铁皮石斛组培技术
铁皮石斛的组织培养研究
专业班级：
姓名：
学号：
课程：植物组织培养
目录
摘要 (3)
Abstract (4)
前言 (5)
1.培养基 (6)
1.1配方 (6)
1.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例） (6)
1.3灭菌 (8)
2.转接 (9)
2.1转接前准备 (9)
2.2转接 (9)
2.3培养 (9)
3.炼苗 (10)
3.1炼苗目的 (10)
3.2炼苗方法 (10)
4.移栽 (11)
4.1基质选择 (11)
4.2移栽技术要求 (11)
5.结论与分析 (12)
参考文献 (13)
摘要
铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw．)多年生草本植物。铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。
关键词：铁皮石斛组织培养移栽培养基转接快速繁殖
Abstract
Dendrobium orchid Dendrobium is a perennial herb. It is the ultimate in DendrobiumSw,named for its ferric green epidermis.As a rare traditional Chinese herbal medicine,it contributes to dry dampness and strengthen the spleen,clear away lung-heat ,nourish yin ，clear away heat ,and so on.The main medicinal components of Dendrobium polysaccharide is a kind of immune modulators.When mature,its capsule cracks,in which seeds are in small particle size and have a low rate of natural reproduction.In order to protect and utilize the Dendrobium orchid Dendrobium ,it is particularly important to establish a rapid propagation by the tissue culture technique .
key words:Dendrobium orchid Dendrobium tissue culture
culture medium adapter rapid propagation
前言
多年生草本，具有气生根。茎直立丛生、高30-50cm，肉质稍扁，有节、有槽沟，黄绿色。单叶互生，叶片革质，无柄，狭长椭圆形或近披针形，叶鞘抱茎。总状花序腋生，每个花序有花2-3朵，白色，先端淡紫红色。
铁皮石斛为兰科石斛属多年生草本植物。作为我国传统的名贵中药,具有重要的药用价值。由于长期过度采挖,加之本身繁殖率低,导致其野生资源急剧减少,日趋濒危,现已被列为国家重点保护植物,成为国家重点保护的药材品种。
试验结果表明,MS、N6和B5等3种基本培养基对铁皮石斛芽诱导和增殖的效果, B5要优于其他基本培养基;在激素浓度配中,铁皮石斛原球茎在6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L中,增殖系数最大;天然附加物对铁皮石斛增殖的影响差异很大,实际应用中宜选用香蕉汁为添加剂;在B5+蔗糖30g/L+香蕉汁100mg/L+琼脂5.8g/L基本培养基中,加入的NAA对铁皮石斛芽的生根以1.0mg/L 处理的效果最好,但考虑到NAA价格较贵,且在浓度范围为0.2-1.0之间对生根的影响差异不明显,在实际应用中以选用0.2mg/L的NAA为好;生成的小苗经过炼苗后,在铺有一层苔藓的含有75％锯末+20％泥炭土+5％碎磁片的基质上能够良好的生长。
1.培养基
1.1配方
根据不同阶段，培养基配方有所差异。如表1-1
表1-1 各种培养基配方
不同阶段培养基备注
愈伤组织（原球茎）的诱导MS+2.0mg/L6-BA+3%蔗糖+0.8%
琼脂
pH=5.8
原球茎的增殖MS+20%马铃薯+3%蔗糖+0.8%琼
脂
pH =5.8
原球茎的分化
MS+20%马铃薯
+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂
pH=5.8
幼株的生根壮苗MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3%
蔗糖+0.8%琼脂
pH=5.4-5.6
1.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例）
配方：10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA 1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；
2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；
3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；
4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA（0.1mg/ml），混合均匀；
5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；
6）冷却至50±5℃时，调pH至5.4—5.6。分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。
培养基附加物：
（1）天然添加物
在基本培养基中加人香蕉汁、马铃薯汁、绿豆芽汁、苹果汁仁、椰子乳等能促进铁皮石斛幼苗的生长和根系的发育，香蕉汁的促进作用最为显著。
（2）炭源
铁皮石斛在生根培养时加入活性炭有利于试管苗的生长，能使根系长得更加粗壮闭。唐桂香等认为在培养基中添加活性炭有助于提高试管苗的成活率，但对苗的根数和根长影响小。
注意事项
①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解；
②各种母液混合时，要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序；
③煮沸时，小心溶液溢出；
④分装时不要污染培养瓶瓶口。
1.3灭菌
1.3.1培养基灭菌
1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生；
2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝；
3）打开电源和排气阀，调节电压至220V；
4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀；
