实验六肝脏谷丙转氨酶活力测定

肝脏谷丙转氨酶活力测定

进入实验室要注意的问题

安全第一，在实验室中使用挥发性试剂时应在通风橱中进行，以免发生中毒事件；不得在实验室中随意使用明火，因为实验室中有许多易燃易爆药品，使用明火可能引起火灾或引发爆炸事件；不得在实验室吃东西，实验结束后也应将手洗净再吃东西。在实验室中不得嬉戏打闹，更不得用实验药品互相开玩笑。实验中使用药品应尽量节约，不得浪费药品，未使用完的药品因倒人废液缸或指定的容器中，切不可倒入原试剂瓶以免污染试剂。实验完成之前不能离开实验室，如有特殊原因要离开需经实验室负责人批准才能离开。每个实验台内的各种仪器的摆放顺序要牢记，离开实验室前要将仪器按顺序摆放好。养成一个好的习惯。

一．实验目的

了解转氨酶的性质及临床意义，并掌握谷丙转氨酶活力的测定方法

二．实验原理

在氨基酸的分解代谢过程中，联合脱氨基为大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与氧化脱氨基的作用偶联而完成。本实验以丙氨酸和 ā-酮戊二酸作为谷丙转氨酶的作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作为辅酶，在一定条件及时间作用后来测定所生成的丙酮酸的含量来确定其酶的活力。丙酮酸能与2，4二硝基苯肼结合，生成丙酮酸-2，4二硝基苯腙，后者在碱性条件溶液中呈棕色，基吸收光谱的峰为439-530nm，可用于测定丙酮酸的含量。 ā--酮戊二酸与能与2，4二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中的吸收光谱与丙酮酸二硝基苯肼稍有差别，在520nm波长处 ā--酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远比丙酮酸2，4二硝基苯腙为低，因此在520nm处吸光度增加的程度与反应体系中的丙酮酸和 ā--酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系。故可籍此可测定谷丙转氨酶的活力。

三、实验器材

容量瓶100ml 4个500ml 2个；电子天平；玻璃棒；研钵；试管5支；试管架；移液管0.5ml 2支；1ml 2支；5ml 1支；滴管1支；分光光度计，比色皿4个；

四.实验试剂

1标准丙酮酸溶液：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于100ml 0.05mol/L H2SO4中，现用现配。

2、谷丙转氨酶底物：称取0.90g L-丙氨酸，29.2mg α-酮戊二酸，先溶于pH7.4 0.1mol/L 的磷酸缓冲液中。然后用1 mol/L NaOH 调节pH到7.4，再用pH7.4 0.1mol/L的磷酸缓冲液定容到100ml，贮存于冰箱中，可使用1周。

3、0.1mol/L pH7.4磷酸缓冲液：称取13.97g K2HPO4和2.69g KH2PO4溶于蒸馏水中，定容到1000ml。

4、0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液：称取20mg 2,4-二硝基苯肼溶于少量的1mol/L HCl中。加热溶解，用1mol/L HCl定容到100ml。（后经试验发现取20mg 2,4 - 二硝基苯肼，溶于7ml11.6mol/L的浓盐酸，再定容至100ml效果更好）

5、0.4mol/L NaOH ：称取16g NaOH定容到1000ml。

6、0.9%生理盐水：称取0.9gNaCl，定容到100ml。

五.实验操作

1.肝匀浆的制备（1）将小白鼠处死，取肝脏后用生理盐水冲洗，滤纸吸干后，称取0.5g

肝脏，剪成小块，加入预冷的pH7.4的磷酸缓冲液 4.5ml，在冰水浴中制成10%的匀浆，保存在冰水中备用。（2）吸取上述肝匀浆0.5ml于另一试管中，加入预冷的pH7.4的

0.1mol/L磷酸缓冲液4.5ml摇匀，为稀释肝匀浆。2.谷丙转氨酶活力的测定（1）取

4支试管，分别注明“测定管”、“对照管”、“标准管”、“空白管”。（具体操作见下表）加样顺序：

（2）混匀后，静置10min，于520nm波长处进行比色，读取测定管与对照管的吸光度，将测定管的吸光度减去对照管的吸光度后与标准管进行比较算出相当于丙酮酸的含量。

计算

谷丙转氨酶活力计算：本法规定酶在37℃与底物30min后能产生2.5ug的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位。据此计算每毫升稀释肝匀浆的谷丙转氨酶活力单位及每克肝组织中的谷丙转氨酶的总活力单位

（1）每毫升肝匀浆谷丙转氨酶活力单位的计算：D=(A-B) ×500/（S×2.5）=(A-B) ×200/S 式中D:每毫升肝脏匀浆谷丙转氨酶活力单位(U/ml)；A:样品管吸光度值；B:对照管吸光度值；S:标准管吸光度值；500:标准丙酮酸溶液；2.5浓度谷丙转氨酶的换算单位系数（2）每克肝组织中的谷丙转氨酶的总活力单位D’=D×50×10/0.5式中D’：每克肝组织中的谷丙转氨酶单位（U/g）；D:每毫升肝脏匀浆谷丙转氨酶活力单位(U/ml)；50:稀释倍数；10：0.5g肝脏制成10%肝匀浆；0.5：0.5g肝脏

