非洲猪瘟实验室诊断技术
万方数据
非洲猪瘟实验室诊断技术
作者：刘峰
作者单位：安徽省金寨县南溪镇畜牧兽医站,安徽,金寨,237361
刊名：
畜牧与饲料科学
英文刊名：ANIMAL HUSBANDRY AND FEED SCIENCE
年，卷(期)：2010,31(3)
被引用次数：5次
参考文献(4条)
1.王华;王君玮;徐天刚非洲猪瘟流行病学和诊断方法的研究进展[期刊论文]-中国兽医科学 2008(06)
2.李倩;姚淑霞非洲猪瘟病毒VP73蛋白的B细胞表位预测[期刊论文]-安徽农业科学 2008(18)
3.田金宁;张亮;游进猪常见传染病的诊断[期刊论文]-养殖技术顾问 2010(03)
4.马洁莹非洲猪瘟[期刊论文]-国外畜牧学-猪与禽 2009(01)
本文读者也读过(9条)
1.林荣泉非洲猪瘟与猪瘟的鉴定及防控技术[期刊论文]-肉类工业2001(3)
2.赵刚非洲猪瘟流行动态[期刊论文]-现代畜牧兽医2010(5)
3.叶芬.蔡家利.YE Fen.CAI Jia-li猪瘟诊断方法的研究进展[期刊论文]-四川畜牧兽医2010,37(9)
4.朱红非洲猪瘟病毒P72蛋白单克隆抗体的制备及抗体检测方法的建立[学位论文]2007
5.王君玮.张维.王华.WangJunwei.Zhang Wei.Wang Hua非洲猪瘟病毒分子流行病学进展[期刊论文]-中国动物检疫2010,27(9)
6.杨林.赵德明.熊永忠猪瘟诊断技术的研究进展[期刊论文]-畜牧兽医科技信息2005(3)
7.钟霞.毛华明.邓卫东.Zhong Xia.Mao Huaming.Deng Weidong18S rRNA/rDNA为主的分子生物学技术在瘤胃原虫分类鉴定中的应用[期刊论文]-饲料工业2007,28(22)
8.朱小甫.李晓成.陈德坤.吴旭锦.张志.洪军.张燕霞猪瘟诊断技术研究进展[期刊论文]-中国动物检疫
2007,24(2)
9.杭军猪瘟的流行现状及其原因分析[期刊论文]-畜牧与饲料科学2010,31(8)
引证文献(5条)
1.冯海勇.薛海霞一起猪瘟诊治的体会[期刊论文]-畜牧与饲料科学 2010(8)
2.温肖会.魏文康.黄忠.吕殿红非洲猪瘟的研究进展[期刊论文]-广东农业科学 2010(10)
3.黄福军.李可启非洲猪瘟的研究进展[期刊论文]-中国猪业 2013(6)
4.杨小燕.刘建奎.戴爱玲.李晓华猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊断及病原特性分析[期刊论文]-安徽农业科学 2010(34)
5.杭军猪瘟的流行现状及其原因分析[期刊论文]-畜牧与饲料科学 2010(8)
本文链接：https://www.sodocs.net/doc/fc9060886.html,/Periodical_nmgxmkx201003092.aspx
结核病的实验室诊断方法及评价
耐多药结核病的实验室诊断条件：因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性， 1）需P2及以上实验室，目前我院实验室条件基本具备即将投入运行， 2）日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限，工作人员生物安全得不到保障，应定期予以更换。 耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。因此其基础是培养，只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。 1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准，是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准，是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化，其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。 2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多，抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。 3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。多种以PCR为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变，作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。这些方法具体包括：主要是DNA序列分析法，聚合链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP），另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明，检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变，但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷，检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。 