葡萄糖_6_磷酸脱氢酶的研究进展_安选

红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症

红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏系临床上最多见的红细胞内戊糖磷酸途径的遗传性缺陷，红细胞G6PD缺乏症指因G6PD缺乏所致的HA，全球患者估计2亿人以上。土耳其东南部的犹太人发病率最高(58.2%)。国内广西某些地区(15.70%)、海南岛黎族(13.7%)和云南省傣族多见，淮河以北较少见。 【发病机制】 突变基因位于X染色体(Xq28)，呈伴性不完全显性遗传，男多于女。基因呈复杂的多态性，可形成多种G6PD缺乏症的变异型。 G6PD缺乏症患者一旦受到氧化剂的作用，因G6PD的酶活性减低，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)和还原型谷胱甘肽(GSH)等抗氧化损伤物质缺乏，导致高铁血红素和变性珠蛋白包涵体海因小体(Heinzbody)生成。后者在光学显微镜下为1～2tLm大小的折光小体，大多分布在红细胞膜上。含有这种小体的红细胞，极易被脾素阻滞而被单核巨噬细胞所吞噬。 【实验室检查】 （一）高铁血红蛋白还原试验 患者血标本加入美蓝时，高铁血红蛋白还原低于正常值(75%)，严重者低于30%。本法简便，适用于过筛试验或群体普查。缺点是有假阳性。 （二）红细胞海因小体(Heinzbody)生成试验 在所采血中加入乙酰苯肼，37℃温育后再做甲基紫或煌焦油蓝活体染色。G6PD缺乏的红细胞内可见海因小体，计数大于5%有诊断意义。 （三）葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)活性测定 最为可靠，是主要的诊断依据。溶血高峰期及恢复期，酶的活性可以正常或接近正常。通常在急性溶血后2～3个月后复测可以比较正确地反映患者的G6PD 活性。 【临床表现、诊断】 ①有伴性不完全显性遗传的家族史，自幼发病。②有HA的临床表现和实验室证据（见第一节），有G6PD活性缺乏的实验室检查结果。③抗人球蛋白试验阴性，外周血涂片无异形红细胞，温育后红细胞渗透性脆性正常;无异常血红蛋白病，可排除其他溶血性贫血的可能。具备以上三点即可诊断红细胞G6PD缺乏症。临床类型如下。 （一）蚕豆病(favism) 广东、四川、广西、湖南、江西等地农村常见，机制不明。男多于女，成年人发病低于小儿，3岁以上儿童占70%左右。 1．发生于每年的3～5月间蚕豆成熟季节。40%的患者有家族史可查。 2．在食新鲜蚕豆后几小时（最短2小时）至几天（一般1～2天，最长15天）突然发作，呈现急性血管内溶血的临床表现和实验室检查结果（具体内容见第一节）。其严重程度与食蚕豆的量无关。从发病到尿隐血转阴、溶血停止约7天，溶血呈自限性。 3．G6PD活性在正常水平的10%以下，海因小体是本类溶血的特征。 （二）药物诱发的HA 服药（抗疟药如伯氨喹、扑疟喹啉等、磺胺类如磺胺甲〒唑、柳氮磺吡啶等、解热镇痛药如阿司匹林、乙酰苯胺等、硝基呋喃类如呋喃妥因、呋喃唑酮等、氨苯砜、维生素K、丙磺舒、对氨基水杨酸、奎尼丁、氯霉素等）或接触樟脑丸后1～3天出现急性血管内溶血的临床表现和实验室检查结果（见第一节），溶血贫