思考题：

1、为什么在研磨肝脏的过程当中，必须在冰水浴中进行？

2、为什么加入底物和肝匀浆后要准确保温30分钟？

3、为什么加入2.4-二硝基苯肼溶液后一定要保温？

实验六肝脏谷丙转氨酶活力测定

肝脏谷丙转氨酶活力测定 进入实验室要注意的问题 安全第一，在实验室中使用挥发性试剂时应在通风橱中进行，以免发生中毒事件；不得在实验室中随意使用明火，因为实验室中有许多易燃易爆药品，使用明火可能引起火灾或引发爆炸事件；不得在实验室吃东西，实验结束后也应将手洗净再吃东西。在实验室中不得嬉戏打闹，更不得用实验药品互相开玩笑。实验中使用药品应尽量节约，不得浪费药品，未使用完的药品因倒人废液缸或指定的容器中，切不可倒入原试剂瓶以免污染试剂。实验完成之前不能离开实验室，如有特殊原因要离开需经实验室负责人批准才能离开。每个实验台内的各种仪器的摆放顺序要牢记，离开实验室前要将仪器按顺序摆放好。养成一个好的习惯。 一．实验目的 了解转氨酶的性质及临床意义，并掌握谷丙转氨酶活力的测定方法 二．实验原理 在氨基酸的分解代谢过程中，联合脱氨基为大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与氧化脱氨基的作用偶联而完成。本实验以丙氨酸和 ā-酮戊二酸作为谷丙转氨酶的作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作为辅酶，在一定条件及时间作用后来测定所生成的丙酮酸的含量来确定其酶的活力。丙酮酸能与2，4二硝基苯肼结合，生成丙酮酸-2，4二硝基苯腙，后者在碱性条件溶液中呈棕色，基吸收光谱的峰为439-530nm，可用于测定丙酮酸的含量。 ā--酮戊二酸与能与2，4二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中的吸收光谱与丙酮酸二硝基苯肼稍有差别，在520nm波长处 ā--酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远比丙酮酸2，4二硝基苯腙为低，因此在520nm处吸光度增加的程度与反应体系中的丙酮酸和 ā--酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系。故可籍此可测定谷丙转氨酶的活力。 三、实验器材 容量瓶100ml 4个500ml 2个；电子天平；玻璃棒；研钵；试管5支；试管架；移液管0.5ml 2支；1ml 2支；5ml 1支；滴管1支；分光光度计，比色皿4个； 四.实验试剂 1标准丙酮酸溶液：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于100ml 0.05mol/L H2SO4中，现用现配。 2、谷丙转氨酶底物：称取0.90g L-丙氨酸，29.2mg α-酮戊二酸，先溶于pH7.4 0.1mol/L 的磷酸缓冲液中。然后用1 mol/L NaOH 调节pH到7.4，再用pH7.4 0.1mol/L的磷酸缓冲液定容到100ml，贮存于冰箱中，可使用1周。 3、0.1mol/L pH7.4磷酸缓冲液：称取13.97g K2HPO4和2.69g KH2PO4溶于蒸馏水中，定容到1000ml。 4、0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液：称取20mg 2,4-二硝基苯肼溶于少量的1mol/L HCl中。加热溶解，用1mol/L HCl定容到100ml。（后经试验发现取20mg 2,4 - 二硝基苯肼，溶于7ml11.6mol/L的浓盐酸，再定容至100ml效果更好） 5、0.4mol/L NaOH ：称取16g NaOH定容到1000ml。 6、0.9%生理盐水：称取0.9gNaCl，定容到100ml。

赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶

实验十九 赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶 【原理】 L-丙氨酸 + α-酮戊二酸 α-丙酮酸 + L-谷氨酸 α-丙酮酸 + 2，4-二硝基苯肼 2，4-二硝基苯腙 （红棕色，λ=505nm ） 利用比色分析原理将样品显色与丙酮酸标准品配制成的系列标准液比较，求出样品中丙氨酸氨基转移酶（ALT ）活性。 【试剂】 1．0.1mol/L 磷酸二氢钾溶液 称取KH 2PO 4 13.61g ，溶解于蒸馏水中，加水至1 000ml ，4℃保存。 2．0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液 称取Na 2HPO 414.22g ，溶解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml ，4℃保存。 3．0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4） 取420ml 0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液和80ml 0.1mol/L 磷酸二氢钾溶液，混匀，即为pH7.4的磷酸盐缓冲液。加氯仿数滴，4℃保存。 4．基质缓冲液 精确称取D-L-丙氨酸1.79g ，α-酮戊二酸29.2mg ，先溶于0.1mol/L 磷酸盐缓冲液约50ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.4，再加磷酸盐缓冲液至100ml ，4～6℃保存，该溶液可稳定2w 。每升底物缓冲液中可加入麝香草酚0.9g 或加氯仿防腐，4℃保存。配成200mmol/L 丙氨酸与2.0mmol/Lα-酮戊二酸基质缓冲液。 5．1.0mmol/L 2，4-二硝基苯肼溶液 称取2，4-二硝基苯肼（AR ）19.8mg ，溶于1.0mol/L 盐酸100ml ，置棕色玻璃瓶中，室温中保存，若冰箱保存可稳定2个月。若有结晶析出，应重新配制。 6．0.4mol/L NaOH 溶液 称取NaOH 1.6g 溶解于蒸馏水中，并加蒸馏水至100ml ，置具塞塑料试剂瓶内，室温中可长期稳定。 7．2.0mmol/L 丙酮酸标准液 准确称取丙酮酸钠（AR ）22.0mg ，置于100ml 容量瓶中，加0.05mol/L 硫酸至刻度。此液不稳定，应临用前配制。丙酮酸不稳定，开封后易变质（聚合），相互聚合为多聚丙酮酸，需干燥后使用。 8．待测标本 病人血清或质控血清。 【操作步骤】 1．ALT 校正曲线绘制： （1）按表19-1向各管加入相应试剂。 表19-1 ALT 各标准管的配制方法 加入物（ml ） 1 2 3 4 5 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 2.0mmol/L 丙酮酸标准液 0 0.05 0.10 0.15 0.20 基质缓冲液 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 2,4-二硝基苯肼溶液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 混匀，37℃水浴20min ??→?ALT ???→?碱性条件下