结核病的实验室诊断方法及评价 (一)标本的采集 1．痰标本采集新发病人应在抗结核药物治疗前留取痰标本。治疗中的病人应停药2～3天后留取痰标本。病人于清晨漱口后，留取3～5ml合格的痰标本(深咳后吐出的黏液痰、脓样痰、干酪样痰、褐色血样痰或含少量新鲜血液的血痰)，遇到唾液或口永，应重新留取。至少采集3次。WHO推荐的采集容器为国际通用的螺旋盖痰瓶、可密封塑料盒或蜡纸盒。痰容器上应标明病人姓名、编号、检查项目和容器序号。 2.胃冲洗液幼儿不会吐痰，常将痰液咽下，故可用清晨空腹胃洗出液，直接涂片染色或进行结核杆菌培养，连续作三次可提高培养阳性率。胃液结核杆菌检出率以浸润性肺结核和干酪性肺炎为最高，其次为粟粒型肺结核。胃液、痰液或其他分泌物中结核杆菌检查，有时对诊断有决定性意义。 3.支气管肺泡灌洗和支气管冲洗支气管肺泡灌洗和支气管冲洗液至少5ml并以无菌容器盛装，以用于检验。 4.病灶组织或干酷块等先用组织研磨器磨碎后再行涂片。 5．尿液留全量夜尿，静置4或5小时后，弃上清液，取沉淀部分尿液10ml，3000rpm．离心30min，取沉渣涂片。 6.体液或脑脊液无菌操作收集体液或脑脊液，放置冰箱或室温24h，待薄膜形成后
非洲猪瘟检测实验室
非洲猪瘟检测实验室
非洲猪瘟实验室检测能力比对报名表市
非洲猪瘟实验室检测能力比对方案 为进一步做好非洲猪瘟检测工作，在全省开展非洲猪瘟实验室检测能力比对，具体工作由省动物疫病预防与控制中心组织实施。 一、参加比对实验室范围 报名参加非洲猪瘟检测能力比对的实验室。 二、比对项目和试验方法 非洲猪瘟病毒荧光PCR。 三、比对样品、试剂准备和发放 比对项目设置5份盲样，由省动物疫病预防与控制中心准备、分装和编号和发放。 比对试剂由各参加比对的实验室自行准备。 四、盲样发放 省动物疫病预防与控制中心6月15日前准备好盲样，各参加检测能力比对的实验室6月16日派专人持有效身份证明，第一次参加非洲猪瘟检测能力比对的实验室需同时提供实验室证明材料（CMA 证书或CNAS 证书复印件以及检测能力范围一览表），统一领取样品，并务必于12小时内抵达实验室。 五、结果报告与分析
各实验室在收到样品后2日内完成检测工作，并将检测结果填写在非洲猪瘟检测结果报告单，并加盖公章后扫描电子版6月18日16:00前发送至指定邮箱。同时，各实验室向省动物疫病预防与控制中心出具正式检测报告，并通过特快专递邮寄。 省动物疫病预防与控制中心6月23日完成检测结果比对分析，报省畜牧兽医局。 六、结果反馈 比对工作结束后，省畜牧兽医局通报实验室比对结果，并通报承担非洲猪瘟监测的实验室。 七、联系方式 1、样品领取 山东省动物疫病预防与控制中心 联系人：李玉杰 联系电话： 2、报送检测结果地址（邮箱） 山东省动物疫病预防与控制中心 联系人：孙圣福 电话： 邮箱：
非洲猪瘟检测结果报告单 试剂盒厂家及名称： 荧光定量PCR仪型号： 备注：检测结果填写“阳性”或“阴性” 检验人：校核人： 单位盖章
非洲猪瘟检测与诊断技术要点
非洲猪瘟检测与诊断技术要点 中国农业科学院上海兽医研究所 牵头编制 2019年9月
前言 非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，发病率和死亡率可达100%。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。 1921年，ASF最初发现于肯尼亚，上世纪五、六十年代在非洲、欧洲、南美洲流行。2018年8月初我国爆发非洲猪瘟首起疫情以来，该疫病已蔓延全国23个省，给我国生猪养殖业和国民经济带来巨大损失。由于ASFV感染机制复杂，目前世界范围内至今尚无有效预防用非洲猪瘟疫苗，因此早期发现、精准检测是控制该病传播和发生的关键。 本文参考了OIE、农业农村部和中国动物卫生与流行病学中心、中国动物疫病预防控制中心的相关文件和技术手册，结合我们的研究成果，从非洲猪瘟早期发现、现场排查、精准检测三个方面的技术要点编写而成，主要面向从事非洲猪瘟现场排查和检测的一线防疫人员，提供了简明实用的相关操作技术与方法，为非洲猪瘟现场排查与检测等相关工作提供参考。
编者： 牵头团队：上海兽医研究所猪呼吸道传染病团队 负责人：马志永 参加人：魏建超等 参加团队：哈尔滨兽医研究所猪烈性传染病创新团队负责人：仇华吉 参加人：罗玉子等 兰州兽医研究所外寄生虫与虫媒疫病团队 负责人：刘志杰 参加人：林密等 兰牧药研究所中兽医与临床团队 负责人：李建喜 参加人：崔东安
目录 一、概述 (1) 二、早期发现 (3) 三、现场排查 (5) （一）准备工作 (6) 1. 人员准备 (6) 2. 车辆准备 (6) 3. 物品准备（生物安全防护及采样所需物品） (6) （二）进出养殖场要求 (7) 1. 抵达养殖场 (7) 2．穿戴个人防护设备( 在清洁区) (8) 3. 离场前准备 (8) 4. 离场后 (9) 5. 消毒剂的选择 (9) （二）临床诊断 (9) 1.临床症状 (10) 2. 剖检病变 (11) 3. 鉴别诊断 (12) 4. 发现疑似病例的情况下应立即采取的行动 (14) （三）样品采集、包装与运输 (14) 1. 采样方法 (14) 2. 样品的记录、保存、包装和运送 (16) 3. 废弃物处理 (18) 四、实验室诊断与确诊 (18) 1．快速精准检测 (18) 2. 疫情确诊 (18) 附件一：非洲猪瘟防治技术规范 (20) 附件二:国家非洲猪瘟参考实验室、专业实验室和区域实验室名单 (24)
一、非洲猪瘟现场快速检测实验操作规程