体液检验

尿液化学检查标准操作程序 规范操作，保证尿液化学检查结果的准确性。 【适用范围】 尿液化学检查。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任 【方法】：尿液试带法 【原理】： 优利特-100A尿液分析仪为一个反射光度计，分析从试剂区域反射光的密度和颜色，把反射光转换成电脉冲，通过微机处理，便转变为有意义的结果。 1．校正空白：尿在试剂块上分布的状态及尿本身颜色，一般都会给测定结果带来误差，设空白块就是为了排除这些产生误差的因素，各项目都不得使用同一空白块。 2．PH：通过PH指示剂测定4.5~9的范围内的PH值，正常人的新鲜尿液PH值在5~7之间。 3．亚硝酸盐：反应依赖于尿中格兰氏阳性细菌把硝酸盐还原成亚硝酸盐，亚硝酸盐与对氨基苯砷酸反应生成重氮化合物，重氮化合物再与萘基乙二胺二盐酸结合呈现出 桃红色。对于含有少量亚硝酸盐离子的尿样，当Vc浓度超过1.4mmol/L时会造成假 阴性的结果。 4．葡萄糖：根据葡萄糖氧化酶法反应原理，葡萄糖氧化酶特异性氧化β-D葡萄糖，生成葡萄糖醛酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，使指示剂氧化而呈现 出蓝色，如果采集尿液的容器残留氧化性的消毒剂可能出现假阳性结果。 5．蛋白质：根据染料结合的蛋白误差法原理，蛋白质与染料结合形成复合物产生色变，特别是对白蛋白的反应比对球蛋白、血红蛋白、本-周氏蛋白和粘蛋白更为灵敏。高 比重尿、高缓冲尿、碱性尿和清洗剂之类物质都有可能影响结果的准确性。 6．根据血红蛋白接触活性原理，通过血红蛋白的类过氧化物酶样作用催化分解过氧化物，使邻联甲苯胺氧化呈色。强氧化剂可能造成假阳性，肌红蛋白也会呈阳性反应，Vc浓度超过1.4mmol/L时会造成假阴性的结果。 7．比重：利用多聚电解质方法，尿中电解质与聚电解质发生离子交换的原理。阳离子存在时，多聚物氢离子通过交换释出，使溴百里酚蓝指示剂发生颜色变化，颜色由 蓝经过蓝绿最后变成黄色。尿比重试纸检测结果不受尿中非离子物质的影响。高PH 和低PH值将影响测定结果，在高PH值的情况下，测定结果将偏低；在低PH值的情 况下，测定结果将偏高。 8．胆红素：根据偶氮偶合法的原理，2，4-二氯苯胺重氮盐与胆红素进行特异性反应，并与胆红素的浓度相对应产生不同的颜色。在低PH值的情况下，一些药物代谢物会 给出假阳性结果，当Vc达到250mg/L以上亦可能出现假阴性结果。 9．尿胆原：根据偶氮结合法的原理，尿胆素原在强酸条件下和重氮盐偶联形成胭脂红色素。某些药物可导致轻微阳性结果，例如非那吡啶等药物可导致在酸性介质中显 红色。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症(G6PD) 简介(英文)

What is G6PD deficiency? Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency, or G6PD deficiency for short, is the most common “inborn metabolic disorder” in the world. This means that from the time a baby is born, thre is already something wrong with how his body makes and breaks important substances. According to statistics, about 400 million people have G6PD deficiency, and it is most common in Africa, Southeast Asia and the Middle East.Babies with G6PD deficiency have very little or no enzyme called Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase (G6PD). An enzyme is a kind of protein that speeds up chemical reactions in the body. The enzyme G6PD is especially important to red blood cells. If this enzyme is lacking or missing, red blood cells are easily destroyed. Another name for G6PD deficiency is favism because some people who have it, usually those living in the Meditteranean region, react very badly to fava beans. What causes G6PD deficiency? In order to understand what causes G6PD deficiency, one must first learn a bit about genes and chromosomes. Genes are like the body’s blueprints. They contain instructions on how specific parts of the body are made. For example, if the isntructions in your hair genes say your hair is black, your hair will be black. Genes are packaged into threadlike structures called chromosomes. A chromosome is very much like a beaded bracelet. The beads are the different genes that give instructions for different part of the body; the entire bracelet is the chromosome. Genes usually come and act in pairs. One member of a specific pair comes from the father, and the other member comes from the mother. The members of a pair are located on paired chromosomes. All normal human beings have 23 pairs of chromosomes. Each of the first 22 pairs contain the same number and kind of genes. The last and 23rd pair is the sex chromosomes. They are different from the first 22 pairs in that they do not have the same number and kind of genes. The sex chromosomes contain the genes that determine whether a baby will be a girl or a boy. There are 2 kinds of sex chromosomes, X and Y. All baby girls have two X chromosomes. All baby boys have one X and one Y. The gene that gives instructions on how G6PD is made is found in the X chromosome only, thus G6PD deficiency is described as X-linked. If a baby girl gets one defective G6PD gene from either of her parents, she will not have G6PD deficiency because she has another G6PD gene that can do the work (remember: a baby girl has two X chromosomes, thus two G6PD genes). But if she gets two defective G6PD genes from both her parents, she will have G6PD deficiency. On the other hand, a baby boy whose G6PD gene is defective will surely get G6PD deficiency because the Y chromosome has no G6PD gene. A defective G6PD gene will give wrong instructions on how to make the enzyme G6PD. As a result, too little or none of it is made. What are the harmful effects of G6PD deficiency? G6PD has a very small but strategic role in protecting the body from substances that can cause damage to cells or oxidative substances. Because of this important role, G6PD is normally found in all parts of the body. To be sure, most parts of the body also keep a “spare” enzyme, one that can do the w ork of G6PD in case it is lacking or missing entirely.