谷丙转氨酶

谷丙转氨酶（GPT）活性的测定预习报告 1.研究背景：转氨酶是体内重要的一类酶。转氨酶催化α–氨基酸的α–氨基与α–酮酸 的α–酮基之间的相互转化，从而生成一种新的氨基酸与一种新的酮酸，这种作用称为转氨基作用。它在生物体内蛋白质的合成，分解等中间代谢过程中，在糖，脂及蛋白质三大物质代谢的相互联系，相互制约及相互转变上都起着很重要的作用。故转氨酶是氮代谢中不可缺少的一种酶，本次实验测定谷丙转氨酶活性不但可以进一步完善了转氨酶活性研究领域，并且对其他种类转氨酶活性测定具有一定指导作用，测得数据还可以作为临床医学参数造福人类。 2.研究目标：由于催化活性是酶的一个独特属性。酶蛋白质质量再多，纯度再高，如果没有活性往往是毫无意义的。实验用赖氏法分别测定兔子肝脏和血清中GPT活性，藉以作为谷丙转氨酶研究的一个基础。 3.研究策略：根据本次酶活力单位和酶比活定义，通过一定技术手段测定在该条件下由酶催化产生的丙酮酸的量，进而间接反应酶的比活。由于丙酮酸与2,4—二硝基苯肼反应所生成的丙酮酸二硝基苯腙，在碱性环境中于520nm下的特异光吸收在一定的浓度范围内符合朗伯比尔定律，故可以用比色法测定丙酮酸的含量，便可以计算出肝脏和血清中谷丙转氨酶的比活。 4．研究方案及可行性分析：现在可以对反应环境可以做到相当准确的控制，pH 值可以通过缓冲溶液控制，反应的温度可以通过恒温水域箱控制，电子天平可以测定万分之一克以及精确的容量瓶这样可以保证标准管丙酮酸的浓度的准确性。虽然这些实验基础具备了但是由于α-酮戊二酸和2,4—二硝基苯对显色的干扰，以致丙酮酸产量与酶量的关系并不始终成线性关系，其理论误差可以控制相应物质浓度尽量减小。同时，在操作过程中酶在相应条件下反应的时间，以及将试管同时放入和取出水浴的时间不能够精确保证，造成进一步的误差。故本次实验虽具有一定的可操作性，但由于其中引入的误差过程比较多，应该注意保证每一步的正确性，同时通过卡门氏单位进行校正，进而减小实验误差对可操作性带来的影响。 5．具体实验设计： 5.1实验材料：家兔的肝脏和血清 5.2实验仪器：722-光栅分光光度计、离心机、电热恒温水浴锅、匀浆机、移液器、100ml 容量瓶若干、15ml具塞刻度试管若干 5.3具体操作步骤 1．肝匀浆液制备：新鲜肝脏用生理盐水冲洗后沥干，取1g以9ml预冷的pH7.4的0.1M磷酸缓冲液在冰浴上充分匀浆（10%肝匀浆），4000转低温冷冻离心15分钟取上清液冰浴中备用，酶活测定时视情况一般还需稀释至少50倍使用。 2. 血清的制备：心脏采血，分装至预先用生理盐水浸润过的离心管中，3000转低温冷冻离心15分钟取血清冰浴中备用。 3.谷丙转氨酶活力的测定

