污水中苯酚降解菌的分离与初探

实验一 苯酚降解菌的分离及降解性测定

实验一苯酚降解菌的分离及降解性测定 实验原理：在污染环境中，大部分微生物由于受到毒害而死亡，少数微生物具有较强的降解能力或通过诱变改变其基因型或诱导产生某些酶而能在污染的环境中存活，成为有机污染物的高效降解菌或耐性菌株。 从污染环境中取样，通过在选择性培养基上培养，可筛选出目的性微生物。本实验取青年湖水样作为菌种的来源，在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基进行培养，分离苯酚降解菌。实验步骤： 1. 从污染地区取样品（污水，污泥或受污染的土壤）。 2. 配制无碳源的无机盐培养基，加入苯酚储备液，使培养基中苯酚浓度达100 mg/L。 121℃灭菌20 min。 3. 吸取1 ml活性污泥，加入灭菌培养基，同时做空白对照，28℃恒温摇床培养24 h（160 rmp/min）. 4. 测定苯酚降解率。 苯酚降解率的测定方法： a.标准曲线的绘制分别吸取0、1、2、3、4、5mL 酚标准溶液（100 mg/L） 于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释成20 mL。加入2 mL pH9.8缓冲溶液，4 mL 4％4－氨基安替比林溶液，摇匀后加入4 mL 8％铁氰化钾溶液，显色10min 后，加蒸馏水稀释至刻度。用722型分光光度计460nm波长处比色测定。 b.以不加酚的试剂作空白对照，以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标绘制标准 曲线。 c.培养液中苯酚降解率的测定吸取培养液2mL于50mL容量瓶中，加蒸馏水 稀释成20 mL。加入2 mL pH9.8缓冲溶液，4 mL 4％4－氨基安替比林溶液， 摇匀后加入4 mL 8％铁氰化钾溶液，显色10min后，加蒸馏水稀释至刻度。 用722型分光光度计460 nm波长处比色测定。 d.根据标准曲线求出苯酚含量以分解苯酚的百分数表示酚分解作用强弱。

苯酚类废水处理办法

苯酚类废水处理办法集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-

一、物理法 1、萃取法 由于酚类化合物是有机物,在水相与有机相的溶解度有较大差异,因此可以利用与水不互溶的有机萃取剂与含酚类污染物的废水混合,从而使酚类物质从水相转移至有机相中,以此实现酚类物质从水相中的脱除[8]。目前萃取法的发展除了选取混合强度更高的反应器之外[9],选择、优化萃取剂也是一个重要方向,其中使用超临界流体进行反应萃取分离是目前萃取法研究的重要方向[1()]。由于萃取剂一般都相对昂贵,因此萃取剂一般都需要回收利用。但由于萃取过程中存在一些副反应、操作过程中也有一定的损失、溶剂会一定程度地溶解于水中,因此萃取法一般只用来处理回收较高浓度的苯酚废水,从而限制了其广泛应用。 2、蒸汽法 蒸汽法用来脱除挥发酚也一种使用时间比较长的方法,主要是利用挥发酚能够与水蒸汽组成一种共沸物的物理特点,当两种物质的总蒸汽压大于外部的压力时,废液就会沸腾,同时挥发酚便会转变为气体。在传统的蒸汽脱酚塔中,含酚废液喷淋塔顶端向下喷淋,而水蒸气则从下往上流动,两者进行逆流接触,从而使废液中的挥发酚转入气相中,达到脱除挥发酚的目标。 蒸汽法的优点是不使用昂贵的萃取剂、操作比较简便、处理量大、无后续污染,适合处理含挥发酚含量较高的酚类废水[li】,但其也存在蒸汽消耗大、设备体积大、废水处理不彻底的缺点。 3、吸附法 比表面积大、具有多孔结构等特征的物质常常能吸附水体中的污染物。科研人员使用具有以上特征的吸附剂处理酚类废水,在达到一定吸附量之后,再利用其他手段进行脱附,

苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究

上海师范大学 硕士学位论文 苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究 姓名：何小丽 申请学位级别：硕士 专业：微生物学 指导教师：肖明 20090501

上海师范大学硕士学位论文摘要论文题目：苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究 学校专业：微生物学 学位申请人：何小丽 指导教师：肖明 摘要 酚类化合物为细胞原浆毒物，属高毒性物质。这类物质来源广泛，通常污染水源，毒死鱼虾，危害农作物，并严重威胁人类的健康。含酚有机物的毒性还在于其只能被少数的微生物分解。从自然界中筛选分离出能够降解特定污染物的高效菌种，有针对性的投加到已有的污水处理系统中的生物强化技术，能够快速提供大量具有特殊作用的微生物，在有毒有害污染物治理中显示出巨大的潜力。 1、本研究从胜利油田河口采油厂的飞雁滩油田土壤样品中分离得到10株能够利用并降解苯酚的菌株P1-P4、P7、P9-P13。该10株苯酚降解菌能够在以苯酚为唯一碳源和能源的培养基上生长，经16S rDNA分子鉴定和生理生化检测，该10株降酚菌分别被鉴定到属或种。其中降酚菌株P1、P3和P4这3株菌株分别属于劳尔氏菌属(Ralstonia)、贪噬菌属（Variovorax）和节杆菌属（Arthrobacter）里的种。其它7株降酚菌株P 2、P7、P9-P13都属于假单胞菌属（Pseudomonas）里的种。这4个属里的细菌在国内外都已被报道有降解苯酚的特性，其中有关假单胞菌降解环境有机物的报道较多。 2、培养液中的苯酚含量通过4-氨基安替比啉分光光度法测定，通过苯酚降解效率的比较，菌株P2降解苯酚的能力较其它9株菌株要强。于是将菌株P2作为本研究中进一步研究的对象，研究了不同的环境条件下该菌株降解苯酚和菌体生长的情况。 3、通过苯酚羟化酶特异性引物的设计，从菌株P2扩增出苯酚羟化酶大亚基基因，该基因片段编码对苯酚有催化活性的多肽，催化苯酚代谢的第一步反应；表明菌株P2能降解苯酚是由于细胞具有降解苯酚的遗传基础。 I

