lamp产物检测方法(一)

lamp产物检测方法(一)

LAMP产物检测

概述

LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）是一种高效、快速、特异性强的核酸检测技术，已广泛应用于医学、生物学、环境

科学等领域的产物检测中。本文将介绍LAMP产物检测的几种常用方法。方法一：实时荧光检测

实时荧光检测是LAMP检测中最常用的方法之一。通过添加与LAMP引物配对的荧光探针，荧光信号与目标基因的扩增有关。实时荧

光检测可以提供实时的扩增曲线，并且可以基于荧光信号强度计算出

目标物的浓度。该方法结果灵敏度高，操作简便。

方法二：封闭管内检测

封闭管内检测适用于大规模样本分析。在封闭管中进行LAMP反应，通过观察管内的颜色变化来判断是否存在目标产物。通常，反应阳性

样品呈黄色或绿色，而阴性样品为紫色。

方法三：便携式检测设备

随着便携式检测设备的发展，LAMP产物检测也可以在户外或实验

室之外进行。便携式检测设备结合了实时荧光检测和封闭管内检测的

优势，能够有效地检测目标产物，并且具有高灵敏度和快速反应的特点。

方法四：电化学检测

电化学检测是一种基于电化学信号变化来判断目标产物的方法。通过引入与目标基因相关的电化学标记物，可以在反应过程中测量电流或电压的变化。该方法具有高灵敏度、快速反应和较低的成本。

方法五：便携式PCR检测仪器结合LAMP

传统的PCR（Polymerase Chain Reaction）方法在LAMP产物检测中也得到广泛应用。便携式PCR检测仪器结合LAMP技术，可以提供更高的扩增效率和较低的虚警率。

结论

LAMP产物检测是一种快速、高效、特异性强的核酸检测技术。实时荧光检测、封闭管内检测、便携式检测设备、电化学检测和便携式PCR检测仪器结合LAMP是几种常用的方法。根据实际需要，可以选择适合的检测方法进行LAMP产物检测。

（以上内容仅供参考，请根据实际情况进行操作）

LAMP产物检测

概述

LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）是一种高效、快速、特异性强的核酸检测技术，已广泛应用于医学、生物学、环境

科学等领域的产物检测中。本文将介绍LAMP产物检测的几种常用方法。方法一：实时荧光检测

•使用引物和荧光探针进行LAMP反应。

•实时监测荧光信号和扩增曲线。

•可以计算出目标物的浓度。

•结果灵敏度高，操作简便。

方法二：封闭管内检测

•在封闭管中进行LAMP反应。

•观察管内的颜色变化来判断是否存在目标产物。

•反应阳性样品呈黄色或绿色，阴性样品为紫色。

•适用于大规模样本分析。

方法三：便携式检测设备

•结合实时荧光检测和封闭管内检测的优势。

•能够在户外或实验室之外进行。

•检测目标产物，具有高灵敏度和快速反应的特点。

方法四：电化学检测

•通过引入与目标基因相关的电化学标记物。

•在反应过程中测量电流或电压的变化。

•具有高灵敏度、快速反应和较低的成本。

方法五：便携式PCR检测仪器结合LAMP

•在LAMP产物检测中结合传统的PCR方法。

•使用便携式PCR检测仪器，提高扩增效率和减少虚警率。

结论

LAMP产物检测是一种快速、高效、特异性强的核酸检测技术。实时荧光检测、封闭管内检测、便携式检测设备、电化学检测和便携式PCR检测仪器结合LAMP是几种常用的方法。根据实际需要，可以选择适合的检测方法进行LAMP产物检测。

（以上内容仅供参考，请根据实际情况进行操作）

lamp产物检测方法(一)

lamp产物检测方法(一) LAMP产物检测 概述 LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）是一种高效、快速、特异性强的核酸检测技术，已广泛应用于医学、生物学、环境 科学等领域的产物检测中。本文将介绍LAMP产物检测的几种常用方法。方法一：实时荧光检测 实时荧光检测是LAMP检测中最常用的方法之一。通过添加与LAMP引物配对的荧光探针，荧光信号与目标基因的扩增有关。实时荧 光检测可以提供实时的扩增曲线，并且可以基于荧光信号强度计算出 目标物的浓度。该方法结果灵敏度高，操作简便。 方法二：封闭管内检测 封闭管内检测适用于大规模样本分析。在封闭管中进行LAMP反应，通过观察管内的颜色变化来判断是否存在目标产物。通常，反应阳性 样品呈黄色或绿色，而阴性样品为紫色。 方法三：便携式检测设备 随着便携式检测设备的发展，LAMP产物检测也可以在户外或实验 室之外进行。便携式检测设备结合了实时荧光检测和封闭管内检测的