5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min；
6）关闭电源，使之自动降温至0℃。10min后，打开排气阀和锅盖；
7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。
表1-2 灭菌时间统计
阶段单锅灭菌（耗时
64min）
多锅连续灭菌
第一锅（耗时
63min）
第二锅（耗时
46min）
起始22:218:04 9:30
排气22:418:23 9:43
T=121℃22:508:32 9:50
关闭电源23:10 8:52 10:10
气压降至0 23:25 9:07 10:16
1.3.2外植体灭菌
①原材料清洗
选择生长旺盛、无病害的铁皮石斛健康植株，每2 节为一段放入500ml 的烧杯中，加入少量洗衣粉，用纱布单层棚扎杯口，然后用工程线扎紧，放在自来水龙头下冲洗30min，冲水量调整到能使铁皮石斛茎段在水中漂动为好。
主要作用是洗去外表尘土和大颗粒菌落、菌丝等。
②材料二次消毒灭菌
将上述完成后的材料带到无菌室超净工作台上，进行二次消毒灭菌: 将茎段腋芽的苞叶拨去。
70% 的酒精速浸25s，用0.1%的升汞溶液浸泡10min 用无菌水冲洗5 次，灭菌过程中不断摇动烧杯使灭菌更加彻底，以去掉表面药物残留。
2.转接
2.1转接前准备
1）培养皿、镊子、剪刀等转接用具的灭菌（可以在培养基灭菌时附带）；
2）检查超净台内各种用具，及时补充酒精灯的酒精，确保用具齐全；
3）放置待转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈列；
2.2转接
1）揭去防尘膜，打开电源、通风和紫外灯，灭菌15—20min；
2）关掉紫外，打开白炽灯，用75%酒精仔细擦拭手指、指甲、材料瓶瓶盖及盖边缘、工作区等处，确保“消毒”彻底；
3）点燃酒精灯，用无菌镊子把材料夹取于无菌培养皿内，挑选生命力旺盛的植株用于转接；
4）用无菌剪刀修去多余的根系，“双镊子”法将材料转接于新的培养基中；
5）标注相关日期和品系，转至培养室培养。
注意事项
①操作时，所有用具均不能从“核心工作区”和开启的培养瓶上面晃过，防止细菌落入而导致污染；
②在打开材料瓶和培养瓶后，其盖均在酒精灯外焰灼烧3-5s，瓶口灼烧5-10s；盖瓶盖时，亦如此操作；
③转接时，确保手一直在超净台内，以免带入外界细菌。
2.3培养
石斛组培常用的温度为(26±1) ℃
光强1 600～2 000 lx
日照光8~12h/d
（1）组培苗在光照度为2000lx ，温度以22 ℃为宜。
(2) 在20 一22 ℃时丛生芽增殖较好，温度超过25 ℃丛生芽就开始分化成苗。
待增殖芽数量较多时，将高1～2cm、带有2～3片叶的小芽切下转入生根培养基上进行生根培养。培养30天左右，基部开始出现2～3条约1cm长的白色根，随后逐渐伸长，生根率达到90％以上。
3.炼苗
3.1炼苗目的
炼苗的主要目的是使组培苗适应外界的环境——温差，湿度差以及微生物环境。
3.2炼苗方法
1）将待炼苗的材料放置于欲移栽的环境，不开盖保持4-5天；
2）半开盖保持1-2天后，全开盖再炼苗2-3天；
方法（整个过程：适应期，半开瓶期，开瓶期，出瓶，洗根，浸泡，移栽或框炼并移栽）。
4.移栽
4.1基质选择
栽培的基质为火山岩1+椰衣2+木炭1的基质配比石斛兰长势最好，椰衣1+水苔1和块状椰衣的基质配比稍微次之。
多数树皮中含有较多的酚类物质，这对于植物是有害的，而且树皮的C/N比值都较高，直接使用会引起微生物对速效氮的竞争作用，造成N素缺乏，树皮保水性能差。
4.2移栽技术要求
将已经灭菌地石斛茎段，在无菌条件下切成至少带有一个茎节地茎段，接种于事先准备好的诱导芽培养基中诱导出芽。从茎尖或茎段培养得到的小苗，大多数是无根小苗，需转入1／2MS加马铃薯进行生根和壮苗培养，才能出管移栽。
铁皮石斛不宜深植，种植时根系向四周均匀展开，将基质填充根部、基部必须露出，否则易造成烂根。移栽后隔5天再浇水效果较好。30天内每隔1天喷雾1次，水量不宜过多，期间勿施肥，待小苗恢复正常生长后才开始常规的水肥管理。
4.3移栽后期管理
营养生长期施用氮肥较高的花多多复合肥（N:P:K=30:10:10），花芽分化期开始施偏重磷钾肥（N:P:K=10:30:20），其余时期施（N:P:K=15:20:25）以促进假鳞茎的生长，采用“薄肥多施”的原则，施肥频率为1次／1周，浓度为0.1%叶面喷施，雨天不施肥。
石斛生长季节应注意追肥，每年可追肥两次,第一次在春季,以促进石斛生长,第二次在秋末,既可使石斛储蓄养分,又可使石斛保温过冬。可用腐熟的花生鼓、菜籽饼、过磷酸钙等加入河泥等混合物撒在根部，此外尚可用0.05—0.1%磷酸二氢钾进行根外追肥。
5.结论与分析
本文以铁皮石斛为材料,通过研究不同基本培养基对铁皮石斛茅诱导和增殖的影响、不同激素浓度组合对原球茎生长影响、天然附加物对铁皮石斛茅增殖的影响、不同浓度NAA对铁皮石斛原球茎增殖的影响,找出适合石斛组织培养快速繁殖的方法及条件,以便更好的用于生产实践。
通过本实验，有助于我们更好地掌握组织培养技术，了解铁皮石斛的组织培养特点。本试验结果表明：铁皮石斛形成的愈伤组织有群体效益，在培养容器中的分布密度和愈伤组织0.5cm2为宜；铁皮石斛在组培增殖和生根培养过程中需添加土豆汁等辅助物质，才能使组培苗正常生长；铁皮石斛的种子是呈粉状的，从表现性来看无法用肉眼观察出种子的品质好坏，若用种子做外植体进行组培繁育，无法预计培育的后代性状是否优良。用茎段为外植体建立快繁体系则具有较多的优点（诱导时间短、发生过程简单），在已知母本材料遗传特性的前提下，不存在分化的组织或基本植物结构的丧失，能够较好地保持母本的生物学性状和经济性状。
随着近年来中药产业的蓬勃发展，人们在不断的开发挖掘铁皮石斛药用价值，企业也为提高其经济效益，确保铁皮石斛药材原料基地的建设，盲目地进行规模化产业化生产育苗，而忽视了合理的繁育手段。一旦建立组培快繁体系，繁育的后代却无法保持亲本良好特性，这样的话前期工作将毁于一旦，还会带来巨大的经济损失，所以在良种选好的前提下需选择能最大极限的保持亲本的特性高效、稳定、经济合理繁育体系来保持铁皮石斛资源达到长期有效地永续利用。本研究只在铁皮石斛法、遗传稳定性方面做了研究分析，还有待于进行组培苗成年个体差异跟踪调查，组培成品苗药物活性提取及分析等方面进行全面的、更详细的研究。
参考文献
1 杨显志, 邵华, 周成, 等. 生物技术在药用石斛中的应用. 中草药, 2002, 33(2): 173～175
2 邵华, 张玲琪, 李俊梅, 等. 铁皮石斛研究进展. 中草药, 2004, 35(1): 109～112
3 曾宋君, 程式君, 张京丽, 等. 五种石斛兰胚培养及其快速繁殖研究. 园艺学报, 1998, 25(1): 75～80
4 侯丕勇, 郭顺星. 悬浮培养的铁皮石斛原球茎在固体培养基上生长和分化的研究. 中国中药杂志, 2005, 30(10): 729～732
5 张伟, 陈坤. 药用石斛的组织培养及管理研究. 南阳师范学院学报(自然科学版), 2004, 3(6): 41～43
