酵母菌的分离纯化

酵母菌的分离纯化(总4页)

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酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵

第一部分酵母菌的分离纯化

一、实验目的

应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。

二、实验原理

酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。

三、器材和用品

1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。

2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。分装三角瓶；试管斜面1支/组

3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。

4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。

四、实验方法

1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。

2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。

3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。

4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。

5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后

分离得到单个菌落。

6、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。

7、菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。

第二部分酵母菌的固定化技术

一、实验目的

1.了解固定化细胞的原理。

2.掌握用海藻酸钠制备固定化酵母细胞的方法。

二、实验原理

固定化细胞技术是指用物理或化学的手段将游离细胞定位于限定的空间区域，并使其保持催化活性、反复使用的方法。优点：细胞密度高、反应速度快、耐毒害能力强、产物分离容易、可反复使用、能实现连续操作，可大大提高生产能力。用于生产各种胞外产物，包括酒精酒类、氨基酸、有机酸、酶、辅酶、抗生素。

细胞固定化的方法有多种，如吸附法、交联法和包埋法等。吸附法：又叫载体结合法，依据带电的微生物细胞和载体之间的静电、表面张力和黏附力的作用，使细胞固定在载体表面和内部；简便，活力损失小；但细胞与载体作用力小，易脱落。交联法：利用双功能或多功能试剂，直接与细胞表面的反应基团（如氨基酸、羟基、咪唑基等）发生反应，使其彼此交联形成网状结构的固定化细胞，其结合力是共价键。此法制备麻烦，活力损失较大；但细胞与载体结合较紧。包埋法：分为凝胶包埋法和半透膜包埋法。凝胶包埋法是将细胞包埋在各种凝胶内部的微孔中而使细胞固定；半透膜包埋法是将细胞包埋在由各种高分子聚合物制成的小球内。简单，条件温和，稳定性好，包埋细胞容量高。

工业上常用包埋法固定微生物细胞。海藻酸盐是一种广泛应用的固定化介质，具有化学稳定性好、无毒、包埋效率高且价格低廉等优点。在海藻酸钠呈溶液状时，将细胞加入混匀，然后在氯化钙中凝固形成海藻酸钙凝胶，凝胶颗粒中的微小空格将细胞固定。海藻酸钙凝固的颗粒能反复使用，细胞在空格中可以新陈代谢（固定活细胞)。

三、实验材料

1、分离的酵母菌。

2、培养基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖30g，蒸馏水1000m L，p H自然，115℃灭菌20m i n。

3、试剂：m o l/L氯化钙溶液150m l/瓶（氯化钙，蒸馏水1000m L）、2%海藻酸钠50m l/瓶：称取一定的海藻酸钠加入无菌烧杯中，先加少量水调成糊状，在不足水份适当加热融化。

4、器具：200m l无菌烧杯1个、玻璃棒1根、无菌注射器1个（20m l）、无菌吸管1支，无菌水200m l/三角瓶、10m l培养基试管1支、200m l三角瓶培养基1个、青霉素、天平、纱布、细绳、电炉、培养箱、棉塞等。

四、实验步骤

1、将酵母菌接入10m l培养基中,于30℃培养箱中培养24h后待用。

2、取3m l酵母菌培养液（预热到35℃左右）加入到50m l2%海藻酸钠溶液中（冷却到45℃左右），均匀混合后用注射器吸入制成小球滴入m o l/L氯化钙溶液中，搅拌成珠（固定酵母）。

3、待凝胶珠在氯化钙溶液中浸泡30m i n后，用蒸馏水洗涤固定酵母2次后，再转入到灭过菌的200m L液体培养基中（其中加入1m g青霉素）。

4、将固定酵母于28℃静置培养3天后观察，可见培养基中有大量的C O2气泡产生，嗅气味有酒香；用刀片切开固定酵母，镜检可见大量密集的酵母菌。

第三部分酵母菌的酒精发酵

一、实验目的

1.掌握酵母菌生产酒精的方法。

2.了解酒精发酵的主要类型及其控制条件。

二、实验原理

在厌氧条件下，己糖分解为乙醇并放出二氧化碳的作用，称为酒精发酵作用。酒精发酵的类型有三种：即通过E M P途径的酵母菌酒精发酵、通过H M P途径的细菌酒精发酵（即异型乳酸发酵）和通过E D途径的细菌酒精发酵。在工业酒精和各种酒类的生产中，酒精发酵的主要作用是由酵母菌来完成的。

