为何复发性胎停患者夫妇要测HLA相容性？

为何复发性胎停患者夫妇要测HLA相容性？北京大学第三医院刘湘源

一、定义

同种免疫型复发性胎停尚缺乏特异性检测指标。对2次以上的自然流产患者，检查封闭

抗体阴性，并排除染色体异常、生殖道解剖异

常、内分泌失调、生殖道感染、自身免疫异常

及血栓前状态等原因，同时排除患者身体因素、

心理因素和环境因素和男方因素后，可诊断为

同种免疫型复发性胎停。

二、配偶间HLA（人类白细胞抗原）相

似性高，是导致免疫型复发性胎停的重要因素

正常妊娠时，一般夫妇HLA是不相容（即不相同）的，胚胎所带的父系HLA能刺

激母体免疫系统产生抗配偶淋巴细胞的特异性

IgG抗体，它能抑制混合淋巴细胞反应，并与

滋养细胞表面的HLA结合，覆盖来自父方的

HLA，从而封闭母体淋巴细胞对滋养层细胞的

细胞毒作用，保护胚胎或胎儿免受排斥，被认

为是维持妊娠所必须的封闭抗体。反之，当妻

子在遗传学上与其丈夫是纯合子时，与丈夫共

有HLA，特别是D/DR抗原系相似性高，则不

能刺激母体产生维持妊娠所需要的封闭抗体，

母体免疫系统容易对胎儿产生免疫学攻击，将

胎儿作为异物排斥而造成流产。配偶间D／

DR抗原的相容性越高，复发性胎停的发生率

越大。90％以上的夫妇双方HLA无相同位点，

一旦出现一个以上的相同位点则可能出现夫妇

双方发生排斥反应，导致流产，流产与HLA 相同位点数呈正相关。大量证据表明，复发性胎停的夫妇具有共同HLA的频率较正常对照组显著增高，并发现与复发性胎停相关的抗原主要表现在HLA-DR位点及HLA-DQA1位点上。

大部分研究认为，夫妻双方HLA- II类分子（HLA-DR、DP和DQ分子）相同位点多导致的流产，主要发生在围着床期（流产发生在6周前甚至更早，以致临床难于确认）；而HLA -I类分子（HLA-A、B和C）相同位点多，发生的流产相对较晚，多数能够临床确认。

许多研究表明，复发性胎停患者血清中HLA含量明显低于同期正常妊娠孕妇，主动免疫能有效增加复发性胎停患者血清中HLA 的水平，降低母-胎HLA的相容性，故有学者提出HLA可以作为复发性胎停患者成功妊娠的检测指标。

目前认为，HLA-II类基因的DQ区和DR 区为复发性胎停的易感基因区，但各国报道的流产易感基因或单体存在的位点或部位有所不同，这可能与种族特异性有关，黄色人种（中国汉族人）复发性胎停的易感基因为HLA-DQB1*0604/0605，易感单元为DQA1*01-DQB1*0604/0605。

三、检测母体HLA－Cw多态性，了解是否为反复胚胎移植失败的原因

HLA-Cw属于经典的HLA-1类基因，广泛分布于有核细胞表面，具有高度多态性。HLA-Cw不仅呈递内源性多肽给CD8 T细胞，

诱发特异性细胞杀伤效应，同时还可作为杀伤细胞免疫球蛋白的配体，与杀伤细胞免疫球蛋白结合，传递抑制／激活信号，从而调节NK 细胞的功能。体外受精－胚胎移植和胚胎培养相关技术发展很快，但依然存在10％～15％的反复胚胎种植失败。研究发现，HLA-Cw基因多态性与胚胎种植失败有关，胚胎种植失败组的HLA-Cw*06基因频率增加，而HLA-Cw*07基因频率降低，HLA-Cw*LYS频率有增加趋势。

四、配偶间HLA相似性高的处理

在临床工作中，夫妇双方HLA的相同位点超过一个以上，可能出现排斥反应，导致胎儿流产，可采用其他男性（也需行HLA检测）的淋巴细胞进行主动免疫。夫妻之间的HLA 相同位点数越多，越应该进行主动免疫。有部分患者认为，多数女性体内的封闭抗体为阴性，干脆就不检查封闭抗体和夫妻双方的HLA相容性，直接做主动免疫，殊不知，如果夫妇双方HLA的相同位点多，经过多次的主动免疫也难产生封闭抗体，起不到治疗效果。