6 陈瑞蕊, 林先贵, 施亚琴. 药用石斛及其组培技术研究概要. 江苏农业科学, 2002, (5): 64～66
7 卢文芸, 唐金刚, 乙引, 等. 五种药用石斛快速繁殖的研究. 种子, 2005, 24(5): 23～26
8 刘骅, 张治国. 铁皮石斛试管苗壮苗培养基的研究.中国中药杂志, 1998,
23(11): 654～65629 - -
铁皮石斛组培技术
铁皮石斛的组织培养研究 专业班级： 姓名： 学号： 课程：植物组织培养
目录 摘要 (3) Abstract (4) 前言 (5) 1.培养基 (6) 配方 (6) 配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例） (6) 灭菌 (8) 2.转接 (9) 转接前准备 (9) 转接 (9) 培养 (9) 3.炼苗 (10) 炼苗目的 (10) 炼苗方法 (10) 4.移栽 (11) 基质选择 (11) 移栽技术要求 (11) 5.结论与分析 (12) 参考文献 (13)
摘要 铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw．)多年生草本植物。铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。 关键词：铁皮石斛组织培养移栽培养基转接快速繁殖
Abstract Dendrobium orchid Dendrobium is a perennial herb. It is the ultimate in DendrobiumSw,named for its ferric green a rare traditional Chinese herbal medicine,it contributes to dry dampness and strengthen the spleen,clear away lung-heat ,nourish yin ，clear away heat ,and so main medicinal components of Dendrobium polysaccharide is a kind of immune mature,its capsule cracks,in which seeds are in small particle size and have a low rate of natural order to protect and utilize the Dendrobium orchid Dendrobium ,it is particularly important to establish a rapid propagation by the tissue culture technique . key words:Dendrobium orchid Dendrobium tissue culture culture medium adapter rapid propagation
铁皮石斛繁殖技术
铁皮石斛繁殖技术 铁皮石斛别称黑节草、云南铁皮等，为微子目兰科石斛属多年生附生草本植物，分布于我国安徽、浙江、福建等地，其茎入药，属补益药中的补阴药，繁殖方法主要有分株繁殖、分芽繁殖和扦插繁殖，下面我们就一起来看一看铁皮石斛繁殖技术吧！
分株繁殖 选择铁皮石斛生长较密的植株，开过花后将其从盆中取出，除去老很从丛生茎的基部切开，分切时尽最少伤根系，只掩剪开相互连接的很状呈部位，根部用手位开，不必用刀切。以主株为一组，再将老根进一步剪除。将新芽靠近盆中央，填入新的基质并压实，即成新的植株。
分芽繁殖 盆裁3年以上的植株或部分秋石斛茎的顶部或基部长有小植株时可以进行切芽繁殖，选择具有3～4片叶，2～3条根，根长4～5厘米的小植株，从母株上切下，用草木灰或70%的代森锰锌处理伤口，将苗植入盆中即可，汪意要浅植，栽培2年后一般可开花成为商品花。
扦插繁殖 铁皮石斛扦插繁殖可以结合花后换盆和分株时一起进行，选择未开花且较充实的整做播条，将技条切成数段，每段具2～3个节，在伤口上涂上草木灰或70%的代森锰锌处理伤口。将茎一段一段地插入苔藓和泥炭混合的基质中，一半露在外面，放于半阴、潮湿处。插后1周不必浇水，然后经常喷雾保湿，适当遮阴。经过1～2个月，在节部有新芽长出，新芽下部长出2～3条小根形成新的植株。将新植株连向老茎一起上盆，栽培2～3年可开花，扦插时间以4～8月为好。
组织快繁 铁皮石斛组培苗栽培前应先进行14～21天的炼苗，具体措施是将组培苗移至炼苗房，使其在开放变化的环境中逐渐适应自然环境，待组培苗叶色浓绿时即可出瓶种植。出瓶前先将瓶盖打开，让瓶苗在室外空气中放置2～3天，让其适应自然温湿度。然后进行洗苗，洗苗时将带有培养基的幼苗轻轻取出，置于盆中清洗，污染苗和裸根苗或少根苗应分开放置。组培苗先用自来水清洗，主要是应洗掉琼脂，以免琼脂发霉引起烂根，而后再用清水漂洗一下。洗苗时最好根据苗的大小和优劣同步进行分级，以便栽培、管理，提高组培苗的成活率并使其生长整齐。
铁皮石斛组织培养
铁皮石斛组织培养研究进展组织培养 摘要：近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。 铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。 1 种子萌发 1.1 胚龄 不同种龄的种子萌发率不一样。叶秀嶙等取铁皮石斛2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。2 个月种龄的种子接入改良N6培养基中，萌发率仅为6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养2 周后开始萌发，萌发率为87 % ; 4 一6 个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为95 ％。曾宋君等将铁皮石斛种子接入改良N6培养基中进行组织培养，亦得到相似的结论，幼胚胚龄在60d 以下时，萌发率极低，随着胚龄的增长，其萌发期逐渐缩短，萌发率逐渐升高，成苗率也逐渐
升高，但到达一定的胚龄后，差异并不明显。 1.2 基本培养基 铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。罗吉凤等比较了MS 、l / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。 1.3 激素 在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA 对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L 为最佳。 1.4 天然添加物 在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不
铁皮石斛的组织培养