酵母菌通过E M P途径分解己糖生成丙酮酸，在厌氧和微酸性条件下，丙酮酸继续分解为乙醇。但是，如果在碱性条件下或在培养基中加入亚硫酸盐时，产物主要是甘油，这就是工业上的甘油发酵。因此，如果酵母菌要进行酒精发酵，就必须控制发酵液在微酸性条件下。

三、实验材料

1、菌种：分离的酵母菌。

2、培养基：

白糖（蔗糖）80g、(NH

4)

2

SO

4

、KH

2

PO

4

、H

2

O 1000ml；pH自然，115℃灭菌

20m i n。

150m l三角瓶装上述培养基50m l，250m l三角瓶装培养基100m l，大试管中装一个注满培养基的杜氏小管，再装入10m l培养基。

3、试剂：10%的NaOH、10%H

2SO

4

、1%K

2

Cr

2

O

7

。

4、器材：150m l三角瓶1个、250m l三角瓶1个、大试管1支、杜氏小管1支、无菌吸管1支。接种环、培养箱、100m L量筒、纱布、细绳、天平、棉塞3个。

四、实验步骤

1、取分离的酵母菌种一环，接入150m l的三角瓶中，于28-30℃培养箱中培养24h，作为液体种子。将上述液体种子以5%的接种量分别接入250ml的三角瓶和大试管中，在于28-30℃培养箱中培养24-36h，后观察结果。

2、二氧化碳生成的检验

1）观察三角瓶中的发酵液有无泡沫或气泡溢出，再观察发酵试管中的杜氏小管中有无气体聚集。

2）取10%的NaOH溶液1ml注入发酵试管内，轻轻搓动发酵管，观察杜氏小管内液面是否上升，如气体逐渐消失，则证明气体为发酵过程中产生的二氧化碳。

3、酒精生成的检验：

1）打开发酵瓶塞子，嗅闻有无酒精味；

2）取发酵液5ml加入试管，加10% H

2SO

4

溶液2ml；向试管中滴入1% K

2

Cr

2

O

7

溶液

10～20滴；如管内由橙黄色变为黄绿色，证明有酒精生成。

2K

2Cr

2

O

7

+ 8H

2

SO

4

+ 3CH

3

CH

2

OH → 3CH

3

COOH + 2K

2

SO

4

+ 2Cr

2

(SO

4

)

3

(黄绿色) +

11H

2

O

实验报告：

1、酵母菌的形态以及增殖方式怎样判断酵母菌的死活细胞

2、海藻酸钠溶液滴进氯化钙溶液中为什么会凝固？

3、细胞固定化有何意义如何制备固定化细胞

4、固定化细胞与游离细胞比较，有什么优点？

5、固定化细胞制备过程中观察到的现象

6、酒精发酵过程中观察到的现象

酵母菌菌体离心实验步骤

酵母菌菌体离心实验步骤 以酵母菌菌体离心实验步骤为标题，写一篇文章如下： 酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然环境中，被广泛应用于食品发酵、酿造和生物学研究等领域。离心实验是一种常用的分离和纯化生物物质的方法，下面将介绍以酵母菌菌体离心实验步骤。 实验所需材料和仪器： 1. 酵母菌培养液：含有大量酵母菌菌体的培养液。 2. 离心管：用于离心实验的管状容器。 3. 离心机：用于离心实验的设备，能够以高速旋转离心管。 实验步骤如下： 步骤一：准备工作 1. 将离心管清洗干净，并确保没有任何杂质。 2. 用无菌技术取出适量的酵母菌培养液，注意避免外界的污染。 3. 准备好离心机，确保离心机内部的离心管是干净的。 步骤二：装样品 1. 将取出的酵母菌培养液缓慢倒入离心管中，避免产生气泡。 2. 确保离心管中液体的高度不超过离心管的容积的70%。 步骤三：离心实验