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 教学设计

专题2 微生物的培养与应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计 金堂县竹篙中学谭善财2013-3-16 一．本节课内容的总体目标 二、教学重点与难点 课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制课题难点：对分解尿素的细菌的计数 三、课时： 1h 四、本课题内容标准 1、研究培养基对微生物的选择作用，“研究”属于知识性领域的目标动词，应用水平 2、进行微生物的分离，“进行”属于技能性领域目标动词，独立操作水平 3、测定某种微生物的数量，“测定”属于技能性领域目标动词，独立操作水平。 五、本课题研究思路

六、教学思路： 七、教学流程 八、教学过程 教学内容 教师活动 学生活动 设计意图 复习提问 1.微生物最常用的两种接种方法是什么？ 2.什么稀释涂布平板法？其目的是什么？ 学生回忆 为细菌计数原 理、操作做好铺 垫 导入课题 引导学生阅读“课题背景”知识，提出的问题。 学生自主学习 回答问题 创设情景，引入 新课，使学生明 确分解尿素的细 菌的重要性，突出课题的必要性

研究思路 1、筛选 菌株 1、教师让学生阅读课本P21，讲解：DNA 聚合酶作用，发现过程。引导学生得到启示根据它对生存环 境的要求，到相应的环境中去寻找（即自然界筛 选）。 2、实验室中微生物的筛选原理实验室筛选：人为提 供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、p H 等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 3、教师展示各种筛选菌株方法的多媒体图片： 黄石公园热泉 海底火山 大肠杆菌显色培养基 实验室筛选SARS 菌株 4、培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿 1、DNA 聚合酶发现过程，同学们得到什么启示？ 2.学生讨论为什么Taq 细菌能从热泉中筛选出来吗？ 3、学生阅读课本P22侧边栏关于本课题使用的培养基成分相关内容，讨论并回答提供碳源和氮源的分别是什么物质。 4.学生分析讨论，以尿素为唯一 氮源的培养基能否筛选出分解尿素的细菌 3、学生观看教师展示的多媒体图片。 4、学生讨论培养基如何对微生物进行筛选。 引导学生对知识进行迁移学习，培养学生的逻辑迁移思维。 通过观看图片， 使学生由感性认 识过渡到理性认 识。培养学生的学科素养。

纤维素降解菌的分离

纤维素降解菌的分离 一．实验目的 了解纤维素降解菌的分离流程，并掌握分离方法。了解生物技术在环境污染治理中的应用，掌握环境生物技术研究的基本方法。 二．实验原理 纤维素是自然界中存在的最廉价、最丰富的天然可再生资源,存在许多高能氢键, 因此其水解、利用较困难,利用微生物分解纤维素能够节省资源又减少对环境造成的污染。纤维素是碳源营养物质，已知的分解纤维素的真菌有野生型的曲霉、青霉、木霉等，细菌有纤维素单胞菌、纤维弧菌，在有氧条件下起分解纤维素作用的主要是真菌。纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物，木材、作物秸秆等也富含纤维素。纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素最终被水解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养。 多聚糖与刚果红形成多聚糖——刚果红复合物。复合物不仅被吸附在菌丝外，而且可以进一步被吸收转化到菌丝内部。通过进一步的降解，多聚糖被进一步吸收利用。而刚果红被留在菌丝外使菌落显红色。纤维素降解菌首先分解的纤维素物质为含有葡聚糖等物质的多聚糖类物质。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红－纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 三．实验材料 刚果红培养基 (K2HPO4 0.5g CMC-Na 1.88g MgSO4?7H2O 0.25g 明胶 2g 刚果红 0.2g 琼脂 14g）土壤小烧杯培养皿蒸汽灭菌锅锥形瓶涂布器无菌操作台移液枪滴管枪头试管培养箱无菌称量瓶药匙试管架 四．实验过程 1．取土壤 取表层以下5—10cm处的土样(注意取土的位置，应选择富含纤维素的环境， 在植物茂盛的地方。），放入小烧杯中备用，或放在4℃冰箱中暂存。参考文献 （沈萍、范秀容、李广斌，微生物学实验（第三版）北京：高等教育出版社，2001） 2．制备稀释液(要无菌操作) (1)制备土壤悬液：称土样0.5g，迅速倒入带玻璃珠的49.5mL无菌水瓶中(玻璃珠用量以充满瓶底力最好)，振荡5～10min，使土样充分打散，即成为10-2的土壤悬液。 (2)稀释：用无菌移液管吸10-2的土壤悬液0.5mL，放入4.5mL无菌水中即为10-3稀释液，如此重复，可依次制成10-3～10-8的稀释液(图3-1)。注意：操作时管尖不能接触液面，每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土液后，要将移液

实验三高效苯酚降解菌的筛选及其性能测定课件.doc

实验三高效苯酚降解菌的筛选及其性能测定 一、实验目的 1、掌握微生物分离纯化的基本操作； 2、掌握用选择性培养基从环境中分离苯酚降解菌的原理和方法； 3、掌握微生物对酚降解能力的测定方法； 4、掌握4-氨基安替比林法测定苯酚含量的方法。 二、实验原理 在工业废水的生物处理中，对污染成分单一的有毒废水，可以选育特定的高效菌株进行处理。这些高效菌株以有机污染物作为其生长所需的能源、碳源或氮源，从而使有机污染物得以降解，具有处理效率高、耐受毒性强等优点。 苯酚是一种在自然条件下难降解的有机物，其长期残留于空气、水体、土壤中，会造成严重的环境污染，对人体、动物有较高毒性。本实验通过筛选苯酚降 解菌来处理含酚废水，将苯酚降解为为二氧化碳和水，消除对环境的污染。 + COOHCH2CH2COOH CH3COOH C O2+H2O 从环境中采样后，在以苯酚为唯一碳源的培养基中，经富集培养、分离纯化、降解实验和性能测定，可筛选出高效酚降解菌。 三、实验器材与试剂 1、样品 实验土样采自校园污水处理厂。 2、器材 恒温培养箱、恒温摇床、分光光度计、比色皿、试管、250mL三角瓶、100mL 容量瓶、培养皿、涂布玻棒、量筒、天平、灭菌锅、酒精灯、接种环、棉花、棉 线、牛皮纸、pH 试纸。 3、试剂 葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、苯酚、四硼酸钠（Na2B4O7）、4-氨基安替比林、过硫酸铵（（NH4）2S2O8）、K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、琼脂。