由于石斛自然繁殖力极弱，生长缓慢，加之人们掠夺性采挖，资源已严重枯竭。而石斛栽培一直未解决其存活率低、进入盛产期年限长等问题，故石斛药源一直处于紧张状态。因此，组织培养、遗传转化、菌根技术、悬浮培养等生物技术在石斛的应用意义重大，甚为迫切。石斛的组织培养，可用种子、根、茎尖、茎节及叶等为外植体，但以种子进行组培快繁的为多。原球茎的增殖分化是石斛试管苗繁殖的关键，因此，研究原球茎增殖分化的适宜培养条件非常重要。特别是应用组织培养技术快速大量繁殖石斛试管苗，是解决其种苗与发展生产的有效途径。 铁皮石斛的组织培养 铁皮石斛，又名铁皮兰、节草、耳环石斛等。野生铁皮石斛为国家珍稀濒危保护植物（三级）。由于其生长环境要求特殊，野生资源已濒临灭绝。现云南晨安生物科技开发有限公司对铁皮石斛的组培快繁已获成功，月出苗量50万瓶以上，为铁皮石斛工厂化育苗和大面积栽培闯出了一条新路。 1 胚培养（种子培养）：取人工授粉的铁皮石斛果实，用75％的乙醇表面消毒，30s后再用0.1％升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗4~5次。在无菌操作下，把果实切成0.1mm见方的小块，接种到培养基上，每瓶3~5块。研究结果表明，N6培养基对种子萌发和生长最好，蔗糖浓度2％最佳，NAA浓度0.2~0.5mg/L最适合胚的萌发和生长；种子培养中加入椰乳对胚萌发和萌发后的初期生长起促进作用；而香蕉汁对继代培养中石斛的生根和壮苗起促进作用，生根和壮苗培养中不加入NAA，只用N6+10％香蕉汁，苗长得更粗壮。培养温度25~28℃，光照强度1600~2000lx，每日10~12h。种子萌发后，转管3~4次，当幼苗长出4~5片真叶并具有3~4条1~2cm长的根时，可将试管苗进行炼苗后移栽。 在实验中尚发现，石斛原球茎的增殖与胚龄相关，不同胚龄培养，其萌发率不同：胚龄45
铁皮石斛组织培养研究进展组织培养.
铁皮石斛组织培养研究进展 1、1 种子萌发1.2 基本培养基 铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。 1.3 激素 在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L为最佳。 1.4 天然添加物
在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。 1.5 炭源 在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。曾宋君等在改良N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素 2 原球茎增殖 2.1 基本培养基 铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。张治国等研究了6 种不同培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响，结果表明，l /2 MS 是原球茎增殖的适宜培养基。 2.2 激素 适宜的NAA 、KT 、6 一BA 浓度对原球茎的增殖起促进作用。唐桂香等以1 / 2 MS 为基本培养基，发现BA 1.0mg/L和NAAO.lmg/L有利于原球茎诱导增殖。蒋林等叫研究表明，l / 2Ms + NAA1.0mg/L+ KTO.2mg/L比较适合嗓球茎的增殖。蒋波等以1 / 2MS 为基本培养基.添加BA 2.0mg/L + NAA0.5mg/L或6 一BA3.0mg/L + NAAO.5 mg/L的激素，原球茎
铁皮石斛组培方案
铁皮石斛组织培养方案报告 一、实验目的 了解铁皮石斛培养的方法和步骤，熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养的操作过程。 二、实验器材 超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯、玻璃棒、移液管、培养箱、剪刀、培养瓶等。 三、实验步骤 配方： 根据不同阶段，培养基配方有所差异。如表1 表1 各种培养基配方 配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例） 10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA 1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾； 2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解； 3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛
有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀； 4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA（0.1mg/ml），混合均匀； 5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解； 6）冷却至50±5℃时，调pH至5.4—5.6。分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。 注意事项： ①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解； ②各种母液混合时，要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序； ③煮沸时，小心溶液溢出； ④分装时不要污染培养瓶瓶口。 灭菌： 1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生； 2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝； 3）打开电源和排气阀，调节电压至220V； 4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀； 5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min； 6）关闭电源，使之自动降温至0℃。10min后，打开排气阀和锅盖； 7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。
铁皮石斛组培方案教学文案
铁皮石斛组培方案