1. 将装有酵母菌培养液的离心管放入离心机中。 2. 调节离心机的转速和离心时间。一般来说，酵母菌的离心转速为3000-5000转/分钟，离心时间为5-10分钟。 3. 启动离心机，使其以设定的速度旋转。 步骤四：离心结束 1. 离心结束后，停止离心机的运转。 2. 注意离心管内可能产生的沉淀，避免晃动或颠倒离心管。 步骤五：收集上清液 1. 将离心机中的离心管取出，并小心地将上清液倒入另一个干净的容器中。 2. 注意避免将沉淀带入上清液中。 通过以上实验步骤，我们可以将酵母菌菌体从培养液中分离出来，得到较为纯净的上清液。离心实验通过利用离心力将悬浮在液体中的颗粒物分离出来，其原理是根据颗粒物在离心力作用下的不同沉降速度来实现分离。在酵母菌菌体离心实验中，酵母菌菌体由于其较大的体积和密度，会向离心管底部沉积，形成沉淀，上清液中则是相对较为纯净的液体。 需要注意的是，在进行酵母菌菌体离心实验时，应注意使用无菌技术，以避免外界的污染。此外，在实验过程中，离心机的转速和离心时间的选择也需要根据具体的实验要求和酵母菌的性质进行调整。

酵母菌的分离筛选方法

酵母菌的分离筛选方法 酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条 件下，液体培养比霉菌快。菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明， 菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色， 圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。 含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。 1.培养基： 葡萄糖 50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L L L MgSO41g/L FeSO4 L 酵母膏 L 孟加拉红 L （富集用） ★乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗 糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布 过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养 用）（富集用） ★麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过 滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤， 10-15波林，氯霉素L 121℃ 20min （分离保存 用） 灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用） ★虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨L 葡萄糖10g/L L L 孟加拉红L 氯霉素L 琼脂15g/L PH自然 （分离纯化用）

★豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。100g黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L 察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用 蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾L 硫酸镁 L 硫酸亚铁L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然 一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。 2.集菌：研究酵母菌生态和某种基物或样品中的酵母菌区系，一般不进行集菌，以免改变其中不同种类数量间的对比，将样品制成菌悬液按常规法分离。若从样品中分离特定种类时先集菌。集菌发酵力强菌株，加酸性含糖的培养基，酸性豆汁，必要时注入高浓度的酒精（13-17%），霉菌在液体中形成菌丝体，酵母不形成菌丝，25-28℃2-3d，遇到菌丝体用接种环挑去烧掉，去掉上清液，取沉淀酵母一至两环移植另一液体培养基中，集菌连续两至三次才能完成，要配合镜检。 实例：将待分离的样品10g（ml）放入90ml无菌水或生理盐水/150ml 三角瓶（玻璃珠），摇床振荡20-30min，取上清液接种于酸性培养液（乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基酸性麦芽汁或酸性豆芽汁）25-28℃2-3d，培养过程中若出现菌丝体跳出烧掉，集菌连续两至三次，培养液变成混浊，产生菌膜和沉淀物。镜检：美兰染液染色，活菌可还原美兰染液，菌体无色。 3.筛选：

酵母菌的分离纯化

酵母菌的分离纯化-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN

酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵 第一部分酵母菌的分离纯化 一、实验目的 应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。 二、实验原理 酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。 三、器材和用品 1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。分装三角瓶；试管斜面1支/组 3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。 4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。 四、实验方法 1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。 2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。 3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。 4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。 5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分

