葡萄糖6磷酸脱氢酶缺乏症

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症，又名G6PD缺乏症（英文：G lucose-6-P hosphate D ehydrogenase deficiency），俗称蚕豆症，是一种常见的先天遗传性疾病。患者由于遗传基因的先天缺陷，无法正常地分解葡萄糖。除此以外，部份药物和化学物如蚕豆、樟脑、臭丸、龙胆紫（紫药水）、都会令患者出现急性溶血反应，症状包括黄疸、精神不佳，严重时会出现呼吸急速、心脏衰竭，甚至会出现休克而有生命危险。

由于先天性六磷酸葡萄糖去氢酵素缺乏症（以下简称为G6PD）是X染色体联锁遗传性疾病，而男性只得一条X-染色体，故此病症几乎只出现于男性身上，但带有此病因的女性亦有可能出现轻微的症状。

以下为G6PD发病时可能出现的症状：

?持续的黄疸

?溶血反应，由以下项目引发：

?某类药物（见下）

?某类食物（如蚕豆、金银花）

?其他物品（如樟脑、龙胆紫（紫药水））

?其他疾病（如受到严重病菌感染、糖尿病）

?严重症状可引致急性肾衰竭

诱发G6PD症状的药物有：

?伯氨喹（Primaquine）

?奎宁、汤力水（tonic water）等抗疟药物

?磺胺类抗生素

?砜类：如用以治疗麻疯病的氨苯砜

?其他含硫磺的药品，如治疗糖尿病、控制血糖的药物血糖平（Glibenclamide）

?呋喃妥因：治疗尿道感染的抗生素

?阿司匹林

当某些族裔的病人，出现黄疸、贫血，以及对某些诱因产生溶血反应时，又或是家族中有G6PD患者，都会被列为G6PD 的疑似个案，需要作进一步的测试。

G6PD的测试包括：

?全套血球计数（Complete blood count）及网状细胞（reticulocyte）计数；当症状出现时，G6PD患者的海因兹小体（Heinz bodies）会出现于在检验血液玻片的红血球内。

?肝脏蛋白酶测试，以剔除其他黄疸症状的诱因

?结合珠蛋白（Haptoglobin）于溶血反应中会减少

?库氏试验（直接抗球蛋白试验，Coombs test）：于G6PD患者病发时应呈阴性反应，这是由于G6PD引发的溶血反应并非由免疫系统协调产生

?甲状腺功能量度（TSH measurement）

当有足够证据支持病者症状由G6PD引发，便可以"Beutler fluorescent spot test"为患者进行直接测试，其他可能的诊断方法，有DNA直接测试及检查G6PD的基因排列。

现时使用的G6PD测试名为Beutler fluorescent spot test（取代过去使用的Motulsky dye-decolouration test），是一个快速、便宜的测试方法，透过紫外线识别G6PD患者身体制造的NADPH。测试为阳性时，血点不会在紫外线下发出萤光；但当病人出现溶血反应时，测试结果可能会呈伪阳性（false positive），故需要待溶血反应停止后数周才可进行测试。

G6PD可按病症分为四类：

1. 非血球型溶血性贫血（Hereditary nonspherocytic hemolytic anemia）

2. 严重缺失症状

3. 温和缺失症状

4. 无缺失症状（隐性）

磷酸戊糖途径是部份细胞（如红血球）赖以产生能量的代谢途径，以及维持NADPH的水平，而G6PD酶则属于该代谢途径的一员。NADPH的含量，亦直接影响谷胱甘肽于细胞中的含量，而谷胱甘肽亦能保护红血球免受氧化反应的破坏。G6PD酶对磷酸盐戊糖代谢途径有速度限制作用，以及能转化葡萄糖-6-磷酸为6-磷酸葡萄糖酸-δ-内酯。

当G6PD患者的氧化反应转趋剧烈便有可能出现溶血性贫血现象；这种情况可能会由严重感染、药物治疗及部份食物引起。蚕豆含有大量蚕豆嘧啶葡糖甙、蚕豆嘧啶、伴蚕豆嘧啶核苷及异脲咪─这些全都是氧化剂。

在剧烈的氧化反应下，谷胱甘肽会被耗尽，接着酵素及各种蛋白质（如血红蛋白）亦会被氧化物破坏，导致体内电解质失衡、细胞膜cross-bonding、巨噬作用及脾脏隔离红血球等现象。血红蛋白会被代谢为胆红素，于高浓度时会引致黄疸，或直接经肾脏排出，于严重情况下可导致肾衰竭。

G6PD患者的G6PD酶分子结构，会导致葡萄糖的积聚而引致后期糖化终产物（Advanced glycation endproducts, AGE）的积聚。酶分子的缺失亦会导致NADPH的减少，而NADPH是产生一氧化氮的要员。糖尿病二型的普及，与西方黑人的高血压情况都与G6PD缺失症状有直接关系（Gaskin R. et al.）。然而，其他流行病学的报告指出，G6PD似乎会降低癌症、心脏血管病症及中风等病症。

