花粉的形态观察及生活力测定
实验一花粉贮藏及花粉生活力的测定
花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术
一、实验目的
掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料
百合、金鱼草、菊花等花粉。
三、仪器及药品
显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨水。
四、实验原理
花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过
氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：
1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法
1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。
2 ） TTC 染色法：使用TTC测定花粉生命力的原理，主要是无色药液进入花粉遇到活组织里的脱氢酶，接受氢离子，还原成红色三苯基甲腊TTF，还原结果使有生命力的花粉染上红色，死花粉不着色；花粉生活力强弱有异，染色深浅也有不同。在28—30℃的温度下2小时以上(花卉不同染色时间也不同)。
4 ．培养基发芽法在培养基上进行花粉的人工萌发，鉴定待测花粉萌发率的高低。此法若采用适宜的培养基能较精确地测定出花粉的生活力，但不同植物的花粉萌发条件存在较大的差异，所以很多时候测定的结果也只是相对可靠。
五、实验步骤：
１．花粉的贮藏：
（１）将采集的花粉进行干燥（凉干或放入盛有无水氯化钙的干燥器中干燥），一般以花粉不相互黏结为度。
（２）将干燥的花粉装在指形管中（不要太多，一般以五分之一体积或更少为宜），瓶口塞以纱布，瓶外贴以标签，注明花粉种类、采收日期。
（３）将指形管放入无水氯化钙控制一定湿度的干燥器中，干燥器置于 0 ～ 2℃的冰箱内。
２．花粉生活力的测定：
（１）染色观察法——TTC 染色法
①配制 TTC 染色液：称取 0.5g TTC 溶于 100ml 磷酸盐缓冲液（ 100ml 蒸馏水中溶解 0.832g Na 2 HPO 4 ·2H 2 O 和 0.273g KH 2 PO 4 ， pH7.2 ）中，装入棕色瓶备用。
②制片：取少量花粉于载玻片上，滴入 1 ～ 2 滴 0.5 ％TTC 染色液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，于 35 ～ 40℃条件下净置 15 ～ 20min 。
③观察统计：在显微镜下观察三个不同的视野，凡被染成红色或玫瑰红的都是有生活力的花粉，黄色或不着色者为没有生活力的花粉。
（２）培养基发芽法——固体培养基
①配制培养基：称取 1g 琼脂， 5g 蔗糖，量取 94ml 蒸馏水，装入烧杯，加热使琼脂融化呈透明状（注意补充水分，以保持培养基的浓度），即配成 5% 浓度的培养基。同法配制 10% 、 15% 、20% 浓度的培养基。
②制片：用滴管吸取少量培养基，趁热滴在载玻片的凹槽内，放置片刻，使其凝固。
③播种花粉：将少量花粉均匀地撒播在培养基上，注意不可过多，否则难以观察。
④培养与观察：将制备好的片子放在垫有湿润滤纸的培养皿内，于 20 ～ 22℃的温箱中培养；待花粉萌发后于显微镜下观察并统计发芽率。观察时每片随机取三个视野，统计花粉总数及发芽数，计算平均萌发率（花粉总数不少于 100 粒）。
六、作业及思考题：
１、按下表统计实验结果。
用染色法计算花粉生活力 (3 -5个视野 ) 。
花粉生活力 ( ％ ) =有生活力花粉数／观察花粉总数× 100
染色法测定结果记载表
2.检测花粉生活力能否采用蓝墨水？其原因及机理是什么？
700万显微镜下24种植物花粉的惊艳之美
700万显微镜下24种植物花粉的惊艳之美 换个角度看世界:700万显微镜下24种植物花粉的惊艳之美 一：银叶树 常绿乔木，高约10米；树皮灰黑色，小枝幼时被白色鳞秕。叶革质，矩圆状披针形、椭圆形或卵形，长10-20厘米，宽5-10厘米，顶端锐尖或钝，基部钝，上面无毛或几无毛，下面密被银白色鳞秕；叶柄长1-2厘米；托叶披针形，早落。圆锥花序腋生，长约8厘米，密被星状毛和鳞秕；花红褐色；萼钟状，长4-6毫米，两面均被星状毛，5浅裂，裂片三角形，长约2毫米；雄花的花盘较薄，有乳头状突起，雌雄蕊柄短而无毛，花药4-5个在雌雄蕊柄顶端排成一环；雌花的心皮4-5枚，柱头与心皮同数且短而向下弯。果木质，坚果状，近椭圆形，光滑，干时黄褐色，长约6厘米，宽约3.5厘米，背部有龙骨状突起；种子卵形，长2厘米。花期夏季
二：尼泊尔鸢尾 尼泊尔鸢尾是多年生草本植物，植株基部围有大量棕褐色的毛发状老叶叶鞘的残留纤维。根状茎短而粗，块状；根膨大成纺锤形，棕褐色，肉质，肥厚，有皱缩的横纹。叶条形，花期叶长10-20 （-28）厘米，宽2-3 （-8）毫米，果期长可达60厘米，宽6-8毫米，顶端长渐尖，有2-3条纵脉。
三：西番莲 西番莲（学名：Passiflora caerulea L.），为多年生常绿攀缘木质藤本植物，是一种芳香可口的水果，有“果汁之王”的美誉。又名受难果、巴西果、藤桃、热情果、转心莲、西洋鞠，转枝莲、洋酸茄花，时计草。
四：勿忘我 勿忘草（学名：Myosotis silvatica Ehrh. ex Hoffm.）又名勿忘我，为管状花目、紫草科、勿忘草属植物。多年生草本，茎直立，高20-45厘米，基生叶和茎下部叶有柄，狭倒披针形、长圆状披针形或线状披针形，花序在花期短，花后伸长，花冠蓝色，小坚果卵形，暗褐色，平滑，有光泽。
植物花粉生活力检测技术进展_左丹丹