酵母菌的分离与纯化

酵母菌的分离与纯化 酵母菌的分离与纯化 小组组员: 一、实验目的 1.学习分离纯化酵母菌的技术与方法 2.了解培养基的配置与灭菌技术 3.增强无菌操作技术的意识 二、基本原理 从混杂的微生物群体获得只含某一种某一株微生物的过程叫做微生物分离与纯化，酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0.酵母菌生长迅速，容易分离培养。马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红(玫瑰红，Rose Bengal)和链霉素等组成。其中葡萄糖主要作为碳源，蛋白胨主要作为氮源，KH2PO4和MgSO4·7H2O作为无机盐，为微生物提供钾、磷和镁离子。而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长，从而达到分离真菌的目的。 三、实验材料及用具 1.用品：苹果、葡萄糖、琼脂、水、1%孟加拉红水溶液、马铃薯 2.设备与器材：1ml的无菌吸管、无菌培养皿等. 四、实验步骤 1、马铃薯培养基的配置 培养基成分:马铃薯40克、蔗糖（葡萄糖）4克、琼脂4克、水200毫升、 pH 自然。配置方法: （1）配制20%马铃薯浸汁：取去皮马钓薯40g，切成小块，加水200ml.加热煮游30 min ，用纱布过滤，然后补足失水互所需体积。121Pa灭菌30min.即成20%马铃馨漫汁，贮存备用。 （2）配制时，按每100ml 马铃薯浸汁加入2g蔗糖，加热煮沸后加入4克琼脂，继续加热融化并补足失水。

（3）分装、加塞，包扎。 （4）高压蒸汽灭菌：121Pa灭菌30min （5）将灭菌培养基放入37C°的温室中培养24-48小时，观察是否有菌落生成，以检查灭菌是否彻底。 2、倒平板：将马铃薯培养基加热融化，冷却至55--50C°时，倒平板，倒三皿 3、制备苹果悬液 （1）首先将1g苹果在研钵中磨细，放入装有10ml生理盐水和玻璃珠的100ml三角瓶中去。 （2）激烈震荡约10min,使菌体分散并悬浮与液体中。 （3）用无菌吸管吸取1ml苹果悬液注入盛有9ml生理盐水的试管中，吸取三次并混匀。 （4）再去一只无菌吸取管，从此试管中吸取1ml，注入另一盛有9ml生理盐水的试管中，取三次并混匀。 （5）同法类推制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的各种稀释度的苹果悬液。 4、涂布 将上述培养基的5个培养基的四个平板分别标上10-3、10-4、10-5、10-6、10-7五种稀释度。取5只无菌吸管，分别从四种苹果悬液的稀释液中各取0.1ml。对号放于已标记好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻涂布均匀。重复以上4步骤。 5、培养 将培养基平板倒置于温室中2-3d 6、挑菌落 观察培养后长出的酵母菌的单个菌落，分别挑取并接种于斜面培养基上，再培养。待菌苔长好后，检查是否有杂菌，若有则需再一次进行分离纯化，直到获得纯菌株培养物。五、实验结果记录及分析

酵母菌的分离纯化.

酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵 第一部分酵母菌的分离纯化 一、实验目的 应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。 二、实验原理 酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0.酵母菌生长迅速，容易分离培养。在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。 三、器材和用品 1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。分装三角瓶；试管斜面1支/组 3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为5.5左右，再分装试管9ml2支/组。 4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。 四、实验方法 1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。 2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。 3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。 4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml 加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。 5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后

酵母菌的分离纯化实验方案

酵母菌的分离纯化 ?实验目的 1.了解培养基的配置与灭菌技术； 2.无菌操作技术； 3.工业微生物的分离与纯化技术； 4.工业微生物的检测及保藏。 ?基本原理 1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。 2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。 3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。此次实验采用梯度稀释涂布平板法。 4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。 实验器材 仪器设备 恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器 玻璃器皿 烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片 试剂与材料 苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液 其它 纱布、滤纸 ?实验内容及操作步骤 (一)、样品的选择 酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。 （二）、样品的处理 制备苹果悬液 1.首先将1g苹果在研钵中磨细，放入装有10ml生理盐水和玻璃珠的100ml三角瓶中去。