生化总结1知识讲解

第九章体液葡萄糖检验 1、糖尿病的诊断标准（2001年） 注意：以上三种方法都可以单独用于DM的诊断，但任何一种阳性结果都必须随后用三种方法中任何一种进行复查才能正式确诊 2、糖尿病的分型：1 型糖尿病、2 型糖尿病、其他特殊类型的糖尿病、妊娠期糖尿病。 1型和2型糖尿病的区别： 1型和2型糖尿病的特点的比较 3、DM检测酶法：葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（临检中心推荐）、己糖激酶法（参考方法） 葡萄糖氧化酶法 原理：Glu + H2O GOD H2O2 + 葡萄糖酸 H2O2 + 4-氨基安替比林+酚POD 红色醌类化合物（520nm） 试剂组成:1．磷酸盐缓冲液(pH7.0) 2．酶试剂3．酚溶液4．苯甲酸溶液5．L葡萄糖标准液 己糖激酶法（Herokinase） 原理：Glu +ATP HK G-6-P + ADP G-6-P + NADP G-6-PDH 6-P-葡萄糖酸+ H+ + NADPH（340nm) 试剂组成:1．反应混合试剂PH 7.5 2．三乙醇胶盐酸缓冲液（PH 7.5） 3．MgS04、A TP、NADP、HK-1、G6PD 4．L葡萄糖标准液

4、激素调节—升高血糖的激素：胰高血糖素、肾上腺素、生长激素 激素调节—降低血糖的激素：胰岛素、胰岛素样生长因子(IGF） 胰岛素（insulin）：是一种胰岛β细胞分泌的蛋白质激素。作用:促进靶器官（肝脏、骨骼肌、脂肪 组织）摄取葡萄糖，促进葡萄糖转化为糖原或脂肪，抑制肝脏的糖异生，刺激 蛋白质合成并抑制其分解，总效应是降低血糖。 第五章血脂及血浆脂蛋白检验 第一节概述 1、概念: 血脂：是血浆中的中性脂肪（甘油三酯和胆固醇）和类脂（磷脂、糖脂、固醇、类固醇）的总称。 血浆脂蛋白：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质与蛋白质结合成脂蛋白的形式存在。 脂蛋白受体：脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白。它能以高度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。 载脂蛋白：脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白(Apo) 。 高脂蛋白血症：高脂血症是指血浆中胆固醇或/ 和甘油三酯水平升高。 2.、四种主要脂蛋白受体的结构特征（功能）及主要结构蛋白： 3、LDL受体途径：LDL或其他含有ApoB100的脂蛋白如VLDL 与LDL-R结合后，被内吞入细胞，经溶酶体酶作用，胆固醇水解成游离胆固醇，后者进入胞质的代谢库，供细胞膜等膜结构利用，这一代谢过程称为LDL受体途径 4、高脂蛋白血症分类：

临床检验技师生化检验考试第六章考点

临床检验技师生化检验考试第六章考点临床检验技师生化检验考试第六章考点 人体内存在的液体称为体液。 体液中含有多种无机物和有机物 无机物与部分以离子形式存在的有机物统称为电解质。 葡萄糖、尿素等不能解离的物质称为非电解质 体液以细胞膜为界分为细胞内液和细胞外液。 正常情况下，体液之间的水与电解质处于动态平衡，这种平衡状态易受体内外因素影响而被破坏，导致代谢紊乱，即水、电解质和酸碱平衡紊乱。 第一节机体水、电解质的平衡及紊乱 一、体液中水、电解质分布及平衡 (一)水的分布及平衡 人体内含水量与年龄、性别有关，还与组织结构有关。 1.水的来源和去路： 水的来源： 饮水约1200ml、食物中含水约1000ml、代谢内生水约300ml，共约2500ml。 水的去路： 肾脏排尿1500ml、自肺呼出400ml、皮肤蒸发500ml、粪便排出100ml，共约2500ml