苯酚标准溶液：称取分析纯苯酚 1.0g，溶于蒸馏水中，稀释至1000mL，摇 匀。此溶液溶度为1000mg/L。测定标准曲线时将苯酚浓度稀释至100mg/L。 Na2B4O7 饱和溶液：称取N a2B4O7 40g，溶于1L 蒸馏水中，冷却后使用，此 溶液的pH值为10.1。 3% 4-氨基安替比林溶液：称取分析纯4-氨基安替比林3g，溶于蒸馏水中， 并稀释至100mL，置于棕色瓶中，冰箱保存，可用两周。 2% （NH4）2S2O8 溶液：称取分析出（NH4）2S2O8 2g，溶于蒸馏水中，并稀 释至100mL，置于棕色瓶中，冰箱保存，可用两周。 4、培养基 富集培养基：蛋白胨0.5g，K2HPO4 0.1g，MgSO4 0.05g，水1000mL，调节pH 7.2-7.4，高压蒸汽灭菌，冷却后视需要添加适量的苯酚。 基础培养基：K2HPO4 0.6g，KH2PO4 0.4g，NH4NO3 0.5g，MgSO4 0.2g，CaC2l 0.025g，水1000mL，调节pH 7.0-7.5，高压蒸汽灭菌，冷却后视需要添加适量的苯酚。 四、实验步骤 （一）富集培养和驯化 采集活性污泥或土样，接种于装有100mL 富集培养基和玻璃珠并加有适量 苯酚（50mg/L）的三角瓶中，30℃振荡培养。待菌生长后，用无菌移液管吸取 1mL 转至另一个装有100mL 富集培养基和玻璃珠并加有适量苯酚的三角瓶中， 如此连续转接2-3 次，每次所加的苯酚量适当增加，最后可得酚降解菌占绝对优 势的混合培养物。 （二）平板分离和纯化 1、用无菌移液管吸取经富集培养的混合液10mL，注入90mL无菌水中，充 分混匀，并继续稀释到适当浓度。 2、取适当浓度的稀释菌液，加一滴于固体平板（由富集培养基加入2%的琼 脂组成，倒平板时添加适量的苯酚，浓度达到200 mg/L。）中央，用无菌玻璃涂 棒把滴加在平板上的菌液涂平，盖好皿盖，每个稀释度做2-3 个重复。 3、室温放置一段时间，待接种菌液被培养基吸收后，倒置于30℃恒温箱中 培养2-3d。 4、挑选不同菌落形态，在含适量苯酚的固体平板上划线纯化。平板倒置于

含酚废水处理方法

含酚废水处理方法 一、含酚废水的危害 含酚废水主要来自石油化工厂、树脂厂、塑料厂、合成纤维厂、炼油厂和焦化厂等化工企业。它是水体的重要污染物之一。由于工业门类、产品种类和工艺条件不同，其废水组成及含酚浓度差别较大，一般分为酸性、碱性、中性含酚废水和挥发、非挥发性含酚废水。 酚类化合物是一种原型质毒物，所有生物活性体均能产生毒性，可通过与皮肤、粘膜的接触不经肝脏解毒直接进入血液循环，致使细胞破坏并失去活力，也可通过口腔侵入人体，造成细胞损伤。高浓度的酚液能使蛋白质凝固，并能继续向体内渗透，引起深部组织损伤，坏死乃至全身中毒，即使是低浓度的酚液也可使蛋白质变性。人如果长期饮用被酚污染的水能引起慢性中毒，出现贫血、头昏、记忆力衰退以及各种神经系统的疾病，严重的会引起死亡。酚口服致死量为530mg/kg（体重）左右，而且甲基酚和硝基酚对人体的毒性更大。据有关报道，酚和其它有害物质相互作用产生协同效应，变得更加有害，促进致癌化。 含酚废水不仅对人类健康带来严重威胁，也对动植物产生危害。 水中含酚含量达到10-6—2×10-6时，鱼类就会出现中毒症状，超过4×10-6—1.5×10-5时会引起鱼类大量死亡，甚至绝迹。如果使用含酚废水灌溉农田，则会使农作物减产或枯死。含酚废水的毒性还可抑制水体中其它生物的自然生长速度，破坏生态平衡。毫无疑问，含酚废水排入水体或用于灌溉均需经过治理处理，使之符合达到国家要求的排放标准（见附表）。 附表：中华人民共和国水体中含酚浓度及含酚废水排放最高允许标准（单位：mg/人） 海水地面水渔业水农田灌溉水生活饮用水工业含酚水0.005（一类） 0.001（一级） 0．010（二类） 0.005（二级）0.005 1.0～3.0 0.002 0.500 0．050（三类）0．010（三级） 二、含酚废水处理方法 由于含酚废水的组成、酸碱性以及浓度的不同，处理方法也不一样，目前工业上处理含酚废水的方法一般分为物化法、化学法、生化法等三大类。主要介绍最常见的方法。

高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究

高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究 引言 石油、化工、煤气、焦化及酚类等生产厂排放的废水当中含有大量的苯酚[1]。未经净化的含酚废水可导致水源被污染，致使鱼类死亡，危害农作物，最终威胁人类的健康。许多国家将苯酚列为重要的污染物之一。目前，国内外处理含酚废水的方法主要有物理法、化学法、微生物法及各种结合法[2]。其中微生物法主要利用微生物的代谢活动去除废水中的有毒物，处理方法无2次污染且安全、经济。目前，已鉴定具有降解苯酚能力的微生物主要有假单胞菌（Pseudonomonas.sp）[3]、芽孢杆菌（Bacillus.sp）[4]、酵母菌（Yeast trichosporon）[5]、根瘤菌（Rhizobia）[6]、醋酸钙不动杆菌（A. calcoaceticus）[7]等，降酚菌株多存在于酚类污染物企业排放的废水、污泥和被废水污染的土壤中[8]。本课题拟从被苯酚废水污染的污泥中进行菌株筛选，得到耐酚菌后在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养上筛选降酚菌株，进一步测定苯酚降解的影响因素。对特定菌株降解含酚废水的应用价值进行研究。 1 实验材料和方法 1.1 菌株来源 采集原黑龙江省佳木斯东郊黑龙农药化工集团废弃排污口