虽然女性会患上较温和型的G6PD（视乎无受影响的X染色体的钝化情况），但亦存在同质接合的女性病患个案；这些女性患者的病因，与一种名为慢性肉芽肿病的罕见免疫失调有关。

G6PD是最常见因代谢酶缺失而引发的病症，但此病却会为患者带来对抗疟疾的保护，特别是由Plasmodium falciparum 引发的疟疾。类似的情况亦出现于镰刀型红血球疾病的患者。对此情况，其中一个解释是由于疟原虫会很快对脾脏清除，这现象可能是G6PD患者的进化优势。

发生率：世界各地都有G6PD缺乏症患者，尤其是地中海沿岸、非洲及东南亚地区。在台湾地区发生率为3%，因属于X染色体性联遗传疾病，故男性患者多于女性患者[1]。

患者必须避免因食物及药物（如：抗疟疾药物、磺胺类药物等）所引致的溶血反应，亦应接受抗病疫苗注射（如甲型肝炎疫苗）以防止发病。有高含量维生素C及K的食物，亦应该避免食用。一但出现皮肤变黄、脸色苍白、或茶色尿时，应立即送医，寻求诊治，不可延误。

当发生剧烈的溶血反应时，患者需要大量输液治疗，并可能需要接受输血，若发生肾衰竭时更需要接受血液透析。由于患者接受输血时，所输之血液没有G6PD缺失，故此输血是病发时的有效方法。

脾脏是分解红血球之处，切除脾脏对部份病人的病情会有帮忙。任何引致红血球出现高周转的失调现象都应施以叶酸治疗。虽然维他命E及硒具抗氧化特性，他们的使用并不会降低G6PD的严重性。

红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症

红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏系临床上最多见的红细胞内戊糖磷酸途径的遗传性缺陷，红细胞G6PD缺乏症指因G6PD缺乏所致的HA，全球患者估计2亿人以上。土耳其东南部的犹太人发病率最高(58.2%)。国内广西某些地区(15.70%)、海南岛黎族(13.7%)和云南省傣族多见，淮河以北较少见。 【发病机制】 突变基因位于X染色体(Xq28)，呈伴性不完全显性遗传，男多于女。基因呈复杂的多态性，可形成多种G6PD缺乏症的变异型。 G6PD缺乏症患者一旦受到氧化剂的作用，因G6PD的酶活性减低，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)和还原型谷胱甘肽(GSH)等抗氧化损伤物质缺乏，导致高铁血红素和变性珠蛋白包涵体海因小体(Heinzbody)生成。后者在光学显微镜下为1～2tLm大小的折光小体，大多分布在红细胞膜上。含有这种小体的红细胞，极易被脾素阻滞而被单核巨噬细胞所吞噬。 【实验室检查】 （一）高铁血红蛋白还原试验 患者血标本加入美蓝时，高铁血红蛋白还原低于正常值(75%)，严重者低于30%。本法简便，适用于过筛试验或群体普查。缺点是有假阳性。 （二）红细胞海因小体(Heinzbody)生成试验 在所采血中加入乙酰苯肼，37℃温育后再做甲基紫或煌焦油蓝活体染色。G6PD缺乏的红细胞内可见海因小体，计数大于5%有诊断意义。 （三）葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)活性测定 最为可靠，是主要的诊断依据。溶血高峰期及恢复期，酶的活性可以正常或接近正常。通常在急性溶血后2～3个月后复测可以比较正确地反映患者的G6PD 活性。 【临床表现、诊断】 ①有伴性不完全显性遗传的家族史，自幼发病。②有HA的临床表现和实验室证据（见第一节），有G6PD活性缺乏的实验室检查结果。③抗人球蛋白试验阴性，外周血涂片无异形红细胞，温育后红细胞渗透性脆性正常;无异常血红蛋白病，可排除其他溶血性贫血的可能。具备以上三点即可诊断红细胞G6PD缺乏症。临床类型如下。 （一）蚕豆病(favism) 广东、四川、广西、湖南、江西等地农村常见，机制不明。男多于女，成年人发病低于小儿，3岁以上儿童占70%左右。 1．发生于每年的3～5月间蚕豆成熟季节。40%的患者有家族史可查。 2．在食新鲜蚕豆后几小时（最短2小时）至几天（一般1～2天，最长15天）突然发作，呈现急性血管内溶血的临床表现和实验室检查结果（具体内容见第一节）。其严重程度与食蚕豆的量无关。从发病到尿隐血转阴、溶血停止约7天，溶血呈自限性。 3．G6PD活性在正常水平的10%以下，海因小体是本类溶血的特征。 （二）药物诱发的HA 服药（抗疟药如伯氨喹、扑疟喹啉等、磺胺类如磺胺甲〒唑、柳氮磺吡啶等、解热镇痛药如阿司匹林、乙酰苯胺等、硝基呋喃类如呋喃妥因、呋喃唑酮等、氨苯砜、维生素K、丙磺舒、对氨基水杨酸、奎尼丁、氯霉素等）或接触樟脑丸后1～3天出现急性血管内溶血的临床表现和实验室检查结果（见第一节），溶血贫

