酵母菌的培养与分离

微生物学大实验

实验指导

编者：

生物技术教研室

2007.3

目录

实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2 实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7 实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19 实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22 实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24 实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27

耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究

实验一酵母菌的培养与分离

一、实验目的

学习培养和分离酵母菌的技术和方法

二、基本原理

大多数酵母菌为腐生;其生活最适pH为4.5－6;常见于含糖分较高的环境中;例如果园土、菜地土及果皮等植物表面..酵母菌生长迅速;易于分离培养;在液体培养基中;酵母菌比霉菌生长得快..

利用酵母菌喜欢酸性环境的特点;常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长;然后在固体培养基上用划线法分离之.. 三、实验主要内容和要求

一本次实验的方案由同学们自己制定;实验包括：

1．马铃薯葡萄糖培养基; 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制..

2.菌株的筛选;根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株..

3.酵母菌的分离;要求接种一次; 28-30℃;培养24小时;转接一次;28-30℃;培养24小时;并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌..

4.用划线分离法对酵母菌进行纯化;要求每组挑取单个菌落;连续划线分离4代;镜下

为单一纯菌株;每组扩繁10支斜面菌种;备用..

四、实验的准备

1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等..

2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：

原料：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15-20克、蒸馏水1000ml..

配制方法：

1先将马铃薯去皮;切片;称200克并加蒸馏水1000ml;煮沸半小时;用纱布过滤;补足蒸馏水量至1000ml ;制成20%的马铃薯汁..

2在20%的马铃薯汁中加入琼脂;煮沸溶化;补足水分并在115℃条件下高压灭菌20分种..

3加入葡萄糖;制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基..

3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上;但不加琼脂而加乳酸;按每1000ml培养液中含5ml乳酸的量加入;并分装试管..

五、实验设计

l、接种：取一小块果皮;不需冲洗;直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中;置

28-30℃;培养24小时;可见培养液变混浊..

2、培养;用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml;注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中;置28一30℃再培养24小时或稍长过长则霉菌长出..

3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中;混匀后加盖玻片制成水浸片;先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况..

活酵母菌可使美蓝还原;从而使菌体不着色;用此方法可判断酵母菌的死活..

4、分离：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板..用划线法分离酵母菌培养液;从而得到单个菌落..挑取单个菌落反复再次划线分离纯化;最终可获得纯培养..

六、实验注意事项

1.配制培养基时;应注意琼脂的加量;不同规格及批次的琼脂的加量应由实验确定;不能照搬书上的加量..

2.对培养基加热时应注意琼脂的糊底与暴沸..

3.灭菌锅操作时;首先应注意水一定要加足够;排气要彻底;其次灭菌期间不要离开人;灭菌结束后;关闭电源;拔掉插头;最后放气一定要缓慢;均匀;气放彻底才能开锅;取锅内物品;应小心;防止烫伤..

4.接种前应注意无菌工作台的消毒与杀菌;接种时应注意手与接种工具的消毒..

七、实验结果的观察及记录

1.24小时;观察试管内培养液的情况并作记录;每组转接2支试管..

2.48小时;观察试管内培养液的情况;镜检培养液内菌的数量;粗略判断是否为酵母菌并作记录;每人蘸取培养液进行划线分离;并作记录..

3.72小时后;观察培养皿内菌的生长的情况;挑取单个菌落进一步划线分离;直到为纯菌落..

4.每组转接10支斜面试管;备用..

八、实验的延伸

自然条件下酿造苹果酒;葡萄酒、猕猴桃酒..

七实验报告要求

1.实验完毕后;每位同学都应独立作出实验报告;实验报告应类似于小型论文格式..

2.实验报告内容包括：

1立题意义..

2实验设计..

3实验步骤详细记录..

4对实验结果的分析讨论和总结..

5实验延伸..

6实验心得体会..

附1：果酒的酿制方法

—、目的要求

了解果酒酿制原理;学习苹果酒酿制技术..

二、基本原理

果酒是一类营养丰富、含酒精度低的上乘饮料..它是用含一定糖分和水分的果实压汁;经微生物发酵而成..其生化作用;除酒精发酵的主产物外;还有甘油、醋酸、琥珀酸、杂醇油等的形成；同时;陈酿期中;各种酸类与醇类的酯化反应;赋予果酒特殊的香味；果酒中的单宁、色素、果屑微粒及蛋白质包括酵母尸体等的氧化和下沉;使酒液澄清、风味增浓..

各种果酒以原料而称名..除坚果外;所有栽培果;野生果均可做酿果酒的原料..本实验以苹果酒为例;学习其酿制方法..

三、实验材料

1、菌种在7°Be’麦芽汁琼脂斜面培养基上的葡萄酒酵母s.cerevisae ellipsoieleus..

2、器材苹果汁培养基;7°Be’麦芽汁培养基;10ml／管、100ml／三角瓶等装量;白糖;食用酒精;亚硫酸;果胶酶;发酵缸;破碎机;果汁分离器等..

a.苹果汁培养基

粗滤新鲜果汁蔗糖调至13°Be;酸度0.5%以下1000ml

K2HPO4 0.1g MgSO4·7H2O 0.1g

配好后;加热煮沸3～5分钟;静置10小时以上;过滤、分装;0.7Kg／cm2灭菌20分钟..

四、实验步骤

一酒母培养

1、菌种活化一级种取装有10ml苹果汁或7°Be’麦芽汁培养基1支;按无菌操作

法接种葡萄酒酵母菌一环;混匀后置28～30℃下培养2～5天用苹果汁活化菌种时需培养5天以上;镜检酵母繁殖良好;无杂菌即可..

2、母发酵剂制备二级种在装有100ml苹果汁培养基的三角瓶中;接1～2ml经活化的葡萄酒酵母菌液;于28℃下培养2～3天;当培养液表面有气泡产生;嗅之有酒香味、取样镜检无杂菌时使用..

3、生产发酵剂的制备三级种方法与母发酵剂相同;只是采取更大的容器..一般采用500～1000ml的三角瓶或卡氏罐;盛装占容积1／2～3／5的果汁培养液;灭菌冷却后;按10％接种量接人母发酵剂;在25～28℃下培养24～48小时;待发酵正常;镜检无杂菌方可使用..

4、如果使用活性干酵母;添加量为20g/L发酵醪;复水用水量是干酵母重量的5～10倍..复水用水的温度应保持在40℃左右38～43℃;将酵母静置5～10min后搅拌;酵母在水中的时间不能超过30min..然后使酵母溶液缓慢冷却到与将被接种发酵醪的温差小于10℃;然后直接加入发酵醪..

二果酒生产

工艺流程如下：

果胶酶

↓

苹果→分选除杂下清洗→破碎→压榨→粗果汁→果楂、苹果酸、丹宁

↑

活化酵母→母发酵剂→生产发酵剂

↓

蔗糖→发酵→皮渣分离→后发酵→原酒→

→换捅除渣→贮存陈酿→配制→贮存→澄清过滤→装瓶→巴氏灭菌→封口→成品..2～3次

操作要点：

1、分选取成熟苹果;除去腐烂、干疤和伤果..

2、清洗清水充分洗涤;除去果皮上的污物、杂质及药剂;以保证原料干净卫生..

3、破碎为易于压榨;提高出汁率;需进行破碎..用破碎机破碎至果块粒度0．5cm3左右;并除去果籽..

4、压榨分离破碎后立即进行压榨分离..分离出的果汁中不得夹带果肉;同时需添加适量苹果酸调整含量要求果汁总酸含量为5g／L;并加入0.1～0.15g／L的果胶酶;促进果胶分解;使果汁澄清并提高酒的风味..