一、非洲猪瘟现场快速检测实验操作规程 本规程推荐的检测程序、仪器设备和试剂等可作为非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法的一般性指南，用户可根据实验室需求选择仪器设备型号及耗材，优化最佳的检测程序。 1 样品处理 1.1试验材料：待检样品为采集的猪全血，非洲猪瘟病毒荧光定量PCR快速检测试剂盒（缓冲液B1和缓冲液B2）。 1.2 设备与材料：小型离心机，涡旋振荡器，100μl移液器，吸头，1.5ml离心管。1.3 操作步骤 血液混样操作：可将5份猪全血进行混样，每份血样取10μl于离心管后，涡旋振荡混匀，即为混样。 取10μl单样或混样新鲜抗凝全血加入100μl的缓冲液B1中，室温消化3分钟，涡旋混匀3~5次。 向上述混合液中加入100μl的缓冲液B2（恢复至室温并混匀使用），涡旋混匀，12000转/分钟离心1分钟，上清为PCR待检核酸，取2μl PCR待检核酸进行PCR反应。如在2小时内检测则PCR待检核酸置于4℃保存，否则置于﹣20oC以下冰箱保存。 2 PCR反应 2.1 试验材料：待检样品为PCR待检核酸，非洲猪瘟病毒荧光定量PCR快速检测试剂盒（PCR反应液、反应阳性对照和阴性对照） 2.2 设备与材料：荧光定量PCR仪，掌式离心机，20μl移液器，10μl移液器，吸头，荧光定量PCR反应管，乳胶手套，口罩。 2.3 操作步骤 扩增试剂准备：每个反应的体积为20μl。根据检测样品数量每个反应管加入18μl PCR反应液。依次取2μl阴性对照、PCR待检核酸、反应阳性对照到PCR反应管中。 PCR反应：加样后，将PCR管置于荧光定量PCR仪内进行如下反应： 1）95oC预变性20秒；2）95℃变性10秒，58℃延伸20秒，共40个循环；设置58℃收集FAM荧光信号。 判定结果的有效性：阳性对照应出现特异性扩增曲线且Ct值＜35，阴性对照无特异性扩增曲线或无Ct值。
27.猪瘟防治技术规范
猪瘟防治技术规范 猪瘟（Classical swine fever, CSF）是由黄病毒科瘟病毒属猪瘟病毒引起的一种高度接触性、出血性和致死性传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。 为及时、有效地预防、控制和扑灭猪瘟，依据《中华人民共和国动物防疫法》、《重大动物疫情应急条例》和《国家突发重大动物疫情应急预案》及有关法律法规，制定本规范。 1 适用范围 本规范规定了猪瘟的诊断、疫情报告、疫情处置、疫情监测、预防措施、控制和消灭标准等。 本规范适用于中华人民共和国境内一切从事猪（含驯养的野猪）的饲养、经营及其产品生产、经营，以及从事动物防疫活动的单位和个人。 2 诊断 依据本病流行病学特点、临床症状、病理变化可作出初步诊断，确诊需做病原分离与鉴定。 2.1 流行特点 猪是本病唯一的自然宿主，发病猪和带毒猪是本病的传染源，不同年龄、性别、品种的猪均易感。一年四季均可发生。感染猪在发病前即能通过分泌物和排泄物排毒，并持续整个病程。与感染猪直接接触是本病传播的主要方式，病毒也可通过精液、胚胎、猪肉和泔水等传播，人、其它动物如鼠类和昆虫、器具等均可成为重要传播媒介。感染和带毒母猪在怀孕期可通过胎盘将病毒传播给胎儿，导致新生仔
猪发病或产生免疫耐受。 2.2 临床症状 2.2.1 本规范规定本病潜伏期为3-10天，隐性感染可长期带毒。 根据临床症状可将本病分为急性、亚急性、慢性和隐性感染四种类型。 2.2.2 典型症状 2.2.2.1 发病急、死亡率高； 2.2.2.2 体温通常升至41℃以上、厌食、畏寒； 2.2.2.3 先便秘后腹泻，或便秘和腹泻交替出现； 2.2.2.4 腹部皮下、鼻镜、耳尖、四肢内侧均可出现紫色出血斑点，指压不褪色，眼结膜和口腔黏膜可见出血点。 2.3 病理变化 2.3.1 淋巴结水肿、出血，呈现大理石样变； 2.3.2 肾脏呈土黄色，表面可见针尖状出血点； 2.3.3 全身浆膜、黏膜和心脏、膀胱、胆囊、扁桃体均可见出血点和出血斑，脾脏边缘出现梗死灶； 2.3.4 脾不肿大，边缘有暗紫色突出表面的出血性梗死； 2.3.5 慢性猪瘟在回肠末端、盲肠和结肠常见“钮扣状”溃疡。 2.4 实验室诊断 实验室病原学诊断必须在相应级别的生物安全实验室进行。 2.4.1 病原分离与鉴定 2.4.1.1 病原分离、鉴定可用细胞培养法（见附件1）； 2.4.1.2 病原鉴定也可采用猪瘟荧光抗体染色法，细胞浆出现特异性的荧光（见附件2）； 2.4.1.3 兔体交互免疫试验（附件3）；
非洲猪瘟诊断与检测技术要点
非洲猪瘟检测与诊断 技术要点 中国农业科学院上海兽医研究所 牵头编制 2019年9月
前言 非洲猪瘟（African Swine Fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，发病率和死亡率可达100%。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。 1921年，ASF最初发现于肯尼亚，上世纪五、六十年代在非洲、欧洲、南美洲流行。2018年8月初我国爆发非洲猪瘟首起疫情以来，该疫病已蔓延全国23个省，给我国生猪养殖业和国民经济带来巨大损失。由于ASFV感染机制复杂，目前世界范围内至今尚无有效预防用非洲猪瘟疫苗，因此早期发现、精准检测是控制该病传播和发生的关键。 本文参考了OIE关于非洲猪瘟防控的文件、农业农村部发布相关文件和中国动物卫生与流行病学中心、中国动物疫病预防控制中心的相关技术手册，结合我们的研究成果，从非洲猪瘟早期发现、现场排查、精准检测三个方面的技术要点编写而成，主要面向从事非洲猪瘟现场排查和检测的一线防疫人员，提供了简明实用的相关操作技术与方法，为非洲猪瘟现场排查与检测等相关工作提供参考。