植物花粉生活力检测技术进展 左丹丹1,2,明军23,刘春2,王丽娜1 (1.长江大学园艺园林学院,湖北荆州434025;2.中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京100081) 摘要 总结了植物花粉生活力检测的染色法、萌发测定法以及田间授粉测定法等的基本原理和应用,并且分析了各种方法的特点。 关键词 花粉;生活力;检测技术 中图分类号 Q945 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2007)16-04742-04 Advance in T echnique of P lant Pollen V iability ZU O Dan2d an et al (C ollege of H orticulture and Landscape Architecture,Y angtze University,Jingzh ou,Hubei434025) Abstract T he principle and application of technique of plant pollen viability were summ arized,including staining m eth od,germ ination m eth od and polli2 nation in field m eth od,etc.T he characteristics of different techniques were studied. K ey w ords P ollen;Viability;T esting technique 花粉是高等植物的雄配子体。它在有性繁殖中传递着雄性亲本的遗传信息。花粉既是植物遗传、育种、进化、生殖等研究的重要对象,又是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理试验等的重要材料。花粉生活力是花粉具有存活、生长、萌发或发育的能力。在农业和林业的常规育种中,为了进行人工辅助授粉或杂交授粉,需要早期采集和贮存花粉。尤其是在杂交育种工作中,研究花粉的生活力和育性是必不可少的基础性工作。为了解决亲本花期不一致或远距离杂交的困难,更需要保存花粉的活力。在使用采集和贮存花粉之前,通常要做花粉生活力的鉴定。不同类群植物花粉在自然条件下的寿命、花粉的适宜贮存条件以及花粉生活力的适宜测定方法均有所差异。这些差异对于研究花粉贮藏期间控制花粉生活力、花粉—柱头间的相互作用、品种改良与育种操作、基因库的保持、不亲和性与受精关系、生理调节对花粉萌发的影响以及基因流等均有重要的实践意义[1]。因此,掌握花粉生活力检测的方法对于提高植物育种效率具有较高的实际应用价值。 1 染色法 1.1 I22KI染色法 I22K I染色法的基本原理是:根据淀粉遇碘变蓝的特性,根据蓝色的深浅程度来判断花粉粒中淀粉的含量,从而确定花粉粒活性的高低。 具体操作步骤如下:①I22K I的配制。称取2g K I溶于10 m l蒸馏水中,然后加入1g I2,待全部溶解后,加蒸馏水定容至300m l。②染色。取少量花粉置于载玻片上,滴上1～2滴 I2K I染色液,5m in后在显微镜下观察。③结果判断。凡是染成蓝黑色的花粉粒具较强活力,淡蓝色次之,几乎无色则为无活力花粉。 该方法在柑橘[2]、辣椒[3-4]、梅(桃)属[5]、瓜叶菊[6]、黄 瓜[7]、澳洲坚果[8]等植物上均有应用。该方法的局限在于,它是靠花粉粒内的淀粉着色而进行判定的。虽然花粉失去了活力,但是淀粉依然存在,所以测定值偏高,而且对于那些淀粉含量少的种类如菊属[9]不适宜。 基金项目 国家社会公益研究项目(2005DI B022);湖北省自然科学基金(2004ABA142);林木、花卉遗传育种教育部重点实验室开放 基金(200605212)。 作者简介 左丹丹(1981-),女,湖北宜昌人,硕士研究生,研究方向:园林及观赏植物资源与分子育种。3通讯作者。 收稿日期 20072022061.2 TTC染色法 TT C即2,3,52氯代三苯基四氮唑,它是一种氧化还原染料。TT C染色法的基本原理是:当TT C渗入细胞后,可被呼吸代谢中的还原酶所还原,并由无色的氧化型变成红色的还原型,由此来判断花粉的生活力。 具体操作步骤如下:①磷酸盐缓冲溶液的配制。称取1.673g十二水磷酸氢二钠和0.273g磷酸氢二钾溶解于100 m l的蒸馏水,调整pH值为7.17。②TT C溶液的配制。称取0.02～0.05g TT C(依植物而定)溶解在10m l磷酸盐缓冲溶液中,然后放于棕色瓶中于暗处待用。因氯化三苯基唑有毒,操作时要注意安全。③染色。取少量花粉置于普通载玻片上,滴入TT C溶液2滴,用镊子搅拌均匀,盖上盖玻片,在25～28℃的温度下放置15～20m in。④显微镜下观察。具较强生活力的花粉粒呈红色,微弱活力的花粉粒呈淡红色,无活力或不育的花粉为无色。 该方法已应用于黄瓜[7]、枇杷[10]、猕猴桃[11]、番木瓜[12]、瓜叶菊[7]、芸薹属[13]、百合[14]等的花粉生活力检测。但该方法耗时长,染色后花粉的颜色差别很小,不易分辨,且颜色受染色时间的影响较大,不便统计。 1.3 FCR染色法 FCR染色法即荧光染料反应法(Flu o2 rochrome Reaction),其基本原理是:荧光染料本身不产生荧光,无极性,可以自由地透过完整的原生质膜,当这种染料进入原生质后,即被酯酶作用而形成一种能产生荧光的极性物质———荧光素,并且这种物质不能自由出入原生质膜,而只在细胞内积累,所以可以根据花粉产生荧光的情况判断花粉的生活力。而且,该方法可同时反映出酶活和质膜情况2个指标[15]。 具体操作步骤如下:①母液1(SS1)的配制。1.75m ol/L 蔗糖、3.32mm ol/L硼酸、3.05mm ol/L硝酸钙、3.33mm ol/L硫酸镁、1.98mm ol/L硝酸钾,混合后用蒸馏水定容。另外,可以增加蔗糖浓度以避免由渗透压引起的花粉管破裂,也可以根据荧光的强弱来调整盐的浓度。②母液2(SS2)的配制。 7.21mm ol/L双乙酸荧光素(Flu orescein Diacetate)溶于丙酮中,放于4℃冰箱。③染色液的配制。取8～12滴SS2于10m l SS1中,混匀直到该混合液变为轻乳状。④染色。取2～3滴染色液于花粉粒上,盖上盖玻片,2m in后在荧光显微镜下观察即可。产生绿色荧光的花粉具有生活力,无荧光产生的花粉则没有生活力。 安徽农业科学,Journal of Anhui Agri.Sci.2007,35(16):4742-4745 责任编辑 刘月娟 责任校对 胡先祥