铁皮石斛组织培养方案报告 一、实验目的 了解铁皮石斛培养的方法和步骤，熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养的操作过程。 二、实验器材 超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯、玻璃棒、移液管、培养箱、剪刀、培养瓶等。 三、实验步骤 配方： 根据不同阶段，培养基配方有所差异。如表1 10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA 1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾； 2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解； 3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀； 4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA （0.1mg/ml），混合均匀； 5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解； 6）冷却至50±5℃时，调pH至5.4—5.6。分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。注意事项： ①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解； ②各种母液混合时，要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序； ③煮沸时，小心溶液溢出； ④分装时不要污染培养瓶瓶口。 灭菌： 1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生； 2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝； 3）打开电源和排气阀，调节电压至220V； 4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀； 5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min；
组织培养
在铁皮石斛组织培养研究进展组织培养 摘要： 近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。神农本草经》《列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。 为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。 1 种子萌发 1.1 胚龄不同种龄的种子萌发率不一样。叶秀嶙等取铁皮石斛 2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。2 个月种龄的种子接入改良 N6 培养基中，萌发率仅为 6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养 2 周后开始萌发，萌发率为 87 % ; 4 一 6 个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为 95 ％。曾宋君等将铁皮石斛种子接入改良 N6 培养基中进行组织培养，亦得到相似的结论，幼胚胚龄在 60d 以下时，萌发率极低，随着胚龄的增长，其萌发期逐渐缩短，萌发率逐渐升高，成苗率也逐渐升高，但到达一定的胚龄后，差异并不明显。 1.2 基本培养基铁皮石斛种子在 N6，改良 N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、 KundsonC , 1 / 2N6，White 等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、 MS 等 14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以 N6 最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在 SH 、改良 N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良 N6 或自制 PT 培养基。罗吉凤等比较了 MS 、l / 2MS 、 1 / 2 N6 和 White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到 95 % ，但 1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。 1.3 激素在培养基中添加一定浓度的 NAA 可促进种子的萌发，浓度以 0.2 一 0.5mg/L 最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2 , 4-D 对胚的萌发起抑制作用。6 一 BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA 对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过 1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现 ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以 0.5mg/L 为最佳。 1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。 1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人 2 ％蔗糖。曾宋君等在改良 N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素 2 原球茎增殖 2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以 1/2 MS，MS 等作为基本培养基。张治国等研究了 6 种不同培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响，结果表明， /2 l MS 是原球茎增殖的适宜培养基。 2.2 激素适宜的 NAA 、KT 、6 一 BA 浓度对原球茎的增殖起促进作用。唐桂香等以 1 / 2 MS 为基本培养基，发现 BA 1.0mg/L 和NAAO.lmg/L 有利于原球茎诱导增殖。蒋林等叫研究表明，l / 2Ms + NAA1.0mg/L+ KTO.2mg/L 比较适合嗓球茎的增殖。蒋波等以 1 / 2MS 为基本培养基.添加 BA 2.0mg/L + NAA0.5mg/L 或 6 一 BA3.0mg/L + NAAO.5 mg/L 的激素，原球茎的增殖系数较大。陈兆贵等认为原球茎增殖以 MS + NAA1.0mg/L + 6 一 BA1.0mg/L + KT1.0mg/L 为最佳，35d 增殖倍数达到 5 倍。
铁皮石斛组织培养