酵母菌的培养与分离

微生物学大实验 实验指导 编者： 生物技术教研室 2007.3

目录 实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2 实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7 实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19 实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22 实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24 实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27

耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究 实验一酵母菌的培养与分离 一、实验目的 学习培养和分离酵母菌的技术和方法 二、基本原理 大多数酵母菌为腐生;其生活最适pH为4.5－6;常见于含糖分较高的环境中;例如果园土、菜地土及果皮等植物表面..酵母菌生长迅速;易于分离培养;在液体培养基中;酵母菌比霉菌生长得快.. 利用酵母菌喜欢酸性环境的特点;常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长;然后在固体培养基上用划线法分离之.. 三、实验主要内容和要求 一本次实验的方案由同学们自己制定;实验包括： 1．马铃薯葡萄糖培养基; 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制.. 2.菌株的筛选;根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株.. 3.酵母菌的分离;要求接种一次; 28-30℃;培养24小时;转接一次;28-30℃;培养24小时;并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌.. 4.用划线分离法对酵母菌进行纯化;要求每组挑取单个菌落;连续划线分离4代;镜下 为单一纯菌株;每组扩繁10支斜面菌种;备用.. 四、实验的准备 1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等.. 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基： 原料：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15-20克、蒸馏水1000ml.. 配制方法： 1先将马铃薯去皮;切片;称200克并加蒸馏水1000ml;煮沸半小时;用纱布过滤;补足蒸馏水量至1000ml ;制成20%的马铃薯汁.. 2在20%的马铃薯汁中加入琼脂;煮沸溶化;补足水分并在115℃条件下高压灭菌20分种.. 3加入葡萄糖;制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基..

酵母菌的纯培养实验原理

酵母菌的纯培养实验原理 酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界各种环境中，包括土壤、水体和植物表面等。酵母菌的纯培养实验是一种基本的实验手段，用于研究酵母菌的生长、代谢以及其他生物学特性。本文将探讨酵母菌的纯培养实验的原理和方法。 酵母菌的纯培养实验是指将酵母菌分离出单个纯种，使其在培养基上单独生长。这样可以避免不同种类的酵母菌相互干扰，从而更好地研究其生物学特性。纯培养实验的关键是分离出单个酵母菌，实验过程大致分为以下几个步骤。 需要选择适当的培养基。常用的培养基有酵母抽提物培养基、酵母营养盐琼脂培养基等。培养基应提供适当的碳源、氮源和其他必需的营养物质，以满足酵母菌的生长需求。 需要从自然环境中分离出酵母菌。可以通过取样、稀释和涂布等方法，将样品均匀地分布在培养基表面。然后，将培养皿放置在适当的温度和湿度条件下，等待酵母菌的生长。 接下来，需要进行单菌分离。当培养皿上出现酵母菌生长的斑点时，可以使用显微镜和接种针等工具，将单个酵母菌菌落转移到新的培养基上。这个步骤需要非常细心和准确，以确保每个菌落只含有一个酵母菌。 需要进行鉴定和纯化。通过观察酵母菌的形态特征、生长性状和代

谢产物等，可以初步鉴定酵母菌的种类。然后，可以将纯培养的酵母菌菌落转移到新的培养基上，进行进一步的培养和研究。 酵母菌的纯培养实验不仅可以研究其基本生物学特性，还可以应用于酵母菌的育种和工业生产等领域。例如，通过培养高产酵母菌株，可以提高酵母菌的发酵产物的产量和质量；通过培养抗逆性强的酵母菌株，可以提高发酵过程的稳定性和效果。 酵母菌的纯培养实验是一种重要的实验手段，用于研究酵母菌的生物学特性和应用价值。通过适当的培养基和实验方法，可以成功地分离和纯化酵母菌，并进行进一步的研究和应用。酵母菌的纯培养实验对于推动酵母菌研究的发展和应用具有重要意义。