肝脏病常用的实验室检查

肝脏病常用的实验室检查 一、填空题 1、健康体格检查时可选择（）（），从而发现病毒性肝炎。 2、怀疑原发性肝癌时，除查一般肝功能外，应加查（）（）及其同工 酶，（）及其同工酶。 3、、怀疑为肝纤维化或肝硬化时，ALT、AST、STB、A/G、蛋白电泳、ICG为筛选检查， 此外应查（）（）及（）。 4、、肝细胞受损时，LCAT合成减少，胆固醇的酯化障碍，血中胆固醇酯（）。 5、M蛋白血症，主要见于（），（）。 二、是非题 1、90%以上的蛋白质及全部清蛋白由肝脏合成。( ) 2、清蛋白含量与有功能的肝细胞数量呈反比。( ) 3、A/G倒置可以是清蛋白降低亦可以因球蛋白增高引起，可见于严重肝功能损伤。( ) 4、凝血酶原是时间测定可以判断肝病预后。( ) 5、血氨增高可见于严重肝病、上消化道出血、尿毒症及肝外门脉系统分流等。( ) 6、梗阻性黄疸时CB轻度增加，VCB明显增加，尿胆红素阴性。( ) 三、名词解释 1、A/G倒置 2、血清结合胆红素 3、同工酶 4、“胆酶分离”现象 四、选择题 Ａ型题 1—10 1、下列哪项是反映肝损害的最敏感的检查指标？( ) A、AFP（甲胎蛋白） B、ALT（丙氨酸氨基转移酶） C、AST（天门冬氨基转移 酶） D、ｒ－GT（ｒ－谷氨酰转移） E、ALP（碱性磷酸酶） 2、当临床上怀疑急性肝炎时，应尽快做下列哪项检查？( ) A、血清胆红素 B、ALT C、ALP D、血清胆红素 E、血清胆固醇 3、血清铁降低见于: ( ) A、急性肝炎 B、慢性肝炎复发时 C、肝细胞性黄疸 D、肝硬变黄疸 E、阻塞性黄疸 4、天门冬酸氨基转移酶同I酶（ASTm）升高对下列那种疾病的诊断最有意义？( ) A肝硬变 B、慢性肝炎 C、重症肝炎、肝坏死 D、肝癌 E、阻塞性黄疸 5、下列哪项对诊断肝钎维化最有意义？( ) A、MAO（单胺氧化酶） B、GGT C、ALT D、AFP E、ALP 6、尿胆原减少或缺如见于：( ) A、慢性肝炎 B、溶血性贫血 C、顽固性便秘 D、碱性尿时 E、胆道梗阻 7、关于尿胆红素测定，下列叙述那项正确？( ) A、正常可出现阳性反应 B、肝细胞黄疸时，尿胆红素中度增加 C、阻塞性黄疸时，尿胆红素阴性 D、溶血性黄疸时，尿胆红素明显增加 E、严重肾损伤时，尿胆红素明显增加 8、下列那种疾病胆固醇降低: ( ) A、阻塞性黄疸 B、肝硬变 C、肾病综合征 D、冠心病 E、脑动脉硬化 9、下列那种器官是合成胆固醇的主要脏器？( ) A、肝脏 B、脾脏 C、肾脏 D、肌肉 E、脑 10、保证血氨正常的关键是：( ) A、氨转变成氨基酸分子上的氨基

诊断学第一节肝脏病常用实验室检测项目

第一节肝脏病常用的实验室 检测项目 为发现肝脏损伤及了解、评估肝脏各种功能状态而设计的众多实验室检测方法，广义上可统称为肝功能试验（1iver function test，LFTs）。肝癌标志物、肝炎病毒血清标志物及基因检测因不属基本肝功能范畴，在其他相关章节中讲述。 一、蛋白质代谢功能检测 除γ球蛋白以外的大部分血浆蛋白，如清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、多种凝血因子、抗凝因子、纤溶因子及各种转运蛋白等均在肝脏合成，当肝细胞受损严重时这些血浆蛋白质合成减少，尤其是清蛋白减少，导致低清蛋白血症。临床上可出现水肿，甚至出现腹水与胸水。γ球蛋白为免疫球蛋白，由B淋巴细胞及浆细胞产生。当肝脏受损，尤其是慢性炎症时，刺激单核一吞噬细胞系统，γ球蛋白生成增加。当患严重肝病时血浆纤维蛋白原、凝血酶原等凝血因子合成减少，临床上出现皮肤、黏膜出血倾向。体内氨基酸及核酸代谢产生的氨在肝脏内通过鸟氨酸循环合成尿素、经肾脏排出体外，从而维持血氨正常水平，当肝细胞严重损害时，尿素合成减少，血氨升高，临床上表现为肝性脑病。由于肝脏参与蛋白质的合成代谢与分解代谢，通过检测血浆蛋白含量及蛋白组分的相对含量（蛋白电泳）、凝血因子含量及血氨浓度，可了解肝细胞有无慢性损伤及其损害的严重程度。

