微生物限度检验操作规程

* * * * * * 有限公司

质量管理标准文件

1.目的

规范菌落总数检验操作，确保检验数据真实有效。

2.适用范围

适用于本公司菌落总数检验操作规程。

4.依据

检验规程参照《GB 4789.2-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。

4. 内容

4.1 菌落总数定义：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度、和培养时间等）培养后，所得每g（ml）检样中形成的微生物菌落总数。

4.2 仪器与材料：除微生物实验室常用的灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下4.2.1 恒温培养箱：36℃±1℃

4.2.2 冰箱：2℃-5℃，

4.2.3 恒温水浴锅：46℃±1℃，

4.2.4 天平：感量为0.1g，

4.2.5 均质器

4.2.6 无菌吸管：1ml（具有0.01ml刻度）、10ml（具有0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。

4.2.7 无菌锥形瓶:容量瓶250ml、500ml

4.2.8 无菌培养皿：直径90mm

4.2.9 pH计或pH比色管或精密pH试纸

4.2.10 放大镜或菌落计数器

4.3 培养基和试剂

4.3.1 平板计数琼脂培养基

4.3.2 虎红培养基

4.3.3 硫乙醇酸盐流体培养基

4.4 操作步骤：

4.4.1 样品稀释：

4.4.1.1

（1）半固体、固体样液制作：称取25g样品置盛有225ml0.85%的无菌生理盐水内，8000r/min-10000r/min均质1min-2min，或放入盛有0.85%的无菌生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min-2min，制成1:10的样品。

（2）液体样品，以无菌吸管吸取25ml样品置盛有225ml0.85%的无菌生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或其他无菌容器中，充分振摇或置于机械振荡器中振摇，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

4.4.1.2用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1：10 样品匀液1 mL ，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100 的样品匀液。

4.4.1.3按4.4.1.2操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一次1 mL 无菌吸管或吸头。

4.4.1.4根据对样品污染状况的估计，选择2 个-3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）, 在进行10 倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液加人两个无菌平皿内。同时分别取1 mL 稀释液加人两个无菌平皿作空白对照。

4.4.1.5及时将15 mL-20 mL 冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

4.4.2培养：

4.4.2.1样品提取：琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h 。

4.4.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL ) ，凝固后翻转平板，按4.4.1.1条件进行培养。

4.4.3菌落计数：

4.4.3.1可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（ CFU ）表示。

4.4.3.2选取菌落数在30 CFU-300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

4.4.3.3其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2 ，代表一个平板菌落数。

4.4.3.4当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。

4.5 结果计算：

4.5.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。

4.5.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按下式计算：

d )n 1.0n (C

N 21+=∑

式中：N ——样品中菌落数；

∑C ——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；

1n ——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；

2n ——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；

d ——稀释因子（第一稀释度）；

示例：

d

)n 1.0n (C

N 21+=∑2-10)]21.0(2[3533244232??++++=24727=

4.5.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU ，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

4.5.4 所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU ，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀

释倍数计算。

4.5.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

4.5.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU-300CFU之间，其中一部分小于30CFU 或大于300CFU时，则以接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

sop微生物检查操作规程

sop微生物检查操作规程 1目的 建立微生物限度检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。 2 范畴 适用于本厂质监科化验室对本厂生产的固体制剂及物料进行微生物限度的检查。 3 责任 化验员有责任按照本操作规程进行检验、判定,并对检验结果负责。 4 定义 微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及操纵菌的检查。 5 内容 5.1 总则： 5.1.1供试品应随机抽样。一样抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的 3倍量。 5.1.2 供试品在检查前不得开启，检查全过程均应严格遵守无菌操作规程，严防 再污染。 5.1.3 操纵菌的污染检查应做相应的已知菌对比试验，对比菌株为大肠杆菌 [CMCC（B）44102]，每批试验已知菌加入量为50-100个。 5.1.4 染菌量的检查或操纵菌的检查均应做空白对比试验。 5.1.5 供试品稀释成稀释液后应在平均状态下取样，凡有抑菌成份或防腐剂的供 试品应做专门处理后进行检验。 5.1.6 供试品稀释后应在1小时内操作完毕。

第2页/共6页 5.1.7 除另有规定外，细菌培养温度为30-35℃，霉菌、酵母菌培养温度为 25-28℃，操纵菌培养温度为36℃±1℃。 5.1.8细菌、霉菌检验结果的报告以1g、1ml或10cm2为单位；操纵菌检验报告 以每1g、每1ml或每10cm2为单位报告“检出”或“未检出”。 5.2仪器、用具 恒温培养箱、隔水式生化培养箱、电子天平，移液管(1ml、10ml)、试管、离心管、双碟、镊子、剪刀、不锈钢吸管筒、酒精灯、取样勺、称量纸、研钵一个、不锈钢双碟筒。 5.2.1用具的包扎 移液管：用纱布包住移液管，然后放入不锈钢灭菌筒内。 试管、双碟：试管在管口塞上纱布棉塞、双碟放入不锈钢双碟筒内。 无菌衣、裤、帽、口罩：用布口袋将洗净的衣裤、帽子、口罩配套后装入，扎紧袋口，再用牛皮纸包好。 5.2.2用具的灭菌 将包扎好的用具，在121±0.5 ℃蒸汽灭菌柜中灭菌30 分钟，物品取出时切勿赶忙置冷处，以免急速冷却灭菌物品内蒸汽凝造成负压，易致染菌，应置烘箱烘干。 5.3培养基、试剂 5.3.1营养琼脂培养基 称取本品36克，加1升蒸馏水，加热溶解后，按需要进行分装，经121℃15分钟灭菌备用。 5.3.2虎红培养基 称本品30克，加1升蒸馏水，加热溶解，分装，高压灭菌116℃20分钟。 5.3.3胆盐乳糖培养菌（BL） 称本品36克，加1升蒸馏水，加热溶解，分装，高压灭菌116℃20分钟。 5.3.4曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB） 称本品42克，加1升蒸馏水，加热溶解，分装，高压灭菌116℃20分钟。 5.3.5生理盐水 称取9 g 氯化钠，加水1000 ml 溶解，分装后于121℃±0.5℃湿热灭菌30分钟，供作稀释剂用。 5.3.6 75%酒精棉 量取无水乙醇75ml，加水稀释至100ml，摇匀，将脱脂棉与75%酒精混合即得。