上海著名胎停专家鲍时华医生,建议胎停姐妹检查的内容

上海著名胎停专家鲍时华医生，建议胎停姐妹检查的内容 1.染色体异常： Ⅰ. 胚胎染色体异常（发生不可避免的流产时，清宫时取胚胎绒毛送检染色体，需要新鲜绒毛组织，很多小医院无此项检查）。 Ⅱ.夫妻染色体异常（抽取夫妻静脉血，不受饮食月经周期影响，我院周一至周五随时可以检查）。 2. 内分泌异常： Ⅰ. 多囊卵巢综合症（月经第三天至第五天抽血进行性激素测定，每个月自测基础体温和月经干净后行妇科B超） Ⅱ.甲亢或甲减（甲状腺激素检查，不受月经周期影响） Ⅲ. 高泌乳素血症（上午9点左右可以不空腹，静坐15分钟后抽血测定，不受月经周期影响） Ⅳ.糖尿病/胰岛素抵抗（空腹血糖和胰岛素，口服葡萄糖后

再测血糖和胰岛素） Ⅴ.黄体功能不全（自测每个月的基础体温） Ⅵ. 排卵障碍（月经第12天以后B超监测卵泡发育至卵泡排出） 3. 生殖系统解剖异常 Ⅰ.宫腔粘连（B超、宫腔镜、子宫输卵管造影，可以在月经干净后马上进行检查） Ⅱ.子宫畸形（B超、宫腔镜、造影等手段检查） Ⅲ.宫颈机能不全（宫颈扩张试验、B超、造影等手段检查） 4. 感染因素 Ⅰ.支原体、衣原体等（取宫颈粘液，非经期） Ⅱ.TORCH、HIV、RPR等（随时可以抽血）

5. 血栓因素 Ⅰ.先天性血栓前状态（凝血因子Ⅴ突变、凝血酶原基因突变、蛋白C缺陷、蛋白S缺陷、高半胱氨酸：上海瑞金医院血液科查得比较准确） Ⅱ.获得性血栓前状态（抗心磷脂综合症：需反复抽血3-5次左右，每次间隔3周，不需空腹；血小板聚集，D二聚体等需空腹） 6. 免疫因素 Ⅰ.自身免疫型（抗心磷脂综合症：需反复抽血3-5次，每次间隔3周，与月经周期无关） Ⅱ.同种免疫型（封闭抗体或HLA或MLCT：上海红房子医院可查,一般排除了自身免疫才查） 7.子宫血供因素 Ⅰ.非孕期：排卵后第七天左右，超声查子宫动脉血流（上海一妇婴、仁济医院可查）

HLA—B27 B7抗原检测在诊断强直性脊柱炎中的临床价值

HLA—B27 B7抗原检测在诊断强直性脊柱炎中的临床价值 【摘要】目的探讨HLA-B27/B7抗原检测在诊断强直性脊柱炎（AS）中的临床价值。方法选取144例门诊及住院高度疑似AS的患者，应用流式细胞仪对其标本进行HLA-B27/B7抗原检测。结果HLA-B27抗原阳性率在青少年人群比较高，且男性显著高于女性，受检的144例患者，HLA-B27抗原阳性率为63.9%，低于确诊为AS的阳性率（91.1%）。HLA-B27抗原检测对诊断AS的灵敏度为91.1%（82/90），特异度为81.5%（44/54），正确率为87.5%（126/144）。结论HLA-B27抗原与AS密切相关，对临床诊断AS很有帮助，用流式细胞术进行检测是较好的方法。 【关键词】强直性脊柱炎；流式细胞术；HLA-B27 强直性脊柱炎（AS）是一种常见的慢性炎症性关节病，主要影响脊柱关节及骶髂关节，主要发病于年轻男性。该病诊断的直接证据是X线下脊柱的特征性改变及骶髂关节炎，但这种改变只有在疾病发展到一定的程度时才能被观察到。HLA抗原是人类主要组织相容性复合体（major histocompatibity complex，MHC）的表达产物，在免疫系统中主要负责细胞之间的相互识别和诱导免疫反应，调节免疫应答的功能。HLA-B27基因属于Ⅰ型MHC基因。人们在很早就发现了HLA-B27抗原的表达与AS有着高度的相关性[1，2]。在临床上，由于AS 的症状与许多疾病相似而难以确诊，因此，HLA-B27的检测在AS的诊断中有着重要的意义。本文用流式细胞仪检测AS患者外周血淋巴细胞HLA-B27的表达，探讨其在临床诊断中的应用价值。 1 资料与方法 1.1 一般资料本院2009年1月至2012年1月到骨科、风湿科住院的144个病例，其中男110例，女34例，平均年龄34.1岁，20以下38例，20～30岁29例，30～40岁26例，40岁以上51例。其中有90例患者是采用1984年纽约修订的AS诊断标准确诊为AS。 1.2 仪器与试剂仪器采用美国贝克曼公司的BeckmanCoulte FC500流式细胞仪，单克隆抗体HLA-B27-FITC/ HLA-B7-PE、溶血素、鞘液均来自贝克曼公司的标准试剂盒。 1.3 方法操作按SOP要求，取流式管2支，分别加入5 μl单克隆抗体（HLA-B27-FITC/ HLA-B7-PE）和同型对照（IgG2a-FITC/ IgG1-PE），分别向两支管中加入50 μl混匀的抗凝全血，混匀后室温避光15～20 min，然后加入溶血素300 μl，混匀后室温避光10 min，加入500 μlPBS，1500r/min离心5 min，弃上清，加入500 μlPBS，混匀上机测样。 1.4 获取数据采用流式细胞仪自带的软件获取数据并进行分析。如图1所示，先通过FS-SS双参数图圈定淋巴细胞设门，再分析淋巴细胞中