啤酒酵母分离后的提取方法

啤酒酵母分离后的提取方法 摘要： 一、啤酒酵母的培养与分离方法 二、从土壤中分离啤酒酵母菌的步骤 三、啤酒酵母在生产中的应用 四、酵母菌提取方法的探讨 正文： 一、啤酒酵母的培养与分离方法 啤酒酵母，作为一种常用的发酵剂，在食品、饮料等行业中具有广泛的应用。啤酒酵母的培养与分离方法主要有以下两种： 1.直接从麦汁中培养：这种方法适用于啤酒厂家的生产过程中，目的是将酵母添加到麦汁中进行发酵。在此过程中，培养基就是麦汁，无需进行酵母分离。 2.从土壤中分离：这种方法适用于研究或生产中需要特定酵母菌的情况。通过从土壤中分离啤酒酵母，可以得到具有特定性状的酵母菌株。 二、从土壤中分离啤酒酵母菌的步骤 1.配制适合酵母菌的选择培养基，如麦芽汁培养基或YPD培养基。 2.对土壤样品进行梯度稀释，首先配制几包9mL的生理盐水，对1g土壤样品进行稀释，一般稀释到6的梯度就可以了。 3.倒平板，分区划线，将稀释后的土壤样品均匀涂布在培养基表面，25℃培养2到3天。

4.挑选生长良好的菌落进行进一步纯化。 三、啤酒酵母在生产中的应用 啤酒酵母不仅在啤酒生产中起到发酵作用，还具有以下应用： 1.酿造：啤酒酵母用于麦汁的发酵，使麦汁中的糖分转化为酒精和二氧化碳，从而制成啤酒。 2.食品添加剂：啤酒酵母含有丰富的营养成分，如蛋白质、维生素和矿物质，可作为食品添加剂，提高食品的营养价值。 3.生物发酵：啤酒酵母还可用于生产其他发酵产品，如葡萄酒、果酒、腐乳等。 四、酵母菌提取方法的探讨 酵母菌提取是酵母生产与应用的关键环节。常用的提取方法有以下几种： 1.机械法：通过离心、过滤等机械手段将酵母菌从培养液中分离出来。 2.沉降法：利用酵母菌与培养液的密度差异，使酵母菌自然沉降，从而实现分离。 3.浮选法：通过添加表面活性剂，使酵母菌聚集在一起，形成浮游颗粒，从而实现分离。 4.生物分离法：利用酵母菌与其他微生物的生物学特性差异，选择合适的分离介质和条件，实现酵母菌的分离。 综上所述，啤酒酵母的培养、分离与提取方法多种多样，可根据实际需求和应用场景选择合适的方法。

酵母菌培养操作

酵母菌培养操作 酵母菌是一类单细胞真菌，广泛应用于食品发酵、酿造工业以及生物学研究中。为了获得高质量的酵母菌培养物，我们需要进行一系列的培养操作，包括选择合适的培养基、接种、培养条件控制等。本文将介绍酵母菌培养操作的步骤和注意事项。 一、选择合适的培养基 酵母菌的培养基主要包括液体培养基和固体培养基两种。液体培养基适用于大规模培养，而固体培养基则适合于分离纯种菌落。常用的液体培养基有YPDA培养基和YPG培养基，固体培养基则是在液体培养基中加入2%的琼脂。 二、接种酵母菌 接种是酵母菌培养的第一步，也是最关键的一步。首先需要从冷冻保存的酵母菌液氮罐中取出酵母菌菌种，用无菌吸管将菌液转移到无菌培养基中。然后将培养基倒入含有酵母菌菌种的培养瓶中，摇匀后放入恒温摇床中培养。 三、培养条件控制 酵母菌的生长需要适宜的温度、pH值和营养物质。一般来说，酵母菌的最适温度为30℃，pH值为5-6。此外，酵母菌还需要一定的营养物质，如碳源、氮源、矿物质等。在培养过程中，需要根据菌株的不同特点和需求进行调控。