微生物限度检查办法验证方法

精心整理 微生物限度检查方法验证方案 1.目的： 为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。 2.3. 4.0.22um 121营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL ）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG ）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时内，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15 min ，在3周内使用。 4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml ）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min ，在3周内使用。

4.4.2 试验菌的制备和稀释： 4.4.2.1细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液： 4.4 4.4 4.4 4.4.2.2控制菌检查方法验证用菌液： 1ml 含菌10 3g单 45℃pH7.0 液。 3 4.4.4.2试验组： 4.4.4.2.1 平皿法：分1：20的供试液1ml和试验菌液（含菌50～100CFU）1ml，注入同一直径90mm的灭菌平皿中，每株试验菌平行制备2个平皿。 4.4 4.4

4.4.4.4.1 平皿法：取1：20供试液1ml，注入直径90mm的灭菌平皿中，每种培养基平行制备2个平皿。 4.4 4.4.4.5稀释剂对照组：若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心等特殊处理时，需增加稀释剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。 4.4 养48 培养72 稀释剂对照组回收率＝ 结果判定：在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的回收率应均不低于％。试 菌回收率低于70％，则应采用薄膜过滤法、培养基稀释法、离心沉淀集菌法、中和法等方法或联合使用上述方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法学验证。 4.4.4.11细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证结果：

无菌检验室、微生物限度检验室、阳性对照室验证方案

无菌检验室微生物限度检验室 阳性对照检验室黑曲霉对照检验室 验证方案 上善医疗器械 2011年月 目录 １.验证的目的 ２.验证小组成员 ３.验证小组分工 ４.验证依据 ５.标准容 ６.检验室的自净器和超净台安装确认 7.自净器和超净台的运行确认 8.洁净度的测定 9.验证结果及评价： 10.责任 1．验证的目的 1.1检查并确认检验室的自净器和超净台的安装符合设计要求。 1.2检测并确认检验室的自净器和超净台的运行性能应能达到检验要求及验证标准。 1.3洁净度测试,确认检验室能达到规定的洁净度。

3验证小组分工： 3.1组长：负责审核验证方案是否可行。 3.2副组长：负责组织实施验证、审核测试结果、评价及结论，负责验证报告的会签与批准。 3.3组员：负责无菌检验室、微生物检验室、阳性对照检验室、黑曲霉对照检验室的验证过程；提供监测结果。 3.4组员：负责无菌室正常管理。 4.验证依据： GB—T16294—1996 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法 YY0033-2000 无菌医疗器具生产管理规 6．检验室的自净器和超净台安装确认 6.1部件安装确认

6.2高效过滤器的检漏测试 采用尘埃粒子计数器对高效过滤器进行检漏测试，采样头离过滤器距离约2cm，沿过滤器出风侧及边框来回扫描。 检漏测试结果记录在自净器和超净台运行确认记录上。 7．自净器和超净台的运行确认 7.1风速测定 采用风速仪贴近高效过滤器出风口测定，一般测定4个点，求出平均风速。 超净台测定8个点，求平均风速。 7.2压差测定 采用微压表测定 7.3温度、相对湿度测定 采用温湿度记录仪测定 7.4结果记录如下：

微生物限度检测方法验证操作规程(2015年版)

微生物限度检测方法验证操作规程 1 目的 确认所采用的方法适合于该产品的微生物限度检测。 2 依据 《中国药典》2015版。 3 范围 所有需进行微生物限度检测的产品。 4 责任 4.1验证小组负责检验方法验证/确认方案的起草、验证/确认方案的实施。 4.2验证委员会负责验证/确认方案的审批，验证/确认结论的审核。 5 程序 5.1 由验证小组提出验证申请，验证方案编制完成后，填写《确认和验证方案审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证方案编制人对验证小组其余人员进行培训后，方可按验证方案试验。 5.2 试验完成后及时编制验证报告，并填写《验证报告审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证报告结论才可实施。 6 内容 6.1 概述 通过验证以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定及控制菌的检查。根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方案进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行产品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。 6.2 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法的验证 6.2.1 验证用菌株