处污泥进行菌株筛选。 1.2 培养基 基础培养基：NaCl 5.0g/L，蛋白胨10g/L，琼脂15～20g/L，酵母浸膏5.0g/L，调节pH为7.0。 以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基：CaCl2 0.1 g/L ，FeSO4.7H2O 0.01 g/L，K2HPO4 0.5g/L，MnSO4.7H2O 0.05 g/L，NaCl 0.2 g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4.H2O 0.01 g/L，NH4NO3 1.0 g/L苯酚按实验需要量添加，调节pH为7.0 [8]。 富集培养基：葡萄糖10.0g/L，营养琼脂33.0g/L，酵母浸粉10.0g/L，调节pH为7.5。 1.3 研究内容与方法 1.3.1 菌株和的驯化和分离 在超净工作台中，将10mL含0.1g/L苯酚的基础培养基倒入培养皿，取10 g污泥加90mL蒸馏水搅拌15min，静置5min后取上层清液为菌原液[8]。取1mL菌原液加入无菌水中分别制成100、10- 1、10- 2、10- 3、10-4等梯度的菌液，然后分别从各菌液试管中取1mL用涂布法接种于基础培养基平板上。在pH 值为7、25℃情况下培养24～48h。挑取单一菌落于富集培养基平板上划线、扩繁。编号，将平板置于25℃的恒温培养箱中培养24～48h后放于4℃冰箱保存。依据革兰氏染色进行微生物鉴定。 1.3.2 降酚菌的筛选

园林废弃物中高效降解菌的分离与鉴定

龙源期刊网 https://www.sodocs.net/doc/db15954196.html, 园林废弃物中高效降解菌的分离与鉴定 作者：周童袁泽斌万可牟昌红王从梅欧阳秀琴王波 来源：《天津农业科学》2018年第10期 摘要：为了更好地对园林废弃物进行资源化利用，试验以堆肥腐熟后的园林废弃物作为 供试材料，进行其菌株的分離和鉴定。通过细菌16S rDNA测序分析，鉴定出21株细菌，分 属于3门5纲7目10科13种，其中，厚壁菌门（Firmicutes）、变形菌门（Proteobacteria）和放线菌门（Actinobacteria）分别鉴定出4种、6种和3种；通过真菌rDNA ITS 测序分析，鉴 定出9株真菌，分属于1门（子囊菌门）2纲2目2科3属5种，其中青霉菌属（Penicillium）鉴定出3种，曲霉属（Aspergillus）和短梗霉属（Aureobasidium）各鉴定出1种。 关键词：园林废弃物；菌株；分离；鉴定 中图分类号：S961.6 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2018.10.001 Abstract： In order to make better use of garden wastes， the experiment was conducted to isolate and identify the strains from the garden wastes composting. According to the bacterial 16S rDNA sequencing analysis， 21 bacteria strains were identified， which were belonged to 3 phyla，5 classes， 7 orders， 10 families and 13 species. Among the three phyla， the bacteria of Firmicutes， Proteobacteria， Actinobacteria were identified 4 species， 6 species， and 3 species，respectively. According to fungal rDNA ITS sequencing analysis， 9 fungi strains were identified，which were belonged to 1 phylum （Ascomycota）， 2 classes， 2 orders， 2 families， 3 genuses， 5 species. Among the three genuses， the fungi of Penicillium， Aspergillus， and Aureobasidium were identified 3 species， 1 species， and 1 species， respectively. Key words： garden waste； strains； isolation； identification 随着城市绿化建设的飞速发展以及人们对生态环境要求的提高，园林废弃物的数量快速增加，焚烧、填埋、粉碎粗回收等非资源化的处理方式既带来了严重的环境问题[1]，同时也造 成了资源的浪费。大多数园林废弃物含有丰富的有机质，部分地区通过堆肥使其形成基质重新应用于园林和城市绿化，对土壤有很好的改良作用，是一种变废为宝的科学手段，一方面降低了对自然环境的污染，另一方面也节约了资源，是一种适合可持续发展的处置方式。 目前，处理园林废弃物堆肥的主要模式是参照农业废弃物的堆肥方式，然而，相较于一般的农业废弃物，园林废弃物中有更加丰富的、难以降解的木质纤维素，主要存在于植物细胞壁的微管组织中，纤维素分子链聚集成的微纤丝相互交织镶嵌排列形成结晶相和非结晶相，该结构具有超强的防御作用，化学试剂难以有效接触纤维素表面[2]，降解速率低，严重阻碍以园 林废弃物为原料的堆肥处理进程。

苯酚降解菌的分离和鉴定

目录 目录 (1) 摘要 (2) Abstract (3) 第一章绪论 (4) 1.1 苯酚降解菌的定义及分类 (4) 1.2苯酚降解菌的性质及其用途 (4) 1.3苯酚降解的研究现状 (5) 1.4苯酚降解菌生产菌的筛选 (6) 1.5本课题的研究思路及意义 (6) 第二章材料与方法 (7) 2.1试验材料 (7) 2.2试验方法 (8) 2.2.2苯酚降解菌的驯化 (8) 2.2.3菌种在不同条件下的降解能力 (9) 2.2.4最优菌种的鉴定 (9) 3.1苯酚降解菌筛选结果及性状初步研究 (11) 3.11筛选结果 (11) 3.1.1.1初步筛选的结果 (11) 3.1.1.2 菌种驯化中的结果 (11) 3.1.2 H-1菌株的性状初步结果 (13) 3.2 H-1菌株分类鉴定结果 (13) 第四章结论 (14) 4.1菌种的筛选结果 (14) 4.2菌种的鉴定 (14) 参考文献 (15) 致谢.......................................................................................... 错误!未定义书签。

一株苯酚降解菌的分离和鉴定 摘要 为了寻找能高效降解苯酚的微生物, 从土壤中筛选得到了一株苯酚降解菌,通过逐渐增加苯酚的浓度,然后驯化出一株高效降解苯酚的细菌H-1. 当在30 ℃培养48h 时其降解率高达92.11%. 经理化特征测定及外观鉴定,将其初步鉴定为假单胞菌属.再经过对比实验测各种因素(碳源、温度、pH、通气) 对该菌生长及降解苯酚能力的影响,得知该菌能以苯酚作为唯一碳源,最适生长温度为32 ℃,最适pH 为7.0. 该菌为好氧菌,在空气充足的条件下可提高降解能力. 该菌菌落较小，菌落呈微黄色。菌体呈直或微弯的杆装，没有菌柄也没有鞘。不产芽孢。对该菌做生化鉴定，可知该菌革兰氏染色为阴性，可水解苯酚，生长温度为32℃，生长pH为pH 6.5～7.5。参照东秀珠,蔡妙英的《常见细菌系统鉴定手册》等文献方法，以形态和培养特征为主，生理生化特性及生态特性为辅，经初步鉴定为假单胞菌属，命名为H-1，具体确定到种则需要进一步的研究。 【关键词】：筛选苯酚降解鉴定