编者 牵头团队：上海兽医研究所猪呼吸道传染病团队 负责人：马志永 参加人：魏建超等 参加团队：哈尔滨兽医研究所猪烈性传染病创新团队负责人：仇华吉 参加人：罗玉子等 兰州兽医研究所外寄生虫与虫媒疫病团队 负责人：刘志杰 参加人：林密等 兰牧药研究所中兽医与临床团队 负责人：李建喜 参加人：崔东安
目录 一、概述 (1) 二、早期发现 (4) 三、现场排查 (5) （一）准备工作 (6) 1.人员准备 (6) 2.车辆准备 (6) 3.物品准备 (6) （二）进出养殖场要求 (7) 1.抵达养殖场 (7) 2.穿戴个人防护设备（在清洁区） (8) 3.离场前准备 (8) 4.离场后 (9) 5.消毒剂的选择 (9) （三）临床诊断 (9) 1.临床症状 (10) 2.剖检病变 (11) 3.鉴别诊断 (12) 4.发现疑似病例的情况下应立即采取的行动 (13) （四）样品采集、包装与运输 (14) 1.采样方法 (14) 2.样品的记录、保存、包装和运送 (15) 3.废弃物处理 (18) 四、实验室诊断与确诊 (19) 1.快速精准检测 (19) 2.疫情确诊 (19) 附件一：非洲猪瘟防治技术规范 (20) 附件二：国家非洲猪瘟参考实验室、专业实验室和区域实验室名单 (24)
非洲猪瘟自检实验室建设规范
非洲猪瘟自检实验室建设规范 当前，我国部分养殖和屠宰企业自建的检测实验室存在选址布局不合理、检测操作不规范、交叉污染重、检出结果不准确等问题。为规范养殖和屠宰企业检测实验室建设运行，提升非洲猪瘟检测能力，及时有效管控非洲猪瘟发生传播风险，特制定本规范。 1. 选址布局 1.1 养殖场的检测实验室应建在场区之外，屠宰企业的应建 在生产区之外。 1.2 宜为独立建筑物。与其他区域共用建筑物的，应自成一区，设在建筑物一端或一侧。 1.3 与建筑物其他部分相通时，应设可自动关闭的门。 1.4 排污排水便利，便于集中收集和处理。 1.5 根据所使用的检测方法，确定实验室布局。如需提取核酸，至少将其隔成3间，包括样品处理室（含核酸提取）、 试剂准备室（含体系配制）和扩增室。如不需提取核酸，至少将其隔成2间，包括试剂准备室（含体系配制）和扩增室。 1.6 实验室入口处应有明显的生物安全标识。 2. 室内建设 2.1 室内高度
米。2.6净高一般不应低于 2.2 设施与环境要求 2.2.1 实验室门口处设挂衣装置，个人服装与实验室工作服应分开放置。 2.2.2 样品处理室、扩增室应设洗手池，在靠近出口处，宜安装感应水龙头和干手器。 2.2.3 地面应采用无缝的防滑、耐腐蚀材料铺设，易于清洁消毒。 2.2.4 踢脚板应与墙面齐平，并与地面为一整体。 2.2.5墙面、顶棚的材料应光滑防水，易于清洗消毒、耐消毒剂的侵蚀、耐擦洗、不起尘、不开裂。 2.2.6 排出的下水应收集处理。 2.2.7 围护结构表面的所有缝隙应密封。 2.2.8 如果有可开启的窗户，应设置可防蚊虫的纱窗。 2.2.9 实验台应牢固，高低大小适合工作需要且便于操作和清洁。面应防水、耐腐蚀、耐热。 2.2.10 实验室应安装空调设备，能够控制温湿度。 2.2.11 实验室内应保证适当亮度的工作照明，避免反光和强光。 3. 仪器设备 3.1 病原学检测 离心管，转速可达2mL微量移液器、冰箱、离心机（适合．
生猪屠宰企业非洲猪瘟检测实验室建设及生物安全技术要求
生猪屠宰企业非洲猪瘟检测实验室建设及 生物安全技术要求 一、检测实验室建设要求 （一）实验室布局 远离生产区，处于相对封闭区域。实验室面积需满足工作需要，原则上不低于30平方米，至少包括独立的前处理室和检测室。前处理室面积原则上不低于20平方米，检测室原则上不低于10平方米。前处理室应分为样品处理区、配液区等，严格分区操作。 （二）主要仪器设备及耗材配置 1、前处理室主要仪器设备：配置离心机、高压灭菌锅、涡旋振荡器、水浴锅（金属浴）、移液器及其配套吸头（样品处理区和配液区各一套移液器，不能混用）、移动紫外灯，配备冷藏冷冻冰箱（存放检测试剂、检测样品、灭菌后废弃物）、储物柜（存放EP管、PCR管、枪头等耗材）、垃圾桶2个（1个配黑色垃圾袋，用于盛放普通垃圾；1个配黄色废弃物专用垃圾袋，用于盛放废弃物）。 2、检测室仪器设备：荧光定量PCR仪或其他检测设备。 3、实验耗材：采血器（或注射器）、真空采血管（EDTA抗凝剂）、1.5mLEP 管及其管架、PCR八联管（与荧光PCR仪配套）及其管架、剪刀、镊子、搪瓷托盘、酒精灯等。 4、其他器材：实验台、操作椅、试剂架、器皿橱等。 5、个人防护用品：实验服、一次性乳胶手套、一次性口罩、一次性鞋套。 （三）实验室检测人员 屠宰企业应配备专职检测技术人员，检测人员应接受实验室分子生物学检测技术及生物安全相关知识培训，熟悉非洲猪瘟检测要求。 二、检测实验室操作规范 （一）样品采集 生猪屠宰企业应安排专人负责样品采集，并填好采样记录表（见附表1）。样品为生猪抗凝血（5mL，0.5%EDTA抗凝，不能使用肝素钠作为抗凝剂）或全血样品。