由于苹果汁易被自身含有的多酚氧化酶氧化;故需加SO

2还原剂抑制酶活性;同时SO

2

也具有杀菌、防腐和澄清果汁作用..SO

2来源;除工厂应用液态SO

2

外;实验室常加入亚硫

酸钠Na

2SO

3

和偏重亚硫酸钾K

2

S

2

O

5

;其用量为果汁量的0.02％即可..

5、前发酵取澄清果汁放入经干热灭菌的发酵缸中;装量占缸容积的4／5;按3～5％的接种量接入酵母生产发酵剂进行发酵;保持品温在18～22℃之间;最高勿超过25℃;发酵应在7～12天内结束..一般苹果汁糖分约为11％;经发酵后;酒精含量约达6％以上;前发酵结束后;原酒酒度应大于8％V;残糖＜20g／L;总酸苹果酸＞5g／L..

6、后发酵前发酵结束后;迅速将酒液与皮渣分离;酒汁转入经干热灭菌的发酵缸中;进行后发酵;使残糖继续分解..期间;控制品温在18～22℃之间;不要超过25℃;时间1个月;即得原酒..要求残糖含量小于2g／L以下;挥发酸以醋酸计小于0.6g／L;总酸以苹果酸计大于5g／L..

7、换桶除渣为使已澄清的原酒与其酒脚沉淀物及时分离;以免酒脚产生异味而影响酒质;故需进行换桶缸..换桶次数新酒每年换三次..

8、贮存陈酿应满桶贮存..陈酿即酒的老熟;经长期密闭贮存;可使酒质澄清、风味醇厚..贮存室温8～16℃;存期半年以上..

9、配制原酒贮存半年后可开始配制..配制时;按工艺规定将不同原酒按一定配比相混;然后添加适量的糖、酒精、继续贮存半年以上..

10、澄清过滤可采用冷冻法使其澄清;即于-4℃左右存放7天;然后冷过滤..澄清后的酒置-5～-7℃下冷冻3天不发生混浊沉淀;或暴露空气中氧化4天不变混浊即为合格..

11、装瓶灭菌装瓶后需进行巴氏灭菌;即在63℃下处理15分钟;冷却后封口保

存..

五、实验报告

1、简述苹果酒的酿制法..

2、二氧化硫在果酒酿制中的作用是什么

六、思考题

1、酵母菌酿酒的原理是什么

2、果酒酿制中为何要加入果胶酶

实验二酵母菌的鉴定

酒精生产中所用酵母菌在微生物学中的分类依据是什么

微生物学的类别分门、纲、目、科、属、种;生产酒精用酵母菌属于微生物中的真菌门、子囊菌纲、原子囊菌亚纲、内孢霉目、内孢霉科、啤酒酵母属、卡尔斯伯酵母属等..酵母菌的分类依据是根据它的形态特征、生理生化反应特征来确定的..在分类前将菌体细胞进行分离纯化;得到由单细胞长成的菌落;然后再进行形态特征和生理生化鉴定..

一形态特征的鉴定

把酵母菌接种到麦芽汁固体培养基上;让它长成菌落;观察其菌落的形态、颜色、质地、边缘、表面等特征..把它再接种到液体麦芽汁培养基中;观察是否能产生醭、试管或培养仪器表面壁上能否形成菌环;培养液中是否产生沉淀、混浊程度等..另外;还要取样在显微镜下观察其单细胞的形态、大小、能否形成孢子、孢子的大小以及繁殖方式等.. 二生理生化特征的鉴定

酵母菌的生理生化特征主要表现为发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等糖类的能力..同时;还需测定利用其它碳水化合物、同化酒精、耐酒精;利用硝酸盐还是硫酸盐;发酵产酸、产醋、耐温、耐酸、抗重金属离子、抗杂菌性等的能力..

最后;根据以上得出的形态特征和生理生化特征;查阅有关资料;把具有相同特征的一类酵母菌;就可以归属于某一属..

怎样鉴定酵母菌在液体培养基中的培养特征

将酵母菌种接种于米曲汁或麦芽汁液体培养基中;放于恒温培养箱内以28—30℃保温培养18—24、24—48、48—72小时;取出观察各个时期液体培养基表面有无白色浮膜物-醭的存在;各个不同时期培养基中有无沉淀或沉淀的多少、有无混浊和混浊程度、试管或其它培养器壁上有无菌环形成;最后取出各个不同时期的样液;注入酵母细胞计数

器--血球计中;放置显微镜下观察单个细胞的形态变化情况、液泡的大小、细胞数增加的多少以及培养基中pH值的变化情况等;并测定其酒精和二氧化碳的生产量..然后根据不同的反应情况;作好详细的原始记录;便于以后培养菌种时比较和参考..

酵母菌生理生化试验

一、酵母菌糖发酵试验

一实验目的

了解鉴别酵母菌的实验方法..

二实验原理

酵母菌在厌氧条件下能分解糖类;产生各种有机酸、气体和其它产物..酵母菌种类不同对各种糖类的发酵能力各异..因此;这是鉴别酵母菌种类的一项重要依据..

酸的产生可根据培养基中溴甲酚紫pH6.8-5.2由紫变黄或溴麝香草酚蓝pH7.6-6.0由蓝变黄指标剂颜色的改变来确定..产气可由发酵管气泡的产生予以证实..

三材料

糖发酵基础液;1.6%溴甲酚紫或0.2%溴麝香草酚蓝溶液;葡萄糖、乳糖、半乳糖和麦芽糖;啤酒酵母斜面菌种..

四实验内容

1、糖发酵基础液配制好后;按培养液容量的1%加入糖;分装于杜氏发酵管中培养液的高度约为4-5厘米;再在试管内加入倒置的小玻管约0.4×2.0－2.5厘米一支..每种糖设三个重复管;<121℃>高压灭菌15分钟..

2、将酵母分别接入上述各发酵管中;置<30℃>下培养48-72小时;另以不接种者作对照

3、如产酸则培养液pH值下降而变黄色；如产气;则必先产酸;并在杜氏小管顶端出现气泡..

4、结果记录..以“”表示产酸;“<0”>表示产气;“＋”表示产酸产气;“－”表示无变化;“碱”表示产碱..

二、酵母菌碳源同化试验

一实验目的

了解酵母菌对各种碳源的利用情况..

二实验原理

碳是酵母菌细胞的重要组成成分;约占酵母菌体重量的50%;为酵母菌生命活动提供所需的能量和组成其结构的物质..酵母菌对各种碳源的利用;因种类不同而异..这是酵母菌分类鉴定的一个重要依据..

三材料

无碳基础培养基;啤酒酵母斜面菌种;0.5%的葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖溶液.. 四实验内容

1、液体试管法

1每管加无碳基础培养基5毫升;加被测试的某种碳源;并以葡萄糖作为对照..

2接入啤酒酵母;<28℃>下培养1-2周;观察结果..

2、生长图谱法

1无碳培养基内加入2%的水洗琼脂;融化后冷却至45<-50℃>;到至平板..

2接种新鲜培养的啤酒酵母于1毫升无菌生理盐水内;搅匀后倒入上述未凝平板内;摇匀待凝..

3皿底用特种蜡笔写上被测试各种碳源的标记..

4用不锈钢匙;按标记加入相应的米粒大小的碳源;并以葡萄糖作对照..

5<28℃>下培养24-48小时后观察结果..

3、结果观察

1液体试管中是否形成醭;环岛等..

2生长图谱中测量菌落大小;说明对碳源的利用情况..

三、酵母菌氮源同化试验

一实验目的

了解酵母菌对各种氮源的利用情况..