（一）血清总蛋白和清蛋白、球蛋白比值测定 90％以上的血清总蛋白（serum total protein，STP）和全部的血清清蛋白（albumin，A）是由肝脏合成，因此血清总蛋白和清蛋白含量是反映肝脏合成功能的重要指标。清蛋白是正常人体血清中的主要蛋白质组分，肝脏每天大约合成120 mg／kg，半衰期19～21天，分子量为66 000，属于非急性时相蛋白，在维持血液胶体渗透压、体内代谢物质转运及营养等方面起着重要作用。总蛋白含量减去清蛋白含量，即为球蛋白（globulin，G）含量。球蛋白是多种蛋白质的混合物，其中包括含量较多的免疫球蛋白和补体、多种糖蛋白、金属结合蛋白、多种脂蛋白及酶类。球蛋白与机体免疫功能与血浆黏度密切相关。根据清蛋白与球蛋白的量，可计算出清蛋白与球蛋白的比值（A／G）。 【参考值】 血清总蛋白及清蛋白含量与性别无关，但和年龄相关，新生儿及婴幼儿稍低，60岁以后约降低2 g／L，血清清蛋白占总蛋白量至少达60％，球蛋白不超过40％。在分析血清蛋白检测结果时。应考虑以下因素可影响测定结果：激烈运动后数小时内血清总蛋白可增高4～8g／L；卧位比直立位时总蛋白浓度约低3～5 g／L；溶血标本中每存在l g／L的血红蛋白可引起总蛋白测定值约增加3％；含脂类较多的乳糜标本影响检测准确性，需进行预处理，以消除测定干扰。

实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定 (3)

实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定 【目的和要求】 了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，学习转氨酶活力测定的原理和方法。 【原理】 生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类甚多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。它们催化的反应如下。 正常人血清中只含有少量转氨酶。当发生肝炎，心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。 测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。 丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，可用分光光度法测定。从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可计算酶的活力。 【操作方法】

2,4-硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙。底物中的α-酮戊二酸与2，4-二硝基苯肼反应，生成α-酮戊二酸苯腙。因此，在制作标准曲线时，须加入一定量的底物，（内含α-酮戊二酸）以抵消由α-酮戊二酸产生的消光影响。 先将试管置于37℃恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。向各管内加入0.5ml2，4-二硝基苯肼溶液后再保温20min，最后，分别向各管内加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。在室温下静置30min，以0号管作空白，测定520nm的光吸收值。用丙酮酸的微摩尔数为横坐标，光吸收值为纵坐标，画出标准曲线。 2．酶活力的测定：取2支试管并标号，用第1号试管做为未知管，第2号试管做为空白对照管。各加入谷丙转氨酶底物0.5ml,置于37℃水浴内10min，使管内外温度平衡。取血清0.1ml加到第1号试管内，继续保温60min。到60min时，向两支试管内各加入2，4-二硝基苯肼试剂0.5ml，于37℃保温20min,然后再向2支管中加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。在室温下静置30min后，测定未知管的520nm波长光吸收值（显色后30min 至2小时内其色度稳定）。在标准曲线上查出丙酮酸的微摩尔数。（用1μmol丙酮酸代表1.0单位酶活力）。计算每100ml血清中转氨酶的活力单位数。 【试剂和器材】 一`试剂 1．试管及试管架 2．吸管 3．恒温水浴 4．分光光度计 二`器材 1．0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4） 2．2.0μmol/ml丙酮酸钠标准溶液。 取分析纯丙酮酸钠11mg溶解于50ml磷酸缓冲液内[当日配制]。 3．谷丙转氨酶底物。 取分析纯α-酮戊二酸29.2mg DL-丙氨酸1.78g克置于小烧杯内，加1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸调整pH至7.4后，加磷酸缓冲液至100ml。然后加氯仿数滴防腐。此溶液每毫升含α-酮戊二酸2.0μmol，丙氨酸200μmol。[在冰箱内可保存一周]。 4．2，4-二硝基苯肼溶液。 在200ml锥形瓶内放入分析纯2，4-硝基苯肼19.8mg，加100ml 1 mol/L盐酸。把锥形瓶放在暗处并不时摇动，待2，4-二硝基苯肼全部溶解后，滤入棕色玻璃瓶内置[冰箱内保存]。 5．0.4mol/L氢氧化钠溶液。 6．人血清[冰箱内保存]

血清丙氨酸氨基转移酶值偏高的原因

如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 血清丙氨酸氨基转移酶值偏高的原因 导语：可能大家对于丙氨酸氨基转移酶还是不太熟悉的吧，其实丙氨酸氨基转移酶是我们体内参与蛋白质代谢的一种酶，丙氨酸氨基转移酶的值是比较固定 可能大家对于丙氨酸氨基转移酶还是不太熟悉的吧，其实丙氨酸氨基转移酶是我们体内参与蛋白质代谢的一种酶，丙氨酸氨基转移酶的值是比较固定的，我们可以通过观察丙氨酸氨基转移酶的值来知道我们肝脏的功能，如果丙氨酸氨基转移酶的值偏高或者偏低我们就应该引起重视才行。 谷丙转氨酶升高临床意义就在于对急性乙型肝炎、慢性肝炎、HBV 携带者、重型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的诊断和分析，ALT的升高只表示肝脏可能受到了损害。除了肝炎，其他很多疾病都能引起谷丙转氨酶转氨酶升高。 在急性肝炎及慢性肝炎与肝硬化活动，肝细胞膜的通透性改变，谷丙转氨酶就从细胞内溢出到循环血液中去，这样抽血检查结果就偏高，转氨酶反映肝细胞损害程度。但谷丙转氨酶缺乏特异性，有多种原因能造成肝细胞膜通透性的改变，如：疲劳、饮酒、感冒甚至情绪因素等等。上述原因造成的转氨酶增高一般不会高于60个单位，转氨酶值高于80个单位就有诊断价值，需到医院就诊。另外需要注意，谷丙转氨酶活性变化与肝脏病理组织改变缺乏一致性，有的严重肝损患者谷丙转氨酶并不升高。因此肝功能损害需要综合其他情况来判断。 当丙氨酸氨基转移酶偏高时会出现食欲减退、恶心、呕吐、黄疸、肝区疼痛等症状，这些症状都会在丙氨酸氨基转移酶偏高时表现出来。有丙氨酸氨基转移酶高的症状并不一定是肝炎引起的，应及时确定谷丙转氨酶高的原因，建议检查乙肝两对半明确是否有乙肝病毒感染， 预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定