苯酚类废水处理方法

苯酚类废水处理方法 Standardization of sany group #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN#

一、物理法 1、萃取法 由于酚类化合物是有机物,在水相与有机相的溶解度有较大差异,因此可以利用与水不互溶的有机萃取剂与含酚类污染物的废水混合,从而使酚类物质从水相转移至有机相中,以此实现酚类物质从水相中的脱除[8]。目前萃取法的发展除了选取混合强度更高的反应器之外[9],选择、优化萃取剂也是一个重要方向,其中使用超临界流体进行反应萃取分离是目前萃取法研究的重要方向[1()]。由于萃取剂一般都相对昂贵,因此萃取剂一般都需要回收利用。但由于萃取过程中存在一些副反应、操作过程中也有一定的损失、溶剂会一定程度地溶解于水中,因此萃取法一般只用来处理回收较高浓度的苯酚废水,从而限制了其广泛应用。 2、蒸汽法 蒸汽法用来脱除挥发酚也一种使用时间比较长的方法,主要是利用挥发酚能够与水蒸汽组成一种共沸物的物理特点,当两种物质的总蒸汽压大于外部的压力时,废液就会沸腾,同时挥发酚便会转变为气体。在传统的蒸汽脱酚塔中,含酚废液喷淋塔顶端向下喷淋,而水蒸气则从下往上流动,两者进行逆流接触,从而使废液中的挥发酚转入气相中,达到脱除挥发酚的目标。 蒸汽法的优点是不使用昂贵的萃取剂、操作比较简便、处理量大、无后续污染,适合处理含挥发酚含量较高的酚类废水[li】,但其也存在蒸汽消耗大、设备体积大、废水处理不彻底的缺点。 3、吸附法 比表面积大、具有多孔结构等特征的物质常常能吸附水体中的污染物。科研人员使用具有以上特征的吸附剂处理酚类废水,在达到一定吸附量之后,再利用其他手段进行脱

苯酚类废水处理方法

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一、物理法 1、萃取法 由于酚类化合物是有机物,在水相与有机相的溶解度有较大差异,因此可以利用与水不互溶的有机萃取剂与含酚类污染物的废水混合,从而使酚类物质从水相转移至有机相中,以此实现酚类物质从水相中的脱除[8]。目前萃取法的发展除了选取混合强度更高的反应器之外[9],选择、优化萃取剂也是一个重要方向,其中使用超临界流体进行反应萃取分离是目前萃取法研究的重要方向 [1()]。由于萃取剂一般都相对昂贵,因此萃取剂一般都需要回收利用。但由于萃取过程中存在一些副反应、操作过程中也有一定的损失、溶剂会一定程度地溶解于水中,因此萃取法一般只用来处理回收较高浓度的苯酚废水,从而限制了其广泛应用。 2、蒸汽法 蒸汽法用来脱除挥发酚也一种使用时间比较长的方法,主要是利用挥发酚能够与水蒸汽组成一种共沸物的物理特点,当两种物质的总蒸汽压大于外部的压力时,废液就会沸腾,同时挥发酚便会转变为气体。在传统的蒸汽脱酚塔中,含酚废液喷淋塔顶端向下喷淋,而水蒸气则从下往上流动,两者进行逆流接触,从而使废液中的挥发酚转入气相中,达到脱除挥发酚的目标。 蒸汽法的优点是不使用昂贵的萃取剂、操作比较简便、处理量大、无后续污染,适合处理含挥发酚含量较高的酚类废水[li】,但其也存在蒸汽消耗大、设备体积大、废水处理不彻底的缺点。 3、吸附法 比表面积大、具有多孔结构等特征的物质常常能吸附水体中的污染物。科研人员使用具有以上特征的吸附剂处理酚类废水,在达到一定吸附量之后,再利用其他手段进行脱附,如通过加热脱附、溶剂脱附、蒸汽脱附等等。目前使用最为广泛的吸附剂是活性炭吸附剂,其具有吸附总量大的特点,对高含酚量和低含酚量的酚类废水都有很好的吸附效果,但活性炭吸附法也存在着脱附能耗高、脱附产物难以利用等缺点[12]。也有科研工作者探索使用其他更为廉价吸附剂进行吸附,如焦木素等[13]。焦木素吸附污染物的能力与活性炭接近,生产原料来源广泛、成本低,可以实现废物再利用,是一种有前途的替代吸附剂。 二、生物法 1、活性污泥法 生物法中最为常用的处理方法为活性污泥法,活性污泥法是通过在水中生存、利用氧气进行有氧化呼吸的细菌和其他水生生物对污水中的污染物进行栏截及分解,从而将有毒性的污染物转化为对环境无害的物质。活性污泥法处理污水的过程既包括物理过程、化学过程也包括生物化学过程,一方面活性污泥具有较强的吸附和容纳污染物的能力,通过吸附作用将水体中的酚类等有害物质进行拦截,使其从水体中分离;另一方面,好氧细菌在氧气充足的情况下进行有氧呼吸,通过一系列生物化学过程对有机污染物进行利用,分解转化为对环境无害的物质。