二实验原理

酵母菌蛋白酶不分泌于菌体外;故酵母菌对复杂的蛋白质不能利用;酵母菌对一些较简单的含氮化合物的利用程度也不一致..

三材料

无氮基础培养基;啤酒酵母斜面菌;0.5%的蛋白胨、硫酸铵、硝酸铵和尿素溶液..

四实验内容

1、液体试管法

方法同二;以被测试的氮源代替碳源;不加任何氮源作空白对照..

2、生长图谱法

方法同二;以被测试的氮源代替碳源;不加任何氮化物作空白对照..

3、结果观察

1液体试管中溶液pH值的变化..

2生长图谱中测量形成菌落的大小;说明对各种氮源的利用情况..

四、酵母菌生长曲线的测定试验

一实验目的

掌握单细胞微生物群体生长曲线的几种测定方法..

二实验原理

酵母菌属于单细胞真核型微生物;把一定数量的酵母菌接种于的液体培养基中;在适宜的温度下培养时;它的生长过程具有一定的规律性..在其生长过程中;定时取样测定酵母菌细胞数量;然后以酵母菌细胞数的对数作纵坐标;生长时间作横坐标;绘制所得的曲

. . .

线叫生长曲线..此生长曲线大致可划分为四个阶段：调整期、对数生长期、稳定期和衰退期..

三材料

酵母菌增殖培养基;苹果酒酵母斜面菌种..

四实验内容

1、将培养24小时左右的酵母斜面菌种;用无菌水洗下菌苔;以3000转/分的速率离心;得菌体..将酵母菌体沉淀物再用无菌水洗2-3次后;制备酵母菌悬液细胞数量约106左右/毫升;测数备用..

2、取上述菌悬液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培养液的试管中;<25℃>下培养;以此为起始时间;记录起始溶液的细胞数..并在培养1;2;4;6;8;9;10;11;12;14;16;20;22;24小时时分别取样检测酵母菌细胞数量..

3、酵母菌细胞数量的检测

方法①：活菌计数法..此法是将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后;取一定量体积在0.1-1毫升之间的稀释液涂布于盛有固体培养基的培养皿内;在<25℃>下培养24小时左右;计算培养皿内菌落数就可测出溶液中活菌数量..

方法②：血球计数板计数法..此法是先将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后;使菌落数约为105-106个/毫升;取一滴稀释液滴于血球计数板内;在显微镜下直接计算细胞总数..

4、绘制生长曲线

以酵母菌细胞数的对数作为纵坐标;以培养时间作为横坐标;画出酵母菌的生长曲线..并分析酵母菌群体的生长规律..

五、实验结果的观察及记录见表1－2

六、思考题

1. 为什么碘液反映无色糖化即可结束

2. 煮沸强度对麦芽汁质量有什么影响

. . .

..........

附1麦芽汁培养基的制备：

麦芽汁制备俗称糖化..所谓糖化是指将麦芽和辅料中高分子贮藏物质如蛋白质、淀粉、半纤维素等机器分解中间产物通过麦芽中各种水解酶类或外加酶制剂作用降解为低分子物质并溶于水的过程..溶解于水的各种干物质称为浸出物;糖化后未经过滤的料液称为糖化醪;过滤后的清夜称为麦芽汁;麦芽汁中浸出物含量和原料干物质之比质量分数称为无水浸出率..

方法一

1取50g麦芽;在EBC标准磨上粉碎；

2将已经粉碎好的麦芽粉放入已称重的糖化杯中;加200mL46℃水;不断搅拌并在46℃水浴中保温30min；

3使醪液以1℃/ min速率升温到70℃..此时杯内加入100mL70℃水;保持恒温..

45min后用玻璃棒取麦芽汁1滴;置于白滴板上;再加碘液1滴;混合后观察碘液颜色变化..直到碘液呈纯黄色不再变色;停止保温;糖化结束..

5在10~15min内急剧冷却到室温；

6冲洗搅玻璃棒拌器;擦干糖化杯外壁;加水使其内容物准确称量为450g；

7用玻璃棒搅拌糖化杯;并注于漏斗中进行过滤;即获得麦芽汁..

方法二

称取市售麦芽粉或大麦经浸泡、发芽、干燥、粉碎的麦芽粉;按每Kg麦芽粉加入60—65℃温热水3.5—4kg..于55—60℃保温糖化3-4小时;用碘液检查;然后4层纱布过滤;过滤液中加鸡蛋白加水20 mL;调匀之生出丰富的泡沫为止;然后倒在糖化液中搅拌煮沸后用4层纱布过滤;即得到澄清、透明的麦芽汁;灭菌后方可备用..

附2 酵母菌鉴定常用培养基

1.酵母菌生孢培养基

1麦氏琼脂

葡萄糖 1g

KCL 1.8g

酵母浸膏 2.5g

醋酸钠 8.2g

琼脂 12g

蒸馏水 1000ml

115℃灭菌20min

2胡萝卜培养基

将葫萝卜切成的6~7cm的长条;下后上薄;装入培养管中;加水1ml;杀菌;即成..

3Gorodkowa氏培养基

消化蛋白 1g

葡萄糖 0.1g

氯化钠 0.5g

琼脂 1.2g

水 100ml

2.12.5％豆芽汁培养基

黄豆芽125g加1L;煮沸半小时;过滤后补足水至1L..115℃灭菌30min

3.0.6％酵母浸汁

加60g干酵母粉于1L水中;必要时加入一些蛋清以澄清滤液;121℃灭菌15min;趁热用双层滤纸过滤；115℃灭菌15min..

4.同化碳源基础培养基

NH

42SO

4

0.5%;KH

2

PO

4

0.1％;MgSO

4

-7H

2

O0.05%;酵母膏0.02％;水洗琼脂2％..115℃灭菌15min

同化碳源液体培养基

NH

42SO

4

0.5%;KH

2

PO

4

;MgSO

4

-7H

2

O0.05%;CaCl

2

-2H

2

O0.01%.NaCl0.01%;酵母膏0.02％;糖或其它

碳源0.5％..

用蒸馏水配;培养基过滤后分装小试管;每管3 ml; 115℃灭菌20min..

5. 同化氮源基础培养基

葡萄糖2％;KH

2PO

4

0.1％;MgSO

4

-7H

2

O0.05%;酵母膏0.02％;水洗琼脂2％..

用蒸馏水配;培养基过滤后分装大试管;每管20 ml; 115℃灭菌15min..

附3酵母各属检索表

一 1.生子囊孢子简称孢子;营养细胞芽殖二..

2. 生子囊孢子;营养细胞裂殖或兼有芽殖三..

3.不生子囊孢子;但生掷孢子营养细胞芽殖四

4.不生子囊孢子及掷孢子五

二营养细胞芽殖;生子囊孢子

1.除芽生细胞外;有真菌丝……………………………………1拟内孢霉属Endomycopsis..

2.无真菌丝

1营养细胞多边芽殖A

2营养细胞两极芽殖B

A1.孢子圆卵形;光面;无凸线Ⅰ

2. 孢子半圆形;光面;无凸线Ⅱ

3. 孢子痣面Ⅲ

4. 孢子有凸线Ⅳ

5. 孢子长条形Ⅴ

6.生袋状子囊;孢子多到16个;圆形………………………2油脂酵母属LipomycesⅠ1. 孢子1～4个;圆;卵形;光面;无凸线；营养细胞多边芽殖;圆形;卵形;长形..