2014级12班1组201450557 陆丽霞血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力测定 实验原理：以丙氨酸和ɑ-酮戊二酸为底物，在血清丙氨酸氨基转移酶的作用下，生成丙酮酸和谷氨酸；丙酮酸产量的多少，即反应酶活性的大小,丙氨酸能与2，4-二硝基苯肼结合，生成丙酮酸二硝基苯腙。丙酮酸二硝基苯腙在碱性溶液中呈现棕色，可用比色测定。 实验步骤： 1.标准曲线绘制： ⑴取6支试管并编号，按表4-16操作； 表4-16 标准曲线的绘制 试剂对照 1 2 3 4 5 2mmol/L丙酮酸标准液0 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 底物溶液0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 PBS缓冲液0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37摄氏度水浴5分钟，然后各管加入2,4—二硝基苯肼 2,4——二硝基苯肼0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 混匀，37摄氏度水浴20分钟，然后各管加入0.4mol/L NaOH 0.4mol/L NaOH 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 相当于ALT活力单位0 28 57 97 150 200 A5200 0.059 0.107 0.167 0.208 0.249 ⑵将所得6支试管混匀，10min后以对照组调零，用520nm波长 比色并读取吸光度； ⑶以吸光度为纵坐标，各管相应的转氨酶单位为横坐标，绘制标 准曲线

2．酶活性测定： ⑴取2支试管，编号，按表4-17操作： 表2 ALT活力测定 试剂对照测定 血清——0.1 PBS缓冲液0.1 —— 底物溶液0.5 0.5 混匀，37摄氏度水浴30分钟，然后各管加入2,4——二硝基苯肼2,4—二硝基苯肼0.5 0.5 混匀，37摄氏度水浴20分钟，然后各管加入0.4mol/L NaOH 0.4mol/L NaOH 5.0 5.0 A5200 0.122 ⑵用520nm波长比色，以对照管调零，读取测定管吸光度；实验结果: 由标准曲线方程y=0.0014x，当A520=0.122， 即y=0.122，故x=87 那么测得ALT酶活力单位为87 讨论：

谷丙转氨酶

谷丙转氨酶 科技名词定义 中文名称：谷丙转氨酶 英文名称：glutamic-pyruvic transaminase;GPT 其他名称：丙氨酸转氨酶(alanine aminotrans 定义：ALT) " 以上内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 谷丙转氨酶（又名谷氨酸转氨酶 ，简称GPT 、ALT ）升高在临床是很常见的现象。肝脏是人体最大的解毒器官，该脏器是不是正常，对人体来说是非常重要的。GPT 升高是肝脏功能出现问题的一个重要指标。在常见的因素里，各类肝炎都可以引起GPT 升高，这是由于肝脏受到破坏所造成的。一些药物如抗肿瘤药、抗结核药，都会引起肝脏功能损害。大量喝酒、食用某些食物也会引起肝功能短时间损害。 中文名： 谷丙转氨酶 外文名： Cereal third transaminase 别称： 谷氨酸转氨酶 简称： GPT 、ALT 正常参考值： 为0～40U/L