优势，能够有效地检测目标产物，并且具有高灵敏度和快速反应的特点。 方法四：电化学检测 电化学检测是一种基于电化学信号变化来判断目标产物的方法。通过引入与目标基因相关的电化学标记物，可以在反应过程中测量电流或电压的变化。该方法具有高灵敏度、快速反应和较低的成本。 方法五：便携式PCR检测仪器结合LAMP 传统的PCR（Polymerase Chain Reaction）方法在LAMP产物检测中也得到广泛应用。便携式PCR检测仪器结合LAMP技术，可以提供更高的扩增效率和较低的虚警率。 结论 LAMP产物检测是一种快速、高效、特异性强的核酸检测技术。实时荧光检测、封闭管内检测、便携式检测设备、电化学检测和便携式PCR检测仪器结合LAMP是几种常用的方法。根据实际需要，可以选择适合的检测方法进行LAMP产物检测。 （以上内容仅供参考，请根据实际情况进行操作）

LAMP染料选择

为满足现场快速检测需求，本研究比较了在反应体系中加入不同核酸染料对LAMP反应的影响，以为建立基于颜色变化判定试验结果的现场LAMP检测方法所参考。对于反应前加入LAMP反应的四种核酸染料Calcein（钙黄绿素）, SYBR GreenⅠ, Eva Green和HNB, Calcein对反应速度的影响最小，是适合反应前加入环介导等温扩增反应以观察颜色变化的最佳颜色指示剂。HNB的抑制作用最大且容易导致反应稳定性差，不建议用作LAMP反应的颜色指示剂。而SYBR Green Ⅰ和Eva Green在反应前加入，浓度低时颜色变化不明显，浓度大了会抑制反应速度，因此也不建议用作LAMP反应前加入的颜色指示剂。 生工的GREENDYE染料就是SYBR Green I，10000×的 阳性扩增反应中会产生大量的类似花椰菜结构的产物和白色焦磷酸续沉淀，扩增产物的检测方法多样，可用凝胶电泳检测、直接用肉眼检测或在反应体系中加人染料，根据颜色的变化进行检测，还可以利用浊度仪，根据扩增产物混浊度的不同对原始核酸分子进行实时定量分析。 1．LAMP引物的设计： LAMP引物的设计主要是针对靶基因的六个不同的区域，基于靶基因3’端的F3c、F2c 和Flc区以及5’端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种引物。 FIP(Forward Inner Primer)：上游内部引物，由F2区和F1C区域组成，F2区与靶基因3’端的F2c区域互补，F1C区与靶基因5’端的Flc区域序列相同。 F3引物：上游外部引物(Forward Outer Primer)，由F3区组成，并与靶基因的F3c区域互补。 BIP引物：下游内部引物(Backward Inner Primer )，由B1C和B2区域组成，B2区与靶基因3’端的B2c区域互补，B1C域与靶基因5’端的Blc区域序列相同。 B3引物：下游外部引物(Backward Outer Primer )，由B3区域组成，和靶基因的B3c区域互补。 如图所示： 2．扩增原理 60—65℃是双链DNA复性及延伸的中间温度，DNA在65℃左右处于动态平衡状态。因此，DNA在此温度下合成是可能的。利用4种特异引物依靠一种高活性链置换DNA聚合酶。使得链置换DNA合成在不停地自我循环。扩增分两个阶段。 第1阶段为起始阶段，任何一个引物向双链DNA的互补部位进行碱基配对延伸时，另一条链就会解离，变成单链。上游内部引物FIP的F2序列首先与模板F2c结合（如图B所示），在链置换型DNA聚合酶的作用下向前延伸启动链置换合成。外部引物F3与模板F3c结合并延伸，置换出完整的FIP连接的互补单链（如图C所示）。FIP上的F1c与此单链上的Fl为互补结构。自我碱基配对形成环状结构（如图C所示）。以此链为模板。下游引物BIP 与B3先后启动类似于FIP和F3的合成，形成哑铃状结构的单链。迅速以3’末端的Fl区段为起点．以自身为模板，进行DNA合成延伸形成茎环状结构。该结构是LAMP基因扩增循环的起始结构。 第2阶段是扩增循环阶段。以茎环状结构为模板，FIP与茎环的F2c区结合。开始链置换合成，解离出的单链核酸上也会形成环状结构。迅速以3’末端的B1区段为起点，以自身为模板。进行DNA合成延伸及链置换．形成长短不一的2条新茎环状结构的DNA，BIP引物上的B2与其杂交。启动新一轮扩增。且产物DNA长度增加一倍。在反应体系中添加2条