……………………………………………………………3酵母菌属Saccharomyces

a孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..………结合酵母亚属Zygosaccharomyces

b孢子生成时;子囊生试探接合枝;但无二细胞结合现象…孢子圆酵母亚属Torulaspora c孢子生成时;子囊直接有营养细胞变成;无试探枝及结合现象……………酵母菌亚属Saccharomyces

2.孢子1～4个;光面;无凸线；圆卵形;但营养细胞两极芽殖;为柠檬

形………………………………………………4类酵母属Saccharomycodes

Ⅱ孢子为半圆形或肾形

1. 孢子为半圆形;多角形;或兼有圆形的…………………………5毕氏酵母属Pichia

a孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..………接合毕氏酵母亚属Zygopichia

b孢子生成时;子囊有营养细胞直接变成………………………毕氏酵母亚属Pichia

2. 孢子为肾形………………………………………………………

a孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..……接合肾孢酵母亚属Zygofabospora

b孢子生成时;子囊有营养细胞直接变成………………肾孢酵母亚属Fabospora

Ⅲ孢子痣面

1. 孢子痣面;无凸线；营养细胞多边芽殖……7德巴利酵母属Debaryomyces

2. 孢子痣面;无凸线;子囊由接合子的芽子而成;营养细胞两极芽殖……8纳酵母属Nadsonia

3.孢子痣面;圆或卵形;中腰有凸线；营养细胞多边芽殖;…………9施氏酵母属Schwanniomyces

Ⅳ孢子有凸线

1. .孢子痣面;圆或卵形;中腰有凸线…………………………………………施氏酵母属

2. .孢子光面;圆或卵形;中腰有凸线;使整个形体如土星状………10魏氏酵母属Williopsis

a孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成………………接合魏氏酵母亚属Zygowilliopsis

b孢子生成时;子囊直接由营养细胞变成…………………魏氏酵母亚属Williopsis

3. 孢子光面;凸线生在一边;使孢子形如草帽;营养细胞多边芽殖……11汉氏酵母属Hansenula

a孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成……接合汉氏酵母亚属Zygohansenula

b孢子生成时;子囊直接由营养细胞直接生成………汉氏酵母亚属Hansenula

4. 孢子光面;凸线生于一边;使孢子形如草帽;营养细胞两极芽殖;………………

…………………………………………………12孢子柠檬形酵母属Hanseniaspora

Ⅴ孢子长条;梭形或鞭形..

1. 一个子囊中只有一个孢子…………………………13单孢酵母属Monosporellu

2. 孢子2～8个;长条带鞭毛;如鞭子……………………14鞭子酵母属Nematospora

3.孢子无鞭毛………………………………………………15蝇肠酵母属Coccidiasous B营养细胞;两极芽殖;柠檬形..

1. 孢子生成时;营养细胞直接变成子囊…………………4类酵母属Saccharomycodes

2. 孢子上有凸线;使之成草帽形………………12孢子柠檬形酵母属Hanseniaspora

3. 孢子痣面;子囊由接合子的芽子而成…………………………8纳酵母属Nadsonia

三营养细胞裂殖;或兼及芽殖;生子囊孢子..

1.由真菌丝Ⅱ

2.假菌丝发达Ⅱ无真菌丝Ⅰ

Ⅰ只有裂生子;无真菌丝..

1. 孢子圆形卵形…………………………………16裂殖酵母属Schizosaccharamyces

2. 孢子肾形…………………………………………………………17北港酵母属

Ⅱ有真菌丝

1. 有真菌丝;只裂殖生裂生子……………………………………18内孢霉endomyces

2.有真菌丝;芽殖兼及裂殖………………………………1拟内孢霉属Endomycopsis.. 四生掷孢子

1. 掷孢子肾形;不对称;菌落红色或红………………19掷孢酵母属Sporobolomyces

2. 掷孢子圆形或卵圆形;菌落无色或浅黄色…………………20布尔酵母属Bullera.. 五不生子囊孢子或掷孢子

1. 芽殖细胞及假菌丝外生真菌丝且分裂生裂生子……21芽裂酵母属Trichosporon

2. 芽殖细胞;假菌丝及真菌丝可能有;但无裂生子Ⅰ..

Ⅰ1. 普通假菌丝甚发达;真菌丝可能有………………………22假丝酵母属Candida

2. 无真菌丝;假菌丝原始型或无Ⅱ..

Ⅱ1. 生类胡萝卜素………………………………23红酵母属Rhodotorrula

2. 无类胡萝卜素Ⅲ..

Ⅲ1. 两极芽殖;普通细胞常为柠檬形…………………24无孢柠檬形酵母属Kloeckera

2. 三角芽殖;营养细胞常为三角形………………………25三角酵母属Trigonopsis

3.营养细胞瓶形;芽殖;子母细胞基部甚宽;生横膜……26瓶形酵母属Pityrosporum

4. 营养细胞一端为尖穹窿状;含糖培养基中生大量的酸…………27瓶形酵母属Brettanomyces

5. 营养细胞圆形或卵圆形Ⅳ..

Ⅳ1. 生荚膜及淀粉样物质;不发酵………………………28隐球酵母属Cryptococcus..

2. 无淀粉样………………………………………………29圆酵母属Torulopsis..

酵母菌亚属各种检索表

Ⅰ1. 只发酵葡萄糖包括果糖及甘露糖及半乳糖：

a细胞圆形;子囊孢子一个;…………………………………单孢子酵母S.unisporus b细胞圆形;子囊孢子2或多个………………………………大连酵母 S.dairens

c细胞卵形………………………………………………球形酵母S.globosus..

Ⅱ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖及蔗糖………………………………S.ribis

2. 发酵糖类不同Ⅲ..

Ⅲ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖及棉子糖：

a同化麦芽糖……………………………………………水果酵母S.fructuum

b不同化麦芽糖……………………………………………少孢酵母 S.exiguus

2. 发酵糖类不同Ⅳ

Ⅳ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖及麦芽糖………………………………意大利酵母S. italicus

2. 发酵糖类不同Ⅴ..

Ⅴ1. 只发酵葡萄糖、蔗糖及麦芽糖………………………………异质酵母S. heterogenicus

2. 发酵糖类不同Ⅵ..

Ⅵ1. 只发酵葡萄糖、蔗糖及棉子糖………………………………舍氏酵母S. chevalieri

2. 发酵糖类不同Ⅶ..

Ⅶ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖及麦芽糖………………………士泰因酵母S. Steineri

2. 发酵糖类不同Ⅷ..

Ⅷ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖、棉子糖及蜜二糖…………微球酵母S. microellipsodes

2. 发酵糖类不同Ⅸ..

Ⅸ1. 只发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及棉子糖：

a细胞圆形……………………………………………………卵形酵母S.oviformis

b细胞卵到长形………………………………………………白氏酵母 S.bayanus ..

2. 发酵糖类不同Ⅹ..

Ⅹ 1. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖及棉子糖：

a细胞圆形及卵形…………………………………………………酿酒酵母S.cervisiae b细胞长卵及长形……………………………………………韦尔酵母 S.willianus ..

2. 发酵糖类不同Ⅺ..

Ⅺ 1. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖及蜜二糖：

a细胞圆及卵形………………………………………卡尔斯伯酵母S.carlsbergensis

b细胞长卵形……………………………………………………娄哥酵母 S.logos ..

c细胞长卵形及发达的假菌丝………………………………果汁酵母 S.uvarum ..

2. 发酵糖类不同Ⅻ..

Ⅻ1. 只发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖及蜜二糖………………巴氏酵母 S.pastorianus

2. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖、乳糖及棉子糖……………………乳糖酵母

https://www.sodocs.net/doc/6c19034880.html,ctis ..

实验三酵母菌耐受能力的测定

一、酵母菌耐高温能力的测定

一实验目的

了解酵母耐高温试验的原理及应用..