铜绿假单胞菌[CMCC（B）10 104] 金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003] 枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501] 黑曲霉[CMCC（F）98 003] 白色念珠菌[CMCC（F）98 001] 6.2.2 验证用菌液制备 6.2.2.1接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌至胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养18～24小时。取上述培养物各1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液或pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液，备用。 6.2.2.2 接种白色念珠菌至沙氏葡萄糖液体培养基中，于20～25℃培养2～3天。取上述培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液或pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液，备用。 6.2.2.3接种黑曲霉至沙氏葡萄糖琼脂培养基上，于20～25℃培养5～7天，加入含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的孢子悬液，备用。 6.2.3 供试液的制备 6.2.3.1 水溶性供试试品 取供试品，用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1：10供试液。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。 6.2.3.2 水不溶性非油脂类供试品 取供试品，用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1：10供试液。分散力较差的供试品，可在稀释液中加入表面活性剂如0.1﹪的聚山梨酯80，使供试品分散均匀。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用一稀释液将

化妆品微生物限度记录

化妆品微生物限度记录 化妆品微生物限度测定记录编号 REC-QC-HZP001-00 页码第1页共2页产品名称检验依据 SOP-QC-HZP002-00 批号规格检测日期年月日序号操作指令操作记录 称取样品10g，加入90ml 稀释液名称稀释液，混旋，充分溶解，1. -1-1作为10供试液，取10天平型号样品供试液1ml至灭菌试管准备中，加入9ml灭菌生理盐样品称重 g -2水，作为10，同样递增-3稀释级数稀释至10 计数阴性 -1-2-3取3个稀释级的供试液各10 10 10 结果对照 1ml，注入12个平皿中。 菌落 2. 每个稀释级加4只平皿，总数1 菌落总其中2只注入熔化的营养数、霉琼脂培养基，2只注入熔菌落菌酵母化的虎红培养基，另取2总数2 菌检测只平皿作阴性对照。细菌霉菌1 于36?培养48小时，霉菌在25-28?，培养72 霉菌2 小时(取出计数 细菌选取平均菌落数在 30-300之间的稀释级，霉菌落总数(个/g) 3.结果菌选取平均菌落数在 30-100之间的稀释级报霉菌酵母菌总数(个/g) 告 培养及试验供试品结果 双倍浓度乳糖胆盐培养双倍乳糖胆盐基44?培养24h-48h，如培养基培养后产酸产气，取上述伊红美蓝 4. 培养液划线接种伊红美琼脂平板粪大肠蓝琼脂平板，36?培养

菌群 24h，如有典型菌落，挑革兰氏染色 取典型菌落进行革兰氏 染色镜检，并做靛基质试靛基质试验 验 结论 化妆品微生物限度测定记录编号 REC-QC-HZP001-00 页码第2页共2页产品名称检验依据 SOP-QC-HZP002-00 批号规格检测日期年月日序号操作指令操作记录 培养及试验供试品结果取供试液10ml接种 90ml SCDLP中36?1?SCDLP 增菌培养18-24小时。 十六烷基三取培养液划线接种十六甲基溴化铵烷基三甲基溴化铵琼脂 平板36?1?培养5. 革兰染色 18-24h，如有可疑菌落，铜绿假进行染色镜检。革兰染单胞菌氧化酶试验色为阴性菌时进行氧化 酶试验及下面的生化试生化试验1，2 验:1.绿脓菌素试验， 2.硝酸盐产气试验，生化试验3，4 3.42?生长试验， 4.明胶液化试验结论 血琼脂 取供试液10ml接种 BP平板 90mlSCDLP中 36?增菌 培养18-24小时。取增 革兰氏染色 6.金黄菌液划线接种血琼脂平 色葡萄板或Baird-Parker平板甘露醇发酵球菌 36?培养24h,48h，挑试验取可疑菌落进行革兰氏血浆凝固酶染色甘露醇发酵试验和试验血浆凝固酶试验结论

微生物限度检查方法验证方案

微生物限度检查方法验证方案 1.目的： 为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。 验证过程应严格按照本方案规定的容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准 2.围： 本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。 3.规性引用文件： 根据《中国药典》2010年版二部附录ⅪJ 微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。 4.验证实施： 4.4.1 试验前的准备: 4.4.1.1 试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、 滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎 好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30 min，在3天使用。 4.4.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫 瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂 培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制 说明，用纯化水配制、分装后，在2小时，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭 菌15 min，在3周使用。 4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期的试剂，按照 相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、

微生物限度检查室沉降菌检查标准操作程序

微生物限度检查室沉降菌检查标准操作程序 一、目的：为规定微生物限度检查室沉降菌测试方法和要求，特制定本操作规程。 二、适用范围：适用于公司微生物限度检查室沉降菌测试。 三、责任者：质量监督员、质量检验人员。 四、正文： 2 仪器和设备： a、高压消毒锅 b、恒温培养箱 c、培养皿（φ90mm×15mm） d、培养基（营养琼脂培养基） 3 测试方法： 3.1 将已制备好的培养皿按要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露 0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。 3.2 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中 30~35℃培养 48h。 3.3 每批培养基可选定 3 只培养皿作对照试验，检验培养基本身是否污 染。 3.4 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用 5~10 放大镜 检查，有否遗漏，若培养皿上有 2 个或 2 个以上的菌落重叠，可分 辨时，仍以 2 个或 2 个以上菌落计数。 3.5 注意事项： 3.5.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 3.5.2 采取一切措施防止人为对样品的污染。 3.5.3 对培养基培养条件及其他参数作详细的记录。 3.5.4 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的 应剔除。 4测试规则： 4.1 测试状态： 4.1.1 沉降菌测试前，微生物限度检查室的温湿度须达到规定的要求；换