铁皮石斛组织培养研究进展组织培养摘要：近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。 铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。 1 种子萌发 1.1 胚龄:不同种龄的种子萌发率不一样。叶秀嶙等取铁皮石斛2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。2 个月种龄的种子接入改良N6培养基中，萌发率仅为6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养2 周后开始萌发，萌发率为87 % ; 4 一6 个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为9 5 ％。 1.2 基本培养基:铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。 1.3 激素:在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。 1.4 天然添加物:在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发， 1.5 炭源:在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。 2 原球茎增殖 2.1 基本培养基:铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。 2.2 激素:适宜的NAA 、KT 、6 一BA 浓度对原球茎的增殖起促
石斛组织培养研究进展
石斛组织培养研究进展 张明1,夏鸿西2,朱利泉2,张玉进2 (1.重庆市中药研究院,重庆400065; 2.西南农业大学,重庆400716) [摘要]目的:综述国内外对石斛组织培养进行的深入研究。方法:系统查阅国内外近10年来的有关文献20余篇。结果与结论:介绍了石斛组培的多种方法,对培养基、激素及多种条件对组培的影响作了论述,并提出了存在的问题及对策。 石斛属Dendrobium为兰科第2大属,多年生草本植物,全球计有1 500种。多生于树皮或岩石上,开花多,结果少,每果可含100万粒种子。种子细如粉尘[1],每粒重约0.3～0.4μg。种胚不超过球形阶段,即存在后熟现象。由于缺乏胚乳组织,需与真菌共生(symbiotical)才能萌发,自然条件下发芽率一般不及5%。石斛为合轴生长(sympodial),分株是其繁殖的主要方式,对生长条件的要求较为苛刻。石斛属植物中有不少是名贵中药,在《本草纲目》中石斛被列为上品。我国76种石斛属植物中有近40种作药用[2],著名的有 D.nobile(金钗石斛)、D.candium(铁皮石斛)、D.huosanness(霍山石斛)等。具有强阴益精、补肾益力、轻生延年等作用,其应用范围正迅速扩大。石斛属植物约有四分之一可供观赏[3],称为石斛兰 D.orchids,以花艳丽而著称,近年作为观赏植物发展迅速,已形成独立产业。集药用和观赏于一体的价值,加之过度的采伐利用和繁殖率低,造成了石斛供需之间的紧张状况,
我国已将其列为濒于绝灭的受保护的中药品种之一。自1960年法国人Gmorel利用石斛基尖组织培养无病毒植株的无性繁殖技术创立以来,石斛组织培养逐步走向深入化。近年来,石斛组织培养的最佳条件,包括光照、温度、pH以及如何选用外植体,选用激素等取得长足进展,并利用组培技术研究种子萌发过程中的生理生化变化等,还获得了转基因石斛植株。我国石斛组织培养研究起步较晚,直到1984年,徐云鹏等才首次报道获得霍山石斛试管苗[4]。此后又利用铁皮石斛、束花石斛、兜唇石斛的茎尖、叶尖或种胚获得了再生植株。 1石斛组织培养再生植株的获得 组织培养获得石斛再生植物株的途径有器官发生型和原球茎发生型两种。器官发生型通过外植体组织培养,使预先存在的分生组织形成芽(如腋芽)或不定分生组织(如子叶、茎段、愈伤组织等)形成不定芽。此途径又可分为3种类型:无菌短枝型(又称节培法),芽增殖型,器官发生型;原球茎发生途径通过石斛适宜外植体诱导产生胚性愈伤组织并增殖,随后形成类胚组织原球茎进而发育成完整的再生植株。通常由种子离体培养产生的胚性组织称原球茎(protocorm),而上外植体叶尖、基尖等诱导形成的胚性组织称为拟原球茎(protocorm like bodies)即PLBs。原球茎或拟原球茎转入不含任何激素或生长素的培养基(如MS)便可再生出完整小植株。 1.1原球茎发生 影响原球茎发生的主要有外植体的大小、来源、生理状态、培养基类型、激素浓度,种类、处理时间及一些其它因素。
铁皮石斛种子的组织培养
铁皮石斛种子的组织培养 考虑了好久，在网上买了一粒种子，不是不舍得，就是不知道是不是真的铁皮石斛，终于下手了，管他呢，至少是石斛吧，O(∩_∩)O~ 种子是买回来了，又犯懒了，本人最大的毛病就是思想很勤快，要是干实事，很懒，我是没见过我这么懒的人。懒也得做啊，种子再开口了怎么办？狠狠心开始干! 准备：首先是配制培养基，查了下资料，种子的无菌萌发培养基为1/2ms培养基，蔗糖20g，我稍微做了下调整，培养基1/2ms，蔗糖由20g变成25，琼脂为5g。 无菌萌发培养基：1/2ms培养基+蔗糖25g+琼脂5g（灭完菌接种的时候才发现，有点硬了！） 首先，我没有蒸馏水，用的就是大桶水，（态度不严谨啊O(∩_∩)O哈哈~)把琼脂5g，1/2ms培养基 2.14g，蔗糖25g一股脑的倒入800ml的冷水里 （注：个人认为，琼脂在开水的时候倒入容易结块，不容易溶解，当然用温水是好的，但何必呢，所以先倒入冷水，然后再加热，大家以为对不对啊）， 轻轻的搅拌，让培养基和蔗糖完全溶解，然后定容，注意，定容的时候要定容到1100ml，因为我们在加热的时候还有高压灭菌的时候，会有大量的水蒸气出现，多出的100ml是减少这部分的损失。
然后测量一下ph值，大概在3.4（当时记录了，但后来不知道弄哪里去了，也可能是4.2），先不管他，加热溶解！把烧杯放到液化气灶上开最小火，把烧杯放上，然后开始加热边搅 拌............................ 好漫长啊！ 大概10分钟的样子，终于好了，拿下来，开始测量ph值，然后慢慢的一滴一滴的加入氢氧化钠溶液边搅拌边测量，5.8！
铁皮石斛种植技术资料大全
铁皮石斛种植技术大全 铁皮石斛成品价格目前在云南省内为800元左右一公斤，采用温棚种植法，一般亩产量在300到500公斤。第一次种植后，一般可连续采收数年。从瓶苗开始种植到第一次收获成品，时间在18个月左右。种植铁皮石斛，经济效益较为可观。 铁皮石斛种植技术 移栽时先将已经长大的石斛种苗取出，用清水洗去根部的培养基，洗净为止，动作要轻，避免损伤其根和叶。如果有条件的话，还可在将石斛苗植入基质之前20分钟，将石斛苗放入促进生根的药液中浸泡两分钟。然后栽种在基质中，再放入苗盘。种植用的基质首选材料为树皮，其次为锯木屑，也可用水苔。铁皮石斛驯化栽培首要因素是必须提供其根系良好的生长环境。锯木屑因其疏松透气，又能保持水分及肥料，适合根系生长的要求。无论选用何种基质，都要预先经过消毒处理。种植时，需要把系分开，不能搓成一束。根系不能种得太深，把根埋住即可。 栽培方法：将组培苗取出，洗去培养基，即可定植。移栽时将石斛的根部放在基质上，然后用基质盖住根部，直至不见根后，浇足水。移栽前一定对基质进行灭菌消毒。对铁皮石斛大苗生长最为有离的株距为15公分，行距为20公分。如