花粉活力测定的3种方法
实验16花粉活力的测定 在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。 一、花粉萌发测定法 【原理】 正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。 【器材与用具】 载玻片；显微镜；玻棒；恒温箱；培养皿；滤纸。 【试剂】 培养基：10%蔗糖，10mg/L硼酸，0.5%的琼脂。称10g蔗糖、1mg硼酸、0.5g 琼脂与90ml水放入烧杯中，在100℃水浴中熔化,冷却后加水至100ml备用。 【方法】 1.将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。 2.采集丝瓜、南瓜或其他葫芦科植物刚开放或将要开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25℃左右的恒温箱（或室温20℃条件下）中孵育，5~10min后在显微镜下检查5个视野，统计其萌发率。 【注意事项】 1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。 3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。 二、碘- 碘化钾染色测定法 【原理】 多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I 2 -KI溶液可将其染 成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I 2 -KI溶液 染色呈黄褐色。因此，可用I 2 -KI溶液染色来测定花粉活力。 【器材与用具】 显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。 【试剂】 I 2-KI溶液：取2g KI溶于5～10ml蒸馏水中，加入1g I 2 ，待完全溶解后， 再加蒸镏水300ml。贮于棕色瓶中备用。 【方法】 采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药，取一花药于载玻片上， 加一滴蒸馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I 2 -KI溶液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。 【注意事项】 此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。因为三核期退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反应。另外，含有淀粉而 被杀死的花粉粒遇I 2 -KI也呈蓝色。 三、氯化三苯基四氮唑（TTC）法
花粉生活力测定方法研究进展.
花粉生活力测定方法研究进展 摘要:总结了花粉活力测定的染色法、离体萌发法以及田间授粉法等的原理和应用并分析了各种方法的优缺点。 关键词:花粉花粉活力测定方法 花粉是高等植物的雄性配子体,在有性繁殖过程中起到传递雄性亲本的遗传信息。花粉不仅是植物遗传、育种、进化、生殖的重要研究对象,也是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理实验的重要材料。花粉活力是花粉具有生长、萌发、或发育的能力。在农业生产及农业常规杂交育种的中,研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基础性工作。农业生产和育种工作通常会遇到花期不一致带来的困难,为解决这一难题,保存花粉的活力成为重要手段,而在贮藏花粉之前必须先检测花粉的活力。不同种类植物花粉的自然寿命、适宜的贮藏方式及花粉活力适宜的测定方法不同。因此,掌握花粉活力的检测方法对提高育种效率有较高的作用和意义。 综合前人的研究结果,花粉生活力的检测方法可以分为四大类:①染色法;②萌发测定法;③田间授粉检测法;④形态测定法、无机酸检测法。 1染色法 1.1TTC 染色法 TTC 即 2,3,5-氯代三苯基四氮唑,它是一种氧化还原染料,水溶液无色。基本原理是 [1]:当 TTC 渗入细胞后, 遇到活细胞里的脱氢酶接受氢离子,由无色的氧化型变成红色还原型不溶于水的化合物,由此来判断花粉的生活力。 具体操作步骤:①配制 PH 为 7.17的磷酸缓冲液。称取 0.832克磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾溶于 100ml 的蒸馏水中,调整 pH 为 7.17。② TTC 溶液配制。依据不同植物称取 0.02~1.0g 的 TTC 溶于 100ml 的磷酸缓冲液中, 于棕色瓶中黑暗处保存。③染色。取少量花粉置于载玻片上,加上一滴 TTC 溶液,用镊子搅拌均匀,
菊科怎么造句
菊科怎么造句 ⑴其中，以蔷薇科、豆科、唇形科、菊科等科品种较多。 ⑵一个小的或者缩减的花朵，特别是草和菊科类植物，譬如雏菊。 ⑶侧重介绍了禾本科、豆科、蔷薇科、菊科和十字花科植物中抗病原真菌的活性物质的特点。 ⑷例如在十字花科和菊科的植物，柱头的外表产生乳头状单细胞，它具果胶纤维素的壁及一层不连续的角质层。 ⑸为菊科植物苦苣菜的全草。我国大部分地区有分布，多见于路边及田野间。 ⑹这类植物应归入菊科。 ⑺少为人知，是菊科植物在家庭过敏的潜质，如菊花，雏菊。 ⑻蜂斗菜与款冬则是菊科不同属的两种植物。 ⑼一种非洲菊科植物，特别是耳状冠毛菊属、大丁草属以及罗纳属的菊科植物，具有艳丽的头状花序。 ⑽单子叶植物以禾本科和莎草科为主，分别为270种和115种，双子叶植物以豆科和菊科为主，分别为212种和54种。 ⑾为提醒广西菊科药用植物区系的特点，对该区系的基本组成和地理成分进行了分析。 ⑿金鸡菊属菊科金鸡菊属的一种植物，尤其是北美的品种，有华丽堂皇的花冠，花色常为黄，少数的呈淡紫色。 1⑶通过调查和文献整理，初步确认广西有外来入侵植物114种，