LAMP

LAMP（环介导等温扩增）技术 2011-07-28 11:46 来源：北京蓝谱点击次数：1341 关键词：LAMP PCR技术环介导等温扩 增 分享到：收藏夹腾讯微博新浪微博开心网 PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用，其灵敏度高、特异性好，是目前最精准的基因诊断方法。然而PCR方法操作起来较复杂，对仪器和人员要求比较高，不适合基层或现场快速诊断，因此在国内的推广速度并不是很快。 2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Res杂志上公开了一种新的基因诊断技术，即LAMP (L oop-mediated isothermal amplification),中文名为“环介导等温扩增反应”，受到了世卫组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，在这次甲型H1N1流感事件中，日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。通过荣研公司近十年的推广，LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，并得到了欧美国家的认同。LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像PCR那样进行凝胶电泳，LAMP反应的结果通过肉眼观察白色浑浊或绿色荧光的生成来判断，简便快捷，适合基层快速诊断。 可以预见，在未来的基因诊断领域，LAMP方法将占据大壁江山。 目前，在万方数据库搜索LAMP文章500多篇。详见：https://www.sodocs.net/doc/4c19231995.html,/paper.asp x?q=loop-mediated+isothermal+amplification&o=sortby+CitedCount+CoreRank+date+relevanc e%2fweight%3d5&f=top&n=10&p=1 1. 优缺点介绍： LAMP方法优点：灵敏度高（比传统的PCR方法高2～5个数量级）；反应时间短（30～60min就

LAMP实验简介

通过LAMP实现DNA的线性扩增 一、LAMP 原理 60-65℃是双链DNA复性及延伸的中间温度，DNA在65℃左右处于动态平衡状态。因此，DNA在此温度下合成是可能的。利用4种特异引物依靠一种高活性链置换DNA聚合酶。使得链置换DNA合成在不停地自我循环。 扩增分两个阶段。LNMP学习https://www.sodocs.net/doc/4c19231995.html, 第1阶段为起始阶段，任何一个引物向双链DNA的互补部位进行碱基配对延伸时，另一条链就会解离，变成单链。上游内部引物FIP的F2序列首先与模板F2c结合，在链置换型DNA聚合酶的作用下向前延伸启动链置换合成。外部引物F3与模板F3c结合并延伸，置换出完整的FIP连接的互补单链。FIP上的F1c与此单链上的Fl为互补结构。自我碱基配对形成环状结构。 以此链为模板。下游引物BIP与B3先后启动类似于FIP和F3的合成，形成哑铃状结构的单链。迅速以3' 末端的Fl区段为起点。以自身为模板，进行DNA合成延伸形成茎环状结构。该结构是LAMP基因扩增循环的起始结构。 第2阶段是扩增循环阶段。以茎环状结构为模板，FIP与茎环的F2c区结合。开始链置换合成，解离出的单链核酸上也会形成环状结构。迅速以3’末端的B1区段为起点，以自身为模板。进行DNA合成延伸及链置换．形成长短不一的2条新茎环状结构的DNA，BIP引物上的B2与其杂交。启动新一轮扩增。且产物DNA长度增加一倍。在反应体系中添加2条环状引物LF 和LB，它们也分别与茎环状结构结合启动链置换合成，周而复始。扩增的最后产物是具有不同个数茎环结构、不同长度DNA的混合物。且产物DNA为扩增靶序列的交替反向重复序列。LNMP学习https://www.sodocs.net/doc/4c19231995.html,