正常情况摄入量与排出量持平。 2.影响体液动态平衡的因素 (1)影响水在血管内外转移的因素主要通过血管壁 血浆胶体渗透压(主要)、毛细血管通透性、毛细血管静水压 (2)影响水在细胞内外转移的因素主要通过细胞膜 晶体渗透压 水从低渗透压的一侧流向高渗透压一侧。 正常情况下，细胞内外渗透压相等 3.水代谢平衡的调节： 水的调节中枢在下丘脑，通过神经体液调节 (1)口渴思饮 产生口渴的原因：血浆晶体渗透压升高、血管紧张素Ⅱ增多、生活习惯等。 (2)抗利尿激素： 抗利尿激素的作用是作用于远端肾小管的，促进水的重吸收,减少尿量。 血浆晶体渗透压升高、血容量下降、剧烈运动和疼痛等可使抗利尿激素分泌增多。 (3)心房肽、肾素-醛固酮系统亦有调节水的功能。 (二)电解质分布及平衡 1.电解质的含量和分布： 有机电解质：蛋白质和有机酸 无机电解质：主要是无机盐，

葡萄糖磷酸脱氢酶缺乏症

葡萄糖磷酸脱氢酶缺乏症

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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症，又名G6PD缺乏症（英文：G lucose-6-P hosphate D ehydrogenase deficiency），俗称蚕豆症，是一种常见的先天遗传性疾病。患者由于遗传基因的先天缺陷，无法正常地分解葡萄糖。除此以外，部份药物和化学物如蚕豆、樟脑、臭丸、龙胆紫（紫药水）、都会令患者出现急性溶血反应，症状包括黄疸、精神不佳，严重时会出现呼吸急速、心脏衰竭，甚至会出现休克而有生命危险。 症状 由于先天性六磷酸葡萄糖去氢酵素缺乏症（以下简称为G6PD）是X染色体联锁遗传性疾病，而男性只得一条X-染色体，故此病症几乎只出现于男性身上，但带有此病因的女性亦有可能出现轻微的症状。 以下为G6PD发病时可能出现的症状： ?持续的黄疸 ?溶血反应，由以下项目引发： ?某类药物（见下） ?某类食物（如蚕豆、金银花） ?其他物品（如樟脑、龙胆紫（紫药水）） ?其他疾病（如受到严重病菌感染、糖尿病） ?严重症状可引致急性肾衰竭 诱发G6PD症状的药物有： ?伯氨喹（Primaquine） ?奎宁、汤力水（tonic water）等抗疟药物 ?磺胺类抗生素 ?砜类：如用以治疗麻疯病的氨苯砜 ?其他含硫磺的药品，如治疗糖尿病、控制血糖的药物血糖平（Glibenclamide） ?呋喃妥因：治疗尿道感染的抗生素 ?阿司匹林 当某些族裔的病人，出现黄疸、贫血，以及对某些诱因产生溶血反应时，又或是家族中有G6PD患者，都会被列为G6PD 的疑似个案，需要作进一步的测试。 G6PD的测试包括： ?全套血球计数（Complete blood count）及网状细胞（reticulocyte）计数；当症状出现时，G6PD患者的海因兹小体（Heinz bodies）会出现于在检验血液玻片的红血球内。 ?肝脏蛋白酶测试，以剔除其他黄疸症状的诱因 ?结合珠蛋白（Haptoglobin）于溶血反应中会减少

分光光度计法测定糖

实验二总糖和还原糖的测定（二） ──3,5－二硝基水杨酸法 目的要求： 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。 实验原理: 在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 试剂和器材 一、试剂 3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为2.0mg/ml。 6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。 碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。 0.1% 酚酞指示剂。 二、材料 藕粉，玉米淀粉。

三、器材 WFJ UV－2000型分光光度计，水浴锅，电炉，15mm×180mm试管。 操作方法 一、葡萄糖标准曲线制作 取5支15mm×180mm试管，按下表加入2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。 管号葡萄糖标准液蒸馏水葡萄糖含量OD540 /ml /ml /mg 0 1 0 0.2 1 0.8 0.4 2 0.4 0.6 0.8 3 0.6 0. 4 1.2 4 0.8 0.2 1.6 5 1 0 2 在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。 二、样品中还原糖的提取 准确称取0.5g藕粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。 三、样品总糖的水解及提取 准确称取0.5g玉米淀粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。 四、样品中含糖量的测定 取7支15mm×180mm试管，分别按下表加入试剂：