6- 酶磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒

6-磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒 产品简介： 6-磷酸葡萄糖脱氢酶是磷酸戊糖途径的关键酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸内酯，同时将NADP还原为NADPH，以供生物合成及维持细胞内的还原状态，因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。 G6PDH能使NADP还原成NADPH，6-磷酸葡萄糖+NADP→6-磷酸葡萄糖酸内脂+NADPH；在一定反应时间内其活性高低与反应前后生成物浓度的变化呈线性关系。本测试盒通过在340nm下测定NADPH增加速率来反应G6PDH活性的大小，NADPH浓度升高越多则G6PDH 活力越大。 试验中所需的仪器和试剂： 紫外可见分光光度计、37℃恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、蒸馏水 产品内容： 提取液：60mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：储备液50mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×2支，-20℃保存；用时每只加275μL双蒸水充分溶解备用； 试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；用时每只加275μL双蒸水充分溶解备用。 操作步骤： 一、样品测定的准备： (1)细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液的比例充分匀浆以破碎并裂解细胞。8000g离心10分钟，取上清，置冰上待测。 组织：称取100mg组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10分钟，

取上清，置冰上待测。 （2）血清（浆）样品：直接检测。 二、测定操作表： 测定管对照管试剂一（μL）750750 试剂二（μL）1010 试剂三（μL）1010 样本（μL）30 蒸馏水（μL）30 将上述试剂按顺序加入1mL石英比色皿中，加样本的同时开始计时，在340nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1，比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃或25℃水浴中（哺乳动物用37℃，非哺乳动物用25℃），准确反应5分钟。迅速取出比色皿并擦干，340nm下比色，记录5分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。 注意事项： 1、若A2-A1大于0.5，需将酶液用提取液稀释，使A2-A1小于0.5，可提高检测灵敏度。 2、实验时，试剂二、试剂三和样本在冰上放置，以免变性和失活。试剂一37℃或25℃水浴放置。 3、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

体液检验

尿液化学检查标准操作程序 规范操作，保证尿液化学检查结果的准确性。 【适用范围】 尿液化学检查。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任 【方法】：尿液试带法 【原理】： 优利特-100A尿液分析仪为一个反射光度计，分析从试剂区域反射光的密度和颜色，把反射光转换成电脉冲，通过微机处理，便转变为有意义的结果。 1．校正空白：尿在试剂块上分布的状态及尿本身颜色，一般都会给测定结果带来误差，设空白块就是为了排除这些产生误差的因素，各项目都不得使用同一空白块。 2．PH：通过PH指示剂测定4.5~9的范围内的PH值，正常人的新鲜尿液PH值在5~7之间。 3．亚硝酸盐：反应依赖于尿中格兰氏阳性细菌把硝酸盐还原成亚硝酸盐，亚硝酸盐与对氨基苯砷酸反应生成重氮化合物，重氮化合物再与萘基乙二胺二盐酸结合呈现出 桃红色。对于含有少量亚硝酸盐离子的尿样，当Vc浓度超过1.4mmol/L时会造成假 阴性的结果。 4．葡萄糖：根据葡萄糖氧化酶法反应原理，葡萄糖氧化酶特异性氧化β-D葡萄糖，生成葡萄糖醛酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，使指示剂氧化而呈现 出蓝色，如果采集尿液的容器残留氧化性的消毒剂可能出现假阳性结果。 5．蛋白质：根据染料结合的蛋白误差法原理，蛋白质与染料结合形成复合物产生色变，特别是对白蛋白的反应比对球蛋白、血红蛋白、本-周氏蛋白和粘蛋白更为灵敏。高 比重尿、高缓冲尿、碱性尿和清洗剂之类物质都有可能影响结果的准确性。 6．根据血红蛋白接触活性原理，通过血红蛋白的类过氧化物酶样作用催化分解过氧化物，使邻联甲苯胺氧化呈色。强氧化剂可能造成假阳性，肌红蛋白也会呈阳性反应，Vc浓度超过1.4mmol/L时会造成假阴性的结果。 7．比重：利用多聚电解质方法，尿中电解质与聚电解质发生离子交换的原理。阳离子存在时，多聚物氢离子通过交换释出，使溴百里酚蓝指示剂发生颜色变化，颜色由 蓝经过蓝绿最后变成黄色。尿比重试纸检测结果不受尿中非离子物质的影响。高PH 和低PH值将影响测定结果，在高PH值的情况下，测定结果将偏低；在低PH值的情 况下，测定结果将偏高。 8．胆红素：根据偶氮偶合法的原理，2，4-二氯苯胺重氮盐与胆红素进行特异性反应，并与胆红素的浓度相对应产生不同的颜色。在低PH值的情况下，一些药物代谢物会 给出假阳性结果，当Vc达到250mg/L以上亦可能出现假阴性结果。 9．尿胆原：根据偶氮结合法的原理，尿胆素原在强酸条件下和重氮盐偶联形成胭脂红色素。某些药物可导致轻微阳性结果，例如非那吡啶等药物可导致在酸性介质中显 红色。