从属于36科80属，其中以菊科的品种最多，有26种。 1⑷天人菊一种天人菊属新大陆菊科植物，长有大的冠状花序，由红色或黄色小花组合而成。 1⑸本文报导广州地区主要菊科杂草瘦果的形态特征及其分类，并描述一新变种。 1⑹这些抗菌植物主要分布在菊科、唇形科、豆科、百合科、蓼科和伞形科。 1⑺菊花脑是指一种可以食用的菊科植物头部的嫩茎叶。 1⑻翠菊：产于中国的一年生菊科植物（翠菊翠菊属），因有引人瞩目、色彩各异的花冠而被以数种形式广泛种植。 1⑼黄土高原植物资源丰富，其中有菊科药用植物53属、113种。 20、优势科主要有豆科、菊科、蔷薇科、唇形科、蓼科。 2⑴有天然牧草42科，138属，215种，主要是禾本科、菊科、豆科、藜科、莎草科和蔷薇科的种。 2⑵按照对31个性状的聚类分析和分类学原理，我们认为菊科可分为三个类群。 2⑶对国产菊科特有属毛冠菊属的花粉形态和构造进行了光学显微镜、扫描电镜和透射电镜的观察和研究。 2⑷湖北西部菊科春黄菊族植物有9属，54种，6变种，其中药用植物14种，香料植物7种，鞣料植物1种，花卉2种，蔬菜2种，饲料4种，有毒植物5种。 2⑸栌菊木是菊科的单型属。
花药的发育和花粉粒的形成
第三节花药的发育和花粉粒的形成 一、花药的发育 二、小孢子的形成 三、花粉粒的发育和形态结构 四、花粉败育和雄性不育 雄蕊和雌蕊是直接与生殖有关的花的组成部分，单核期的花粉（小孢子）和胚囊（大孢子），以及雄性配子（精子）和雌性配子（卵），将由两种花蕊分别产生，并进一步经受精作用，完成花的有性生殖过程。两种花蕊分别起源于雄蕊原基和雌蕊原基，在经过细胞分裂和一系列生长发育后，形成雄蕊和雌蕊。本节和下一节将分别对雄蕊和雌蕊的发育过程，进行较详的叙述。 雄蕊（即小孢子叶）是由花丝和花药两部分组成。花丝与生殖无直接关系，它的作用是将花药托展在空间，以利传粉，同时把营养输送到花药部分，供其发育时用。花丝的结构一般简单，最外层是一层角质化的表皮细胞，有的还附生毛茸、气孔等，表皮以内是薄壁组织，中央有一条由筛管和螺纹导管组成的维管束贯穿，直达药隔。花药（即小孢子囊）是雄蕊产生花粉的主要部分，多数被子植物的花药是由4个花粉囊组成，分为左、右两半，中间由药隔相连，也有少数种类花药的花粉囊仅2个的，同样分列药隔的左、右两侧。花粉囊外由囊壁包围，内生许多花粉粒。花药成熟后，药隔每一侧的两个花粉囊之间的壁破裂消失，二花粉囊相互沟通，犹如每侧仅含一个粉囊。裂开的花粉囊散出花粉，为下一步进行传粉作好准备（图4－32，图4－33）。 一、花药的发育 最初，在花托上产生雄蕊原基，从雄蕊原基进而形成的花药原始体在结构上十分简单，外面是一层表皮细胞，表皮之内是一群形状相似、分裂活跃的幼嫩细胞。以后由于原始体在四个角隅处细胞分裂较快，使原始体呈现出四棱的结构形状，并在每棱的表皮下出现一个或几个体积较大的细胞，这些细胞的细胞核大于周围其他细胞，细胞质也较浓，
花粉的形态观察及生活力测定
实验一花粉贮藏及花粉生活力的测定 花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术 一、实验目的 掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。 二、实验材料 百合、金鱼草、菊花等花粉。 三、仪器及药品 显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨水。 四、实验原理 花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。 花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过
氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。 鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种： 1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。 2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。 3 ．染色观察法 1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。 2 ） TTC 染色法：使用TTC测定花粉生命力的原理，主要是无色药液进入花粉遇到活组织里的脱氢酶，接受氢离子，还原成红色三苯基甲腊TTF，还原结果使有生命力的花粉染上红色，死花粉不着色；花粉生活力强弱有异，染色深浅也有不同。在28—30℃的温度下2小时以上(花卉不同染色时间也不同)。
花粉粒的发育
第十章植物的成熟与衰老 第一节授粉与受精 一、花粉粒和胚囊的发育 （一）花粉粒的发育 1．花粉粒的发生 花粉是花粉粒的总称，花粉粒是由小孢子发育而成的雄配子体。花粉囊内的花粉母细胞经减数分裂产生四个子细胞（图10-2），每个子细胞染色体数目是花粉母细胞的一半。这四个子细胞，起初是连在一起的，叫四分体。不久，这四个细胞彼此分离，最后发育成单核花粉粒。单核花粉粒最后发育为成熟的花粉粒（图10-3）。 图10-2 花粉母细胞减数分裂的两种胞质分裂类型 A．小麦的连续型胞质分裂；1．减数分裂后期Ⅰ2．产生分隔壁，形成二分体3．后期Ⅱ4．末期Ⅱ5．四分体形成B．蚕豆的同时型胞质分裂：1．减数分裂后期Ⅰ2．后期Ⅱ3．末期Ⅱ4．同时产生分隔壁5．四分体形成（另一小孢子在所见的三个小孢子的后方） （引自郑相如等主编《植物学》） 图10-3 花药横切面结构图 （引自郑相如等主编《植物学》） 阅读材料11-1：减数分裂时间判断 一般植物在花粉母细胞的减数分裂期间，对环境条件变化甚为敏感。例如水稻花粉母细胞减数分裂时期，正是水稻生育中的孕穗期，此时如遇干旱、低温、缺乏营养等都会影响花粉粒的正常形成，从而影响结实，降低产量，因此减数分裂时期是农业生产中加强管理的重要阶段。 为了掌握花粉母细胞的减数分裂时期，除了做压片直接在显微镜下检查外，通常可利用一定的形态学指标或计算方法进行预测。对水稻、小麦等禾本科作物，常可根据顶叶（花序下的叶，又称剑叶或旗叶）叶环与下一叶叶环之间的距离数值、幼穗的长度、幼穗分化开始后的天数和积温指数等来判断。例如水稻当剑叶和下一叶叶环重叠（叶环距为零）。颖花长度达到全长的55%~60%时为减数分裂盛期。小麦旗叶全部长出叶稍（挑旗），旗叶与倒二叶的叶耳距为2~4cm时为减数分裂时期。棉花减数分裂时，其花蕾长度达3~4cm，花瓣即将露出花蕊。但有时因品种、地区不同，减数分裂时期也会有所变动，应用多种方法综合分析，