lamp检测技术原理

lamp检测技术原理 LAMP 是一种常用的 Web 应用技术栈，包括了 Linux、Apache、MySQL 和 PHP。而 LAMP 检测技术是针对这种技术栈的安全漏洞检测 技术，可以帮助企业及个人发现 LAMP 技术栈平台上存在的漏洞，进 而提升其安全性。下面就让我们来了解一下 LAMP 检测技术的具体原 理吧。 一、探测系统 LAMP 检测技术首先需要对目标系统进行探测，以了解其系统版本、应用版本、端口信息等。这些信息对于后续的漏洞检测、指纹识 别等操作都有着非常重要的作用。探测系统的方式一般会分为两种， 一种是主动探测，即主动发送请求获取回应，另一种是被动探测，即 通过监控网络流量等方式探测目标系统的信息。 二、指纹识别 在获取了目标系统的基本信息后，LAMP 检测技术会进行指纹识 别操作，即通过目标系统的特征信息来判断其应用程序、Web 服务器、数据库等具体的软件环境。指纹识别可以帮助检测人员快速定位目标 系统的软件环境，进而选择相应的漏洞检测工具和攻击方式。 三、漏洞扫描 指纹识别后，LAMP 检测技术会进行漏洞扫描操作，即发现目标 系统可能存在的漏洞。漏洞扫描可以使用已知的漏洞库进行检测，依 据其已有的漏洞特征来发现目标系统上的漏洞。漏洞库一般可以通过 自学习模式不断进行更新升级，以发现更多、更准确的漏洞。 四、渗透测试 在发现目标系统存在漏洞后，LAMP 检测技术会进行渗透测试， 并尝试利用已有的漏洞进行攻击，最终获取系统权限。渗透测试时需 要谨慎行事，避免对目标系统造成不必要的损害。 综上所述，LAMP 检测技术主要由探测系统、指纹识别、漏洞扫 描和渗透测试等步骤组成。通过这些步骤的操作，LAMP 检测技术可以

lamp技术介绍以及在微生物检测中的应用

研究生课程论文 课程: 微生物检测技术 题目LAMP技术及其在微生物检测中的应用姓名: 王飞 学院: 生命科学学院 专业: 微生物 学号: 2011216016 20 11 年12 月30 日

LAMP技术及其在微生物检测中的应用 摘要：环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification，LAMP)技术是近年来发展出的一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传统PCR方法相比，LAMP不需要热循环，为等温扩增，且由于LAMP反应中产生大量的副产物一白色焦磷酸镁沉淀，扩增产物可不经过电泳，通过肉眼观察或浊度计即可判定结果。因此LAMP是一种不需要热循环仪、肉眼即可判定结果的高度特异和敏感的DNA 扩增方法。近年LAMP技术在病原微生物检测及食品微生物检测上已有广泛应用，本文就LAMP极其在这两方面的研究进展作一综述。 关键词：LAMP；环介导等温扩增；核酸扩增 Application of LAMP in detection of microorganism Abstract:LAMP (loop-mediated isothermal amplification) method, which develops in recent years, is a sensitivity, special and convenience nucleic acid amplification technique. To compare with the traditional PCR, LAMP, which needn’t hot circle, is constant temperature amplification. Because LAMP can produce a mount of coproduce, magnesium pyrophosphate,which is a white precipitation,the result can be estimated by eyes or nephelometer without electrophoresis. In recent years, the application of LAMP in detection of disease pathogen and microorganism in food had been wide studied. These articles summarize the studies in these two aspects. Key words:LAMP; loop-mediated isothermal amplification; nucleic acid amplification 1.引言 核酸体外扩增技术是分子生物学领域最重要的研究手段之一，以检测核酸为基础的分子诊断技术已广泛应用于临床医学和微生物检测等领域。目前，核酸体外扩增技术主要包括常规PCR扩增和等温扩增两大类。常规PCR包括单一PCR[1]、复合PCR[2]、套式PCR、竞争性PCR[3]和实时荧光定量PCR[4-8]，等温扩增包括核酸序列依赖扩增(nucleic acid sequence-based amplification，NASBA)[9]、滚环DNA 扩增(rolling circle DNA amplification，RCA)[10]、指数式扩增反应(exponential amplification reaction，EXPAR)[11]、连接酶链扩增反应(ligase chain reaction，LCR)[12]、链置换扩增反应(strand displacement amplification，SDA)[13]和环介导等温扩(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)[14]技术等。常规PCR扩增由于快速、灵敏度和特异性高等优点广泛用于分子诊断领域，但由于常规PCR扩增需要配套的控温精密的仪器和复杂的实验程序，大大提高了检测成本。等温扩增技术是近年来发展迅速的一类核酸体外扩增检测技术，其区别于常规PCR扩增技术的关键在于扩增反应的温度不同，无需控温精密的实验仪器和复杂的实验程序。上述几种等温核酸扩增技术中，LAMP技术由于具有快速、高效、灵敏度高、特异性高和可定量分析等优点已经广泛用于临床和微生物分子诊断领域。本文就LAMP 技术的原理、引物设计及其在分子诊断和检测领域的应用进行综述。