四、培养时间控制 酵母菌的培养时间一般为24-48小时，具体时间取决于菌株的生长速度和培养条件的控制。在培养的过程中，需要定期观察菌液的浑浊度和菌体的形态，以判断是否需要停止培养。 五、酵母菌分离与纯化 在酵母菌培养过程中，可能会出现多个菌株混合生长的情况。为了获得纯种菌株，需要进行菌落分离。具体方法是将培养物均匀涂布在固体培养基上，培养一段时间后，通过菌落形态和颜色的差异，选择目标菌落进行传代培养。 六、保存酵母菌菌种 为了长期保存酵母菌菌种，可以采用冷冻保存或冻干保存的方法。冷冻保存是将酵母菌菌种悬浮液加入到甘油中，然后在液氮罐中保存。而冻干保存则是将酵母菌菌落在无菌条件下冻干，并保存在低温干燥的环境中。 总结起来，酵母菌培养操作是一个复杂而关键的过程，需要仔细控制培养基的选择、接种、培养条件的调控以及菌株的分离与纯化。只有通过科学规范的操作，才能获得高质量的酵母菌培养物，为后续的实验研究提供可靠的基础。

酵母菌的培养与分离

酵母菌的培养与分离 实验目的】学习培养和分离酵母菌的技术和方法 【实验原理】 大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5一6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。 利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长），然后在固体培养基上用划线法分离之。 【实验材料和用具】 1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基： 原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸馏水（1000ml）。 配制方法： （1）先将马铃薯去皮，切片，称200克并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml ，制成20%的马铃薯汁。 （2）在20%的马铃薯汁中加入琼脂，煮沸溶化，补足水分并在115摄氏度条件下高压灭菌20分种。 （3）加入葡萄糖，制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。 3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，但不加琼脂而加乳酸，按每1000ml培养液中含5ml乳酸的量加入，并分装试管。 【实验步骤】 l、接种：取一小块果皮，不需冲洗，直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中，置28一30℃，培养24小时，可见培养液变混浊。 2、培养，用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml，注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，置28一30℃再培养24小时或稍长(过长则霉菌长出)。 3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。 活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。

酵母菌的分离与纯化

酵母菌的分离与纯化 （一）菌源 1土样用无菌的采样小铲在橘树果园中取土壤表层下1~10cm土壤10g，装入灭菌的牛皮纸袋内。封好袋口，记录取样地点、环境及日期。图样采集后应及时分离，若不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥的条件下，以减少其中菌相的变化。 2面肥 （1）面粉500克，白酒100克，水250，和好静置发酵就可以了。冬季10个小时。（2）在温水中兑一点酒，倒入适量面粉拌匀后放入绝缘保温盛器（陶瓷，砂锅）中，用布将整个盛器盖好置于温度较高处，6小时后即成面肥。 *以上方法做出的面肥只能保存几天，不宜放置太久。 3水果果皮 桔子和葡萄等的果皮上含有数量较多的酵母菌，既可单独作为菌源也可以和果园土壤作为混合菌源。 （二）酵母菌的分离 1制备菌悬液 称取菌源1g，加入盛有99ml无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的锥形瓶中。振荡20min，即成10-2的菌源悬液。再一次稀释成10-4、10-5、10-6三个稀释度。 2涂布法分离 取融化并冷却至45~50度左右的豆芽汁葡萄糖培养基，每皿分别倾注约12ml培养基到培养皿内。注意，温度过高易将菌烫死，皿盖上冷凝水太多也会影响分离效果；低于45度培养基易凝固，平板高低不平。待平板冷却后，用无菌移液管分别吸取上述已经制好的菌源稀释液10-4、10-5、10-6三个稀释度菌悬液各0.1ml，依次滴加于相应编号的豆芽汁葡萄糖培养基平板上。每个稀释度做2~3个平行皿。左手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，在火焰旁右手持无菌玻璃涂棒将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散。注意，切忌用力过猛，这样会将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。3培养 接种后，平版倒置于30度恒温箱中，培养2~3天，观察结果。 4纯化 用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。 酵母扩培方案 一、培养基制备 (一)麦芽汁培养基的配制 1．培养基成分 新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 2．配制方法 (1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。 (2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。 (3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。