（二）样品保存 样品采集后，按要求进行混血，混血待检样品需在60℃下进行30min的灭活处理，在12h内检测的待检样品应在冰箱冷藏（4℃）保存，超过12h不能检测的样品和留样需冷冻保存。留样应至少保存3个月，以备复查。 样品需转运的，应按农业农村部《高致病性动物病原微生物菌（毒）或者样本运输包装规范》要求进行包装，并由专人将样品送至实验室，禁止使用公共交通工具运送。 （三）样品检测 1．严格按照试剂说明书的操作步骤进行检测。 2．采集的血液样品，可按照生猪批准次（车次）或一定的生猪数量进行混样，具体混样数量根据所使用的检测试剂盒的技术指标科学确定。 3．待检血样必须充分混匀，使用经农业农村部批准或中国动物疫病预防控制中心对比符合要求的检测试剂盒进行检测。 4．熟悉操作，缩短检测过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏。 5．所有试剂开盖前都应先瞬时离心，避免液体飞溅；若液体不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并清洁桌面。 6．样品处理、配液、扩增严格分区操作，仪器、耗材等严禁交叉混用。 7．加样时严禁反复吹吸。 8．荧光探针应避光保存，反应液现配现用，加入核酸后应尽快上机。 9．不要在荧光定量PCR管盖的采光部位做任何标记。 （四）原始记录 检测完成后应填写并保存相关检测原始记录（见附表2），检测原始记录、PCR 图至少保存2年。 （五）检测报告 根据《关于全面开展生猪屠宰环节非洲猪瘟检测工作有关具体要求的通知》（川动监[2019]5号）要求，屠宰企业检测结果应规范出具《检测报告》（见附表3），载明对应的检疫合格证明编号、检测方法、检测日期、检测结果。检测报告必须经由报告编制人、驻场官方兽医和批准人（场点负责人）签字确认，加盖屠宰企业公
最新结核病实验室要求资料
一、各级各类实验室职责 （一）结防机构结核病实验室 1、国家结核病参比实验室 在卫生部和中国疾病预防控制中心的领导下，国家结核病参比实验室负责全国结核病实验室工作的规划、质量控制和生物安全等技术管理，为各级提供技术支持和技术服务。 根据国家结核病控制规划的要求，组织全国结核病实验室的工作，参与国家有关技术政策的制定和组织实施。 制定和推行结核病细菌学检查技术标准、操作规程及规章制度。 建立可行的全国结核病实验室质量控制标准和质量保证系统，并负责组织实施，协调、检查各省（市、自治区）结核病实验室工作。 除常规的分枝杆菌检查项目外，还应承担其它结核病诊断新技术，新方法的实施和基础研究，承担分枝杆菌最终的菌种鉴定工作。 开展有关的实施性研究。 培训结核病实验室技术人员。 接受跨国参比实验室的质量控制。 2、省级结核病参比实验室 在国家结核病参比实验室的技术指导下，负责全省结核病实验室工作计划的制定和实施、培训、督导和质量控制等技术管理。 按照国家和省结核病控制规划的要求，在国家参比实验室的统一部署下，规划本省结核病实验室工作，指导省内各级结核病实验室工作并提供技术支持。 根据国家结核病实验室质量保证体系的要求，组织全省各级实验室痰涂片镜检的质量保证工作，按要求对所辖的地市、县级实验室进行督导和评估，指导地市级实验室对各县级实验室的盲法复检和现场评估。 对本省各级结核病实验室所用耗材、试剂的质量进行评估和核准，为全省统一提供抗酸染色试剂，为省内开展分离培养的实验室统一提供培养基。 按国家统一的标准化操作程序开展涂片镜检、分离培养、药物敏感性测定和分离株的初步鉴定，有条件的省参比实验室，可建立完整的分枝杆菌菌种鉴定体系。
非洲猪瘟疫情应急预案
非洲猪瘟疫情应急预案 1 总则 非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病，是我国重点防范的外来动物疫病之一。 1.1 编制目的 及时扑灭突发非洲猪瘟疫情，保障生猪养殖业健康发展。 1.2 编制依据 据《中华人民共和国动物防疫法》《中华人民共和国进出境动植物检疫法》《重大动物疫情应急条例》《国家突发重大动物疫情应急预案》和《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）》，制定本预案。 1.3 工作原则 按照属地管理的原则，实行政府统一领导、部门分工负责，切实落实防控工作责任制，联防联控，形成防控合力。 坚持预防为主，贯彻“加强领导、密切配合、依靠科学、依法防治、群防群控、果断处置”的防控方针。按照“早、快、严、小”的要求，及早发现，快速反应，严格处理，减少损失。 1.4 适用范围 本预案适用于我国突发非洲猪瘟疫情的应急处置工作。 2 组织管理 2.1 应急指挥机构 农业部在国务院统一领导下，负责组织、协调全国非洲猪瘟疫情应急管理工作，并根据突发疫情应急处置工作的需要，向国务院提出启动国务院重大动物疫情应急指挥部应急响应建议。 地方各级人民政府兽医主管部门在本级人民政府统一领导下，负责组织、协调本行政区域内非洲猪瘟疫情应急管理工作，并根据突发疫情应急处置需要，向本级人民政府提出启动地方重大动物疫情应急指挥部应急响应建议。 各级人民政府应急指挥部应明确组成部门，各有关部门要加强协调配合，建立健全多部门共同参与的联防联控协作机制。 2.2 职责分工 农业部负责组织实施突发非洲猪瘟疫情应急管理工作，并进行检查、督导；及时发布突发非洲猪瘟疫情信息，并向有关国际组织、国家和地区通报疫情；紧急组织调拨消毒药品等应急防疫物资；提出启动、停止疫情应急控制措施建议；组织对扑杀及补偿等费用和疫情损失的评估。各地兽医部门要积极配合出入境检
非洲猪瘟防控调研报告