葡萄糖标准曲线

1DNS DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。 2试剂制备 将6.3克DNS和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml，即制成3,5-二硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶中备用。 3标准曲线 分别取葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中，用蒸馏水补足至1.0ml, 分别准确加入DNS试剂2ml，沸水浴加热2min，流水冷却，用水补足到15ml刻度。在540nm波长下测定吸光度。 4样品测定 样品液适当稀释，使糖浓度为0.1-1.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度。从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。求出样品中糖含量。

pH 0.1M柠檬酸/ml 0.1M柠檬酸钠/ml pH 0.1M柠檬酸/ml 0.1M柠檬酸钠/ml 3.0 18.6 1.4 5.0 8.2 11.8 3.2 17.2 2.8 5.2 7.3 12.7 3.4 16.0 4.0 5.4 6.4 13.6 3.6 1 4.9 5.1 5.6 5.5 14.5 3.8 1 4.0 6.0 5.8 4.7 15.3 4.0 13.1 6.9 6.0 3.8 16.2 4.2 12.3 7.7 6.2 2.8 17.2 4.4 11.4 8.6 6.4 2.0 18.0 4.6 10.3 9.7 6.6 1.4 18.6 4.8 9.2 10.8 C6H8O7·H2O分子量＝210.14 0.1M溶液含21.01g/L Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 0.1M溶液含29.41g/L

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法) 简介： 葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase ，G-6-PD 或G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中的第一个酶(EC1.1.1.49)。 Leagene 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯，后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA)，同时NAPD 被还原成NADPH ，其反应公式如下： G-6-P+NAPD +→6-PGA +L-NADPH 。 在上述偶联反应中，NADPH 生成速率与样本中酶活性呈正比，通过分光光度计或自动分析仪检测吸光度升高速率(ΔA /min)，升高速率(ΔA /min)与G-6-PD 活性呈正比，比色杯光径1.0cm ，直接计算酶的活性单位。100T 该试剂盒试剂可以检测50次样本，该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、 生理盐水 2、 水浴锅 3、 比色杯 4、 分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 1、 准备溶血液：取新鲜抗凝血，离心取上清及白细胞层，用4℃预冷的生理盐水洗涤，每 次取上清时，务必去除剩余的白细胞层，再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30%的红细胞悬液，4℃保存备用。临用前，以样本稀释液稀释，即为溶血液。4℃保存10h ， 编号 名称 TE0085 100T Storage 试剂(A): 样本稀释液 100ml -20℃ 避光 试剂(B): G6PD assay buffer 100ml 4℃ 试剂(C): NADP 18mg -20℃ 试剂(D): G-6-P 1支 -20℃ 试剂(E): G-6-P 稀释液 10ml RT 使用说明书 1份

红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症

红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏症是世界上最多见的红细胞酶病，本病有多种G-6-PD基因变异型，伯氨喹啉型药物性溶血性贫血或蚕豆病，感染诱发的溶血，新生儿黄疸等。本病是由于调控G-6-PD 的基因突变所致。呈X连锁不完全显性遗传。 红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏症是世界上最多见的红细胞酶病，据统计全球约有近4亿人G-6-PD缺陷。本病常在疟疾高发区、地中海贫血和异常血蛋白病等流行地区出现，地中海沿岸、东南亚、印度、非洲和美洲黑人的发病率较高。我国分布规律呈“南高北低”的态势，长江流域以南，尤以广东、海南、广西、云南、贵州、四川等地为高发区，发生率为4%-15%，个别地区高达40%。 疾病分类 本病有多种G-6-PD基因变异型，伯氨喹啉型药物性溶血性贫血或蚕豆病，感染诱发的溶血，新生儿黄疸等。 发病原因 诱因有：①蚕豆；②部分氧化药物：解热镇痛药；磺胺药；硝基呋喃类；伯氨喹；维生素K3、4；对氨基水杨酸等;③感染：细菌或病毒。 发病机制 本病是由于调控G-6-PD的基因突变所致。呈X连锁不完全显性遗传。由于G-6-PD基因的突变，导致红细胞葡萄糖磷酸戊糖旁路代谢异常，当机体受到伯氨喹啉型药物等氧化物侵害时，氧化作用产生的H2O2不能被及时还原成水，过多的H2O2可致血红蛋白和膜蛋白均发生氧化损伤。最终造成红细胞膜的氧化损伤和溶血。溶血过程呈自限性，因新生的红细胞G-6-PD活性较高，对氧化剂药物有较强的“抵抗性”，当衰老红细胞酶活性过低而被破坏后，新生红细胞即代偿性增加，故不再发生溶血。蚕豆诱发的溶血是蚕豆嘧啶核苷及伴蚕豆嘧啶核苷对红细胞氧化作用的结果。 病理生理