面团中酵母菌分离的原理

面团中酵母菌分离的原理 面团中酵母菌分离部分，首先合适分离材料进行分离，然后添加培养基，提供适宜生长的条件。其次，通过孵育和观察酵母菌在培养基上的生长情况，可以得到纯种单菌落。最后，分离的酵母菌进行鉴定确认其物种。 一、分离材料及培养基的选择 1.1 分离材料选择： 在进行酵母菌分离前，首先需要准备适宜的分离样品。面团是由面粉、水和酵母菌等成分混合而成的，因此可以直接从面团中进行酵母菌的分离。 1.2 培养基的选择： 培养基是为了提供酵母菌生长所需的营养物质，常用的培养基有酵母浸出液平皿培养基、MYP平皿培养基等。选择适宜的培养基可以促进酵母菌的繁殖和分离。 二、分离步骤 2.1 样品处理： 将面团样品取出，加入适量的稀释液（可以是生理盐水或蒸馏水），进行搅拌均

匀。倒出一小部分样品到另一个容器中备用。 2.2 稀释方法： 将样品和稀释液按照一定比例进行稀释，如1:10，1:100等。这样可以使酵母菌的密度适当降低，便于分离。 2.3 涂布法分离： 取适量的稀释液，用无菌针头或吸管沾取一小滴液滴在培养基平皿上，用铂丝或吸管在平皿表面均匀涂布。重复涂布过程，使涂布密度适当。 2.4 孵育过程： 将涂布的培养基平皿倒置，放置在恒温培养箱内进行孵育。适宜的温度为30，孵育时间为24-48小时。在培养过程中，酵母菌会生长并形成菌落。 2.5 分离纯化： 根据菌落的外观形态和颜色等特征进行初步分离，选取较为典型和单一的菌落。用无菌铂丝或吸管可将单个菌落划入新的培养基平皿，进行纯化。 三、培养基成分的作用

培养基中各种营养物质的提供对于酵母菌的分离和生长非常重要。 3.1 碳源： 酵母菌需要碳源作为能量来源，面团中的糖分在培养基中很好地提供了碳源。培养液中的碳源主要是葡萄糖，也可以添加其它碳源，如果糖、乳糖等。 3.2 氮源： 氮源对酵母菌的生长起着重要作用，其中含有丰富的氨基酸。培养液中的氮源有氨基酸、尿素等。 3.3 矿物质和微量元素： 矿物质和微量元素是酵母菌正常生长和代谢所必需的，其中包括钙、铁、锌等。合适的含量可以增加菌落的直径和增长速度。 3.4 pH值： 培养基的pH值对酵母菌的生长起着重要的调节作用。大多数酵母菌最适宜的pH值为4.5-6.5。

酵母菌的分离纯化实验方案

酵母菌的分离纯化 ∙实验目的 1.了解培养基的配置与灭菌技术； 2.无菌操作技术； 3.工业微生物的分离与纯化技术； 4.工业微生物的检测及保藏。 ∙基本原理 1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。 2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。 3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。此次实验采用梯度稀释涂布平板法。 4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。

实验器材 仪器设备 恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器 玻璃器皿 烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片 试剂与材料 苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液 其它 纱布、滤纸 实验内容及操作步骤 (一)、样品的选择 酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。（二）、样品的处理 制备苹果悬液 1.首先将1g苹果在研钵中磨细，放入装有10ml生理盐水和玻璃珠的100ml三角瓶中去。 2.激烈震荡约10min,使菌体分散并悬浮与液体中。 3.用无菌吸管吸取1ml苹果悬液注入盛有9ml生理盐水的试管中，吸取三次并混匀。 4.再去一只无菌吸取管，从此试管中吸取1ml，注入另一盛有9ml生理盐水的试管中，取 三次并混匀。 5.同法类推制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的各种稀释度的苹果悬液。