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒使用说明

葡萄糖-6-磷酸酶（G6P)试剂盒使用说明 分光光度法货号：BC0930 规格：50管/48样 产品内容： 提取液：60mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体47.5mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1支，-20℃保存； 试剂三：粉剂×1支，-20℃保存； 试剂四：液体×1支，-20℃保存； 产品说明： 葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose6phosphatase，G6Pase，EC3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。 G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH，在340nm下测定NADH生成速率，即可反映G6P活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。操作步骤： 一、样本的前处理： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞 数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加

入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组 织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 二、测定步骤： 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合待用；用不完的试剂4℃保存一周； 2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）预热5分钟。 3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液，立即混匀，记录340nm处 初始吸光值A1和2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。 注意：在该试剂盒中，若ΔA大于0.3，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA小于0.3可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。 G6P活性计算： 1、血清（浆）G6P活力计算 单位定义：每毫升血清（浆）每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 G6P（U/mL））＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=1608×ΔA 2、组织、细菌或细胞中G6P活力计算 （1）按样本蛋白浓度计算 单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 G6P（U/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)活性检测试剂盒说明书 微量法

葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）活性检测试剂盒说明书微量法 注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号:BC3325 规格:100T/48S 产品内容： 提取液：液体120mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体12mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存； 试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前用4mL蒸馏水溶解备用。 试剂四：试剂×1瓶，4℃保存；临用前用4mL蒸馏水溶解备用。 试剂五：液体4mL×1瓶，4℃保存； 标准品：液体1mL×1支。10μmol/mL磷标准液。 产品说明： 葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose6phosphatase，G6Pase，EC3.1.3.9）是一种水解磷酸化合物的磷酸酶，广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。 G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和无机磷，利用钼蓝法测定无机磷含量的增加，即可反映G6P活性。试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取

液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 二、测定步骤： 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。 2、将10μmol/mL标准液用蒸馏水稀释16倍至0.625μmol/mL的标准溶液备用。 3、工作液的配制：试剂二中加入5mL试剂一充分溶解备用。 O:试剂三:试剂四:试剂五=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若4、定磷试剂的配制：按H 2 无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。 注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。 5、操作表： 测定管对照管标准管空白管样品（μL）2020 工作液（μL）80 充分混匀，37℃（哺乳动物）或者25℃（其他物种）水 浴反应10min。反应后迅速放入沸水中沸水浴10min。取出 冷却至常温 工作液（μL）-80 10000rpm常温离心10min后取上清。 上清液（μL）2525-- 标准溶液（μL）--25- 定磷试剂（μL）125125125125 蒸馏水（μL）100100100125 充分混匀，40℃反应10min。吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中，测量660nm处吸光值，测定管、对照管、空白管、标准管测定的吸光度分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。计算△A=A测定管-A对照管，△A标准=A标准管-A空白管。 三、G6P活性计算：

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症(G6PD) 简介(英文)

What is G6PD deficiency? Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency, or G6PD deficiency for short, is the most common “inborn metabolic disorder” in the world. This means that from the time a baby is born, thre is already something wrong with how his body makes and breaks important substances. According to statistics, about 400 million people have G6PD deficiency, and it is most common in Africa, Southeast Asia and the Middle East.Babies with G6PD deficiency have very little or no enzyme called Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase (G6PD). An enzyme is a kind of protein that speeds up chemical reactions in the body. The enzyme G6PD is especially important to red blood cells. If this enzyme is lacking or missing, red blood cells are easily destroyed. Another name for G6PD deficiency is favism because some people who have it, usually those living in the Meditteranean region, react very badly to fava beans. What causes G6PD deficiency? In order to understand what causes G6PD deficiency, one must first learn a bit about genes and chromosomes. Genes are like the body’s blueprints. They contain instructions on how specific parts of the body are made. For example, if the isntructions in your hair genes say your hair is black, your hair will be black. Genes are packaged into threadlike structures called chromosomes. A chromosome is very much like a beaded bracelet. The beads are the different genes that give instructions for different part of the body; the entire bracelet is the chromosome. Genes usually come and act in pairs. One member of a specific pair comes from the father, and the other member comes from the mother. The members of a pair are located on paired chromosomes. All normal human beings have 23 pairs of chromosomes. Each of the first 22 pairs contain the same number and kind of genes. The last and 23rd pair is the sex chromosomes. They are different from the first 22 pairs in that they do not have the same number and kind of genes. The sex chromosomes contain the genes that determine whether a baby will be a girl or a boy. There are 2 kinds of sex chromosomes, X and Y. All baby girls have two X chromosomes. All baby boys have one X and one Y. The gene that gives instructions on how G6PD is made is found in the X chromosome only, thus G6PD deficiency is described as X-linked. If a baby girl gets one defective G6PD gene from either of her parents, she will not have G6PD deficiency because she has another G6PD gene that can do the work (remember: a baby girl has two X chromosomes, thus two G6PD genes). But if she gets two defective G6PD genes from both her parents, she will have G6PD deficiency. On the other hand, a baby boy whose G6PD gene is defective will surely get G6PD deficiency because the Y chromosome has no G6PD gene. A defective G6PD gene will give wrong instructions on how to make the enzyme G6PD. As a result, too little or none of it is made. What are the harmful effects of G6PD deficiency? G6PD has a very small but strategic role in protecting the body from substances that can cause damage to cells or oxidative substances. Because of this important role, G6PD is normally found in all parts of the body. To be sure, most parts of the body also keep a “spare” enzyme, one that can do the w ork of G6PD in case it is lacking or missing entirely.