学习酵母菌耐高温试验的操作技术..

二实验原理

酵母生殖;需要一定的温度;温度过低或过高;均不生长;生殖率最大的温度;称为最适温度；一般的酵母;在35℃以上;生殖困难;发酵力弱..

三实验材料

1菌种酿酒酵母

2培养基 10Bx麦芽汁

3其它发酵瓶;吸管;接种针;培养箱等..

四方法与步骤

配制酵母培养液15瓶;10％的接种量接入酵母菌;加拴;抹干;称量..按标签各置32℃;35℃;38℃;40℃;42℃保温箱中..每个处理3瓶..每天称量一次;并观察发酵情况;5天为止..计算总减轻量;以定温度过高之害及最高发酵温度..

五实验结果见表3

表3酵母耐高温测定结果

二、酵母菌耐酒精能力的测定

一实验目的

了解酵母耐酒精试验的原理及应用..

学习酵母菌耐酒精试验的操作技术..

二实验原理

酵母在糖液中发酵;到某一时刻即行停止;其最大原因之一是由于酒精浓度增高所致..每一种酵母都有其忍耐的最高酒精浓度;酵母的这个特性在应用上很重要..

三实验材料

1菌种酿酒酵母

2培养基 10Bx麦芽汁

3药品 95％乙醇;

4器材无菌试管;吸管;接种针;培养箱等..

四方法与步骤

五实验结果

若气泡产生时间越早;产气量越大;说明酵母的耐酒精能力越强..

三、酵母菌耐酸能力的测定

一实验目的

了解酵母耐酸试验的原理及应用..

学习酵母菌耐酸试验的操作技术..

二实验原理

酸对于微生物;除其氢离子的作用外;未解离的酸及酸根;都会发生影响;所以pH值相同的各种酸;与微生物有不同的作用;且酵母菌是一种生酸菌;培养酵母时不断的增加碱量;酵母也可渐渐生酸;可是于不加碱的培养液中;酵母生酸;达其最高度后;即不再增加;此最高度;因菌而异....

三实验材料

1菌种酿酒酵母

2培养基 10Bx麦芽汁或曲汁

3药品冰醋酸;75％的乳酸;0.1NNaOH;酚酞

4器材大试管;吸管;接种环;培养箱等..

四方法与步骤

酵母菌菌体离心实验步骤

酵母菌菌体离心实验步骤 以酵母菌菌体离心实验步骤为标题，写一篇文章如下： 酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然环境中，被广泛应用于食品发酵、酿造和生物学研究等领域。离心实验是一种常用的分离和纯化生物物质的方法，下面将介绍以酵母菌菌体离心实验步骤。 实验所需材料和仪器： 1. 酵母菌培养液：含有大量酵母菌菌体的培养液。 2. 离心管：用于离心实验的管状容器。 3. 离心机：用于离心实验的设备，能够以高速旋转离心管。 实验步骤如下： 步骤一：准备工作 1. 将离心管清洗干净，并确保没有任何杂质。 2. 用无菌技术取出适量的酵母菌培养液，注意避免外界的污染。 3. 准备好离心机，确保离心机内部的离心管是干净的。 步骤二：装样品 1. 将取出的酵母菌培养液缓慢倒入离心管中，避免产生气泡。 2. 确保离心管中液体的高度不超过离心管的容积的70%。 步骤三：离心实验

1. 将装有酵母菌培养液的离心管放入离心机中。 2. 调节离心机的转速和离心时间。一般来说，酵母菌的离心转速为3000-5000转/分钟，离心时间为5-10分钟。 3. 启动离心机，使其以设定的速度旋转。 步骤四：离心结束 1. 离心结束后，停止离心机的运转。 2. 注意离心管内可能产生的沉淀，避免晃动或颠倒离心管。 步骤五：收集上清液 1. 将离心机中的离心管取出，并小心地将上清液倒入另一个干净的容器中。 2. 注意避免将沉淀带入上清液中。 通过以上实验步骤，我们可以将酵母菌菌体从培养液中分离出来，得到较为纯净的上清液。离心实验通过利用离心力将悬浮在液体中的颗粒物分离出来，其原理是根据颗粒物在离心力作用下的不同沉降速度来实现分离。在酵母菌菌体离心实验中，酵母菌菌体由于其较大的体积和密度，会向离心管底部沉积，形成沉淀，上清液中则是相对较为纯净的液体。 需要注意的是，在进行酵母菌菌体离心实验时，应注意使用无菌技术，以避免外界的污染。此外，在实验过程中，离心机的转速和离心时间的选择也需要根据具体的实验要求和酵母菌的性质进行调整。

酵母菌的培养与分离

微生物学大实验 实验指导 编者： 生物技术教研室 2007.3 目录 实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2 实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7 实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19 实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22 实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24 实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27 耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究 实验一酵母菌的培养与分离 一、实验目的 学习培养和分离酵母菌的技术和方法 二、基本原理 大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5－6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。

利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长），然后在固体培养基上用划线法分离之。 三、实验主要内容和要求 （一）本次实验的方案由同学们自己制定，实验包括： 1．马铃薯葡萄糖培养基, 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制。 2.菌株的筛选,根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株。 3.酵母菌的分离,要求接种一次, 28-30℃，培养24小时，转接一次，28-30℃，培养24小时，并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌。 4.用划线分离法对酵母菌进行纯化，要求每组挑取单个菌落，连续划线分离4代，镜下为单一纯菌株，每组扩繁10支斜面菌种，备用。 四、实验的准备 1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基： 原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸馏水（1000ml）。 配制方法： （1）先将马铃薯去皮，切片，称200克并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml ，制成20%的马铃薯汁。 （2）在20%的马铃薯汁中加入琼脂，煮沸溶化，补足水分并在115℃条件下高压灭菌20分种。 （3）加入葡萄糖，制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。 3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，但不加琼脂而加乳酸，按每1000ml培养液中含5ml乳酸的量加入，并分装试管。 五、实验设计 l、接种：取一小块果皮，不需冲洗，直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中，置28-30℃，培养24小时，可见培养液变混浊。 2、培养，用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml，注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，置28一30℃再培养24小时或稍长(过长则霉菌长出)。

酵母菌的分离筛选方法

酵母菌的分离筛选方法 酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条 件下，液体培养比霉菌快。菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明， 菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色， 圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。 含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。 1.培养基： 葡萄糖 50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L L L MgSO41g/L FeSO4 L 酵母膏 L 孟加拉红 L （富集用） ★乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗 糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布 过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养 用）（富集用） ★麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过 滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤， 10-15波林，氯霉素L 121℃ 20min （分离保存 用） 灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用） ★虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨L 葡萄糖10g/L L L 孟加拉红L 氯霉素L 琼脂15g/L PH自然 （分离纯化用）

★豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。100g黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L 察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用 蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾L 硫酸镁 L 硫酸亚铁L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然 一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。 2.集菌：研究酵母菌生态和某种基物或样品中的酵母菌区系，一般不进行集菌，以免改变其中不同种类数量间的对比，将样品制成菌悬液按常规法分离。若从样品中分离特定种类时先集菌。集菌发酵力强菌株，加酸性含糖的培养基，酸性豆汁，必要时注入高浓度的酒精（13-17%），霉菌在液体中形成菌丝体，酵母不形成菌丝，25-28℃2-3d，遇到菌丝体用接种环挑去烧掉，去掉上清液，取沉淀酵母一至两环移植另一液体培养基中，集菌连续两至三次才能完成，要配合镜检。 实例：将待分离的样品10g（ml）放入90ml无菌水或生理盐水/150ml 三角瓶（玻璃珠），摇床振荡20-30min，取上清液接种于酸性培养液（乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基酸性麦芽汁或酸性豆芽汁）25-28℃2-3d，培养过程中若出现菌丝体跳出烧掉，集菌连续两至三次，培养液变成混浊，产生菌膜和沉淀物。镜检：美兰染液染色，活菌可还原美兰染液，菌体无色。 3.筛选：