气次数，空气流速必须控制在规定值内。 4.1.2 测试前，微生物限度检查室应已经消毒过。 4.1.3 测试状态为静态测试，并在报告中注明测试状态。 4.2 测试人员： 4.2.1 测试人员必须穿戴符合洁净室级别的工作服。 4.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。 4.3 测试时间：对单向流，如 100 级净化工作台，测试应在净化空调系 统正常运行不少于10min 后开始。 采样点布置见“质检微生物限度检查室悬浮粒子测试操作规程”。 4.4.1 采样点的布置： 采样点的位置可以同悬浮粒子测试点。 4.4.1.1 工作区采样点的位置离地 0.8m~1.5m 左右（略高于工作面）。 4.4.1.2 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。 4.5 记录： 测试报告中应记录房间温度、相对湿度及测试状态。 4.6 结果计算： 4.6.1 用计算方法得出各个培养皿的菌落数。 4.6.2 平均菌落数的计算 平均菌落数M= M1+M2+ +Mn N 式中：M：平均菌落数； M1：1 号培养皿菌落数； M2：2 号培养皿菌落数； Mn：n 号培养皿菌落数； N：培养皿总数 5 结果评定： 用平均菌落数判断微生物限度检查空气中的微生物。 5.1 微生物限度检查室内的菌落数必须低于所选定的评定标准。 5.2 若某区域的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域进行消毒，然后采样两次，测试结果均须合格。

微生物检验操作规程

微生物检验操作规程 1.0目的 建立微生物检验标准操作规程，保证检验操作规范化。 2.0适用范围 适用于本公司相关的微生物检验活动的全过程。 3.0职责 3.1 微生物检验员负责微生物检验的全过程； 3.2 QC主管负责监督检查本规程的有效实施。 4.0作业内容 4.1无菌操作要求 4.1.1 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 4.1.2专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 4.1.3 接种样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4.1.4 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 4.1.5 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 4.1.6 接种样品、转种细菌必须在酒精灯旁操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞（即硅氟胶塞）都要通过火焰消毒。

4.1.7 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处。 4.1.8 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。4.2无菌间使用要求 4.2.1 无菌间内应保持清洁，工作后用消毒溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 4.2.2无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4.2.3处理和接种样品时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 4.3消毒灭菌要求 4.3.1灭菌前准备 （1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。 （2）装培养基的三角瓶，内容物不应超过总体积的2/3（例如500mL的三角瓶最好装300～350mL培养基，以防再次加热融化时爆沸）。 （3）无菌室内使用的毛巾、脱脂棉球用纸包裹，进行湿热灭菌。 4.3.2装放 （1）干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。 （2）大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。

微生物限度检查记录 版

表：微生物限度检查记录（通用） 三、大肠埃希菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）

微生物限度检查记录 （30～35℃，3～5天） 20℃～25℃，5～7天） 沙氏葡萄糖琼脂培养基（配制批号：） 三、控制菌检查（30-35℃）

表： 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：） （30℃～35℃） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：） 五、耐胆盐革兰阴性菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：），紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）

表： （含药材原粉的片剂） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、麦康凯液体培养基（配制批号： ）麦康凯琼脂培养基（配制批号： ） （30℃～35℃） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、RV 沙门增菌液体培养基（配制批号： ），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号： ）、三糖铁琼脂（配制批号： ） 五、耐胆盐革兰阴性菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号： ），紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号： ）

表：微生物限度检查记录（蛇胆川贝液） 三、大肠埃希菌检查 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：）

微生物限度检测

微生物限度检查法 录入时间:2006-7-6 15:25:25 来源：其它 微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。 供试品应随机抽样。一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。 检查的全过程,均应严格遵守无菌操作，严防再污染。 除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25～28℃，控制菌培养温度为36℃±1℃。 检验结果的报告以1g、1ml或10cm2为单位。 培养基及其制备方法 除另有规定外，培养基制备的灭菌条件为121℃20分钟。 1.营养琼脂培养基与营养肉汤培养基见无菌检查法（附录ⅪH）。 2.玫瑰红钠琼脂培养基 胨5g 玫瑰红钠0.0133g 葡萄糖10g 琼脂15～20g 磷酸二氢钾1g 水1000ml 硫酸镁0.5g 除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠，分装，灭菌。 3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD) 胨10g 琼脂15～20g 酵母浸出粉5g 水1000ml 葡萄糖20g 除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖，分装，灭菌。 4.胆盐乳糖培养基(BL) 胨20g 磷酸二氢钾 1.3g 乳糖5g 牛胆盐（或去氧胆酸钠0.5g）2g 氯化钠5g

磷酸氢二钾 4.0g 除乳糖、牛胆盐外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.4±0.2，煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，灭菌。 5.曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB) 营养琼脂培养基100ml 曙红钠指示液2ml 20％乳糖溶液5ml 亚甲蓝指示液 1.3～1.6ml 取营养琼脂培养基，加热溶化后，冷至60℃，按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液，摇匀，倾注平皿。 6.麦康凯琼脂培养基(MacC) 胨20g 1%中性红指示液3ml 乳糖10g 琼脂15～20g 牛胆盐5g 水1000ml 氯化钠5g 除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，冷至约60℃，倾注平皿。 7.4-甲基伞形酮葡糖苷酸(4-Methylumbelliferyl-β-D-Glucuronide，MUG)培养基 胨10g 磷酸二氢钾0.9g 硫酸铵5g 磷酸氢二钠(无水) 6.2g 酸锰0.5mg 亚硫酸钠40mg 硫酸锌0.5mg 去氧胆酸钠1g 硫酸镁0.1g MUG 75mg 氯化钠10g