生化总结1知识讲解

第九章体液葡萄糖检验 1、糖尿病的诊断标准（2001年） 注意：以上三种方法都可以单独用于DM的诊断，但任何一种阳性结果都必须随后用三种方法中任何一种进行复查才能正式确诊 2、糖尿病的分型：1 型糖尿病、2 型糖尿病、其他特殊类型的糖尿病、妊娠期糖尿病。 1型和2型糖尿病的区别： 1型和2型糖尿病的特点的比较 3、DM检测酶法：葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（临检中心推荐）、己糖激酶法（参考方法） 葡萄糖氧化酶法 原理：Glu + H2O GOD H2O2 + 葡萄糖酸 H2O2 + 4-氨基安替比林+酚POD 红色醌类化合物（520nm） 试剂组成:1．磷酸盐缓冲液(pH7.0) 2．酶试剂3．酚溶液4．苯甲酸溶液5．L葡萄糖标准液 己糖激酶法（Herokinase） 原理：Glu +ATP HK G-6-P + ADP G-6-P + NADP G-6-PDH 6-P-葡萄糖酸+ H+ + NADPH（340nm) 试剂组成:1．反应混合试剂PH 7.5 2．三乙醇胶盐酸缓冲液（PH 7.5） 3．MgS04、A TP、NADP、HK-1、G6PD 4．L葡萄糖标准液

4、激素调节—升高血糖的激素：胰高血糖素、肾上腺素、生长激素 激素调节—降低血糖的激素：胰岛素、胰岛素样生长因子(IGF） 胰岛素（insulin）：是一种胰岛β细胞分泌的蛋白质激素。作用:促进靶器官（肝脏、骨骼肌、脂肪 组织）摄取葡萄糖，促进葡萄糖转化为糖原或脂肪，抑制肝脏的糖异生，刺激 蛋白质合成并抑制其分解，总效应是降低血糖。 第五章血脂及血浆脂蛋白检验 第一节概述 1、概念: 血脂：是血浆中的中性脂肪（甘油三酯和胆固醇）和类脂（磷脂、糖脂、固醇、类固醇）的总称。 血浆脂蛋白：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质与蛋白质结合成脂蛋白的形式存在。 脂蛋白受体：脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白。它能以高度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。 载脂蛋白：脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白(Apo) 。 高脂蛋白血症：高脂血症是指血浆中胆固醇或/ 和甘油三酯水平升高。 2.、四种主要脂蛋白受体的结构特征（功能）及主要结构蛋白： 3、LDL受体途径：LDL或其他含有ApoB100的脂蛋白如VLDL 与LDL-R结合后，被内吞入细胞，经溶酶体酶作用，胆固醇水解成游离胆固醇，后者进入胞质的代谢库，供细胞膜等膜结构利用，这一代谢过程称为LDL受体途径 4、高脂蛋白血症分类：