酵母菌的纯培养实验原理

酵母菌的纯培养实验原理 酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界各种环境中，包括土壤、水体和植物表面等。酵母菌的纯培养实验是一种基本的实验手段，用于研究酵母菌的生长、代谢以及其他生物学特性。本文将探讨酵母菌的纯培养实验的原理和方法。 酵母菌的纯培养实验是指将酵母菌分离出单个纯种，使其在培养基上单独生长。这样可以避免不同种类的酵母菌相互干扰，从而更好地研究其生物学特性。纯培养实验的关键是分离出单个酵母菌，实验过程大致分为以下几个步骤。 需要选择适当的培养基。常用的培养基有酵母抽提物培养基、酵母营养盐琼脂培养基等。培养基应提供适当的碳源、氮源和其他必需的营养物质，以满足酵母菌的生长需求。 需要从自然环境中分离出酵母菌。可以通过取样、稀释和涂布等方法，将样品均匀地分布在培养基表面。然后，将培养皿放置在适当的温度和湿度条件下，等待酵母菌的生长。 接下来，需要进行单菌分离。当培养皿上出现酵母菌生长的斑点时，可以使用显微镜和接种针等工具，将单个酵母菌菌落转移到新的培养基上。这个步骤需要非常细心和准确，以确保每个菌落只含有一个酵母菌。 需要进行鉴定和纯化。通过观察酵母菌的形态特征、生长性状和代

谢产物等，可以初步鉴定酵母菌的种类。然后，可以将纯培养的酵母菌菌落转移到新的培养基上，进行进一步的培养和研究。 酵母菌的纯培养实验不仅可以研究其基本生物学特性，还可以应用于酵母菌的育种和工业生产等领域。例如，通过培养高产酵母菌株，可以提高酵母菌的发酵产物的产量和质量；通过培养抗逆性强的酵母菌株，可以提高发酵过程的稳定性和效果。 酵母菌的纯培养实验是一种重要的实验手段，用于研究酵母菌的生物学特性和应用价值。通过适当的培养基和实验方法，可以成功地分离和纯化酵母菌，并进行进一步的研究和应用。酵母菌的纯培养实验对于推动酵母菌研究的发展和应用具有重要意义。

啤酒酵母分离后的提取方法

啤酒酵母分离后的提取方法 摘要： 一、啤酒酵母的培养与分离方法 二、从土壤中分离啤酒酵母菌的步骤 三、啤酒酵母在生产中的应用 四、酵母菌提取方法的探讨 正文： 一、啤酒酵母的培养与分离方法 啤酒酵母，作为一种常用的发酵剂，在食品、饮料等行业中具有广泛的应用。啤酒酵母的培养与分离方法主要有以下两种： 1.直接从麦汁中培养：这种方法适用于啤酒厂家的生产过程中，目的是将酵母添加到麦汁中进行发酵。在此过程中，培养基就是麦汁，无需进行酵母分离。 2.从土壤中分离：这种方法适用于研究或生产中需要特定酵母菌的情况。通过从土壤中分离啤酒酵母，可以得到具有特定性状的酵母菌株。 二、从土壤中分离啤酒酵母菌的步骤 1.配制适合酵母菌的选择培养基，如麦芽汁培养基或YPD培养基。 2.对土壤样品进行梯度稀释，首先配制几包9mL的生理盐水，对1g土壤样品进行稀释，一般稀释到6的梯度就可以了。 3.倒平板，分区划线，将稀释后的土壤样品均匀涂布在培养基表面，25℃培养2到3天。

4.挑选生长良好的菌落进行进一步纯化。 三、啤酒酵母在生产中的应用 啤酒酵母不仅在啤酒生产中起到发酵作用，还具有以下应用： 1.酿造：啤酒酵母用于麦汁的发酵，使麦汁中的糖分转化为酒精和二氧化碳，从而制成啤酒。 2.食品添加剂：啤酒酵母含有丰富的营养成分，如蛋白质、维生素和矿物质，可作为食品添加剂，提高食品的营养价值。 3.生物发酵：啤酒酵母还可用于生产其他发酵产品，如葡萄酒、果酒、腐乳等。 四、酵母菌提取方法的探讨 酵母菌提取是酵母生产与应用的关键环节。常用的提取方法有以下几种： 1.机械法：通过离心、过滤等机械手段将酵母菌从培养液中分离出来。 2.沉降法：利用酵母菌与培养液的密度差异，使酵母菌自然沉降，从而实现分离。 3.浮选法：通过添加表面活性剂，使酵母菌聚集在一起，形成浮游颗粒，从而实现分离。 4.生物分离法：利用酵母菌与其他微生物的生物学特性差异，选择合适的分离介质和条件，实现酵母菌的分离。 综上所述，啤酒酵母的培养、分离与提取方法多种多样，可根据实际需求和应用场景选择合适的方法。

酵母菌培养操作

酵母菌培养操作 一、引言 酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中，是生物学研究中常用的模式生物。酵母菌在许多领域都有重要的应用，如发酵工业、食品工业和生物医学研究等。为了研究酵母菌的生物学特性和开发应用，科学家们需要进行酵母菌的培养操作。本文将介绍酵母菌培养操作的步骤和注意事项。 二、酵母菌培养操作步骤 1. 选择培养基：选择适合酵母菌生长的培养基，常用的培养基包括YPAD培养基、YPD培养基和SD培养基等。培养基的选择应根据具体实验目的和需求进行。 2. 预处理培养基：按照配方将培养基加入蒸馏水中，加热煮沸，然后冷却至室温。在培养基中加入抗生素可以抑制杂菌的生长。 3. 接种酵母菌：将酵母菌从冰冻保存的培养物中取出，用一次性接种环或一次性吸管接种酵母菌到培养基中。注意避免杂菌的污染。 4. 培养酵母菌：将接种好的培养基置于恒温摇床中，设置适当的温度和摇动速度，促进酵母菌的生长。培养时间根据实验需求而定，通常为24小时。 5. 酵母菌的分离和传代：将培养好的酵母菌涂布在含有琼脂的培养

基上，通过酵母菌的单个菌落分离得到纯化的酵母菌株。然后，将纯化的酵母菌株传代至新的培养基中，以维持酵母菌的生长。 6. 储存酵母菌：将酵母菌株保存在低温下，通常为-80℃的冰箱或液氮罐中，以便长期保存和使用。 三、酵母菌培养操作注意事项 1. 严格遵守无菌操作：在培养酵母菌过程中，必须保持无菌操作，避免杂菌的污染。使用消毒柜、酒精灯和一次性试验用具等设备进行消毒和无菌操作。 2. 注意培养条件：酵母菌对培养条件较为敏感，温度、pH值和氧气含量等因素都会影响酵母菌的生长。因此，在培养酵母菌时，应根据不同酵母菌株的生长特性进行优化培养条件。 3. 避免过度培养：过度培养会导致酵母菌的老化和死亡，影响实验结果。因此，在培养酵母菌时，应根据实验需要确定合适的培养时间。 4. 酵母菌的纯化：为了获得纯化的酵母菌株，必须进行酵母菌的分离和传代。在分离过程中，要注意避免不同菌株之间的杂交和杂交菌株的产生。 5. 储存酵母菌：为了长期保存酵母菌株，必须将其保存在低温和无菌的环境中。在储存过程中，应注意防止冷冻和解冻过程中的细胞