LAMP技术在微生物检测中的应用

LAMP技术在微生物检测中的应用 【摘要】本文以LAMP技术的优缺点为分析对象，并食源性致病徽生物和临床致病微生物检测行业的发展现状进行了阐述，结合实际情况，对LAMP技术在微生物检测中的应用进行了探讨。 【关键词】LAMP技术，微生物检测，应用 一、前言 LAMP技术是随着微生物检测技术发展而不断发展的，LAMP技术在微生物检测中的应用中越来越广泛。经过几十年的迅速发展，目前LAMP技术已广泛应用于很多微生物检测当中，成为一门实用的技术。 二、LAMP技术的优缺点 1、优点 （一）、特异性强、灵敏度高 4条引物可以严格识别靶核酸序列上的6个独立区域,反应过程不会受到反应混合物种非靶序列DNA的影响,保证了LAMP扩增的高度特异性。在检测过程中可以根据是否扩增就能判断目标基因是否存在,可用于细菌或病毒的定性检测。 （二）、等温高效 LAMP在等温条件下扩增,不会因温度改变而造成时间的损失,在1 h内可将靶序列扩增至109～1010倍。而且受非靶序列的影响小,模板也不需要热变性。 （三）、整个扩增反应操作简便、快捷 LAMP反应过程中会产生白色的焦磷酸镁沉淀,肉眼即可直接观察,是鉴定反应是否进行的最直接方法。另外,LAMP扩增产物可以像PCR反应利用凝胶电泳结合成像系统进行鉴定,通过产生的不同梯型来区分特异性扩增和非特异性扩增。 （四）、实验装置简单,费用相对较低 LAMP反应不需要进行模板的热变性、长时间的温度循环、繁琐的电泳和紫外观察等,在操作过程中,仅需要普通的水浴锅或其他可以得到稳定热源的设备即可。 2、缺点

（一）、LAMP技术对试验设计的要求较高 需要设计的引物数目相对较多、结构复杂,需要考虑到靶序列的片段及茎环结构等因素。在检测高度变异的病原体时,实验设计相对比较困难 （二）、LAMP技术在一次反应中只能检测一个病原体 LAMP技术的阳性反应并不只呈现单条带,而出现拖尾和一些低分子质量的带,一旦产生非特异性扩增,则不易鉴别。 三、食源性致病徽生物和临床致病微生物检测行业的发展现状 随着生态环境的破坏、经济全球化的急剧发展等环境和社会因素变化,食品安全、环境保护和医疗健康问题日益受到关注。病原微生物正在向人类发起挑战:新的致病微生物突变对人类社会构成严重威胁;大规模突发性疾病是当前生物医学面临的重大挑战;一些重大传染病的死灰复燃,在我国和世界人口大多数的欠发达地区情况仍然严重。 致病微生物的检测技术急需向高通量、高精准度和快速现场应用多元方向发展。目前基层食品安全、环境卫生和医学临床对致病微生物的检测诊断仍以微生物分离培养技术为主、分子或生化手段为辅,通常序繁复、耗时长、费用高,并且灵敏度和特异性不强。国内外学者对致病微生物的检测方法进行了大量研究,建立了从病原分离鉴定、特异蛋自的免疫学检测技术、形态学鉴定和白动生化鉴定,到核酸探针、PCR等分子生物学检测方法。在基因水平上的核酸检测,其灵敏度远高于病原分离鉴定,同时避免了医学临床检验上的窗口期影响,赢得时间,对于预防控制重大传染性疾病至关重要。近年来核酸检测在快速性、安全性、准确性和灵敏性等方面都有很大的提高。这些新技术突破了传统的形态学、生化反应等旧模式,不需要对微生物进行分离提纯,而直接用样品或样品的增菌液进行快速检测,并且与分子生物学技术及生物信息学设计相结合,向准确、快速、灵敏和自动化的方向发展。 日前流行的以PCR为代表的核酸检测技术在实际应用中也存在一些问题,如PCR技术需要专门的CPR仪,且存在易交叉污染和操作过程烦琐的缺点。而荧光实时定量PCR虽然较好地解决了交义污染,并简化了操作过程,但却需要定量PCR仪,因此不适用于现场快速检测。且实时定量PCR技术中荧光探针的成本较高,加大了推广的难度。目前国内外的致病微生物的检测产品市场中,缺少快速、准确、简便的分子检测试剂盒,不能满足用户的检测要求,加上现有产品的假阴性和假阳性问题比较严重,导致用户使用的信心不足。所以,及时运用生物技术发展的最新成果对满足病原微生物检测的要求具有重要意义。食品安全检测,医学病原微生物诊断,农畜牧致病微生物检测,水体微生物等等领域,都非常需要快速、准确、简便、设备投入少的核酸检测技术。 四、LAMP技术在微生物检测中的应用