非洲猪瘟防控调研报告 调研报告 2018非洲猪瘟防控调研报告 一、我区生猪养殖基本情况 第一季度全区生猪养殖户数770户，养殖存栏为36039头；其中规模养殖场数13户，存栏6316头，其中能繁母猪存栏2125头，元旦至今规模养殖场生猪出栏6772头；种猪场3户，存栏2924头，其中能繁母猪存栏1084头；全区生猪散养户780户，存栏约3000头；对比2018年第一季度生猪存栏数42161头，养殖量呈下降趋势。产生原因有二：一是非洲猪瘟传染性强、死亡率高（几乎是100%），目前防控形势依然复杂严峻。规模养殖户唯恐波及致全军覆灭，主动减少养殖数量包括淘汰多年经产母猪和仔猪。二是散养户因为环保要求和我市实施的庭院养猪退养弃养政策以及2018年年底生猪收购价格低于成本而减量存栏甚至收摊弃养。但今春由于价格回升，全国生猪存栏减少，政治经济环境、养殖环节、屠宰、检测检疫环节等众多因素共同影响下，猪肉价格上涨已成必然，又有养殖户开始购进仔猪，增加后备母猪养殖数量。2019春节后生猪养殖数量又持续回升至当前数值。 二、非洲猪瘟防控采取的主要措施 1、非洲猪瘟排查。我区根据非洲猪瘟病毒传播途径制作实施方案，多次下发文件安排部署，多方位、多环节进行缜密排
查。养殖环节：屯留区生猪现存栏约3.6万头，2018年8月至今从养殖环节实施全覆盖排查，多次进行拉网式大排查。尤其进入冬春季节对非洲猪瘟、口蹄疫、高致病禽流感等重大动物疫情进行严格细致排查，排查覆盖全区所有畜禽养殖户、无害化处理场所，特别是要对城郊结合部、工矿厂区等地排查力度，不留死角。规模养殖场户实施封闭管理。现阶段，排查已进行51轮次，累计排查生猪养殖场户3万余个次，生猪206万头次。屠宰环节：每日派出2-3名官方兽医对我区唯一生猪定点屠宰场入场排查检疫。未发现异常猪只。泔水猪排查：全区经入户认真排查及设立公开电话举报，共排查出13个泔水猪养殖户，共存栏1521头，均未发现非洲猪瘟可疑情况。现均已退养完毕，且排查中未再排查出泔水猪。饲料排查：排查全区21个生猪养殖场和3个饲料生产企业，5个饲料经营门市部、均未发现经营或使用猪血成份、血浆蛋白粉、肉骨粉等动物源性饲料喂猪。市场猪肉排查：市场监督管理局持续对市场、冷库等销售环节生猪产品一一进行排查，严查来自疫区省市生猪产品。庭院养猪摸底排查：对矿区、人口密集区及两场周围的庭院养猪情况进行排查摸底，全区有866户庭院养猪户存栏28530头生猪，现由各乡镇依据实施方案逐步进行庭院养猪退养并养工作。现阶段退养弃养85户6354头。流行病学调查：对规模猪场深入开展流行病学调查分析，采集样品开展非洲猪瘟疫情筛查，强化基层动物防疫人员对非洲猪瘟的鉴别诊断能力，及时发现和消除风险隐患。
农业农村部办公厅关于做好非洲猪瘟实验室检测工作的通知-国家规范性文件
综合法律门户网站 https://www.sodocs.net/doc/fc9060886.html, 法律家·法律法规大全提供最新法律法规、司法解释、地方法规的查询服务。 法律家https://www.sodocs.net/doc/fc9060886.html, 农业农村部办公厅关于做好非洲猪瘟实验室检测工作的通知 各省、自治区、直辖市及计划单列市畜牧兽医（农牧、农业、农业农村）厅（局、委、办），新疆生产建设兵团畜牧兽医局： 为及时发现非洲猪瘟疑似疫情，进一步做好样品检测工作，现就非洲猪瘟实验室检测有关事项补充通知如下。 一、承担检测任务实验室范围 现承担实验室检测任务的各省级动物疫病预防控制机构根据工作需要，并经省级畜牧兽医部门批准，可选择辖区内具有相应设施设备和专业技术人员，管理体系健全，近三年内未发生任何生物安全事故，具有生物安全二级或以上的实验室分担样品检测任务。受委托实验室可为高等院校、各级动物疫病预防控制机构、第三方检测机构等符合条件的实验室。各省级畜牧兽医部门要对受委托实验室的实验活动和生物安全进行督导。各省级动物疫病预防控制机构要组织协调受委托实验室做好样品检测工作，检测结果应由受委托实验室和省级动物疫病预防控制机构共同负责。 二、严格开展实验室活动 各受委托实验室应严格遵守实验室生物安全操作规范。样品检测前，要在生物安全柜中对样品进行处理和灭活。每批样品检测结束后，要对检测过程中产生的废物、废液等进行消毒和无害化处理；并对相关仪器、工作台面、环境进行严格消毒。检测任务完成后，要对所有剩余样品进行高温高压处理，做好样品销毁记录，不得留样。 三、及时报送检测结果 各受委托实验室一旦发现疑似阳性结果，应立即报告所在地省级动物疫病预防控制机构，并反馈送样单位；省级动物疫病预防控制机构应于1小时内以快报形式报告中国动物疫病预防控制中心，并尽快组织将疑似阳性样品送至中国动物卫生与流行病学中心进行确诊。中国动物卫生与流行病学中心确诊完成后，应于1小时内将结果以快报形式报送中国动物疫病预防控制中心，同时反馈送样单位。 四、其他有关要求 各受委托实验室须通过检测能力比对验证后方可开展检测工作，能力比对实施方案由各省级动物疫病预防控制机构制定并实施。样品检测所用引物、阳性对照品和实验室操作程序由中国动物卫生与流行病学中心统一提供。未经省级畜牧兽医部门批准，任何单位和个人不得采集病料。除我部指定的实验室外，任何单位和个人不得擅自保存病料。未经我部批准，任何单位和个人不得分离病毒，不得进行动物感染实验。 农业农村部办公厅 2018年10月25日 来源: https://www.sodocs.net/doc/fc9060886.html,/fg/detail2089909.html
非洲猪瘟诊断规范2020