酵母菌的培养与分离

. . . 微生物学大实验 实验指导 编者： 生物技术教研室 2007.3

目录 实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2 实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7 实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19 实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22 实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24 实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27

耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究 实验一酵母菌的培养与分离 一、实验目的 学习培养和分离酵母菌的技术和方法 二、基本原理 大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5－6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。 利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长），然后在固体培养基上用划线法分离之。 三、实验主要内容和要求 （一）本次实验的方案由同学们自己制定，实验包括： 1．马铃薯葡萄糖培养基, 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制。 2.菌株的筛选,根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株。 3.酵母菌的分离,要求接种一次, 28-30℃，培养24小时，转接一次，28-30℃，培养24小时，并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌。 4.用划线分离法对酵母菌进行纯化，要求每组挑取单个菌落，连续划线分离4代，镜下为单一纯菌株，每组扩繁10支斜面菌种，备用。 四、实验的准备 1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基： 原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸馏水（1000ml）。 配制方法： （1）先将马铃薯去皮，切片，称200克并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml ，制成20%的马铃薯汁。 （2）在20%的马铃薯汁中加入琼脂，煮沸溶化，补足水分并在115℃条件下高压灭菌20分种。 （3）加入葡萄糖，制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。

酵母菌的分离筛选方法

酵母菌的分离筛选方法 一、酵母菌的分离筛选方法二、酵母菌的生活史三、酵母菌的生长条件 酵母菌的分离筛选方法1、培养基:1.1葡萄糖50g/L,尿素1g/L(NH4)2SO41g/L,KH2PO42.5g/L,Na2HPO40.5g/L,MgSO41g/L,FeSO4 0.1g/L,酵母膏 0.5g/L,孟加拉红 0.03g/L,PH4.5-5.0(富集用)。1.2乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基:马铃薯200g/L,葡萄糖(霉菌用蔗糖)20g/L,乳酸5ml马铃薯去皮切片200g,加水煮沸30min,纱布过滤,补足蒸馏水1L,PH自然。(去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养用)(富集用)。1.3麦芽汁培养基:1:4水60-65℃水浴3-4小时,4-6层纱布过滤,可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫,倒入糖化液中,煮沸过滤,10-15波林,氯霉素0.1g/L,PH6.0-6.4,121℃,20min。 2、集菌:研究酵母菌生态和某种基物或样品中的酵母菌区系,一般不进行集菌,以免改变其中不同种类数量间的对比,将样品制成菌悬液按常规法分离。若从样品中分离特定种类时先集菌。集菌发酵力强菌株,加酸性含糖的培养基,酸性豆汁,必要时注入高浓度的酒精(13-17%),霉菌在液体中形成菌丝体,酵母不形成菌丝,25-28℃ 2-3d,遇到菌丝体用接种环挑去烧掉,去掉上清液,取沉淀酵母一至两环移植另一液体培养基中,集菌连续两至三次才能完成,要配合镜检。3.筛选分离:取集菌液适当稀释,吸取0.1-0.2ml梯度菌液(至少两个两个平衡),涂布于马铃薯-葡萄糖麦芽汁或虎红培养基平板,也可采用混菌法或蘸取集菌菌液直接划线,(平放12h后倒置培养),25℃培养48h,低温酵母菌15℃ 高温酵母菌35℃ 40℃ 45℃,形成清晰菌落。在培养皿底划分小方格,待菌落生长良

酵母菌的培养与分离

酵母菌的培养与分离 实验目的】学习培养和分离酵母菌的技术和方法 【实验原理】 大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5一6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。 利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长），然后在固体培养基上用划线法分离之。 【实验材料和用具】 1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基： 原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸馏水（1000ml）。 配制方法： （1）先将马铃薯去皮，切片，称200克并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml ，制成20%的马铃薯汁。 （2）在20%的马铃薯汁中加入琼脂，煮沸溶化，补足水分并在115摄氏度条件下高压灭菌20分种。 （3）加入葡萄糖，制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。 3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，但不加琼脂而加乳酸，按每1000ml培养液中含5ml乳酸的量加入，并分装试管。 【实验步骤】 l、接种：取一小块果皮，不需冲洗，直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中，置28一30℃，培养24小时，可见培养液变混浊。 2、培养，用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml，注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，置28一30℃再培养24小时或稍长(过长则霉菌长出)。 3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。 活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。

酵母菌的分离纯化实验方案

酵母菌的分离纯化 ∙实验目的 1.了解培养基的配置与灭菌技术； 2.无菌操作技术； 3.工业微生物的分离与纯化技术； 4.工业微生物的检测及保藏。 ∙基本原理 1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。 2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。 3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。此次实验采用梯度稀释涂布平板法。 4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。

实验器材 仪器设备 恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器 玻璃器皿 烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片 试剂与材料 苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液 其它 纱布、滤纸 实验内容及操作步骤 (一)、样品的选择 酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。（二）、样品的处理 制备苹果悬液 1.首先将1g苹果在研钵中磨细，放入装有10ml生理盐水和玻璃珠的100ml三角瓶中去。 2.激烈震荡约10min,使菌体分散并悬浮与液体中。 3.用无菌吸管吸取1ml苹果悬液注入盛有9ml生理盐水的试管中，吸取三次并混匀。 4.再去一只无菌吸取管，从此试管中吸取1ml，注入另一盛有9ml生理盐水的试管中，取 三次并混匀。 5.同法类推制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的各种稀释度的苹果悬液。

面团中酵母菌分离的原理

面团中酵母菌分离的原理 面团中酵母菌分离部分，首先合适分离材料进行分离，然后添加培养基，提供适宜生长的条件。其次，通过孵育和观察酵母菌在培养基上的生长情况，可以得到纯种单菌落。最后，分离的酵母菌进行鉴定确认其物种。 一、分离材料及培养基的选择 1.1 分离材料选择： 在进行酵母菌分离前，首先需要准备适宜的分离样品。面团是由面粉、水和酵母菌等成分混合而成的，因此可以直接从面团中进行酵母菌的分离。 1.2 培养基的选择： 培养基是为了提供酵母菌生长所需的营养物质，常用的培养基有酵母浸出液平皿培养基、MYP平皿培养基等。选择适宜的培养基可以促进酵母菌的繁殖和分离。 二、分离步骤 2.1 样品处理： 将面团样品取出，加入适量的稀释液（可以是生理盐水或蒸馏水），进行搅拌均

匀。倒出一小部分样品到另一个容器中备用。 2.2 稀释方法： 将样品和稀释液按照一定比例进行稀释，如1:10，1:100等。这样可以使酵母菌的密度适当降低，便于分离。 2.3 涂布法分离： 取适量的稀释液，用无菌针头或吸管沾取一小滴液滴在培养基平皿上，用铂丝或吸管在平皿表面均匀涂布。重复涂布过程，使涂布密度适当。 2.4 孵育过程： 将涂布的培养基平皿倒置，放置在恒温培养箱内进行孵育。适宜的温度为30，孵育时间为24-48小时。在培养过程中，酵母菌会生长并形成菌落。 2.5 分离纯化： 根据菌落的外观形态和颜色等特征进行初步分离，选取较为典型和单一的菌落。用无菌铂丝或吸管可将单个菌落划入新的培养基平皿，进行纯化。 三、培养基成分的作用