4.糖代谢

第四章糖代谢 一、A型选择题 01. 淀粉经α-淀粉酶作用后的主要产物是 A. 麦芽糖及异麦芽糖 B. 葡萄糖及麦芽糖 C. 葡萄糖 D. 麦芽糖及临界糊精 E. 异麦芽糖及临界糊精 02. 糖酵解时下列哪一对代谢物提供～P使ADP生成ATP A. 3-磷酸甘油醛及6-磷酸果糖 B. 1,3-二磷酸甘油酸及磷酸烯醇式丙酮酸 C. 3-磷酸甘油酸及6-磷酸葡萄糖 D. 1-磷酸葡萄糖及磷酸烯酸式丙酮酸 E. 1，6-双磷酸果糖及1,3-二磷酸甘油酸 03. 下列有关葡萄糖磷酸化的叙述中，错误的是 A. 已精激酶有四种同工酶 B. 己糖激酶催化葡萄糖转变成6-磷酸葡萄糖 C. 磷酸化反应受到激素的调节 D. 磷酸化后的葡萄糖能自由通过细胞膜 E. 葡萄糖激酶只存在于肝脏和胰腺p细胞 04. 下列哪个酶直接参与底物水平磷酸化 A. 3-磷酸甘油难脱氢酶 B. α-酮戊二酸脱氢酶 C. 琥珀酸脱氢酶 D. 磷酸甘油酸激酶 E. 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 05. 1分子葡萄糖酵解时可生成几分了ATP？ A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 06. 1分子葡萄糖酵解时可净生成几分子ATP？ A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 07. 糖原的1个葡萄糖基经糖酵解可生成几个ATP A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 08. 糖原的1个葡萄糖基经糖酵解可净生成几个ATP？ A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 09. 肝脏内据酵解途径的主要功能是 A. 进行糖酵解 B. 进行糖有氧氧化供能 C. 提供磷酸戊精 D. 对抗糖异生

E. 为其他代谢提供合成原料 10. 糖酵解时丙酮酸不会堆积的原因是 A. 乳酸脱氢酶活性很强 B. 丙酮酸可氧化脱羧生成乙酰CoA C. NADH／NAD+比例太低 D. 乳酸脱氢酶对两酮酸的K m值很高 E. 丙酮酸作为3-磷酸甘油难脱氢反应中生成的NADH的氢接受者 11. 6-磷酸果糖激酶-l的最强别构激活剂是 A. AMP B. ADP C. 2,6-双磷酸果糖 D. A TP E. 1,6-双磷酸果糖 12. 与糖酵解途径无关的酶是 A. 己糖激酶 B. 烯醇化酶 C. 醛缩酶 D. 丙酮酸激酶 E. 磷酸烯酸式丙酮酸羧激酶 13. 下列有关糖有氧氧化的叙述中哪一项是错误的？ A. 糖有氢氧化的产物是CO2及H2O B. 糖有氧氧化可抑制糖酵解 C. 糖有氧氧化是细胞获取能量的主要方式 D. 三羧酸循环是在糖有氧氧化时三大营养素相互转变的途径 E. 1分子葡萄糖氧化成CO2及H2O 时可生成38分子ATP 14. 丙酮酸脱氢酶复合体中不包括 A. FAD B. NAD＋ C. 生物素 D. 辅酶A E. 硫辛酸 15. 不能使同酮酸脱氢酶复合体活性降低的是 A. 乙酰CoA B. A TP C. NADH D. AMP E. 依赖cAMP的蛋白激酶 16. 下列关于三羧酸循环的叙述中，正确的是 A. 循环一周可生成4分子NADH B. 循环一周可使2个ADP磷酸化成A TP C. 乙酰CoA可经草酸乙酸进行糖异生 D. 百二酸可抑制延胡索酸转变成苹果酸 E. 琥珀酸CoA是α酮戊二酸氧化脱羧的产物 17. 1分子乙酰COA经三羧酸循环氧化后的产物是 A. 草酰乙酸 B. 草酸乙酸和CO2 C. CO2＋H2O D. 草酰乙酸十CO2＋H2O E. 2CO2＋4分子还原当量

临床检验技师生化检验考试第六章考点

临床检验技师生化检验考试第六章考点临床检验技师生化检验考试第六章考点 人体内存在的液体称为体液。 体液中含有多种无机物和有机物 无机物与部分以离子形式存在的有机物统称为电解质。 葡萄糖、尿素等不能解离的物质称为非电解质 体液以细胞膜为界分为细胞内液和细胞外液。 正常情况下，体液之间的水与电解质处于动态平衡，这种平衡状态易受体内外因素影响而被破坏，导致代谢紊乱，即水、电解质和酸碱平衡紊乱。 第一节机体水、电解质的平衡及紊乱 一、体液中水、电解质分布及平衡 (一)水的分布及平衡 人体内含水量与年龄、性别有关，还与组织结构有关。 1.水的来源和去路： 水的来源： 饮水约1200ml、食物中含水约1000ml、代谢内生水约300ml，共约2500ml。 水的去路： 肾脏排尿1500ml、自肺呼出400ml、皮肤蒸发500ml、粪便排出100ml，共约2500ml

正常情况摄入量与排出量持平。 2.影响体液动态平衡的因素 (1)影响水在血管内外转移的因素主要通过血管壁 血浆胶体渗透压(主要)、毛细血管通透性、毛细血管静水压 (2)影响水在细胞内外转移的因素主要通过细胞膜 晶体渗透压 水从低渗透压的一侧流向高渗透压一侧。 正常情况下，细胞内外渗透压相等 3.水代谢平衡的调节： 水的调节中枢在下丘脑，通过神经体液调节 (1)口渴思饮 产生口渴的原因：血浆晶体渗透压升高、血管紧张素Ⅱ增多、生活习惯等。 (2)抗利尿激素： 抗利尿激素的作用是作用于远端肾小管的，促进水的重吸收,减少尿量。 血浆晶体渗透压升高、血容量下降、剧烈运动和疼痛等可使抗利尿激素分泌增多。 (3)心房肽、肾素-醛固酮系统亦有调节水的功能。 (二)电解质分布及平衡 1.电解质的含量和分布： 有机电解质：蛋白质和有机酸 无机电解质：主要是无机盐，