花粉生活力测定
实验九花粉生活力测定 一、实验目的 1．学习和了解植物花粉生活力测定方法及原理。 2．初步掌握稻、麦的花粉生活力测定方法。 二、内容说明 农业常规育种工作中，为了进行人工辅助授粉和杂交授粉，尤其是杂交育种工作，为解决亲本花期不一致和远距离杂交的问题，通常需要早期采集和储藏花粉。不同类群植物花粉在自然条件下的寿命，花粉的储藏条件，以及花粉生活力的测定有所区别，这一是由花粉本身的特征决定的，二是由贮藏条件决定的。一般来说，禾谷类作物花粉的寿命较短，自花授粉植物花粉的寿命尤其短，如小麦在花药开裂后30min，花粉即由鲜黄色变为深黄色，此时己有大量花粉丧失活力。 在许多特殊条件下，花粉生活力的差异对于研究花粉-柱头的相互作用，作物改良与育种操作，基因库的保持，不亲和性与受精关系，生理调节对花粉萌发的影响和基因流等，均有非常重要的实践意义。因此，对于外地采集来的花粉的短暂贮藏、花粉的生物学研究、自交或远缘杂交分析结实率或不结实原因、鉴定雄性不育系时，花粉生活力的测定显得很重要。 花粉生活力有很多表述法，为了方便起见，现将各种表述方法列表如下(表9-1)，以供参考。 表9-1 花粉生活力的各种表述法 花粉生活力的测定方法较多，通常可分为萌发测定和不萌发测定两大类，常用的有：（1）形态鉴定法是一种简便的鉴定新采集花粉的方法。可通过直接观察花粉在形态上有明显差异来鉴定花粉有无生活力。发育不正常的花粉，内含物不充实而空秕，形状也不规则，大小参差不齐。而正常花粉内含物充实饱满，形状规则，大小整齐。因
内部含有较多淀粉粒而遇1%I-IK溶液呈深紫色反应，遇水易涨而破裂。一般适用于不育系及远缘杂交后代花粉形态和育性的鉴定。 （2）染色鉴定法（FCR法）用不同的化学试剂如双乙酸荧光素(fluorescein diacetate)、联苯胺茶酚等快速鉴定花粉生活力。双乙酸荧光素是一种荧光染料，其本身不产生荧光，无极性，可以自由地透过完整的原生质膜。当此种染料进入原生质后，即被酯酶作用而形成一种能产生荧光的极性物质—荧光素，并且这种物质不能自由出入原生质膜，而只在细胞内积累，所以，可以根据花粉产生荧光的情况判断花粉的生活力。此方法可同时反映出酶活和质膜情况两个指标。 （3）花粉发芽测定法配制一定浓度的蔗糖溶液等作培养基，在人工控制条件下进行花粉发芽试验。根据花粉发芽率的高低衡量花粉生活力。也可以在授粉数小时后直接观察柱头花粉萌发伸长情况。 三、材料仪器药品 1．材料当天采集的稻、麦任一种作物的新鲜花粉。 2．仪器用具冰箱、荧光显微镜、普通显微镜、恒湿箱、载玻片、盖玻片、培养皿、滴管、镊子、解剖针、吸水纸、滤纸、标签、铅笔等。 3．药品KNO3、NaOH、MgSO4、MnSO4、Ca(N03)2、H3BO3、1%I-IK溶液、双乙酸荧光素、丙酮、乳酸、苯酚、甘油、棉蓝、苯胺蓝、冰醋酸、蔗糖、琼脂、马铃薯淀粉、蒸馏水。 四、方法步骤 花粉的育性和生活力可由浅入深按以下顺序观察鉴定：外形观察→I-IK测定内含物的充实度→染色法鉴定花粉酶学性质→花粉发芽试验→观察花粉在柱头上萌发和伸长情况。 （一）形态鉴定 1．将少量正常的稻、麦的新鲜花粉用解剖针播于一般载玻片上，于低倍显微镜下观察花粉形态。根据形态特征，判断花粉的生活力状况。一般来说，畸形、皱缩、小型化等均为无生活力花粉，而有光泽、饱满、具有本品种花粉典型特征等性状的均为有生活力花粉。将观察的结果统计一下填写表格9-2。 2．与形态观察相同。但在有花粉的载玻片上滴1滴1%I-IK，再观察花粉是否染色和染色深浅情况，以判断花粉内含物的充实度。正常花粉应有较多的淀粉粒，遇I-IK呈紫黑色，不正常的染色浅或不染色。 （二）FCR测定法（荧光染料反应法) 荧光染色法可根据细胞质膜完整性判断花粉的生活力。迅速简便，与萌发测定有相
菊科花粉形态与系统分类的研究现状与发展趋势
菊科花粉形态与系统分类的研究现状与发展趋势 张小平, 王 琼 (安徽师范大学生命科学学院,安徽芜湖 241000) 摘 要:从菊科花粉的研究简史;菊科花粉的显微和超显微形态和结构;菊科花粉外壁超微结构类 型及分类群所属花粉类型的归类;菊科花粉外壁纹饰和超微结构特征的功能与进化;菊科花粉研究 今后的主要方向等5个方面对菊科现代花粉的研究现状与发展趋势进行了全面的综述,为古植物 和现代被子植物花粉的形态研究,以及花粉的应用研究包括被子植物的系统分类与演化学、地质 学、古气候、古植被和古地理学等学科的研究提供了详实的参考资料. 关键词:菊科;花粉形态;系统分类;研究进展 中图分类号:Q949.783.5 文献标识码:A 文章编号:1001-2443(2007)03-0326-05 1 菊科花粉的研究简史 菊科是一个包括2万余种的大科,其孢粉学研究具有悠久的历史,而且是菊科系统分类研究中的一个重要内容.菊科花粉研究不仅解决了该科中不少疑难类群的分类划界和定位问题,而且也为地层孢粉学研究提供了丰富可靠的对比资料,有力地促进了菊科孢粉学、被子植物系统演化学、地质学、古气候、古植被以及古地理学的研究进展. 菊科孢粉学研究始于1890年[1],按照研究的手段、内容和深度,可以将菊科花粉的研究历史大致分为三个主要阶段:第一阶段为花粉外壁外形观察分型阶段.从1926年至1945年,Wodehouse 利用光学显微镜观察和描述了菊科各个类群代表属种花粉的外壁形态,按照外壁纹饰特征,将菊科花粉分为三种主要类型,即 1.外壁光滑类(Psilate ); 2.外壁具刺类(Echinate ); 3.外壁网胞状类(Lophate ),即外壁隆起成脊和由脊围成一个个凹陷的孔,是菊科花粉中独特的类型,该类型又分为2种亚类型:(1)脊上有刺的(echinolophate );和(2)脊上无刺的(psilolophate ).