附件1 非洲猪瘟诊断规范 一、流行病学 （一）传染源 感染非洲猪瘟病毒的家猪、野猪（包括病猪、康复猪和隐性感染猪）和钝缘软蜱等为主要传染源。 （二）传播途径 主要通过接触非洲猪瘟病毒感染猪或非洲猪瘟病毒污染物（餐厨废弃物、饲料、饮水、圈舍、垫草、衣物、用具、车辆等）传播，消化道和呼吸道是最主要的感染途径；也可经钝缘软蜱等媒介昆虫叮咬传播。 （三）易感动物 家猪和欧亚野猪高度易感，无明显的品种、日龄和性别差异。疣猪和薮猪虽可感染，但不表现明显临床症状。 （四）潜伏期 因毒株、宿主和感染途径的不同，潜伏期有所差异，一般为5至19天，最长可达21天。世界动物卫生组织《陆生动物卫生法典》将潜伏期定为15天。 （五）发病率和病死率 不同毒株致病性有所差异，强毒力毒株可导致感染猪在12至14天内100% 死亡，中等毒力毒株造成的病死率一般
为30%至50% ，低毒力毒株仅引起少量猪死亡。 （六）季节性 该病季节性不明显。 二、临床表现 （一）最急性：无明显临床症状突然死亡。 （二）急性：体温可高达42℃，沉郁，厌食，耳、四肢、腹部皮肤有出血点，可视黏膜潮红、发绀。眼、鼻有黏液脓性分泌物；呕吐；便秘，粪便表面有血液和黏液覆盖；腹泻，粪便带血。共济失调或步态僵直，呼吸困难，病程延长则出现其它神经症状。妊娠母猪流产。病死率可达100% 。病程4至10天。 （三）亚急性：症状与急性相同，但病情较轻，病死率较低。体温波动无规律，一般高于40.5℃。仔猪病死率较高。病程5至30天。 （四）慢性：波状热，呼吸困难，湿咳。消瘦或发育迟缓，体弱，毛色暗淡。关节肿胀，皮肤溃疡。死亡率低。病程2至15个月。 三、病理变化 典型的病理变化包括浆膜表面充血、出血，肾脏、肺脏表面有出血点，心内膜和心外膜有大量出血点，胃、肠道黏膜弥漫性出血；胆囊、膀胱出血；肺脏肿大，切面流出泡沫性液体，气管内有血性泡沫样粘液；脾脏肿大，易碎，呈暗
结核病实验室要求
一、实验室生物安全 实验室环境安全：根据我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》、《实验室生物安全通用要求》、《人间传染的病原微生物名录》和《医疗机构临床实验室管理办法》的规定，结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级（Laboratory Biosafety Level 3）的环境中进行；样本检测（包括涂片、显微镜观察、样本的病原菌分离纯化、药物敏感性试验、生化鉴定、免疫学实验、PCR核酸提取等初步检测活动），可以在符合生物安全二级（Laboratory Biosafety Level 2）的环境中进行。实验室所用设施、设备和材料（含防护屏障）均应符合相关的标准和要求。 实验室操作安全：由具有相关专业知识和操作技能的工作人员进行实验室操作，实验人员应该认真负责，格按照标准化、规化的操作程序进行各项实验室操作。 菌种或样本运输安全：为保障人体健康和公共卫生安全，在运输可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本时，须按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求进行包装、运输、操作、保藏和管理。 废弃物处理安全：为防止疾病传播，保护环境，保障人体健康，医疗废弃物的处理应格按照《中华人民国传染病防治法》和《中华人民国固体废物污染环境防治法》，以及《医疗废物管理条例》的相关规定妥善处理。 （一）痰涂片镜检实验室基本要求 1.实验室应分区（痰涂片染色区域和读片镜检区域），布局应符合生物安全二级防护的要求。
2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。 3.个人防护，在实验室工作时，应穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。 4.实验室墙壁、天花板和地板应易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。 5.实验操作台面应耐热、防水，耐消毒剂、酸、碱和有机溶剂的腐蚀。 6.实验室应保证操作时的照明，避免不必要的反光和闪光。 7.实验室应设置洗手池、洗眼器或喷淋设备。 8.实验室中的器具和实验台应坚固耐用，在实验台、生物安全操作柜和其他设备之间及下面，应留有足够空间，以便于清洁。 9.实验室中可开启的窗户应安装纱窗。 10.实验室应有适当的消毒设备。 11.在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开放置。 12.实验室应装备开展痰涂片检查所需要的仪器和设备。 （二）结核分枝杆菌培养实验室基本要求 1.满足生物安全二级的基本要求。 2.准入规定，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，未经批准任人不得进入实验室工作区域，实验室的门应随时关闭。 3.个人防护，在实验室工作时，应该穿防护服、隔离衣，并佩戴口罩（面具）和手套等。 4.实验室墙壁、天花板和地板应光滑、易清洁、不渗液，并耐化学品和消毒
结核病的实验室诊断技术