无菌检查室微生物限度检查室的管理规定

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1. 明确无菌检查室、微生物限度检查室的要求和规定，确保检验结果的准确性。 2.范围： 适用于本厂质监科无菌检查室、微生物限度检查室的操作。 3.责任： 质监科化验室有关人员。 4.内容：

4.1本厂无菌检查室为1万级、局部（净化操作台）100级的洁净室；微生物限度检查室为1 万级的洁净室。 4.2室内严禁放置杂物，无关人员严禁入内。 4.3室内应保持整洁，定期用甲醛熏蒸消毒（每月一次）；使用前用0.1%新洁尔灭溶液擦拭消 毒净化工作台。 4.4在操作前，对菌检室、缓冲间及净化工作台进行紫外线消毒30分钟，并打 开净化工作台的层流净化装置。操作完毕及时清理，擦净台面,再开紫外灯 照射30分钟。 4.5化验员进入无菌室，必须按规定程序进行更衣、戴帽、换鞋等；操作前用0.1%新洁尔灭或 75%酒精进行手消毒。 4.6吸取菌液时，切勿直接用口接触吸管。吸完菌液的吸管放入5%石炭酸消毒液中。 4.7接种针在每次使用前后，必须通过火焰烧红灭菌，冷却后方可接种培养物。 4.8所有带菌的实验用品，须经有效的消毒灭菌方法处理后，再洗刷，严禁污染下水道。 第2页/共2页 4.9如有菌液污染桌面或地面，应立即用消毒水彻底消毒后，再作处理。

4.10无菌室每月检查杂菌数（在室内打开营养琼脂培养皿30分钟，经37℃培养48小时），10000 级平均菌数不得过3个/皿，100级平均菌落数不得过 1个/皿，如超过应进行清洁消毒。 4.11无菌检查室和微生物限度检查室的清洁卫生均按“1万级洁净区的清洁卫生操作规程”进 行。 欢迎下载阅读！

2015年版微生物限度检验操作规程完整

**文件 目的建立微生物限度检查操作规程，规操作，保证结果的准确性。 围成品、辅料、包装袋及纯化水的检验。 责任品管部微生物限度检验人员 容 概述：本检验操作规程依据中国药典2015年版四部《通则1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》和《通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法》进行检查。 微生物计数法 一、计数方法 1、微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 2、计数方法本法包括平皿法、薄膜过滤法。 3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。 4、菌种及菌液的制备 4.1试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋），并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验见表1。 4.2菌液制备按表1规定培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢

子悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时使用；若保存在2-8℃，可在24小时使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期使用。 4.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行对照试验，阴性对照试验应无菌生长。 4.4培养基适用性检查按照表1规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置规定的条件下培养。每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2围，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。 5、计数方法适用性试验 5.1供试品制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采用适宜的方法制备供试液。制备时若需加温应加热均匀且温度不得超过45℃。供试液从制备到加入检验用培养基不得超过1小时。

微生物限度检验方法验证记录

微生物限度检验方法验证记录 1.适用范围 本方案适用于本公司各品种微生物限度检验方法的验证。 2.目的 通过验证确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，确保该产品微生物限度检查结果的正确 性。 3.职责 项目责任人:负责验证方案的起草及具体实施。 验证管理员:负责验证工作的组织、协调及管理。 QA现场监控员:负责验证实施过程中的监督检查，取样，确保结果的可靠性。QC负责人:负责验证方案中检验方法的审核及按照规定的取样计划对标准检验操作程序的准确执行，负责 组织实施。 QC检验员:负责验证方案的起草与参与实施，并对所测数据准确性负责。质量部经理:负责验证方案及报告的审核和批准。 4. 概述 通过验证以确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查。根据样品特性制订检验方法和检验条件， 按制定的方法进行实验，根据实验结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行药品的 微生物限度检查;若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的

验证标准。 5.检查和确认 5.1微生物限度检验室，洁净级别1万级;超净工作台，局部100级(确认方法: 审阅相关的验证资料)。 微生物限度检验室(洁净级别1万级)验证报告 超净工作台(洁净级别100级)验证报告 检查结论:验证资料完整，符合相应洁净度要求且在有效期内。检查人: 日期: 5.2与验证相关的文件(确认方法:检索)。 微生物限度检查法操作规程和检定菌传代操作规程 净化工作台使用操作规程 微生物限度检验室清洁消毒规程 培养箱标准操作规程 检查结论:验证所需资料齐全、完整，符合验证要求。 检查人: 日期: 5.3检验用仪器设备(确认方法:检查、核对)。 符合3Q(IQ、OQ、PQ)要求。 5.3.1 培养箱 型号: HP400S 生产厂家: 武汉瑞华仪器设备有限公司 校验有效期至: 年月日 设定温度: 32.5? 型号: PYX-280S-A 生产厂家: KELI 科力仪器 校验有效期至: 年月日

微生物限度检查室管理规程 (2)