由于受光学显微镜的限制,Wodehouse 未能揭示花粉外壁内部结构特征.因此他的研究结果表明菊科13个族除了Vernonieae 和Cichorieae 两个族的花粉与别的族有较大的差异外,其余11个族的大部分类群的花粉外壁外形特征有着惊人的相似. 第二阶段为花粉外壁内部结构观察分型阶段.1960年,Stix [2]借助紫外光显微镜观察经切割的花粉粒,首次描述菊科花粉的内部结构.Stix 观察了菊科所有13个族的228个代表种,揭示出花粉外壁内部结构的高度复杂性和变异性,当然其中有些变异类型和Wodehouse 在光镜下看到的外部类型是对应的.Stix 的重要发现是:菊科中很多外壁外形特征相似的花粉粒其内层结构却相差甚远,而且内层结构的差异较好地反映了植物之间的关系.根据这些差异,她在菊科中划分出42种花粉类型(Stix ,1960),但她并未将这42种花粉类型与族的分类和各类群的系统演化路线联系起来,从而探讨他们的作用和意义. 第三阶段利用透射电镜观察花粉壁的超显微结构,并且结合菊科的分类系统来划分花粉类型的阶段.Skvarla 等[3]根据花粉外壁外层的超显微结构,将外壁具刺,形态相似的菊科花粉又分为三种基本类型即春黄菊型,向日葵型和千里光型.Skvarla 等人的研究全面而精细,系统地展示了整个菊科在族级水平上的花粉形态结构及其在分类和演化中的作用. 近年来,在上述研究的基础上,菊科中很多族的花粉相继被进行了详细的研究,如Lactuceae [4,5],Vernonieae [6],Liabeae [7],Cichorieae [8],Ambrosiinae [9]以及Astereae 族中的一些北美属种. 收稿日期:2007-01-30 基金项目:教育部博士点专项科研基金(20060370001);安徽省自然科学基金(050430501). 作者简介:张小平(1956-),男,安徽泾县人,教授,博士生导师. 第30卷3期 2007年5月 安徽师范大学学报(自然科学版) Journal of Anhui Normal University (Natural Science )Vol.30No.3May .2007
实验四、花粉生活力的测定
实验四、花粉生活力的测定 一、实验目的：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法。 二、实验原理：花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力。花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。 三、实验材料：苹果花粉 四、实验用具与试剂：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾（KI）、碘、蓝墨水、蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等。 五、实验步骤 常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘-碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养基发芽法。 1. 形态观察法 直接在显微镜下观察花粉的形态，根据花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。具体方法：将花粉置于载玻片上，在显微镜下观察3个不同视野，要求被检查的花粉粒总数达到100粒以上，计算正常花粉粒占总数的比率。 此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。 2. 染色法 (1) 碘-碘化钾染色法 ①原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。据此，可用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。 ②I-KI溶液：取2.0 g KI溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1.0 g I2待全部溶解后，再加蒸馏水至200mL，贮于棕色瓶中备用。 ③具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。为了保证实验的准确性，要求观察不同的3个视野，求其平均值，统计花粉生活力。 (2) 蓝墨水染色法 ①蓝墨水溶液：正常购买的蓝墨水稀释10倍。
三花粉的贮藏和生活力测定
实验三花粉的贮藏和生活力测定 一、目的和要求 在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。 从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。因此不适宜做授粉品种。 本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。 二、花粉及用具 材料：桃或苹果树的花粉。 用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。 三、方法 （一）花粉贮藏 从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。 （二）花粉生活力试验 1、花粉发芽法 人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉发芽条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。 （1）培养基的制作与接种 一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用接种针或解剖针沾以少量花粉。轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并