微生物学 ,土壤中草甘膦降解菌的提取和分离

草甘膦降解菌的富集培养 1 材料与方法 1．1 试验材料 1．1．1 农药和供试土壤来源市售41％草甘膦异丙胺盐水剂(美国孟山都公司生产)。供试土壤。 1．1．2 培养基①基础盐培养基：MgSO。·7H200．500 g、K2HP04·3H20 1．310g、FeS04"7H20 0．0189、NaN03 3．000 g、KCl 0．500 g、H20 1 000 mL，pH值7．0，121℃、0．1 MPa蒸汽灭菌30 min。②以草甘膦为惟一碳源的培养MgSO。·7H200．500 g、K：HP04·3H20 1．310 g、FeS04·7H20 0．0189、NaN033．000 g、KCl 0．500 g、草甘膦100～600 mmol／L、H．20 1 000mL，pH值7．0，121C0．1M 蒸汽灭菌30min。③LB培养基：胰蛋白胨10．0 g、酵母粉5．0 g、NaCl 10．0 g、H20 1 000 mL，pH值7．0，121℃、0．1MPa蒸汽灭菌30min。 1．2试验方法 1．2．1 土壤中降解菌的驯化 取土样10 g．将土样加入含100 mmol／L的草甘膦的100 mL基础盐培养基中，在28℃，120 r／rain的条件下振荡培养7 d，然后10 mL培养液接人100 mL新鲜基础盐培养基中(培养基中草甘膦浓度每一周期逐步提高1次，依次为200、300、400 mmol／L)，振荡培养7 d，连续驯化富集4次。 1．2．3 菌种形态观察观察并记录菌株的生长状况、个体形态特征、菌落特征，对菌株进行革兰氏染色。 1．2．4 菌株生长曲线的测定 挑取适量的草甘膦纯化筛选的菌株分别接入50 mL LB培养基和50mL含草甘膦(300 mmol／L)的基础培养基中．预培养到对数生长期(OD鲫达到0．6左右)，将在LB培养基中预培养的菌液按体积分数为2％的接入量分别接入50 mL LB和50mL 含草甘膦(300 mmol／L)的基础培养基中。将含草甘膦(300 mmol／L)的基础培养基中预培养的菌液按体积分数为2％的接人量分别接人50 mL LB和50 mL含草甘膦(300 mmol／L)的基础培养基中．28℃，120 r／min摇床培养，间隔4h取样．使用紫外分光光度计测定菌体在波长600nin处的吸光值．绘制生长曲线。 1．2．5 菌株降解率的测定 取纯化好的菌株于草甘膦浓度为300 mmol／L的基础盐培养基中培养．每隔8 h取草甘膦降解菌液10 mL．离心后取上清液进行测定，测定方法参照参考文献[7]进行。 1．2．6 菌株对草甘膦的耐受 将纯化菌株在含300mmol／L草甘膦的基础盐培养基中预培养至对数生 长期．培养液按照体积分数为2％的接种量接种至基础盐培养基中．分别添加不同浓度(100、200，300、400、500、600 mmol／L)的草甘膦作为碳源，28。C，

苯酚类废水处理方法

一、物理法 1、萃取法 由于酚类化合物是有机物,在水相与有机相的溶解度有较大差异,因此可 以利用与水不互溶的有机萃取剂与含酚类污染物的废水混合,从而使酚类物质从水相转移至有机相中,以此实现酚类物质从水相中的脱除[8]。目前萃取法的发展除了选取混合强度更高的反应器之外[9],选择、优化萃取剂也是一个重要方向,其中使用超临界流体进行反应萃取分离是目前萃取法研究的重要方向[1()]。由于萃取剂一般都相对昂贵,因此萃取剂一般都需要回收利用。但由于萃取过程中存在一些副反应、操作过程中也有一定的损失、溶剂会一定程度地溶解于水中,因此萃取法一般只用来处理回收较高浓度的苯酚废水,从而限制了其广泛应用。 2、蒸汽法 蒸汽法用来脱除挥发酚也一种使用时间比较长的方法,主要是利用挥发酚能够与水蒸汽组成一种共沸物的物理特点,当两种物质的总蒸汽压大于外部的压力时,废液就会沸腾,同时挥发酚便会转变为气体。在传统的蒸汽脱酚塔中,含酚废液喷淋塔顶端向下喷淋,而水蒸气则从下往上流动,两者进行逆流接触,从而使废液中的挥发酚转入气相中,达到脱除挥发酚的目标。蒸汽法的优点是不使用昂贵的萃取剂、操作比较简便、处理量大、无后续污染,适合处理含挥发酚含量较高的酚类废水[li】,但其也存在蒸汽消耗大、设备体积大、废水处理不彻底的缺点。 3、吸附法

比表面积大、具有多孔结构等特征的物质常常能吸附水体中的污染物。科研． 人员使用具有以上特征的吸附剂处理酚类废水,在达到一定吸附量之后, 再利用其他手段进行脱附,如通过加热脱附、溶剂脱附、蒸汽脱附等等。目前使用最为广泛的吸附剂是活性炭吸附剂,其具有吸附总量大的特点, 对高含酚量和低含酚量的酚类废水都有很好的吸附效果,但活性炭吸附法也存在着脱附能耗高、脱附产物难以利用等缺点[12]。也有科研工作者探索使用其他更为廉价吸附剂进行吸附,如焦木素等[13]。焦木素吸附污染物的能力与活性炭接近,生产原料来源广泛、成本低,可以实现废物再利用,是一种有前途的替代吸附剂。 二、生物法 1、活性污泥法 生物法中最为常用的处理方法为活性污泥法,活性污泥法是通过在水中生存、利用氧气进行有氧化呼吸的细菌和其他水生生物对污水中的污染物进行栏截及分解,从而将有毒性的污染物转化为对环境无害的物质。活性污泥法处理污水的过程既包括物理过程、化学过程也包括生物化学过程,一方面活性污泥具有较强的吸附和容纳污染物的能力,通过吸附作用将水体中的酚类等有害物质进行拦截,使其从水体中分离;另一方面,好氧细菌在氧气充足的情况下进行有氧呼吸,通过一系列生物化学过程对有机污染物进行利用,分解转化为对环境无害的物质。 酚类可以被很多水处理微生物所利用,是其生长时的碳源,所以活性污泥 法也被广泛用于中低浓度酚类废水的处理[14-17]。由于酚类物质对于微