目的:规范微生物实验室管理,确保微生物检验结果的准确性。 范围:适用于微生物实验室。 职责:微生物检测人员及检验室负责人对此规程执行负责。 内容: 1.微生物实验室包括微生物限度检查室、阳性菌接种室及抗生素微生物检定室。１、1 微生物实验室结构应坚固、严密、防尘、光线明亮,地面应光滑,并应有缓冲间,设双层传递窗传递物件。 1、2 室内温度1８～26℃,相对湿度为45～65%,室内必须保持整洁。 2、微生物实验室洁净度要求: 2、1微生物实验室洁净度应符合相应的医药洁净室设计规范与验收要求。 2、1、1 操作室洁净度应符合洁净度C级要求。 2、1、2 操作台洁净度应符合洁净度A级要求。 3.微生物实验室的使用: 3.１微生物实验室由微生物检验员管理及使用,其她人员须经主管人员批准后方可进入与使用。 3、2 微生物实验室的人员需经过相关的岗位培训,必要时定期进行再培训。 ３、３微生物实验室操作人员应严格遵守洁净工作区域净化控制规定。 3.3、1 保持个人卫生,不得佩带饰物,不得涂抹化妆品。 3、3、2 室内应穿戴专用衣帽、口罩及鞋子。 3、3、3 手部应进行２次消毒,宜带无菌手套。 3、3.4 在操作中,操作台面应垫上消毒布巾,以防操作中有滴落液污染台面。３、3、5 人员进入微生物限度检查室、阳性对照室或抗生素微生物检定室前,在一更脱外衣、换鞋后,进入一更缓冲间洗手,并消毒后,进入二更自上而下依次换上洁净帽、口罩、洁净服、洁净鞋后,进入二更缓冲间,手经再次用消毒液消毒后方可进入微生物限度检查室或阳性对照室,实验操作前须带上无菌手套。 ３、４微生物实验室使用前应确保操作室的洁净程度。 3、4.１微生物实验室的清洁分为一般清洁及彻底清洁,其具体的清洁部位、方式方法、频率见下表所示:

微生物检验操作规程

微生物检验操作规程 1.目的 为规范微生物检验员的工作流程及检验方法，确保检测数据的准确性及生产环境的卫生条件符和前提方案的要求，特制订本规程。 2.职责 微生物检验员负责按本规程进行微生物检验及记录的填写整理。 3.商业无菌检测 3.1抽样方法 以《成品留样管理规定》商业无菌检测留样。 3.2检测范围 公司生产各品类产品(发酵核桃乳除外)。 3.3检测方法 GB4789.26-2013 《食品微生物学检验商业无菌检验》。 3.3.1操作 样品准备：每个批次取3听样品，在包装容器表面用防水油性记号笔标注样品编号，观察并记录时否有泄露、包装是否有小孔，锈蚀，压痕、膨胀及其它异常情况。 称重：准备好的样品每个批次取2听称重，精确到1g，并记录。 保温：准备好的样品每个批次取剩下的1听置于2℃~5℃冰箱保存作为对照，称重后样品于36±1℃的恒温箱中保温10天，每日观察，保温期间如有胖听、泄漏及时剔除并开罐检查。

保温结束后，再次称重并记录，比较保温前后有无变化。如变轻，表明样品发生泄漏，并记录。将所有包装物置于室温直至开启检查。 开启：如有膨胀的样品，将样品先置于2℃~5℃冰箱冷藏数小时后开启。 如有膨胀样品用冷水和洗涤剂清洗待检样品光滑面，水冲洗后用无菌纱布擦干。以含4%碘的乙醇溶液浸泡消毒光滑面15min后用无菌纱布擦干，用酒精灯将表面残余的碘乙醇溶液全部燃烧完。 在百级洁净实验室内将保温后样品摇匀，用无菌镊子开启，开罐时不得伤及卷边结构，在开启下一个样品前应将镊子在火焰下灼烧灭菌。 留样：开启后用灭菌移液器无菌取出至少30ml至灭菌容器中，做好标记了，保存2-5℃冰箱中，有需要可用于进一步实验，待该批样品得出检验结论后可弃去。 感官检查：开启后，将样品内容物倒入透明玻璃瓶中，观察其组织形态，色泽和气味有无腐败变质迹象并记录。 pH测定：被测液温度应调到20±2℃，与对照样品比较是否有显著差异，pH 相差0.5及以上为显著差异。 涂片：用无菌接种环挑取样液涂于载玻片上，待干后用酒精灯火焰固定，然后向载玻片上滴一滴结晶紫，覆盖固定的料液1min，用蒸馏水小流沿载玻片一端冲洗，待冲洗后水不为紫色为止，自然干燥。 镜检：至少观察5个视野，记录菌体形态特征及每个视野的菌数，与同批冷藏对照样比较，判断是否有明显微生物增殖现象，菌数有百倍或百倍以上增长判为明显增殖。 3.3.2判定