四种常用花类生药的花粉粒的显微鉴别
十四种常用花类生药的花粉粒的显微鉴别 摘要：目的：利用花粉粒的特征来鉴别不同品种的花类生药材。方法：采用永久玻片法应用光学显微镜和显微分析图像技术观察花类生药的花粉粒的大小、形状、萌发孔、色泽。结果：花粉粒的鉴别专属性强，对于花类含花粉粒的生药易检出，也是一种简单、准确、快速的检出方法。结论：花粉粒因花类生药种类的不同，其大小、形状、萌发孔、色泽也有显着差异。 花粉在中成药的生产加工过程中，不易受酸、碱的破坏，还抗生物分解，因此稳定且专属性强【1】，是花类中药显微鉴别的标志性特征之一。不同科、种、属的花类生药的花粉粒形状、大小、萌发孔情况、色泽差异显着。以往研究报道多以墨线图对生药的显微特征进行描述，为克服描绘墨线图时引入的人为误差，本实验特将现代数码成像技术和传统的显微鉴定技术有机地结合在一起，应用光学显微镜及显微分析图像技术对十四种花类生药进花粉粒鉴别，并采用真实而直观的彩色数码照片来反映花类生药花粉粒的显微鉴别特征。 1 实验材料 实验仪器 光学显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、药勺。 实验试剂 无水乙醇、二甲苯、甘油、中性树脂。 实验材料 丁香、金银花、洋金花、红花、槐花、菊花、西红花、蒲黄、松花粉、野菊花、凌霄、款冬花、密蒙花、芫花，均购于同仁堂药店，经鉴定为正品。
2 实验方法 粉末的制备 先将购得的丁香、金银花、洋金花、红花、槐花、菊花、西红花、蒲黄、松花粉、野菊花、凌霄、款冬花、密蒙花、芫花、蒲公英依次分别放置打粉机，打粉1～2 min，打多次，至粉末细至1cm以下，得到的粉末装于玻璃瓶，分别 贴好标签。 永久玻片的制作 分别将丁香、金银花、洋金花、红花、槐花、菊花、西红花、辛夷、蒲黄、松花粉、野菊花、凌霄、款冬花、密蒙花、芫花粉末一小勺药匙置于滤纸，滴加2滴无水乙醇，浸没粉末，等待至微干。再滴加2滴二甲苯溶液，浸没粉末，等待至干。将经上述操作的粉末移至载玻片，滴加3滴中性树脂，要求完全浸润粉末，用大头针将粉末与中性树脂搅拌并推平。然后直接加盖玻片，要求盖玻片置中，且不能多次改变位置。等待完全干透，大概1w左右，显微镜观察，并保存相关图片。【2】 3 实验结果 镜检丁香、金银花、洋金花、红花、槐花、菊花、西红花、蒲黄、松花粉、野菊花、凌霄、款冬花、密蒙花、芫花、蒲公英的花粉粒特征，其特征见表1与图1~1 药品名花粉粒颜色花粉粒形状与大小 丁香粉末无色或微黄色近三角形,赤道表面观呈双凸镜形,直径20um~25um,具3副合沟(见图1) 金银花粉末黄白色类球形或圆三角形,直径60um~86um,外壁有细密短刺及颗粒状雕纹(见图2) 洋金花粉末无色、淡黄或黄色球形或扁球形,直径40um~65um,外壁有条纹状雕纹,自两极向四周放射状排列,萌发孔2个~3个,有 的花粉粒外壁破碎,内壁及内容物类圆形(见图3) 红花粉末鲜黄或橙黄类圆形或椭圆形,直径60um~80um,具3个萌发孔,外壁有短刺及疣刺状雕纹(见图4) 槐花粉末无色或淡黄色圆球形,直径14um~22um,具3孔沟,孔圆形而大,外壁稍厚,表面近光滑(见图5) 菊花粉末黄色类圆形,直径18um~32um,具3孔沟,外壁具有长刺,刺长3um~6um,刺基部宽(见图6) 西红花粉末无色或淡黄色类球形,直径70um~166um,萌发孔难察见,表面有稀疏的细小刺状雕纹(见图7) 蒲黄粉末黄色类球形,长圆形或圆三角形,直径20um~40um,表面具拟网状雕纹,网脊粗而中断,具单孔,不甚明显 (见图8) 松花粉末淡黄色椭圆形，长45~55μm，直径29~40μm，远极面具单孔沟，表面光滑两侧个有一膨大的气囊，气囊壁有明显的网状纹理 (见图9)
花粉生活力萌发试验
实验二花粉生活力的测定―――悬滴培养法 一、实验目的：掌握了解花粉生活力测定的意义和方法。 二、实验材料：二月兰花粉 三、实验仪器及药品：凹玻片、盖玻片、解剖针、镊子、纱布、标签、铅笔、显微镜、恒温 箱、蔗糖、蒸馏水、硼酸、凡士林。 四、实验原理：花粉是植物自然授粉和人工杂交的主要物质基础，花粉生活力的大小是保证 杂交成功的关键。在有性杂交育种中，常因父母本花期的不同，作为父本的花粉必须经过贮藏直到母本植株开花时再用于授粉（花粉在低温0－2℃、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低。花粉贮藏的原理就是创造代谢强度低的环境，以延长花粉的寿命）；或者双亲不在同一个地方，必须由外地邮寄花粉供应。经过贮藏或外地邮寄的花粉是否已经丧失生活力，必须经过测定才能确定。 鉴定花粉生活力的方法主要有四种：一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。此法的缺点是需要的时间较长，且实验的结果易受气候条件的影响。二是将待测花粉授到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况。根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。后两种方法都是根据花粉的萌发率来反映生活力的高低，有一定的参考价值。但是萌发的不一定都能受精，特别是人工萌发还受许多条件的限制，所以也只有相对的可靠性。四是用染色方法来鉴定花粉的生活力。其原理是在活的花粉内有过氧化氢酶的存在，它可以促进过氧化物（如H2O2）放氧分解。这些刚被放出的活性氧很容易使还原剂氧化，常用无色联苯胺、α－萘酚等还原剂做指示剂，这些还原剂被氧化后表现红色或玫瑰红色。如果花粉是活的，那么会很快被染成红色或玫瑰红色，如果花粉是死的，则这一反应迟迟不能进行，花粉保持原色。此法优点是比较快捷，但是比较间接。本试验采用悬滴培养法鉴定花粉生活力。 五、实验步骤： 1.配培养液：用蒸馏水和蔗糖分别配成5％、10%、15％的蔗糖溶液，并在各培养液 中加少量硼酸。 2.取盛开的正在散粉的二月兰花朵。 3.播花粉：在凹玻片的凹点滴一滴清水。在盖玻片中央滴一滴培养液，用镊子轻轻夹 取二月兰的花药，在培养液中央轻轻蘸一下，使花粉均匀的分散在培养液的球面上。 在盖玻片的四角涂抹少量的凡士林，用镊子夹住盖玻片在上提的过程中迅速把它翻 转过来，小心放在凹玻片上，使培养液处在盖玻片和凹点形成的小密室中。每个凹 玻片分别做蔗糖溶液的三个浓度，并用蒸馏水做对照。 4.培养：做好的凹玻片上贴好标签，注明花粉种类、培养液的浓度以及时间，然后小 心放到铺有湿润滤纸的培养皿中，放到22－24℃的恒温箱中培养5h。 5.观察：从恒温箱中取出凹玻片，在低倍镜下随机观察三个视野，计算花粉的萌发率。 以花粉管长度达到花粉粒径的2倍及以上视为萌发。 六、结果分析 1.分析花粉萌发率高或低的原因。 2.本实验关键性步骤总结及实验中所存在问题的讨论。 七、作业 1.绘制一幅花粉粒萌发形态图。 2.花粉生活力测定在杂交育种中的重要意义？测定花粉生活力的方法有哪些？