紫外光降解苯酚废水实验-07

实验名称 紫外光降解苯酚废水实验 一、实验目地 了解光催化氧化降解有机废水地机理； 了解紫外光催化装置，熟悉光催化处理废水地工艺流程； 了解光催化动力学参数测定地意义，并探讨不同实验条件下光催化降解地效果. 二、实验原理 光催化氧化法氧化能力强，要求地反应条件温和，是目前处理含低浓度难降解有机物废水地一种高级氧化法. 光催化氧化法，是以型半导体地能带理论为基础.当能量大于带阵能量（地为）地光照射半导体催化剂时，价带（ ）上电子被激发，跃过禁带进入导带( )，形成高活性电子（－），并在价带上产生带正电荷地空穴（＋），从而引发反应.以为例说明：文档来自于网络搜索 ＋ ν ＋ － 水溶液中地光催化氧化反应，在半导体表面失去地电子主要是水分子，水分子经一系列变化后产生氧化能力极强地羟氧自由基（·），可以氧化各种有机物，并使之矿化为.文档来自于网络搜索是常用地光催化剂 ，主要有锐钛型和金红石型两种晶型.二氧化钛地化学性质和光化学性质十分稳定，无毒价廉，货源充足.是一种半导体氧化物，它有充满电子地价带和缺电子地导带，在光照下价电子上留下地空穴有氧化性，导带上地电子具有还原性，降解物在表面发生氧化还原后，价带又得到电子，光再次照射时，价带上电子又同样发生跃迁，故将使用过地通过过滤收集起来，在阴暗处自然晾干，重复使用，不影响其催化活性.文档来自于网络搜索影响二氧化钛光催化氧化过程地因素有很多，主要有：光催化剂地性质和结构、光催化剂地投加量、废水地值和浓度等.文档来自于网络搜索研究表明，为催化剂地光催化氧化反应速率可用描述： KC kKC r += 1 （） k C kK r o 1111+= （） 式中：－反应物浓度，; －表观吸附平衡常数，； －表面反应速率常数，. 取不同浓度地废水进行光催化降解实验，由此得到不同地初始反应速率，并绘制出 o r 1～C 1关系图，图中直线地斜率为 kK 1值，截距为k 1 值.就可以得到值和值.文档来自于网络搜索三、实验仪器、设备与药品 型紫外光催化实验装置（武汉科林环保技术有限公司）、分光光度计 模拟有机废水（苯酚废水）、苯酚浓度用表征. 四、实验步骤 将浓度为地有机废水放入水箱至一定体积，废水量必须大于照射反应器地有效容积； 容器废水中定量加入光催化剂（），投加量为3.0g ，并搅拌均匀，使催化剂悬浮在容器中；

降解苯酚微生物的选育

降解苯酚微生物的选育 一、实验目的 1. 学习从含酚工业污水、活性污泥中筛选苯酚降解菌。 2. 学习通过活性污泥驯化分离耐酚菌。 二、实验原理 酚类化合物是化工、造纸、钢铁等工业废水的主要有害成分，含酚污水的排放，污染水源、毒死鱼虾、危害庄稼、严重危害人类健康，是各国研究关注的污染物之一。 含酚废水中分离出的生物降解酚能力强的菌为：假单胞菌、白乳杆菌、假丝酵母和野丝膜菌等。含酚废水生物处理目前主要采用活性污泥法。 三、实验材料 1.菌源含酚工业废水或含酚废水曝气池中的活性污泥。 2.培养基耐酚真菌培养基(固体、液体和斜面)，耐酚细菌培养基(固体、液体和斜面) ，碳源对照培养液a，苯酚培养液b。 3.试剂2% 4-氨基安替比林溶液，8%铁氰化钾溶液，氯仿，氨性氯化铵缓冲液，溴酸钾-溴化钾溶液，硫代硫酸钠溶液, 1%淀粉溶液。 4.其他稀释分离所用的无菌水，无菌培养皿，无菌移液管，测定酚所用的移液管，容量瓶，试剂瓶，酸式滴定管等。 四、实验方法 1.采样 自焦化厂、钢铁公司化工厂、造纸厂处理含酚工业污水的曝气池中取活性污泥和含酚污水，装于无菌瓶中，带回实验室，记录采样日期、地点，曝气池的水质分析包括：挥发酚、可溴化物、BOD5五日生化需氧量、COD化学需氧量、焦油、硫化物、氰化物、总氮、氨态氮、磷、pH、水温等。采集的样品应迅速稀释分离。 2.分离纯化 一般微生物在含酚培养基上不能生长。苯酚耐受菌株的筛选，可采用药物抗性菌株一样的梯度平板法。即在培养基中加入一定量的药物，使大量细胞中的少数抗性细胞在平板上的一定剂量药品的部位长成菌落，从而判定该菌耐受酚的能力。

1、梯度平板制备：在无菌培养皿中，先倾倒7～l0mL不含苯酚的无菌细菌或真菌固体培养基，将培养皿一侧置于木条上，使皿中培养基倾斜成斜面，且刚好完全盖住培养皿底部，待培养基凝固后，将培养皿放平，再倒入无菌7～l0mL(刚好完全盖住下层斜面)含70mL/l00mL苯酚的无菌耐酚细菌或耐酚真菌固体培养基，刚好完全盖住下层斜面，放置过夜。由于苯酚的扩散作用，造成上层培养基由厚到薄的药物浓度递减的梯度。 2、涂布法分离：将采集的样品作10倍梯度稀释，按涂布法分离，30℃培养2 天后，平板上生长的菌落也形成密度梯度，苯酚低浓度区形成菌苔，苯酚高浓度区出现稀少菌落，将此菌落在含耐酚细菌或真菌培养基平板上连续划线分离，最后挑取单菌落接种到耐酚斜面培养基上，30℃培养2天。 3、耐酚菌驯化 先将从含酚废水采集的活性污泥放入苯酚无机培养液中（苯酚终浓度25mg/L，MgSO4.7H2O终浓度0.3%, KH2PO4终浓度0.3%），30℃振荡培养6～7天，使苯酚降解菌大量增殖，淘汰对酚不适应的微生物；再添加苯酚无机培养液（苯酚终浓度增加至100mg/L）30℃振荡培养4～6天；再流加苯酚无机培养液（苯酚终浓度增加至200mg/L）30℃振荡培养4～6天，再提高到流加250mg/L苯酚无机培养液，30℃培养4天，从中选出对酚耐受力强的菌株。 4、性能测定。 初筛：制备不同含酚浓度的耐酚平板培养基，苯酚浓度为0.025%、0.045%、0.060%、0.075%，将选出的耐酚力强的菌株在以上平板培养基上划线分离，自高酚浓度平板上长出的菌落，即为酚降解力高的菌株。 复筛：将初筛纯化的菌种分别接入碳源对照培养液a和苯酚培养液b中，30℃振荡培养48h，0、12、24、36、48h取样测A600光密度值，绘制生长曲线，以不含酚的碳源(葡萄糖)培养液为对照。若与对照相比，在250mg/L苯酚浓度培养液中生长速度下降不明显，同时，用4-氨基安替比林法检测发酵初时发酵液和发酵终止时发酵液苯酚浓度，计算降解率，若苯酚降解率达>80%，表明确系分离到有效苯酚降解菌。 五、实验报告 1．记录分离得到的苯酚降解菌情况于表4-1。 2．根据复筛耐酚试验，绘制对照组与试验组生长曲线。 3．记录在平板上和显微镜下观察的苯酚降解菌的菌落特征和镜检特征。