ALT与AST主要分布在肝脏的肝细胞内。肝细胞坏死时ALT和AST就会升高。其升高的程度与肝细胞受损的程度相一致，因此是目前最常用的肝功能指标。这两种酶在肝细胞内的分布是不同的。ALT主要分布在肝细胞浆，AST主要分布在肝细胞浆和肝细胞的线粒体中。因此，不同类型的肝炎患者的ALT和AST升高的程度及其AST/ALT的比值是不一样的。急性肝炎和慢性肝炎和轻型，虽有肝细胞的损伤，肝细胞的线粒体仍保持完整，故释放入血的只有存在于肝细胞浆内的ALT，所以，肝功能主要表现为ALT的升高，则AST/ALT的比值<1。重型肝炎和慢性肝炎的中型和重型，肝细胞的线粒体也遭到了严重的破坏，AST从线粒体和胞浆内释出，因而表现出AST/ALT≥1。肝硬化和肝癌患者，肝细胞的破坏程度更加严重，线粒体也受到了严重的破坏，因此，AST升高明显，AST/ALT>1，甚至>2。酒精性肝病的患者，AST的活性也常常大于ALT。但是重型肝炎肝功能衰竭由于肝细胞大量坏死，正常肝细胞数量少，转氨酶的生成、释放少，而血清胆红素则显著升高，出现"胆-酶分离"的现象，提示凶险。 分子机理 谷丙转氨酶 在肝细胞中，GPT把丙氨酸的氨基转移给a-酮戊二酸，把酮戊二酸的羰基转移给丙氨酸，这样丙氨酸成为丙酮酸，a--酮戊二酸成为谷氨酸。 注意事项 谷丙转氨酶偏高是个很常见的现象，如果化验单中显示谷丙转氨酶偏高时，不要惊慌，也不可乱用降酶药物，以免造成检查结果与实际病情不相符，而影响医生对病情的判断。大多引起谷丙转氨酶偏高的疾病都有典型的临床表现，一般可借助实验室检查，明确诊断。在诊断出病因之前应避免会导致谷丙转氨酶偏高的因素，如：急性软组织损伤、剧烈运动、服用药物、喝酒等等，亦可出现一过性谷丙转氨酶偏高，以免给病情的正确诊断造成影响。 相关知识 一般来说，转氨酶中的谷丙转氨酶是十分重要的标准，但是它却不具有器官专一性。用通俗的话就是，谷丙转氨酶的变化[2]不一定是因为肝脏问题造成的。许多疾病都可以引起它的增高。明显升高见于急性病毒性肝炎，中度升高见于慢性肝炎，肝硬化活动期，肝癌、肝脓肿、心梗、心肌炎、心衰等也可轻度升高。因此对GPT升高的评价应密切结合临床，部分GPT升高与脂肪肝，饮用酒精有关。

肝脏谷丙转氨酶活力测定

实验八 肝脏谷丙转氨酶活力测定 实验类型：验证性实验 相关知识 1. 酶活力： 2. 酶活力单位(即酶含量的多少) 国际单位 习惯单位：谷丙转氨酶在37度与底物作用30min 后，能产生2.5ug 的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位 3.转氨酶 4 谷丙转氨酶 一、 实验目的 1． 了解转氨酶的性质及临床意义 2． 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法 二、实验原理 丙氨酸及α－酮戊二酸作用为谷丙转氨酶的作用底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件下及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定酶活力。 丙酮酸能与2,4－二硝基苯肼结合，生成丙酸－2,4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439~530nm ，可用于测定丙酮酸的含量。 α－酮戊二酸也能与2,4－二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱为与丙酸－2,4二硝基苯腙的吸光度有差别，在520nm 波长比色时，丙酸－2,4二硝基苯腙吸光度高出3倍。 在520nm 处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α－酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以测定谷丙转氨酶的活力。 三、实验器材、试剂、材料 1． 新鲜猪猪脏 2． 722型分光光度计、剪刀、吸管 3． 标准丙酮酸溶液；谷丙转氨酶底物；0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH7.4）；0.02%2,4－二硝基 苯肼；0.4mol/L NaOH 溶液 2 ＋ 辅基为磷 2 2 + + ‘ ‘

四、实验操作步聚 1.肝匀浆制备 （1）将猪肝脏用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取肝脏0.25g，剪成小块，置于玻璃匀浆管内（或小研砵中），加入2.25ml预冷的pH7.40.1%mol/L磷酸缓冲 液，制成10%肝匀浆。（每四组1份） （2）吸取肝匀浆0.1ml于另一试管中，加入预冷的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4） 4.9ml摇匀，为稀释肝匀浆（稀释50倍）（每四组1份） 2.谷丙转氨酶活力测定（每组做1份） 取试管4支按下表加液 五、实验结果与讨论 2.每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（谷丙转氨酶活力计算：规定酶在37度与底物 作用30min后，能产生2.5ug的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位） 3.每克肝脏谷丙氨酶的活力单位。

9 血液中转氨酶活力的测定

实验九&十血液中转氨酶活力的测定（分光光度法） 本实验八人一组（根据分光光度计来确定） 一、目的要求： 1、了解转氨酶的重要作用及其在临床诊断中的意义。 2、学习转氨酶活力测定的原理和方法。 二、原理：（谷丙转氨酶和丙酮酸的反应方程式） 生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基与丙酮酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解，尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类很多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。正常人血清中只含有少量转氨酶，当发生肝炎、心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。 本实验采用分光光度计法。谷丙转氨酶作用于丙氨酸和α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙（催化反应方程式）。丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，可用分光光度法（520nm）测定。从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可以计算酶的活力。 三、操作： 实验九标准曲线的绘制（由于时间关系，只做一组数据，不要重复） 1、向试管中加入试剂（有改动）：取6支试管，分别标上0、1、 2、 3、 4、5六个号。按表中所列的次序添加各种试剂（由于后面测定样品时有对照实验，所以不需要加入谷丙转氨酶底物，以蒸馏水补齐；不需要保温10分钟来平衡内外温度）。 2、向各管内加入0.5mL 2，4—二硝基苯肼溶液后37℃保温20分钟。 3、分别向各管内加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5mL（丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色）。在室温下保温静置30分钟，以0号管做空白，测定A520nm的吸光度。用丙酮酸的摩尔数做横坐标，光吸收值为纵坐标，画出标准曲线。