!!作者单位""&!!!"杭州(浙江省中西医结合医院结核病治疗中心 结核病的实验室诊断技术 李!锋!朱!敏 !!!摘!要"!由于结核菌耐药性增强(以及不少国家和地区忽视对结核病的控制(使得结核病再次成为一个严重的全球性公共卫生问题’随着免疫学&分子生物学技术的飞速发展(目前涌现出许多新型诊断技术’本文总结目前结核病实验室诊断技术(作一综述’ !关键词"!结核病% 实验室诊断!!结核病作为单因致死率最高的传染性疾病(目前疫情再次呈现上升趋势’其诊断主要依靠医生的临床经验并结合传统的结核菌检测和胸部f 线检查’由于胸部f 线的特异性不强(常给结核病的诊断和鉴别诊断带来很多干扰’结核病的实验室诊断技术近年来发展迅速(本文就其现状及展望作一概述(归纳起来大致有如下几个方面" J @C :?J :)O $也有实验室通过色谱)&* 或质谱)%*来鉴定分枝杆菌中特异性的物质(该法可从涂 片阴性的标本中检测出分枝杆菌(但需要特殊的设备且耗资巨大’I !免疫学检测 *细胞免疫学检测目前常用纯化蛋白衍生物 #) I C ;G ;>H )C :@>;
非洲猪瘟实验室诊断技术
万方数据
非洲猪瘟实验室诊断技术 作者：刘峰 作者单位：安徽省金寨县南溪镇畜牧兽医站,安徽,金寨,237361 刊名： 畜牧与饲料科学 英文刊名：ANIMAL HUSBANDRY AND FEED SCIENCE 年，卷(期)：2010,31(3) 被引用次数：5次 参考文献(4条) 1.王华;王君玮;徐天刚非洲猪瘟流行病学和诊断方法的研究进展[期刊论文]-中国兽医科学 2008(06) 2.李倩;姚淑霞非洲猪瘟病毒VP73蛋白的B细胞表位预测[期刊论文]-安徽农业科学 2008(18) 3.田金宁;张亮;游进猪常见传染病的诊断[期刊论文]-养殖技术顾问 2010(03) 4.马洁莹非洲猪瘟[期刊论文]-国外畜牧学-猪与禽 2009(01) 本文读者也读过(9条) 1.林荣泉非洲猪瘟与猪瘟的鉴定及防控技术[期刊论文]-肉类工业2001(3) 2.赵刚非洲猪瘟流行动态[期刊论文]-现代畜牧兽医2010(5) 3.叶芬.蔡家利.YE Fen.CAI Jia-li猪瘟诊断方法的研究进展[期刊论文]-四川畜牧兽医2010,37(9) 4.朱红非洲猪瘟病毒P72蛋白单克隆抗体的制备及抗体检测方法的建立[学位论文]2007 5.王君玮.张维.王华.WangJunwei.Zhang Wei.Wang Hua非洲猪瘟病毒分子流行病学进展[期刊论文]-中国动物检疫2010,27(9) 6.杨林.赵德明.熊永忠猪瘟诊断技术的研究进展[期刊论文]-畜牧兽医科技信息2005(3) 7.钟霞.毛华明.邓卫东.Zhong Xia.Mao Huaming.Deng Weidong18S rRNA/rDNA为主的分子生物学技术在瘤胃原虫分类鉴定中的应用[期刊论文]-饲料工业2007,28(22) 8.朱小甫.李晓成.陈德坤.吴旭锦.张志.洪军.张燕霞猪瘟诊断技术研究进展[期刊论文]-中国动物检疫 2007,24(2) 9.杭军猪瘟的流行现状及其原因分析[期刊论文]-畜牧与饲料科学2010,31(8) 引证文献(5条) 1.冯海勇.薛海霞一起猪瘟诊治的体会[期刊论文]-畜牧与饲料科学 2010(8) 2.温肖会.魏文康.黄忠.吕殿红非洲猪瘟的研究进展[期刊论文]-广东农业科学 2010(10) 3.黄福军.李可启非洲猪瘟的研究进展[期刊论文]-中国猪业 2013(6) 4.杨小燕.刘建奎.戴爱玲.李晓华猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊断及病原特性分析[期刊论文]-安徽农业科学 2010(34) 5.杭军猪瘟的流行现状及其原因分析[期刊论文]-畜牧与饲料科学 2010(8) 本文链接：https://www.sodocs.net/doc/fc9060886.html,/Periodical_nmgxmkx201003092.aspx
1 猪瘟诊断技术
猪瘟诊断技术 1 范围 本标准规定了猪瘟（CSF）临床诊断、病理学诊断及实验室诊断方法的技术要求。实验室诊断方法主要包括：兔体交互免疫试验、免疫酶染色试验、病毒分离与鉴定试验、直接免疫荧光抗体试验、荧光抗体病毒中和试验、猪瘟单抗酶联免疫吸附试验和反转录聚合酶链式反应等诊断技术。 本标准适用于猪瘟的诊断。兔体交互免疫试验，免疫酶染色试验，直接免疫荧光抗体试验，反转录聚合酶链式反应和病毒分离与鉴定试验等五种方法主要用于猪瘟病毒和抗原的诊断，以发现带毒猪和自然感染猪；猪瘟单抗酶联免疫吸附试验和荧光抗体病毒中和试验主要用于猪瘟抗体的监测和免疫效果评估，其中，单抗酶联免疫吸附试验主要用于猪瘟抗体的鉴别诊断，可区别诊断猪瘟自然感染猪，免疫猪，强、弱毒抗体阳性猪及猪瘟抗体阴性猪。 2 临床及病理学诊断 2.1 临床及病理学诊断的作用 感染CSF的猪临床症状和解剖后肉眼所见的病理变化，因病毒株致病力、感染时间和宿主等因不同而有很大差异，同时田间还存在着无临床症状的猪瘟病毒持续性感染和多种病原混合感染的现象，因此，猪瘟的临床诊断和病理学诊断只能作为综合诊断定性的依据之一，不能作为确诊的根据，特别是那些隐性感染的带毒猪，一般不表现临床症状及肉眼可见的病理变化，所以，猪瘟的确诊应依赖于对CSF病毒及抗原的实验室诊断，才能形成最终的结论。 2.2 临床诊断 猪群中被检猪出现下列临床症状时，可作为综合诊断定性的依椐之一： a）体温在40.5℃以上或间歇性的发热； b）精神萎靡、倦怠，畏寒，食欲不振、厌食、甚至废食，呕吐，步态不稳； c）交替便秘与腹泻，产生带粘液和血丝的粪球，结膜充血、出血或有不正常分泌物； d）鼻盘、嘴唇、耳尖、下颌、四肢、腹下及腹股沟等处出现紫红色斑点或斑块； e）公猪包皮积尿或其他疑似CSF的症状； f）怀孕母猪有流产、死胎、木乃伊等现象或所产仔猪有衰弱、震颤、痉挛、发育不良等现象。 出现上述症状时，猪群作为可疑CSF对待，应全群隔离饲养，并作进一步诊断。