果小苗种植后不再进行移植，可一次按这一标准进行种植。。对于小苗的正常管理，应保持湿度80％，温度不可超过35℃，不接受长时间的阳光直射。刚种植的幼苗，一般以两天浇水一次为宜。 石斛喜温暖、湿润及阴凉的环境，生长期年平均温度在18℃～21℃之间，1月份平均气温在8℃以上，无霜期250～300天；年降雨量1000mm以上，生长处的空气相对湿度以80%以上为适宜。在光照太强或过弱、气温过高或太低、土质贫瘠或保水性差的环境则生长不良。 栽种方法 石斛栽种宜选在春（3～4月）秋（8～9月）季栽种为好，尤以春季栽种比秋季栽种更宜。这主要是充分利用阳春三月，气候回升，风和日暖，春雨如油，万物复苏的黄金季节，适宜的温湿度，日照，雨水等条件，有利于刺激石斛茎基部的腋芽迅速萌发
铁皮石斛组培快繁技术的优化
铁皮石斛组培快繁技术的优化 铁皮石斛(Dendrobium candidum Kimura et Migo)又名黑节草、铁皮兰,为兰科石斛属多年生附生型草本植物。其药用价值独特,是石斛属中的极品。 目前通过组织培养技术已成功获组培苗,但是组培快繁过程中仍存在许多问题：组培苗易黄化、易产生变异、移栽成活率不高等。本研究以铁皮石斛的成熟果实和茎段为材料,采用正交试验设计,对其组培快繁技术进行优化,以期为铁皮石斛的组织培养和规模化生产提供理论参考和技术支持。 主要研究结果如下：(1)种胚萌发最适培养基：MS或 1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA1.0 mg/L+椰汁1OOml/L+活性炭1.Og/L+白糖25g/L+琼脂4.6g/L,植物生长调节剂与天然有机物椰汁的添加能缩短铁皮石斛种胚的萌动时间。(2)外值体最优灭菌方法：经预处理的铁皮石斛茎段在流动的自来水下冲洗30mmin,用75%酒精浸泡30s,再用10% NaClO8min+0.1% HgCl25min+0.2% HgCl22min综合灭菌,经该组合处理的外植体在培养30d后仍未发现有污染。 (3)腋芽诱导最优培养基：MS+NAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+白糖25g/L+琼脂 4.6g/L,茎段诱导率达85%。(4)丛生芽诱导最优培养基： MS+NAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+KT2.0mg/L+白糖25g/L+琼脂4.6g/L,此培养基诱导的丛生芽数量最多,叶色浓绿、植株健壮,且新芽的变异率居中。 (5)增殖最优培养基：1/2MS+NAA1.0mg/L+6-BA0.2mg/L+KT0.2mg/L+活性炭0.5g/L+5%土豆汁+白糖25g/L+琼脂4.6g/L,增殖系数达8.3,原球茎生长紧凑、绿色、且无变异和褐化现象。(6)分化最优培养基：N6+6-BA0.5mg/L+KT1.0mg/L+土豆汁1 00g/L+活性炭0.5g/L+白糖25g/L+琼脂4.6g/L,分化率达87.7%,不定芽数量多、健壮度和整齐度均匀、叶绿。
铁皮石斛组织培养
小苗可以用苔藓或水苔!中苗就要树皮石子加苔藓!大苗可用石子树皮等!至于用来 培养组织苗的培养基属难告知 恩，这个我知道，我就想出了MS培养基，没有其他适合的了吗？培养基也属于商业秘密啊？ 很多好一些的营养基都是商业密秘!我会去给你找个适合石斛的营养基.只能给你个普通的!希望你喜欢 石斛较常见的培养基配方,花宝三克,百分之十到百分之二十的萍果汁一千毫升,蔗糖浓度百分之三点五.琼脂十五克.蒸溜水一千克氢离子浓度调节到一万纳摩/升(PH5.0) 常规铁皮石斛开花后采用人工方法授粉，将其种子接种在１／２ＭＳ液体培养基中非共生萌发培养时，再转入含有０．０１％Ｏｒｙｚａｌｉｎ＋０．０１％秋水仙碱的１／２ＭＳ液体培养基中进行诱变处理，然后转入１／２ＭＳ固体培养基上，光照；取新生长的根尖固定，用压片法制备染色体标本，卡宝品红染色液染色，染色体数目为２ｎ＝７６的幼苗为四倍体铁皮石斛，按通常方法进行栽培管理。 现在大部分采用松树皮发孝后来种的！ 铁皮石斛组织培养的培养基用到的主要基本培养基是MS培养基，也不只是这一种，其它的WV、winte等都可以用，但是一般多用MS培养基，也可以用1/2MS培养基，大量元素减半，其它元素不变。 除此之外，还有加一些生长素（如IAA、IBA、NAA等），细胞分裂素（如6-BA等）。但是不同的培养时期也不同的激素配合。如诱导愈伤组织时，要两种激素的配合。增殖传代时也要两种激素的配合，但生长素为主；分化时以分裂素为主，壮苗和生根以生长素不主。一般用量都是0.1-10mg/L这个范围里。 此外，还有的加了什么香蕉素，椰看你是用什么外植体，或是想诱导什么先了， 一般如果是茎段的话，用一般的MS+0.3mg/L NAA+5mg/L 6-BA做诱导培养基就好，但是如果你要用根茎做外植体诱导原球茎的话，最号用1/2MS加上水解乳蛋白和激动素和6-BA 就好,量看你外植体了，不同的类型不同 乳等。 一般NAA：6-BA是10：1，即2：0.2mg/L （一）繁殖技术 石斛的繁殖方法分为有性繁殖和无性繁殖两大类，目前生产上主要采用无性繁殖方法。 1、有性繁殖即种子繁殖。石斛种子极小，每个蒴果约有20000粒，呈黄色粉末状，通常不发芽， 只在养分充足、湿度适宜、光照适中的条件下才能萌发生长，一般需在组培室进行培养。不过，尽管石斛繁殖系数极高，但其有性繁殖的成功率极低。 2、无性繁殖 （1）分株繁殖：在春季或秋季进行，以3月底或4月初石斛发芽前为好。选择长势良好、无病虫害、
铁皮石斛工厂化生产技术研究
铁皮石斛工厂化生产技术研究 铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是一种兰科石斛属多年生附生草本植物,主要生长于高海拔的山地较阴湿的岩石上,自古以来就由于被认为具有增强人体免疫力和抗衰老的功能,而被认为是一味珍贵的中草药。本论文的试验从铁皮石斛原球茎入手,进行PLB离体条件培养优化,从PLB增殖的优化到多糖含量的测量,然后用改进后的最佳增殖培养基进行铁皮石斛工厂化育苗生根壮苗的培养、优化,探究了不同LED光源对组培苗生长的影响,再到大田移栽中最适宜的栽培基质。 最后,本文尝试建立铁皮石斛原球茎多糖工厂化生产模式,并对该模式进行了效益分析。1、铁皮石斛原球茎离体培养条件的优化通过铁皮石斛原球茎进行PLB的离体培养优化。 (1)铁皮石斛原球茎添加2.0 mg/L的6-BA时,增殖的效果也显著。最佳的原球茎增殖的配方为1/2MS+1.0mg/L 6-BA+100g/L土豆泥。 改良MS中KNO3, KH2PO4比例分别为0.5和1倍时,原球茎的增长系数最高。 (2)添加茉莉酸甲脂对铁皮石斛原球茎增殖的效果不明显。 (3)有机添加物组合增殖系数较高的有：1/2MS (KNO3, KH2PO4:0.5和 1)+50g/L土豆、1/2MS (KNO3, KH2PO4:0.5和1)+50g/L椰子+100/L土豆、1/2MS (KNO3, KH2PO4:0.5和1)+50g/L番茄汁+100/L土豆1/2MS1/2MS (KNO3, KH2PO4:0.5和1)+50g/L香蕉泥+100/L椰子。综合工厂化的经济效益来看,在增殖效果相当的情况下,只添加50g/L的土豆是最经济实惠且增殖系数又较高的。 2、在添加不同激素和有机添加物时原球茎多糖含量的比较在添加不同配比的激素和有机添加物条件下,测量并比较原球茎的多糖含量发现,不同激素加添