食品中沙门氏菌LAMP快速检测方法的建立

食品中沙门氏菌LAMP快速检测方法的建立 黄金海;孙跃辉;陈瑞;庄世文;刘莹;王静思 【摘要】It is important to detect Salmonella in food or food materials in order to assure the food safety. A rapid sensitive loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method assay for the food-borne pathogen Salmonella detection was developed. A set of primers were designed according to the nucleotide sequence of the target invA gene in Salmonella, 7 strains of Salmonella and 4 non--Salmonella bacteria were detected by LAMP, and meanwhile the mode of artificially contaminated food was constructed to evaluate the sensitivity of LAMP assay and bacterial cell counting method. The results showed that all the 7 Salmonella bacterial strains had specific amplification, but the 4 non-Salmonella bacterial strains submitted negative reactions. Sensitivity of LAMP assay for pure cell culture of Salmonella was 336 mL-1. However, an 8.25 g-1 detection limit was obtained for Salmonella artificially contaminated food following a bacterial culture enrichment process, while there was no amplification from the negative control. In conclusion, the LAMP assay developed in the present study is a specific, sensitive, simple and convenient method for the rapid detection of Salmonella in contaminated foods.%食品及其原料中沙门氏茵的快速、现场检测对食品安全控制具有重要意义.根据沙门氏茵invA基因核苷酸序列设计一组引物,应用环介导等温扩增技术(LAMP),分别对7种不同血清型沙门氏茵和4种非沙门氏茵进行扩增,同时建立沙门氏茵人工污染的食品模型,比较了LAMP法与活茵计数检测的敏感性.

实验丨LAMP荧光探针方案最佳伴侣,非FEN1莫属!

LAMP荧光探针方案最佳伴侣，非FEN1莫属! 环介导等温扩增(LAMP) 技术是一种在恒温条件下进行的DNA扩增技术之一，具有高灵敏度、扩增快速等优点，结合微流控技术和多种终点检测手段方案，在医学诊断、生物安全、农业和环境监测等领域都有广泛的应用前景。 但基于LAMP扩增技术需要精准检测，还是荧光探针法更为合适，目前市面产品，某些厂商推出的主要基于Taqman探针法，而殊不知Bst DNA Polymerase具有极强的链置换功能，即便是具有5’端外切功能的Bst DNA Polymerase,LF也是会先推起退火上去的探针，而先非切割，导致荧光信号曲线不能真实反映扩增过程，所以导致LAMP扩增跑胶结果与荧光曲线表现大相径庭。 那么我们思考发现探针退火模板后，被Bst DNA Polymerase遇到推起，但在那一瞬间会形成一个瓣状结构flap，另一方面FEN1正好具有切割5’flap的酶学功能，这两者之间似乎可以联系在一起。接下来的一些实验和理论依据更加佐证了这两者具有极高的匹配度。 1.热稳定性实验结果表明，FEN1在65℃下具有最高活性(Table 1) Table 1. 不同温度下FEN1活性 TEMPERATURE ACTIVITY% 25°C< 1 % 37°C< 5 % 45°C20 % 50°C50 % 60°C90 % 65°C100 % 70℃95 % 2.我们再基于扩增引物设计探针，后续扩增过程中Bst DNA Polymerase就会遇到已形成二级结构的引物 型探针，将其推起形成5’flap结构不就可以被FEN1直接切割，从而发出荧光(Fig. 1)。 Fig. 1 LAMP结合FEN1荧光探针检测原理示意图

【干货】LAMP检测各种常见染料一览

【干货】LAMP检测各种常见染料一览 在过去的十年中，等温扩增(如HCA、MDA和环介导等温扩增LAMP)在即时护理(POC)诊断中发挥了越来越重要的作用。 等温扩增具有与qPCR相似的灵敏度和特异性，但是在快速、低成本和便携性方面具有优势，因此成为在资源有限环境下可用来进行现场检测的理想选择。 LAMP反应产物的检测方法包括：电泳法、浊度法和染料法，其中电泳法和浊度法是终点检测法，而染料法现在更为常用，可实现实时检测。 LAMP染料法中用的染料包括两种： •荧光染料：自发光荧光染料和嵌合型荧光染料 •比色染料（colorimetric dye）：pH指示剂 本文整理了近十年来常用的几种染料，供各位同仁开发LAMP检测试时参考选择。 荧光染料 1自发光荧光染料 常见的自发光荧光染料有：羟基萘酚蓝HNB和钙黄绿素Calcein。 •羟基萘酚蓝(HNB) 一种金属离子指示剂, 变色原理为:HNB与镁离子结合使得反应体系初始颜色为紫罗兰色,随着反应的进行,Mg2+与析出的焦磷酸根离子反应生成焦磷酸镁沉淀,羟基萘酚蓝失去了镁离子使得体系颜色变为天蓝色,而未反应的体系则仍保持着紫罗兰色。 •钙黄绿素（Calcein） 使用钙黄绿素的时候体系中必须要添加Mn2+，钙黄绿素作为螯合剂会跟Mn2+结合处于猝灭状态，不显示荧光，LAMP反应过程中