微生物限度检验

微生物限度检验 1概述：微生物限度检查方法包括直接接种法和薄膜过滤法。饮用水，纯化水，注射用水、及其他完全溶解并能通过滤膜的样品，采用薄膜过滤法进行检查；精制卡介菌多糖核酸等其他不完全溶解或无法通过滤膜的样品，采用直接接种法进行检查。 2设备、仪器及用具 2.1 设备净化工作台、生物安全柜、恒温培养箱(30～35℃)、霉菌培养箱(23～28℃)，恒温水浴锅、电热恒温鼓风干燥箱(180℃～300℃)、电冰箱、高压蒸汽灭菌器、365nm紫外灯、显微镜、集菌仪、薄膜过滤装置等。 2.2 用具 2.2.1 玻璃器皿用前应洗涤干净,无残留抗菌物质。于180℃干热灭菌2小时以上或250℃干热灭菌30分钟以上（仅适用于玻璃器皿或不锈钢用具），或高压蒸汽121℃湿热灭菌30min,50～60℃烘干备用。 2.2.3 无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套,用牛皮纸包严）、移液管、试管、接种环、孔径0.45UM且直径50的微孔滤膜灭菌,备用。也可用一次性无菌口罩、手套。 2.2.3 酒精灯、乙醇棉球、打火机、实验记录纸等。 2.2.4经灭菌处理的用具存放时间不超过48小时，否则需重新灭菌后方可使用。 3稀释液 PH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液。 4培养基及试液 4.1 细菌检查用酪蛋白大豆营养琼脂培养基。 4.2 霉菌、酵母菌检查用沙氏培养基、（玫魂红钠琼脂培养基）、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD）。 4.3 大肠埃希菌检查用胆盐乳糖(BL)培养基、MUG培养基、营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基、靛基质试液、磷酸盐葡萄糖胨水培养基、枸橼酸盐培养基。 4.4 大肠菌群检查用乳糖胆盐发酵培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基。 4.5稀释液 0.9%氯化钠溶液或PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 4.6 培养基制备应注意: 4.6.1 配制的培养基应测定PH值，确保灭菌后培养基的PH值符合相关培养基的要求。并且，不能有沉淀,如有沉淀,应于溶化后趁热过滤,灭菌后使用。灭菌条件为：121℃蒸汽灭菌20分钟。 4.6.2 培养基的分装量不得超过容器的2/3,以免灭菌时溢出。包装时塞子必须塞紧,免松动或脱落造成染菌。 4.6.3 培养基配制后应在2小时内灭菌,避免细菌繁殖。

微生物限度检查操作流程

微生物限度检查工作流程 实验前： 1.对实验器皿的准备：对玻璃器皿进行清洗，将洗净干燥的平皿、乳钵、刻度吸管等用牛皮纸包裹，放入鼓风干燥箱中于160℃干热灭菌2小时或放入高压蒸汽灭菌柜于121℃湿热灭菌30分钟，备用。 2.对实验用培养基及稀释液的准备：按规定比例配制实验所需的各种培养基及稀释液，包好，放入高压蒸汽灭菌柜于121℃湿热灭菌30分钟，备用。 3.洁净服的准备：将当天实验所用洁净服放入高压蒸汽灭菌柜于121℃湿热灭菌30分钟，备用。 实验中： 1.将实验所需器皿、培养基、洁净服、样品、稀释液放入相应的传递窗中，打开紫外灯，照射30分钟。 2.打开洁净室的通风设备1小时以上，观察洁净室各个规定区域的压差是否符合相应规定范围，若不符合，则因通知设备部门及时进行调整。 3.进入洁净室，换上工作鞋，用洗手液洗手，烘干，换上洁净服，戴上口罩、手套，并与喷手器下用75%乙醇或0.1%新洁尔灭对双手进行消毒。 4.进入万级洁净走廊，观察各个规定房间的温度、湿度、压差是否符合规定，并与传递窗中将经紫外灯照射后的样品、器皿稀释液及培养基，放入相应的实验室（如微生物限度检查室或无菌检查室）。并将培养基的温度控制在45℃以下（若培养基出现凝固现象时，因微波炉加热融化；若温度太高时，则因用纯化水降温至不烫手背宜。 5.打开超净工作台的紫外灯，照射30分钟，然后再打开超净工作台的通风设备。用75%乙醇或0.1%新洁尔灭对实验所用工作台面进行擦拭消毒（消毒时应遵循由里到外，由上到下，由洁净要求高到洁净要求低的原则）。 6.按照适宜的次序于超净工作台内摆放好稀释液、天平、消毒液、集菌仪、剪刀、镊子等物品，用75%酒精棉球进行消毒，将样品内包装表面用碘酒棉球以及75%酒精棉球依次进行消毒。将营养琼脂平板与超净工作台的做、中、右各置一个（平板需经下预培养48小时且无菌生长），开盖暴露30min，测定的沉降菌每平板不得超过1cfu，则符合百级超净工作台的沉降菌标准（注：在洁净工作台进行操作时，为防止污染，应用酒精棉球对双手反复消毒）。 7.样品处理（以采用离心薄膜过滤法为例）：用天平称取规定量的样品，置于乳钵中，碾碎，少量几次加入规定量（用灭好菌的两头高量取）的稀释液，研磨均匀，以制备供试液。8.细菌的检查：用灭菌吸管吸取规定量的供试液于离心管中，500转/秒，离心3分钟。离心后用注射器吸取规定量的上清液于集菌仪中（集菌仪中的滤膜应事先用少量的蛋白胨溶液进行润洗），再用规定量的蛋白胨溶液进行反复冲洗（每次冲洗量不得超过100ml，每张滤膜的总的冲洗量不得超过1000ml，且冲洗过程中应该保持滤膜的完整性）。并用等量的蛋白胨溶液制备阴性对照的滤膜。 8.打开集菌仪，用镊子夹取滤膜于在30~35℃预培养48小时且无菌生长的营养琼脂平板上，切忌滤膜与琼脂间有气泡。并且制备2个只加入15~20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂的平板作空白对照。 9.霉菌及酵母菌的检查:取相应稀释级的供试液1ml，加入五个无菌平板中，每个0.2ml，注入15~20ml温度不超过45℃的溶化的玫瑰红钠琼脂培养基，摇匀。