葡萄糖磷酸脱氢酶缺乏症

葡萄糖磷酸脱氢酶缺乏症

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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症，又名G6PD缺乏症（英文：G lucose-6-P hosphate D ehydrogenase deficiency），俗称蚕豆症，是一种常见的先天遗传性疾病。患者由于遗传基因的先天缺陷，无法正常地分解葡萄糖。除此以外，部份药物和化学物如蚕豆、樟脑、臭丸、龙胆紫（紫药水）、都会令患者出现急性溶血反应，症状包括黄疸、精神不佳，严重时会出现呼吸急速、心脏衰竭，甚至会出现休克而有生命危险。 症状 由于先天性六磷酸葡萄糖去氢酵素缺乏症（以下简称为G6PD）是X染色体联锁遗传性疾病，而男性只得一条X-染色体，故此病症几乎只出现于男性身上，但带有此病因的女性亦有可能出现轻微的症状。 以下为G6PD发病时可能出现的症状： ?持续的黄疸 ?溶血反应，由以下项目引发： ?某类药物（见下） ?某类食物（如蚕豆、金银花） ?其他物品（如樟脑、龙胆紫（紫药水）） ?其他疾病（如受到严重病菌感染、糖尿病） ?严重症状可引致急性肾衰竭 诱发G6PD症状的药物有： ?伯氨喹（Primaquine） ?奎宁、汤力水（tonic water）等抗疟药物 ?磺胺类抗生素 ?砜类：如用以治疗麻疯病的氨苯砜 ?其他含硫磺的药品，如治疗糖尿病、控制血糖的药物血糖平（Glibenclamide） ?呋喃妥因：治疗尿道感染的抗生素 ?阿司匹林 当某些族裔的病人，出现黄疸、贫血，以及对某些诱因产生溶血反应时，又或是家族中有G6PD患者，都会被列为G6PD 的疑似个案，需要作进一步的测试。 G6PD的测试包括： ?全套血球计数（Complete blood count）及网状细胞（reticulocyte）计数；当症状出现时，G6PD患者的海因兹小体（Heinz bodies）会出现于在检验血液玻片的红血球内。 ?肝脏蛋白酶测试，以剔除其他黄疸症状的诱因 ?结合珠蛋白（Haptoglobin）于溶血反应中会减少

大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)酶联免疫分析试剂盒使用说明书使用目的： 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)水平。用纯化的大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)，再与HRP 标记的葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)抗体结合，形成抗体-抗 原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝 色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)呈 正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠葡 萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)浓度。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶 2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（400U/L）0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶 4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份 5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张 6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进 行稀 释。 200U/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 100U/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液 50U/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液 25U/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液 12.5U/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl， 然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此 重复5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显

生物化学试题及答案(2)

