 一、安装Nmap Nmap要用到一个称为“Windows包捕获库”的驱动程序WinPcap——如果你经常从网上下载流媒体电影，可能已经熟悉这个驱动程序——某些流媒体电影的地址是加密的，侦测这些电影的真实地址就要用到WinPcap。WinPcap的作用是帮助调用程序(即这

检验医学SOP文件生化室作业指导书

生化室作业指导书 文件编号：ABCD-3-SF-01~61 第A版 编制： 审核： 批准： 生效日期：2015年4月8日ABCD人民医院检验科

目录

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血清总胆红素(T-BIL)测定 1. 实验原理 血清中的胆红素分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。大多数方法是在1883年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法1，一些改良的方法已被用来增进反应。这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行反应。 申能总胆红素试剂是改良的重氮法。使用一种稳定的重氮盐，2,4-二氯苯胺重氮盐（DCA），与胆红素反应，形成红色偶氮化合物，它在540nm吸光度最大。在540/600nm时的吸光度与标本中总胆红素的浓度成正比。 胆红素+DCA 红色偶氮化合物 表面活性剂 2. 标本： 2.1 病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。 2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。 3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。 4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。 5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：申能总胆红素试剂盒（141 0817170 1 试剂1＋试剂2） 6.1.1 试剂组成 试剂1：6×64 ml 磷酸缓冲液40mmol/L 氯化钠9g/L 表面活性剂,稳定剂适量 试剂2：6×16 ml 2,4-二氯苯胺重氮盐1mmol/L 盐酸30mmol/L 表面活性剂适量 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存

单片机课程实验指导书

单片机实验指导书 编写者：小编 机械学院 2018年12月

目录 单片机实验指导书 (1) 实验1 - LED流水灯实验 (3) 实验2 - 模拟汽车转向灯实验 (5) 实验3 - 模拟二进制累加器实验 (7) 实验4 - 继电器控制实验 (9) 实验5 - 步进电机控制实验 (11) 实验6 - PWM波输出实验 (13) 实验7 - 直流电机调速实验 (15) 实验8 - 中断控制实验 (17)

实验1 - LED流水灯实验 一、实验目的 1.熟悉C51的开发环境； 2.掌握芯片的基本开发技能； 3.加深对单片机I/O口工作原理的了解； 4.掌握单片机引脚输出状态的基本控制方法。 二、实验原理 1.P1口是准双向口，它作为输出口时与一般的双向口使用方法相同，可以通过控制寄存器输出对应的高低电平； 2.L1-L8等8颗LED灯管的电气特性与类似，正向电压点亮，反向电压熄灭； 3.P1口的8个引脚可以有效控制8颗LED的工作状态，合理编排输出状态即可实现LED流水灯的基本功能。 三、实验材料 1.DICE-598KⅢ实验平台； 2.PC机一台； 3.导线若干。 四、基本电路原理图 五、参考程序流程

六、实验步骤 1.单片机AT89S52的P1.0-P1.7口接L1-L8； 2.根据程序流程图编写出相应的C51工程代码； 3.使用keil_v5对代码进行调试和仿真； 4.记录调试过程和仿真结果，并结合理论知识进行分析； 5.将代码烧写到芯片上并运行，观察运行结果； 6.如实记录观察到的现象，并结合理论知识进行分析。 七、实验要求 1.准时到达实验室； 2.合理完善实验步奏； 3.独立完成单片机工程的建立、调试和仿真； 4.独立完成实验过程，能自由调整流水灯的周期； 5.如实记录实验过程； 6.认真撰写实验报告。

生物化学实验思考题

生物化学实验思考题

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生物化学实验考试试题

细胞破碎 1 常用的细胞破碎的方法有哪些？ 机械法：研磨，高速捣碎机;物理法:反复冻溶,超声波破碎，压榨法；化学与生物化学法:自溶，溶胀法，酶解法，有机溶剂处理。 2 有机溶剂法破碎细胞原理，常用的有机溶剂有哪些? 有机溶剂溶解细胞壁并使之失稳。比如笨、甲苯、氯仿、二甲苯及高级醇等 ３酶法破碎细胞原理:酶分解作用 4反复冻融法破碎细胞原理：通过反复将细胞放在低温下突然冷却和室温下融化达到破壁作用 层析技术 1.什么叫层析技术？ 层析技术是利用混合物中各组分理化性质的差别（分子亲和力、吸附力、分子的形状和大小、分配系数等),使各组分以不同程度分布在两个相，其中一个是固定相，另一个是流动相,从而使各组分以不同速度移动而使其分离的方法。 2、按层析过程的机理，层析法分哪几类？按操作形式不同又分哪三类? 根据分离的原理不同分类,层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。 按操作形式不同又分层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。 3.指出常用层析技术的应用范围。 凝胶层析法:⑴脱盐;⑵用于分离提纯；⑶测定高分子物质的分子量;⑷高分子溶液的浓缩离子交换层析法：主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子 高效液相层析法:⑴液-固吸附层析；⑵液-液分配层析；⑶离子交换层析 ４.ＳeｐhadｅxG-１0０凝胶柱层析分离蛋白质原理是什么? 大小不同的分子经过的路线长短不同而达到分离作用。 ５．用SeｐhａdeｘG2５脱盐时蛋白质和盐哪个先出峰?蛋白质 6．相对分子量为8万和1０万的蛋白质能否在SephadｅxＧ－７5柱中分开？为什么？不能,分子量差距太小。 7．将分子量分别为a(9０000）、b(45０0０）、c（１10 000)的三种蛋白质混合溶液进行凝胶过滤层析,正常情况下,将它们按被洗脱下来的先后排序。ｃ、ａ、ｂ 8.离子交换层析与凝胶过滤哪种分辨率高?离子交换层析较高。 9.如果样品中只有Ala和His(Ala pI=6．0，Ｈis pＩ＝7.6)，在ｐH4条件下，这两种氨基酸那一种与CM(阳离子交换剂)结合的紧密?如果用pH4-7的洗脱液梯度洗脱，那种氨基酸先洗脱出来？Aｌa 10. 柱层析时湿装柱的注意事项有哪些？ 用水灌注、不能有气泡。 11.说说离子交换层析中洗脱液的选择原则