临床免疫学MHC与HLA检测及应用

第二十一章MHC与HLA检测及应用 本章要点 1.MHC的一般特性 2.HLA分型 3.HLA分型的实际应用 组织相容性是指器官或组织移植时供者与受者相互接受的程度，如相容则不互相排斥，不相容就会出现排斥反应。诱导同种移植排斥反应的抗原称为组织相容性抗原，也称为移植抗原。一组对人和各种哺乳动物中诱导排斥反应起决定性作用的抗原称为主要组织相容性抗原（MHA）。控制主要组织相容性系统（MHS）的基因包括几个不同位点，集中分布于各种动物某对染色体上的特定区域，，是一组紧密连锁的基因群，这组基因群称为主要组织相容性复合体（MHC）。 第一节MHC的一般特性 概念：主要组织相容性复合体（MHC）是一组存在于各种脊椎动物某对染色体特定区域的基因。MHC编码的基因产物为主要组织相容性抗原（MHA）。 人类的MHC即HLA基因复合体位于人的第6对染色体的短臂上，是目前已知最复杂的人类基因系统。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三类基因。HLA由400万碱基组成，传统上分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三类基因。Ⅰ类：包括经典的HLA-A、B、C，非经典的HLA-E、F、G、H、X等；Ⅱ类：包括经典的HLA-DP、DQ、DR，非典型的HLA-DN、D0、DM等；Ⅲ类：位于HLA-Ⅰ、Ⅱ类之间，由一些与补体和某些炎症因子编码相关的基因组成。截止到l999年，已知的HLA等位基因数已超过l000个，且数量仍在继续增加。 HLA基因复合体所表达的基因产物，除直接构成同种异体移植排斥反应的靶抗原外，在免疫应答的过程中发挥着重要调控作用，也反映着自身免疫性疾病的基因易感性。 一、MHC-Ⅰ类分子 MHC-Ⅰ类抗原是一组由非共价键连接的异二聚体分子，在人类包括HLA-A、B、C、HLA-E、F、G、H、X 等。 Ⅰ类分子可广泛地表达于各种组织的有核细胞上，以淋巴细胞、白细胞表面的表达密度最高，肝、肾、皮肤、主动脉和肌细胞次之，成熟的红细胞、神经细胞及滋养层细胞不表达。血清与其他体液中少量存在。 Ⅰ类分子的表达受到多种因素的调节，如IFN-α、β、γ等细胞因子可促进其表达；肿瘤细胞表面Ⅰ类分子表达的减少或缺失，即为肿瘤细胞逃避机体的免疫监视的重要机制。 二、MHC-Ⅱ类分子 人类MHC-Ⅱ类分子是由两条非共价键结合的多肽链组成的异二聚体。α链和β链均系HLA基因表达的产物。包括抗原多肽结合区和Ig样区，由αl、α2、βl、β2四个结构域组成。 MHC-Ⅱ类分子的分布较窄，主要存在于B细胞、单核-巨噬细胞、DC等细胞上，血清、精液及乳汁等体液中也可检测到。胰岛β细胞和甲状腺细胞在病理情况下亦能表达。 胰岛素、甲状腺素、雄激素、TNF-α、IFN-γ、IL-1、IL-2、IL-6、GM-CSF等，可促进Ⅱ类分子的表达；而前列腺素、糖皮质激素等则可抑制其表达。 三、MHC-Ⅲ类分子 至少有36个基因定位于MHC-Ⅲ类区内，表达产物主要包括两类，一类是与免疫应答相关的C4、C2、Bf、TNF、HSP70等蛋白分子，可参与炎症和应急反应，与内源性抗原的加工提呈相关。另一类是与免疫无