微生物限度检查操作规程中国药典四部通则样本

—、范围：本标准规定了微生物限度的检查方法和操作要求；适用于检品 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、控制菌的检查。 二、 引用标准：《中国药典》( 通则1105-1106) 三、 目录1.微生物限度标准 2.设备.仪器及用具 3?消毒液、稀释剂.试液及培养基 4. 检查总则(通则1105:非无菌产品微生物限度检查：微生 物计数法，通则1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法) 5. 微生物计数法检查 6. 控制菌检查法 7. 实验技术 &附件 1. 微生物限度标准 非无菌药用原料及辅料的微生物限度标准 *未做统一规定。 L1成品微生物限度标准

(1).” 一”为不得检出。 (2).目测霉变者以不合格论。 (3).”无”为标准依据或无相应规定。 1.2工艺用水微生物限度标准 1.3内包装材料微生物限度标准 说明：1?”一”为每100 cm2中不得检出。2.目测霉变者以不合格论。3.”无”为标准依据或无相应规定。 2.设施、仪器及用具

2.1、设施： 2丄1?微生物限度检查室及相关设施：微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台直及环境应定期进行监测。 2.12其它设备：高压蒸汽灭菌器；细菌培养箱（30?35?）;霉菌培养箱（25-280 ；电炉（或其它适宜的加热装置）；恒温水浴；电热干燥箱（250~300匕）；电冰箱。生化试剂储存箱。 2.2仪器及器mi 2.2.1.菌落计数器；显微镜（1500X）;电子天平或药物天平（感量O.lg）; pH系列比色计。 222?玻璃器皿：锥形瓶（250?300ml,内装玻璃珠若干）.研钵（玻璃或陶瓷制,f 10?12cm）、培养皿（f 9cm）.量筒（100ml）.试管（18x 180mm）及塞、吸管（lml分度0.01, 10ml分度0.1）、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸（带盖）。 2.2.3新购的玻璃器皿的清洁：先用流水冲洗，浸泡于1%?2%盐酸（工业用）液中约2?6小时，除去游离碱质，再用流水冲洗。用于化学分析的玻璃仪器，需用重洛酸钾清洁液浸泡数分钟后，再用流水冲洗，最后以纯化水涮洗2?3次，晾干备用。 2.3用过的玻璃器皿： 231未被病原微生物污染的器皿：可随时洗涤。用清水冲洗（或浸泡），除容量仪器外， 可用毛刷和肥皂粉，内外刷洗，再用清水涮洗干净，晾干备 用。容量仪器宜用清洁液浸泡或涮洗，再用流水冲洗，最后以纯化水涮洗 2~3 次。

微生物限度检查室管理规程

目的：规范微生物实验室管理，确保微生物检验结果的准确性。 范围：适用于微生物实验室。 职责：微生物检测人员及检验室负责人对此规程执行负责。 内容： 1.微生物实验室包括微生物限度检查室、阳性菌接种室及抗生素微生物检定室。 微生物实验室结构应坚固、严密、防尘、光线明亮，地面应光滑，并应有缓冲间，设双层传递窗传递物件。 室内温度18～26℃，相对湿度为45～65%，室内必须保持整洁。 2.微生物实验室洁净度要求： 微生物实验室洁净度应符合相应的医药洁净室设计规范和验收要求。 操作室洁净度应符合洁净度C级要求。 操作台洁净度应符合洁净度A级要求。 3.微生物实验室的使用： 微生物实验室由微生物检验员管理及使用,其他人员须经主管人员批准后方可进入和使用。 微生物实验室的人员需经过相关的岗位培训，必要时定期进行再培训。 微生物实验室操作人员应严格遵守洁净工作区域净化控制规定。 保持个人卫生，不得佩带饰物，不得涂抹化妆品。 室内应穿戴专用衣帽、口罩及鞋子。 手部应进行2次消毒，宜带无菌手套。 在操作中，操作台面应垫上消毒布巾，以防操作中有滴落液污染台面。 人员进入微生物限度检查室、阳性对照室或抗生素微生物检定室前，在一更脱外衣、换鞋后，进入一更缓冲间洗手，并消毒后，进入二更自上而下依次换上洁净帽、口罩、洁净服、洁净鞋后，进入二更缓冲间，手经再次用消毒液消毒后方可进入微生物限度检查室或阳性对照室，实验操作前须带上无菌手套。 微生物实验室使用前应确保操作室的洁净程度。 微生物实验室的清洁分为一般清洁及彻底清洁，其具体的清洁部位、方式方法、

频率见下表所示： 微生物实验室常用消毒剂及其配制 使用前30分钟应先开启操作台及操作室的净化和消毒系统，关闭消毒系统后10～15分钟再进入操作室；操作结束后，开启消毒系统30分钟后再关闭消毒系统和净化系统。 试验开始前应做好相关试验的准备工作，确保在试验过程中不离开操作室。 进入操作室的任何东西外包装均需消毒处理。 物料进入微生物实验室以前，脱去外包装或者用酒精棉球擦拭后，放置于传递窗中。