生物化学试题及答案（4） 第四章糖代谢 【测试题】 一、名词解释 1．糖酵解（glycolysis） 11．糖原累积症 2．糖的有氧氧化12．糖酵解途径 3．磷酸戊糖途径13．血糖(blood sugar) 4．糖异生（glyconoegenesis) 14．高血糖(hyperglycemin) 5．糖原的合成与分解15．低血糖(hypoglycemin) 6．三羧酸循环（krebs 循环） 16．肾糖阈 7．巴斯德效应(Pastuer 效应) 17．糖尿病 8．丙酮酸羧化支路18．低血糖休克 9．乳酸循环（coris 循环） 19．活性葡萄糖 10．三碳途径20．底物循环 二、填空题 21．葡萄糖在体内主要分解代谢途径有、和。 22．糖酵解反应的进行亚细胞定位是在，最终产物为。 23．糖酵解途径中仅有的脱氢反应是在酶催化下完成的，受氢体是。两个 底物水平磷酸化反应分别由酶和酶催化。 24．肝糖原酵解的关键酶分别是、和丙酮酸激酶。 25．6—磷酸果糖激酶—1 最强的变构激活剂是，是由6—磷酸果糖激酶—2 催化生成，该酶是一双功能酶同时具有和两种活性。 26．1 分子葡萄糖经糖酵解生成分子ATP，净生成分子ATP，其主要生理意义在于。 27．由于成熟红细胞没有，完全依赖供给能量。 28．丙酮酸脱氢酶复合体含有维生素、、、和。 29．三羧酸循环是由与缩合成柠檬酸开始，每循环一次有次脱氢、 - 次脱羧和次底物水平磷酸化，共生成分子ATP。 30．在三羧酸循环中催化氧化脱羧的酶分别是和。 31．糖有氧氧化反应的进行亚细胞定位是和。1 分子葡萄糖氧化成CO2 和H2O 净生 成或分子ATP。 32．6—磷酸果糖激酶—1 有两个ATP 结合位点，一是ATP 作为底物结合，另一是与ATP 亲和能 力较低，需较高浓度ATP 才能与之结合。 33．人体主要通过途径，为核酸的生物合成提供。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法) 简介： 葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase ，G-6-PD 或G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中的第一个酶(EC1.1.1.49)。 Leagene 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯，后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA)，同时NAPD 被还原成NADPH ，其反应公式如下： G-6-P+NAPD +→6-PGA +L-NADPH 。 在上述偶联反应中，NADPH 生成速率与样本中酶活性呈正比，通过分光光度计或自动分析仪检测吸光度升高速率(ΔA /min)，升高速率(ΔA /min)与G-6-PD 活性呈正比，比色杯光径1.0cm ，直接计算酶的活性单位。100T 该试剂盒试剂可以检测50次样本，该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、 生理盐水 2、 水浴锅 3、 比色杯 4、 分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 1、 准备溶血液：取新鲜抗凝血，离心取上清及白细胞层，用4℃预冷的生理盐水洗涤，每 次取上清时，务必去除剩余的白细胞层，再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30%的红细胞悬液，4℃保存备用。临用前，以样本稀释液稀释，即为溶血液。4℃保存10h ， 编号 名称 TE0085 100T Storage 试剂(A): 样本稀释液 100ml -20℃ 避光 试剂(B): G6PD assay buffer 100ml 4℃ 试剂(C): NADP 18mg -20℃ 试剂(D): G-6-P 1支 -20℃ 试剂(E): G-6-P 稀释液 10ml RT 使用说明书 1份

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒说明书

货号：MS3501 规格：100管/96样葡萄糖-6-磷酸酶（G6P)试剂盒说明书 微量法 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： 葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。 测定原理： G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH，在340nm下测定NADH生成速率，即可反映G6P活性。 自备实验用品及仪器： 分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 提取液：100mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体19 mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1支，-20℃保存； 试剂三：粉剂×1支，-20℃保存； 试剂四：粉剂×1支，-20℃保存； 样本的前处理： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 测定步骤： 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。 3、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL工作液，立即混匀，记录340nm 处初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。 注意：在该试剂盒中，若ΔA大于0.3，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA小于0.3可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。 第1页，共2页

葡萄糖-6- 磷酸酶染色液( 铅法)使用说明

葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)使用说明 货号：G1500 规格：3×50ml 保存：4℃避光，6个月 名称3×50ml Storage 试剂(A):G-6-Pase孵育液50ml4℃避光 试剂(B):ALP硫化液2×1ml RT避光 试剂(C):固定液50ml4℃避光 试剂(D):G-6-Pase对照液10ml4℃避光 产品说明： 葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6–phosphatase，G-6-Pase)是一种多存在于哺乳类动物肝、肾、肠等组织的膜结合酶，G-6-Pase和微体紧密结合，定位于内质网，是内质网的主要标志酶，能把葡萄糖-6-磷酸水解成葡萄糖和磷酸。G-6-Pase对维持血糖浓度的相对恒定有至关重要的作用，是糖代谢的关键酶。当血糖降低时，G-6-Pase促进肝糖原转变为血糖。当缺乏G-6-Pase时，会引起糖原分解障碍，使糖原积累在肝、肾、心脏等部位，导致肝糖原储积病。G-6-Pase最适pH为 6.5，在pH6.0～8.0亦可，pH8.0最稳定，pH5.0易变性。组织化学反应多用pH6.5～6.7。 葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)采用重金属捕捉剂和磷酸结合显示酶的活性。该酶对固定很敏感，组织经80%乙酸溶液固定后用石蜡包埋，G-6-Pase完全被抑制。需用新鲜组织低温恒冷切片，经甲醛短时固定酶即失活，但可短时低温丙酮固定，但一般不固定。 操作步骤（仅供参考）：

1.冰冻切片入蒸馏水清洗。 2.入G-6-Pase孵育液37℃孵育20min。 3.自来水冲洗后，蒸馏水冲洗。 4.在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂(B)用蒸馏水稀释50倍,即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1min。 5.自来水水洗。 6.(可选)入固定液，固定2min。 7.入蒸馏水水洗2次。 8.甘油明胶封片。 染色结果： G-6-Pase活性处棕色沉淀 阴性对照(可选)：将切片置入试剂(D)-G-6-Pase对照液中，其余步骤相同，结果为阴性。注意事项： 1.ALP硫化液易失效，最好分成小分储存，一经开启立即使用。 2.ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。 3.对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。 4.本染色液适用于冰冻切片，一般不固定，也可染色后固定，固定步骤非必须步骤。 5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。