百合花粉生活力测定
百合花粉生活力测定 孙永田 （齐齐哈尔大学生命科学与农林学院园艺101，齐齐哈尔 161006） 摘要百合，球根花卉近年来在我国市场需求越来越大，培育新的百合品种是我国花卉科研工作者的工作之重。通过染色观察发测定百合花粉生活力，本实验采用两种方法为碘-碘化 钾法和α-奈酚法。 关键词百合生活力测定染色观察法碘-碘化钾法α-奈酚法 引言我国球根花卉近年来生产面积不断扩大，特别是百合种球的用量不断增加，根据资料统计2004年国内种植百合的面积达2567hm2，生产切花4.7亿枝，但是每年生产中使用的种球一亿粒以上都是从荷兰进口的。我国是百合属植物自然分布的中心，原产于中国的约47种，野生百合种质资源丰富，有很多独特的特性。但是长期以来，我国百合的育种工作远远落后于荷兰、美国、日本等发达国家，充分利用我国丰富的野生百合资源和国外的优良品种资源，培育具有自主知识产权的百合新品种，打破垄断行为，加快百合产业的发展，是我国花卉科研工作者的当务之急。 当前育成的百合新品种中，大部分采用的是常规杂交育种方法，一部分为远缘杂交种。进行杂交工作之前，熟悉掌握花粉的生活力是育种工作的必要准备。从花粉生活力作为亲本选择的标准进行亲本筛选，提高杂交授粉成功率。 1 试验方法和试验方案 1.1试验方法 染色观察法 1.1.1碘-碘化钾法（I-KI） 碘-碘化钾溶液的配制：取2g碘化钾溶于5~10ML蒸馏水中，然后加入1g碘，待全部溶解后加入蒸馏水至300ML定容。取适量新鲜花粉置于载玻片上，加1滴蒸馏水，再加1~2滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置于低倍显微镜下观察。凡花粉粒被染成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活力的花粉。 1.1.2α-奈酚法 A.配置药液：①将0.20g联苯胺溶于100ml的50%的乙醇中，盛入棕色瓶中，放暗处备用。 ②将0.15gα-奈酚溶于100ml的乙醇中，盛入棕色瓶中，放暗处备用。③将0.25克碳酸钠溶于100ml蒸馏水中，盛入白色瓶中备用。④将以上三种溶液等量混合，即成“甲液”，盛入棕色瓶中。⑤将3%过氧化氢，临用前用蒸馏水稀释成0.3%溶液，即成“乙液”，随配随用。 B.制片：取花粉少许，撒入凹型载玻片的凹点内，滴入“甲液”，片刻后再滴入“乙液”，三至五分钟后，在显微镜下观察不同的五个视野。凡有生活力的花粉为红色或玫瑰红色。黄色的（不着色的），为无生活力的花粉。 1.2实验方案 取同种百合花，不同生长程度的百合花花粉，分别用两种方法染色实验花粉生活力。取5 组花粉，每组花粉查看五个视野观察花粉生活力情况，每个视野读书用“，”隔开。A表示从开裂的百合花花药上采集的花粉，A取三组。B表示从即将开裂的百合花花药上采集的花粉，B取两组。
花粉生命力的测定与形态观察
实验三花粉生命力的测定与形态观察 花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过催延花期解决，有的则不得不进行花粉贮藏，为此我们必须掌握花粉贮藏的原理与技术。 为了避免杂交工作失误，在使用远地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉生命力进行鉴定，以便对杂交成果进行分析与研究。 一、实验目的 掌握了解花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法及原理。 二、实验材料 芙蓉花的花粉。 三、仪器及药品 载玻片、盖玻片、标签、标记笔、显微镜、蔗糖、蒸馏水、联苯胺、 -萘酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。 四、实验原理 在园艺植物有性杂交工作中，常因杂交亲本间花期不遇，或父本植株栽在异处(地)而必须预先收集花粉。花粉贮藏在低温(0～4℃)、干燥(相对湿度0～40％)、黑暗的环境下，代谢降低，可以较长时间地保持花粉生活力，但其贮藏期长短对花粉生活力的影响因品种而不同。在授粉之前，对贮藏的或外地采来的花粉必须预先测定花粉的生活力，以确定哪些花粉不能用于杂交，这对取得杂交效果有直接影响。 一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。此法的缺点是需时间较长，且实验结果易受气候条件的影响； 二是将待测粉受到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生命力； 三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。将花粉播种在特定的培养基上，并在一定的环境条件下来测定其发芽能力的方法。培养基常用蔗糖、琼脂(1％)和蒸馏水配制而成。不同植物的花粉，对蔗糖浓度要求不同，如柑桔花粉要求25％左右，苹果和梨10～15％，桃10％左右为宜。蔗糖浓度高低可调节培养基的渗透压，以防止花粉在培养基上破裂。培养基以微酸性为宜，一般在pH5.2～6之间。发芽温度在20～25℃左右，并需要空气和湿度，为了促进花粉发芽，在培养基中还可加入少量的硼酸和维生素B1。 利用花粉发芽试验测定花粉生活力是一种直接的测定方法，其结果也最可靠，但操作较麻烦，要有一定设备和一定时间。 四是用染色方法来鉴定花粉的生命力。其原理是在活的花粉内有过氧化氢酶