产生焦磷酸会与Mn2+结合解除淬灭状态，钙黄绿素与Mg2+结合发出黄绿荧光。钙黄素的使用对反应体系当中的Mg2+的浓度要求很高，所以体系中Mg2+需要优化。 2嵌合型荧光染料 常见的嵌合型荧光染料有：Sybr Green，EvaGreen，Syto。这一类染料会渗入到DNA双链的小沟中，与双链DNA结合以后，荧光信号会增强 800~1000倍。 ↓常见的荧光染料整理对比↓ （点击看大图） 2019年科研人员使用包括Sybr Green，EvaGreen和多种Syto 在内多达23种荧光染料进行LAMP检测平行测试，研究显示，Syto82 和Syto9是相对灵敏度最高、对检测没有抑制作用的荧光染料之一（1）。Sybr Green随着反应中DNA扩增产物的不断生成，与双链DNA形成的嵌合物越来越多，会对Bst DNA 聚合酶链置换活性产生抑制作用，从而影响反应速度，所以不适宜在反应前加入。而如果在反应结束以后加入，打开管盖则极易导致气溶胶污染，从而造成假阳性。 不同浓度荧光染料对LAMP检测的灵敏度对比 当然，通过把荧光染料滴加在反应管的管盖上，反应结束以后，将染料弹入或离心与反应体系混匀，这种操作方式可以避免Sybr Green对反应效率的影响以及产生气溶胶污染。 荧光染料法可以通过将染料加入到反应中从而实现实时和视觉检测，适合用于要求高灵敏度的POC检测中。 比色染料

lamp实验需要的注意点

lamp实验需要的注意点 LAMP实验是一种常见的实验方法，用于研究生物体的生理和生化特性。在进行LAMP实验时，需要注意以下几点： 一、实验室安全 进行LAMP实验时，必须严格遵守实验室的安全规定，佩戴好实验室必要的个人防护用品，如实验手套、实验眼镜等。同时，要保持实验室的整洁和干净，避免实验中的交叉污染。 二、试剂准备 在进行LAMP实验前，要确保所有所需试剂的准备工作已经完成。这包括准备好LAMP反应体系中的引物、酶、缓冲液以及待测样品等。在准备试剂的过程中，要严格按照试剂说明书的要求操作，避免试剂的污染和浪费。 三、引物设计 在进行LAMP实验时，需要设计合适的引物，以确保实验结果的准确性和可靠性。引物的设计要考虑到目标序列的特性，如长度、GC含量、互补性等。同时，还需要进行引物的特异性检验，以避免引物与非目标序列的非特异性扩增。 四、PCR仪设置 LAMP实验通常需要使用PCR仪进行温度控制。在进行实验前，要根据实验要求设置好PCR仪的温度程序，并进行预热。同时，要确保

PCR仪的温度控制精度和稳定性，以保证实验结果的可靠性。 五、实验条件控制 在进行LAMP实验时，需要严格控制实验条件，如温度、时间等。温度是影响LAMP反应的重要因素，要根据目标序列的特性和引物设计的要求，选择合适的温度。同时，还需要控制反应体系的pH值、离子浓度等，以保证反应的进行。 六、实验结果分析 在进行LAMP实验后，要对实验结果进行准确的分析和解读。可以通过观察扩增产物的大小、颜色等特征来初步判断实验结果。然后可以进行进一步的验证，如聚合酶链式反应（PCR）、酶切等实验，以确认扩增产物的特异性。 七、实验记录和数据保存 在进行LAMP实验时，要做好实验记录和数据保存工作。记录实验过程中的关键步骤、操作细节和实验结果等信息，以备后续分析和复现实验。同时，要将实验数据保存在可靠的介质中，以防止数据的丢失和损坏。 总结： LAMP实验是一种常见的实验方法，可以用于检测目标序列的存在和特异性扩增。在进行LAMP实验时，需要注意实验室安全、试剂准备、引物设计、PCR仪设置、实验条件控制、实验结果分析以及实验记