毒死蜱降解菌的分离鉴定与降解效能测定

第26卷第9期 2006年9月 环　境　科　学　学　报　Acta Scientiae Circu m stantiae Vol .26,No .9Sep.,2006 基金项目:国家自然科学基金项目(No .20277001);安徽省优秀青年基金项目(No .04041067) Supported by the Nati onal Natural Science Foundati on of China (No .20771001)and Excellent Youth Foundati on of Anhui Pr ovince (No .04041067) 作者简介:吴祥为(1978—),男,讲师(硕士),E 2mail:wx wahau@ahau .edu .cn ;3通讯作者(责任作者),E 2mail:ri m aohua@ahau .edu .cn B i ography:WU Xiang wei (1978—),male,lecturer,E 2mail:wx wahau@ahau .edu .cn;3Correspond i n g author ,E 2mail:ri m aohua@ahau .edu .cn 吴祥为,花日茂,操海群,等.2006.毒死蜱降解菌的分离鉴定与降解效能测定[J ].环境科学学报,26(9):1433-1439 W u X W ,Hua R M ,Cao H Q,et al .2006.Is olati on,identificati on and degradati on 2efficiency measure ment of chl or pyrifos 2degradaing bacteria [J ].Acta Scientiae Circum stantiae,26(9):1433-1439 毒死蜱降解菌的分离鉴定与降解效能测定 吴祥为1 ,花日茂 1,3 ,操海群1,汤　锋1,李学德1,岳永德 2 1.安徽农业大学资源与环境学院,安徽省“农产品安全”重点实验室,合肥230036 2.国际竹藤网络中心,北京100102 收稿日期:2005208201 修回日期:2006204214 录用日期:2006204229 摘要:取毒死蜱废水处理系统出口处的污泥进行驯化培养,分离出能降解毒死蜱的3株高效降解菌株B 、D 1和D 3,对降解效果最好的D 3菌株经中科院微生物研究所鉴定为玫瑰红红球菌(R hodococcus rhodochrous );3株菌株的生长情况及对毒死蜱的降解动力学研究表明,B 菌株在第3天繁殖增量达到最大,D 1、D 3菌株在第4天繁殖增量达到最大,B 、D 1和D 3菌株的最适宜生长温度都是在30℃;采用10mg ?L -1毒死蜱作为唯一碳源时,B 、D 1和D 3菌株对毒死蜱的降解速率分别为0.0543、0.0479和0.0620h -1;对于浓度为10mg ?L -1的毒死蜱,D 3菌投入的初始菌量 OD 223为0.4是最适宜的;D 3菌对不同初始浓度的毒死蜱降解表明,初始浓度增大,降解速率降低,半衰期延长. 关键词:毒死蜱;分离鉴定;降解;高效液相色谱 文章编号:025322468(2006)0921433207 中图分类号:X172 文献标识码:A Isol a ti on,i den ti f i ca ti on and degrada ti on 2eff i c i ency m ea surem en t of chlorpyr i fos 2 degrada i n g bacter i a WU Xiang wei 1 ,HUA R i m ao 1,3 ,CAO Haiqun 1,T ANG Feng 1,L I Xuede 1,Y UE Yongde 2 1.College of Res ources and Envir onment Anhui Agricultural University,The Key Laborat ory of Anhui Agri 2f ood Safety,Hefei 230036 2.I nternati onal Centre for Ba mboo &Rattan,Beijing 100102 Rece i ved 1August 2005; rece i ved in revised f or m 14Ap ril 2006; accepted 29Ap ril 2006 Abstract:Three bacterial strains that had a capability t o utilize chl or pyrif os as the s ole carbon and energy s ourceswere is olated fr om the sludge .Based on the mor phol ogy and physi o -bi ochem ical p r operties,the strain D 3which had the best degradati on capability t o chl or pyrif os was identified as Rhodococcus rhodochrous by I nstitute of M icr obi ol ogy Chinese Academy of Sciences .The bi omass got t o the maxi m um when strain B was cultivated f or 3d,however strains D 3and D 1need 4d .The op ti m al cultivating te mperature of all the strains was 30℃.I n aqueous s oluti on of chl or pyrif os at the concentrati on of 10mg ?L -1,the degradati on rate constants of strains B,D 1and D 3utilizing chl or pyrif os as the s ole carbon s ource were 0.0479,010543and 010620h -1,res pectively .It was op ti m al that the OD 223of strain D 3s oluti on attained 0.4for the degradati on of chl or pyrifos at the concentrati on of 10mg ?L -1.The results als o showed that the degradati on efficiency of the strain D 3t o chl or pyrif os decreased with initial concentrati on of chl or pyrif os increasing .Keywords:chl or pyrif os;is olati on and identificati on;degradati on;HP LC 1　引言(I ntr oducti on ) 化学农药主要是人工合成的生物外源化学物质,许多类型通常不易被生物降解,故称之为顽固性化合物(Recalcitrants )(王保军等,1998).大量研究证实微生物对土壤和水环境中的农药降解和污染消除起着重要作用,且已分离到一些能降解或转 化农药的微生物类群. 毒死蜱(chl or pyrifos ),化学名称:O,O —二乙基—O —(3,5,62三氯—22吡啶基)硫逐磷酸酯,是美国陶氏化学公司(Dow Che m ical Co .)于1965年开发并研制出来的一种广谱性有机磷酸酯类杀虫剂,被广泛用于农业和城市卫生害虫的防治(刘乾开,1993;吴慧明等,2003).目前,国内外关于毒死蜱的