培养基中各种营养物质的提供对于酵母菌的分离和生长非常重要。 3.1 碳源： 酵母菌需要碳源作为能量来源，面团中的糖分在培养基中很好地提供了碳源。培养液中的碳源主要是葡萄糖，也可以添加其它碳源，如果糖、乳糖等。 3.2 氮源： 氮源对酵母菌的生长起着重要作用，其中含有丰富的氨基酸。培养液中的氮源有氨基酸、尿素等。 3.3 矿物质和微量元素： 矿物质和微量元素是酵母菌正常生长和代谢所必需的，其中包括钙、铁、锌等。合适的含量可以增加菌落的直径和增长速度。 3.4 pH值： 培养基的pH值对酵母菌的生长起着重要的调节作用。大多数酵母菌最适宜的pH值为4.5-6.5。

酵母菌培养流程

酵母菌培养流程 下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢! 并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日 记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注! Download tips: This document is carefully compiled by the editor. I hope that after you download them, they can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, our shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention! 酵母菌在生物学研究中扮演着至关重要的角色，它们广泛应用于发酵工业、食品加工、药物生产等领域。而想要有效地研究和利用酵母菌，首先要进行其培养。在酵母菌培养流程中，每一个步骤都至关重要，需要精心设计和仔细操作，下面将详细介绍酵母菌培养流程的各个环节。 1. 培养基的选择

接种和分离酵母菌注意事项

接种和分离酵母菌注意事项 酵母菌是一种单细胞真菌，广泛应用于工业发酵和食品生产中。接种和分离酵母菌是进行这些应用的必要步骤，也是酵母基因工程研究的基础。接下来，我们将从以下几个方面给出接种和分离酵母菌的注意事项。 一、实验前准备 在进行接种和分离酵母菌实验之前，需要进行一系列的准备工作： 1.培养基准备：考虑到不同酵母菌的生长和代谢需求不同，需要根据具体的实验目的制备不同的培养基。 2.实验器材准备：常用的实验器材有无菌操作台、离心机、显微镜、恒温培养箱等，需要在实验前确保这些器材都已经准备好并检查是否处于正常工作状态。 3.试剂准备：涉及到接种和分离酵母菌实验的试剂有无菌移液管、磁力搅拌器、配体、琼脂、冰醋酸等。 二、酵母菌的接种 酵母菌接种主要是指将酵母菌菌丝或培养基中的活细胞接种到新的培养基或液体培养基中，以便于酵母菌的扩增和维持纯度。接下来我们介绍一些接种酵母菌

的注意事项： 1.无菌操作：接种酵母菌要求无菌操作，否则可能会引入细菌等杂质，影响实验结果。 2.选择培养基：酵母菌属于真菌，需要复杂的生长条件。因此，在选择培养基时，需要考虑酵母菌的生长和代谢需求。 3.接种密度：接种密度应该是适当的，过高的密度会导致菌落之间的竞争，而过低的密度则会影响生长速率和细胞数量。 4.接种方式：接种方式可以采用研磨法、洗菌液法和划线法等，具体方式取决于实验设计和需要。 三、酵母菌的分离 在酵母菌分离实验中，我们需要将混合细胞分离成单个克隆。下面我们介绍一些分离酵母菌的注意事项： 1.选择基质：在分离酵母菌时，需要选择合适的基质，该基质应该能够提供充足的营养物质，支持酵母菌单个克隆的生存和繁殖。

从土壤中分离提纯高效的酵母菌

从土壤中分离提纯高效的酵母菌 主要内容： 利用各种微生物实验技术，从土壤中分离并提纯酵母菌，再通过检测酵母菌发酵速率，从而筛选出高效的酵母菌。 关键词： 分离提纯高效酵母菌 在土壤中分离酵母菌，因此土壤的采样地点在果树下较好。采集好土壤，将土壤配制成10^-2悬液，主要方法是称取1g土壤，放入三角瓶，迅速倒入99ml无菌水，震荡5-10min即成所需的土壤悬液。 1.由于土壤中酵母菌含量较低，因此在分离前要先进行富集培养24h。 2.接下来是配制培养基，由于要分离的是酵母菌，配制马丁氏培养基。 3.对培养基进行灭菌放入高压蒸汽灭菌锅115℃/30min 4.取出后待50℃以下是加入链霉素，每一百克三毫升 5.队超净台消毒，点燃酒精灯 6.在酒精灯旁倒平板。 7.接种，画线。 8.放入26℃保温箱3-4d。 9.取生长较好的六个菌落分别接入 0.05mol/L4ml的六个试管中，编号1-6。 10.3d后检测葡萄糖含量。 11.配置新制的氢氧化铜 0.5mol/L50ml

12.将强氧化铜分别放入六个试管中每个4ml。摇匀加热。 13. 5min后比较六个试管的颜色深浅。 编号 颜色1 褐色'++褐色+2 褐色'--3 褐色-4 褐色+5 褐色6结论： 三号试管的颜色最浅，所含葡萄糖最少，所以三号试管的酵母菌效率最高。 结果讨论： 实验比较成功，但是培养基的菌株较少，这可能和富集培养的时间太短有关系，忘了设置对照试验。选取高校教务军，可以重复做这个实验，选出比较高效的酵母菌。 注意: 1.注意培养基的灭菌 2.注意紫外线只能在无人的时候开启 3.注意接种环要灼烧彻底 4.注意在培养箱中放培养技师要倒置 5.注意统一变量。

酵母菌的分离

酵母菌的分离 酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中的土壤、水体、果实等环境中。酵母菌以其独特的代谢特性被广泛应用于食品工业、制药业、酿酒业等领域。为了深入了解酵母菌的特性和应用潜力，科学家们对酵母菌进行了大量的分离研究。 酵母菌的分离是指从样本中筛选出纯种的酵母菌，并将其进行培养和研究。在分离酵母菌的过程中，科学家们需要采集样本，如土壤、果实等，将样本经过一系列处理后进行培养。首先，样本会经过物理处理，如振荡、搅拌等，以分散其中的酵母菌。然后，样本会被培养在富含营养物的培养基中，提供适宜的环境条件，使酵母菌能够生长繁殖。接下来，科学家们会进行菌落计数，通过观察和统计菌落的数量和形态，筛选出单一的酵母菌菌种。最后，分离得到的酵母菌菌种会被进行进一步的鉴定和培养，以确保其纯度和活力。 酵母菌的分离研究对于酵母菌的应用具有重要意义。首先，分离得到的酵母菌菌种可以用于酿酒和发酵产业。不同的酵母菌菌种具有不同的发酵特性和产物特性，通过分离和筛选，可以获得更适合特定产品的酵母菌菌种，从而提高产品的质量和产量。其次，分离得到的酵母菌菌种可以用于制药工业。酵母菌可以被用于生产多种药物，如抗生素、维生素等，分离研究可以为制药工业提供更多的菌种资源和新的应用途径。此外，分离酵母菌还可以用于食品工业。酵母菌可以被用于发酵食品的制作，如面包、啤酒等，通过分离和

培养研究，可以获得更适合特定食品的酵母菌菌种，提高食品的品质和口感。 当前，酵母菌的分离研究正处于不断深入的阶段。科学家们通过采集不同样本，如极端环境、农产品等，寻找更多的酵母菌菌种。同时，利用现代生物技术手段，如基因工程、高通量筛选等，加速酵母菌的分离和鉴定过程。这些研究不仅有助于发现新的酵母菌菌种，还可以为酵母菌的应用提供更多的可能性。 酵母菌的分离是一项重要的研究工作，对于酵母菌的应用具有重要意义。通过分离研究，科学家们可以获得纯种的酵母菌菌种，并将其应用于食品工业、制药业、酿酒业等领域。当前，酵母菌的分离研究正不断深入，为酵母菌的应用提供更多可能性。相信随着科学技术的不断发展，酵母菌的分离研究将会取得更多的突破和进展。