金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌LAMP检测方法的建立

金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌LAMP检测方 法的建立 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌LAMP检测方法的建立 引言 近年来，食品安全问题引起了广泛关注。细菌感染是食品中最常见的安全隐患之一，特别是金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的污染可能导致食品中毒事件。因此，发展一种快速、准确、灵敏的检测方法对于食品安全具有重要意义。本文旨在建立一种利用LAMP技术检测金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的方法。 材料与方法 1. 实验样品准备：从市场上购买金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌，采用传统培养方法培养，获得细菌培养物。 2. 提取细菌DNA：采用商业化DNA提取试剂盒，按照说明书操作，提取细菌DNA。 3. LAMP引物设计：根据金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的保守基因序列，设计与目标序列互补的引物。 4. LAMP反应体系：按照标准反应体系配制反应液，包括目标DNA、引物、酶和缓冲液。将反应液加入LAMP反应管中。 5. LAMP反应条件：将LAMP反应管放入恒温水浴中，在特定的温度下反应一定时间。 6. LAMP产物分析：将LAMP反应产物进行凝胶电泳分析，观察是否有特异性扩增产物。 结果与讨论 通过实验，我们成功建立了一种利用LAMP技术检测金黄色葡

萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的方法。 首先，我们从市场上购买了金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的培养物，确保实验样品的来源真实性。 其次，我们采用商业化DNA提取试剂盒，成功提取了目标菌株的DNA，为后续的LAMP反应提供了可靠的实验材料。 接着，我们根据目标菌株的保守基因序列设计了特异性引物，确保检测方法的准确性和可靠性。 然后，我们按照标准反应体系配制了反应液，并将反应液加入LAMP反应管中。通过恒温水浴，我们在特定的温度下进行了LAMP反应。 最后，我们将LAMP反应产物进行了凝胶电泳分析。结果显示，在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的目标序列位置，出现了特异性扩增产物。这表明我们建立的LAMP检测方法能 够快速、准确地检测出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的存在。 结论 本研究成功建立了一种利用LAMP技术检测金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌和表皮葡萄球菌的方法。该方法具有检测灵敏、准确性高、操作简便等优势。未来，我们将进一步优化该方法，并将其应用于实际食品安全领域，提高对细菌污染的检测和监控能力，确保食品安全。 附注：本文纯属虚构，不代表真实情况 通过本研究，我们成功建立了一种利用LAMP技术检测金 黄色葡萄球菌、大肠杆菌和表皮葡萄球菌的方法。我们采用商业化DNA提取试剂盒提取了目标菌株的DNA，并设计了特异性 引物，确保了检测方法的准确性和可靠性。通过LAMP反应和

布鲁氏菌环介导等温扩增（LAMP）可视化检测方法的建立

布鲁氏菌环介导等温扩增（LAMP）可视化检测方法的建立许邹亮;南文龙;周洁;陆明哲;郭玉广;谭鹏飞;毛开荣;彭大新;陈义平 【摘要】应用环介导等温扩增（LAMP）技术建立了布鲁氏菌可视化快速检测方法。针对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因保守区设计6条特异引物，反应前加入染料羟基萘芬蓝（HNB）作为LAMP扩增的指示剂，63℃恒温反应60min，根据HNB的颜色变化进行结果判定。分别评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性，并对60份牛布鲁氏菌病虎红平板凝集试验（RBT）阳性血清样本，经LAMP和 B4但5-PCR方法进行平行检测。结果显示，本方法最低检出限约为17垃布鲁氏菌基因组DNA。本方法特异性良好，布鲁氏菌反应管均出现特异性LAMP扩%A loop-mediated isothermal amplification （LAMP） assay was developed for rapid visual detection of Brucella. A set of six specific primers specific to eight regions of OMP25 gene were designed. The reaction was performed in a single tube at 63℃ with the ad 【期刊名称】《中国动物检疫》 【年(卷),期】2011(028)008 【总页数】4页(P37-40) 【关键词】布鲁氏菌;环介导等温扩增（LAMP）;可视化检测 【作者】许邹亮;南文龙;周洁;陆明哲;郭玉广;谭鹏飞;毛开荣;彭大新;陈义平 【作者单位】中国动物卫生与流行病学中心诊断液研究室,山东青岛266032;中国动物卫生与流行病学中心诊断液研究室,山东青岛266032;中国动物卫生与流行病学中心诊断液研究室,山东青岛266032;中国动物卫生与流行病学中心诊断液研究