生物化学实验报告示范-3-5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线

实验二3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线 马铃薯总糖含量测定 实验目的 1. 熟悉并掌握7200型分光光度仪的结构及工作原理和操作使用方法； 2. 掌握分光光度法测定物质含量的基本操作步骤及微机绘制标准曲线的操作方法； 3．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的原理及方法； 4．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理与方法。 实验原理 1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的及标准曲线定制原理 3,5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中加热反应后被还原成棕红色的氨基化合物，该有色物质在540nm 处有最大吸光度，且在一定浓度范围内（一般OD值在～范围内线性较好），还原糖的量与反应液的颜色强度（吸光度OD值）呈线性关系，利用分光光度仪，以分析纯葡萄糖为还原糖测定的标准品，在540nm处按梯度依次测定各葡萄糖浓度对应的反应液的吸光度（OD值）大小，通过微机处理数据，定制葡萄糖标准曲线，确定出3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖的线性回归方程； 2. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理 先将马铃薯去皮，经机械粉碎，过滤和清水漂洗，烘干制成马铃薯淀粉；再精确称取干燥恒重后的马铃薯淀粉加酸水解为还原糖，经中和定容，配制成马铃薯总糖含量测定的待测液（即样品液）；再以标准曲线测定的加样操作方法，测定出样品待测液的吸光度大小，将测定的吸光度大小代入其回归方程，即可计算出样品待测液的显色浓度，根据稀释倍数关系，计算出以还原糖的量表示的马铃薯总糖的量，并测定出马铃薯总糖百分含量。该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。 实验操作 1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线 （1）葡萄糖标准溶液的配制：（2mg/mL）准确称取2000mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至1000mL，冰箱保存备用

实训二、葡萄糖标准曲线的绘(完)制

实训二、葡萄糖标准曲线的绘制 一、实训目的 1、了解DNS法测定还原糖的基本原理 2、通过DNS法测定还原糖的含量，建立吸光度与还原堂含量之间的线形关系，用于后续纤维素酶酶活性的测定 3、通过定量操作，让学生形成准确称量、测定的理念。 二、实训原理 具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应。反应液颜色的强度（吸光度OD值）与还原糖量（此处即为葡萄糖量）成正比关系。 三、实训方法 1、DNS溶液的配制 称取3，5－二硝基水杨酸3.15g(化学纯)，加水500ml，搅拌5s，水浴至45℃，然后逐步加入100ml氢氧化钠溶液（称取氢氧化钠20.0g，加水溶解，定容到100ml），同时不断搅拌，直到溶液清澈透明（注意：在加入过程中，溶液温度不要超过48℃）。再逐步加入四水酒石酸甲钠91g，苯酚 2.50g和无水亚硫酸钠2.50g。继续45℃水浴加热，同时补加水300ml，不断搅拌，直到加入的物质全部溶解。停止加热，冷却到室温后，用水定容到1000ml，用烧结玻璃过滤器过滤。取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。室温下存放7d后可以使用，有效期为6个月。 （笔者注：在处理酸、碱和配制DNS试剂时，请尽可能戴上保护眼镜和乳胶手套，实验应在通风橱或通风良好的房间进行。一旦皮肤或者眼睛接触了上述物质，应及时用大量的清水冲洗） 2、 0.1％葡萄糖标准液 准确称取100mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100ml，保存于冰箱中备用。 3、葡萄糖标准曲线的绘制 取9支具塞刻度试管，分别按表1顺序加入各种试剂。 表 1 试剂加入顺序

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,6-PGDH)说明书

货号：QS1106 规格：50管/48样6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-phosphogluconate dehydrogenase，6-PGDH） 说明书 紫外分光光度法 注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6PGDH依次催化NADPH合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。 测定原理： 6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。 自备实验用品及仪器： 紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入5 mL试剂一，混匀。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前配制，加入5 mL试剂一，混匀。 粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。 2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3.血清、培养液等液体：直接测定。 测定操作： 1. 分光光度计预热30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂一置于25℃或者37℃水浴预热30 min。 3. 空白管：取1mL石英比色皿，依次加入100μL蒸馏水，100μL试剂二，700μL试剂一，100μL试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A空白管=A2-A1 4. 测定管：取1mL石英比色皿，依次加入100μL粗酶液，100μL试剂二，700μL试剂一，100μL试剂三，于340nm处测定3min内吸光值变化，第10 s吸光值记为A3，第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3 注意：空白管只需要做一次。 计算公式： （1）按照蛋白浓度计算 活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1个酶活单位。 6PGDH酶活性(nmol/min/mg prot)= [(△A测定管-△A空白管)×V反总 第1页，共2页