铁皮石斛的植物学特性及组培苗生产技术(一)
铁皮石斛的植物学特性及组培苗生产技术(一) 作者：单芹丽杨春梅赵培飞汪国鲜 择要铁皮石斛是名贵的中药材,其生产技术倍受科研与产业人员关注。综述了铁皮石斛的生物学和生态学特性,并介绍了生产铁皮石斛组培苗的技术要点,最后针对铁皮石斛组培苗快速繁育中的常见问题,提出解决措施。 关键词铁皮石斛;植物学特性;组培苗;生产技术AbstractDendrobiumcandidumisavaluableChineseherbalmedicine.Itsreprodutiontechnologyiscon cernedbyscientistsandindustrypersonnels.Inthispaper,thebiologicalandecologicalcharacteristicsof Dendrobiumcandidumwerereviewed,andtheproductiontechniqueoftissueculturewasdescribed.Fi nally,forthecommonproblemsfromDendrobiumcandidumtissueculture,thesolutionswereproposed soastogetrapidpropagationseedlings. KeywordsDendrobiumcandidum;botanicalcharacteristics;seedlingpropagation;technigue 铁皮石斛(DedrobiumcandidumWall1exLindl)为兰科石斛属植物,是传统名贵中药材。在《神农本草经》中被列为上品,具有滋阴清热、生津益胃、止咳润肺、润喉明目、提高人体免疫功能、防治肿瘤和心血管疾病以及改善睡眠、防治白内障、延年益寿等功效1]。铁皮石斛在自然状态下发芽率极低(小于5%)2],人工自花传粉成功率只有30%3]。加之长期以来被掠夺性的采挖,致使野生的铁皮石斛资源已近枯竭,处于濒危状态4],远远不能满足国内外市场经济和临床医学发展的需要5],造成市场供应紧缺。应用植物组培快繁技术是解决石斛优质种苗短缺的有效途径之一。有关石斛的快速繁殖技术国内已有报道6-8],但系统研究并真正运用于生产并产生规模效益的却不多9-10]。笔者自2003年以来,调查了铁皮石斛生物学和生态学特性,并对铁皮石斛组培苗的快速繁殖技术做了系统研究,总结了一套快繁体系,旨在不破坏植物生态效益的同时,充分利用现有石斛资源,为优质、高效、低耗、批量生产石斛种苗提供参考,推动铁皮石斛产业化进程,以满足市场要求。 1铁皮石斛的生物学和生态学特性 1.1形态特征 铁皮石斛为多年生附生草本植物,茎直立,圆柱形,纤细,长4～50cm,直径0.2～0.4cm,节间长1～6cm,具纵纹,多节,铁灰色或灰绿色,有明显光泽而灰褐色的小节,故又有黑节草之称。节上有花序柄痕及残存叶鞘。叶互生,3～5枚,生于茎上部节上,二列,纸质,矩圆状披针形,长3～7cm,宽0.8～2.0cm,先端钝,顶端略钩,基部下延为抱茎的鞘,边缘和中肋常带淡绛紫色;叶鞘灰白色,稍带紫色斑点,鞘口开张,抱茎不超过上一节,常与节留有一个环状间隙,质硬而脆。总状花序,生于无叶的茎上端,长2～4cm,呈回折状弯曲,花2～5朵,淡黄色,稍有香气;花直径1.5～2.0cm;唇型花,其中1枚花瓣变异成唇瓣。铁皮石斛花的雌蕊与雄蕊合为一体形成一种典型的合蕊柱,雌蕊位于下方,雄蕊在上方,每枚花有花粉粒4粒,药帽近卵形,顶端中间开裂,花苞片淡白色,花被片黄绿色,唇瓣卵状披针形,长1.6cm,白色,上半部具有一个紫红色大斑块,下部两侧具有紫红色条纹;中萼片与花瓣相似,矩圆状披针形,长1.7～1.9cm,,宽0.4～0.5cm;侧萼片宽约1cm;萼囊圆锥形,长约0.5cm;唇盘上密被乳突状短柔毛,基部有1枚绿黄色胼胝体。铁皮石斛果实为椭圆形蒴果,长3～5cm,成熟时为黄绿色。每个果实含有上万颗种子,铁皮石斛种子在普通光学显微镜下为黄绿色,两端具翅,外形为长纺锤形,种子大小为长0.40mm,宽0.09mm。 1.2生态习性 铁皮石斛在国内主要分布在云南、安徽、贵州、广西、浙江、广东等省份,西藏也有分布。其对生态环境要求严格,多附生于海拔2100～2500m的林缘岩石或林中长满苔藓、爬满野藤、直径粗的阔叶树上,喜阴凉、湿润的环境,通常与地衣、蕨类和藓类植物互生。适宜在空气相对湿度大于70%的环境下生长;热量资源丰富,生长期年平均温度在17～22℃,最冷月最热月温差不明显,1月平均气温在10℃以上;无霜期250～350d;年降雨量1000mm以上;耐干旱与严
铁皮石斛营销策划
目录
第二部分：跨境电商行业潜力 第三部分：公司介绍 第四部分：牡丹籽油项目背景 第五部分：牡丹籽油行业市场分析第六部分：产品与技术 第七部分：营销规划 第八部分: 财务分析 第九部分：风险分析 第十部分：应对措施
第二部分：跨境电商行业潜力 跨境电子商务作为21世纪一种新型跨境贸易方式，在我国取得了飞速的发展，目前已经成为我国经济发展新的潜力点和电商行业新的领域，但它仍在海关、物流、监管等方面依然存在着影响其进一步发展的诸多障碍因素。目前世界贸易增速日益缓慢，为了开拓市场的广泛性、提高效益的增速，越来越多的跨境电商开始放眼于减少流通渠道、降低流通成本价格、与国外消费者距离亲近，因此跨境电商正为此提供了非常有利的发展的渠道 亚马逊公司是在1995年7月16日由杰夫·贝佐斯成立的，一开始叫Cadabra。性质是基本的网络书店）然而具有远见的贝佐斯看到了网络的潜力和特色，当实体的大型书店提供20万本书时，网络书店能够提供比20万本书更多的选择给读者。亚马逊公司的最初计划原本是在4到5年之后开始有营利，2000年的网络泡沫造成了亚马逊公司平稳成长的风格成为独树一帜的佳话，在1990年代有相当多网络公司快速成长，当时亚马逊公司的股东不停抱怨贝佐斯的经营策略太过保守和缓慢，而网络泡沫时候，那些快速成长的网络公司纷纷结束营业，只有亚马逊还有获利，2002年的第四季，亚马逊的纯利约有500万美金。2004年则成长到3亿多美金。
第三部分：公司介绍 郑国药用植物研究有限公司成立于2016年6月，主营药用植物种植技术研究、药用植物产品研发和销售及信息交流等业务。 公司根据新郑市委、市政府关于具茨山开发要体现“生态、文化、旅游、扶贫”原则的总体要求，投资建设具茨山大型生态健康养生产业园项目。项目以生态、健康和养生为主题，以地方文化（炎黄文化、郑国文化、岐黄文化、本草文化）营造为主线，以珍奇药用植物研究产业化为核心，计划在3-5年内建成郑国药用科技产业园、郑国药用植物园、郑国中医养生健康园、郑国文化旅游观光园，打造一个集药用植物科研科普、药用植物和绿色农产品开发、传统文化体验、休闲观光、健康养生等服务于一身、融合一二三产于一体的多功能健康养生产业综合体。 项目目前已建成投用1500平方米的专家科研楼、400平方米现代化组培室、400平方米技术先进的低温冷库，建成投用5个总面积达