临床检验技师-临床化学练习2019第六章体液平衡紊乱及其检查

2019 第六章体液平衡紊乱及其检查 一、A1 1、下列哪一种情况下血浆钾离子浓度会降低 A、创伤 B、高烧 C、严重腹泻 D、饱食后 E、缺氧 2、下列能引起血钾浓度降低的是 A、创伤 B、高烧 C、饥饿 D、呕吐 E、缺氧 3、下列不是K+的主要功能的是 A、维持细胞外液容量 B、参与细胞内的代谢 C、调节酸碱平衡 D、维持正常渗透压 E、维持神经-肌肉应激性 4、钾在体内主要分布于 A、组织间液 B、细胞内液 C、骨骼 D、血液 E、肝细胞线粒体 5、每克血红蛋白可结合的氧量为 A、1.34ml B、4.31ml C、3.14ml D、3.41ml E、4.13ml 6、呼吸性酸中毒 A、PaCO2↑ B、PaCO2↓ C、肺过度换气 D、肾脏排出氢离子减少 E、肾脏重吸收HCO3-减少

7、Bohr效应是指 A、PO2改变而影响Hb携氧能力的现象 B、pH改变而影响Hb携氧能力的现象 C、脂肪酸改变而影响Hb携氧能力的现象 D、温度改变而影响Hb携氧能力的现象 E、2，3-二磷酸甘油酸改变而影响Hb携氧能力的现象 8、实际碳酸氢盐（AB）=标准碳酸氢盐（SB）且两者均大于正常值提示 A、代谢性酸中毒 B、呼吸性酸中毒 C、代谢性碱中毒 D、呼吸性碱中毒 E、无酸碱平衡紊乱 9、如血气分析标本不能及时测定，需保存在有冰块的水中，其目的是 A、防止CO2气体丧失 B、防止糖代谢 C、防止溶血 D、防止血液浓缩 E、防止O2气体丧失 10、血氧饱和度主要取决于 A、血氧含量 B、PCO2 C、Hb水平 D、PO2 E、血pH 11、以下符合代谢性酸中毒特点的是 A、HCO3-/H2CO3＜20/1，原发性H2CO3↑ B、HCO3-/H2CO3＜20/1，原发性HCO3-↓ C、HCO3-/H2CO3＞20/1，原发性H2CO3↑ D、HCO3-/H2CO3＞20/1，原发性HCO3-↓ E、pH值一定降低 12、人体每天体内代谢产生的水大约有 A、200ml B、300ml C、400ml D、500ml E、600ml 13、下列哪种蛋白质含量减低可引起水肿 A、免疫球蛋白 B、清蛋白

G6PD缺乏症(红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症)

G6PD缺乏症（红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 缺乏症） G6PD缺乏症，是遗传性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症，是最常见的一种遗传性酶缺乏病，俗称蚕豆病。G6PD缺乏症发病原因是由于G6PD基因突变，导致该酶活性降低，红细胞不能抵抗氧化损伤而遭受破坏，引起溶血性贫血。 疾病简介 红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏症是世界上最多见的红细胞酶病，据统计全球约有近4亿人G-6-PD缺陷。本病常在疟疾高发区、地中海贫血和异常血蛋白病等流行地区出现，地中海沿岸、东南亚、印度、非洲和美洲黑人的发病率较高。我国是本病的高发区之一，分布规律呈“南高北低”的态势，长江流域以南，尤以广东、海南、广西、云南、贵州、四川等地为高发区，发生率为4%-15%，个别地区高达40%。 中医学名G6PD缺乏症 其他名称蚕豆病 英文名称glucose-6-phoshate dehydrogenase deficiency；G-6-PD 所属科室内科- 血液内科 主要症状慢性溶血性贫血、急性起病、贫血、黄疸、血红蛋白尿

主要病因进食新鲜蚕豆 禁用磺胺嘧啶、SMZ、SMZ—TMP等 传染性无传染性 疾病分类 本病有多种G-6-PD基因变异型，伯氨喹啉型药物性溶血性贫血或蚕豆病，感染诱发的溶血，新生儿黄疸等。 发病原因 诱因有:①蚕豆;②氧化药物:解热镇痛药、磺胺药、硝基呋喃类、伯氨喹、维生素K、对氨基水杨酸等;③感染:病原体有细菌或病毒。 发病机制 本病是由于调控G-6-PD的基因突变所致。呈X连锁不完全显性遗传。由于G-6-PD基因的突变，导致红细胞葡萄糖磷酸戊糖旁路代谢异常，当机体受到伯氨喹啉型药物等氧化物侵害时，氧化作用产生的H2O2不能被及时还原成水，过多的H2O2可致血红蛋白和膜蛋白均发生氧化损伤。最终造成红细胞膜的氧化损伤和溶血。溶血过程呈自限性，因新生的红细胞G-6-PD活性较高，对氧化剂药物有较强的“抵抗性”，当衰老红细胞酶活性过低而被破坏后，新生红细胞即代偿性增加，故不再发生溶血。蚕豆诱发的溶血是蚕豆嘧啶核苷及伴蚕豆嘧啶核苷对红细胞氧化作用的结果。

葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏症

葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏症 G-6-PD缺乏症，全称为红细胞葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏症，俗称“蚕豆病”，是一种染色体异常的遗传性溶血性疾病。约90%发生于男性，且多见于3岁以下的儿童，是新生儿黄疸的重要原因。 G-6-PD（红细胞葡萄糖6-磷酸脱氢酶）能协助葡萄糖进行新陈代谢，并可产生一种能够保护红细胞的物质，以对抗某些“不良”物质的破坏。而当体内缺乏G-6-PD时，红细胞失去了保护物质，容易受到某些“不良”物质的破坏，从而发生溶血。主要表现为溶血症状，出现脸色苍黄、疲累、食欲差、黄疸、茶色尿等。严重时，可能会出现昏迷，甚至死亡。 目前，还没有任何药物能治愈此病。G-6-PD缺乏症在无诱因不发病时，与正常人一样，无需特殊处理。防治的关键在于预防，请严格遵照以下健康处方： 1、禁食蚕豆及其有关制品(如蚕豆酥、怪味豆)，避免在蚕豆开花、结果或收获季节去蚕豆地。 2、衣橱、厕所等处不可以使用樟脑丸（含萘的臭丸）。 3、不要使用龙胆紫(紫药水)。 4、禁止使用的药物：乙酰苯胺、美蓝、硝咪唑、呋喃旦叮、呋喃唑酮、呋喃西林、苯肼、伯氨喹啉、扑疟母星、戊胺喹、磺胺、乙酰磺胺、磺胺吡啶、噻唑酮、甲苯胺蓝、SMZ、TNT等。 5、慎用的药物：扑热息痛、非拉西丁、阿司匹林、氨基比林、安替比林、安坦、维生素C、维生素K、氯霉素、链霉素、异烟肼、磺胺嘧啶、磺胺胍、磺胺异恶唑、氯喹、秋水仙碱、苯海拉明、左旋多巴、苯妥英钠、普鲁卡因

酰胺、乙胺嘧啶、奎尼丁、奎宁、SM、TMP、优降糖等。 6、注意下列感染性诱因：病毒性肝炎、流感、肺炎、伤寒、腮腺炎等。 7、凡感染后或接触/服用以上食物或药物数小时或数天内，出现发热、腹痛、呕吐、面黄或苍白、尿呈黄褐色或暗红色等症状，属急性溶血反应，应立即到医院急诊科就诊！

葡萄糖检测试剂盒(Folin-Wu比色法)

仅供科研版本号：180720 葡萄糖检测试剂盒(Folin-Wu比色法) 【产品组成】 【保存条件】 4℃，避光,6个月 【产品概述】 葡萄糖(Glucose,Dextrose，Glu)又称玉米葡糖，简称葡糖，化学式C6H12O6，分子量为180.16，是自然界分布最广、最重要的一种单糖，属于多羟基醛。用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法，最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法，上述酶学法特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪。测定葡萄糖亦可通过邻甲苯胺法、苯胺法、联苯胺法等实现。 葡萄糖检测试剂盒(Folin-Wu比色法)检测原理是葡萄糖在加热的碱性环境中铜离子还原成氧化亚铜沉淀，后者使磷钼酸还原成钼蓝，其最高吸收峰为420nm颜色深浅与葡萄糖含量成正比，利用分光光度计通过已知浓度的葡萄糖制作标准曲线能够计算出未知样本的葡萄糖含量。本试剂盒专门用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的葡萄糖含量定量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 【使用方法】 1、样本处理： ①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血，一般需要去除蛋白质(即为无蛋白血滤液)后再经检测。取抗凝血1ml，加入8ml蛋白酸化液，混匀，缓慢加入蛋白沉淀液，边加边摇匀，至出现暗红色蛋白质沉淀。静置10min，3000g离心5min，取上清液即为无蛋白血滤液，4℃保存备用。 ②组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)=1：9的比例，加入生理盐水或PBS，冰浴条件下手动或机械匀浆。2500~3000g离心10min，取上清待用。 ③细胞样本： a、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。 b、用PBS或生理盐水清洗1~2次，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。 南京森贝伽生物科技有限公司网址：https://www.sodocs.net/doc/6018794810.html,/ 第1页