检查项目名称结果单位正常范围值 血清谷丙转氨酶

检查项目名称结果单位正常范围值血清谷丙转氨酶(S-ALT) 28 U/L 0-60 血清谷草转氨酶(S-AST) 19U/L0-40 空腹血糖（Glu）医生：王香芝检查项目名称结果单位正常范围值血糖(空腹)(S-Glu) 6.2 ↑mmol/L 3.80-6.11肾功二项（肌酐、尿素氮）医生：王香芝检查项目名称结果单位正常范围值血清尿素氮(BUN) 7.39mmol/L2.5-8.3血清肌酐(S-Cr) 54.9 umol/L 32-133血尿酸医生：王香芝检查项目名称结果单位正常范围值血清尿酸(S-UA) 241.95 mmol/L 90-420血液分析医生：于迎晨检查项目名称结果单位正常范围值白细胞(WBC) 5.210^9/L4.0-10.0淋巴细胞比率(L YMPH%) 27.9%20-40中值细胞比率(MONO%) 16.6 ↑%1-15中性细胞比率(NEUT%) 55.5%50-70淋巴细胞数(L YM#) 1.410^9/L0.6-4.1中值细胞数(MONO#) 0.910^9/L0.1-1.8中性细胞数(NEU#) 2.910^9/L2.0-7.8红细胞(RBC) 5.4610^12/L3.5-5.5血红蛋白(HGB) 160g/L110-160红细胞压积(HCT) 48%32-48红细胞平均体积(MCV) 92.1fl80-99平均血红蛋白量(MCH) 29.5pg22-36平均血红蛋白浓度(MCHC) 320 g/L 320-360 红细胞分布宽度-(RDW-CV) 12.9%11.5-17.5血小板(PLT) 18310^9/L100-300血小板容积(PCT) 0.20%0.13-0.43平均血小板体积(MPV) 9.3fl4.5-12.5 血小板分布宽度(PDW) 11.6 % 8-17 血脂二项（TG、CHOL）医生：王香芝检查项目名称结果单位正常范围值血清甘油三酯(S-TG) 1.3mmol/L0.3-1.92血清总胆固醇(S-Chol)6.25 mmol/L 3.6-6.5总检医生血常规 项目名称单位参考范围项目名称单位参考范围红细胞计数10E12/L 4-5.5 血小板计数10E9/L 100-300 红细胞压积L/L 42-49 血小板平均体积f1 6-14 红细胞平均体积f1 82-95 血小板压积L/F 0.108-0.282 % 15-17 红细胞平均血红蛋白pg 27-33 血小板体积分布 宽度 平均血红蛋白浓度g/L 320-360 红细胞体积分布 % 10.6-15 宽度 血红蛋白g/l 120-160 单核细胞绝对值10E9/L 0.1-0.9 白细胞计数10E9/L 4-10 淋巴细胞相对百 % 20-40 分比 淋巴细胞绝对值10E9/L 0.8-4 粒细胞相对百分 % 50-75 比 中性粒细胞绝对值10E9/L 2-7 单核细胞相对百 % 3-9 分比 尿常规- 尿蛋白（PRO）- 尿酸碱值 4.5-8 尿糖（GLU）- 镜检红细胞0-3 尿胆红素（BLL）umol/L - 镜检白细胞0-5 尿胆原（URO）- 上皮细胞 尿潜血（BLO）- 管型 尿酮体（KET）- 结晶 亚硝酸盐（NIT）- 粘液丝 尿白细胞（LEU）- 尿比重（）1-1.03

丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)

丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法) 简介： 转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶，丙氨酸氨基转移酶(ALT)旧称谷丙转氨酶(GPT)主要存在于肝细胞浆内，细胞内ALT 浓度远高于血清，肝细胞破坏后，血清ALT 立即迅速升高，因此谷ALT 被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。 Leagene 丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，丙酮酸与NADH 经LDH 催化成NAD +，上述方法实际为ALT 速率法，在上述偶联反应中，NADPH 的氧化速率与样本中 酶活性呈正比。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 准备样品： ① 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定， -20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT 的检测。 ② 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个 月有效，用于ALT/GPT 的检测。 ③ (选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的ALT/GPT 含量。 2、 分光光度计检测：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避 免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。 编号 名称 TE0125 100T TE0125 200T Storage ALT 检测液(R) 成分 终浓度 2×50ml 2×100ml 4℃ 避光 Tris 缓冲液 100mM L-丙氨酸 500mM 酮戊二酸 15mM NADH 0.22mM LDH 1700U/L 防腐剂 15mM 使用说明书 1份 加入物 空白管 测定管

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定(赖氏法)

授课对象：06级检验1-5班 课时：2学时 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定（赖氏法） 目标：1.掌握赖氏法测血清ALT的原理及注意事项 2.掌握试剂的配制熟练地制作标准曲线 3.规范地进行ALT测定 4.了解血清ALT测定的临床意义 实验用品：配制试剂用的各种器皿（烧杯、容量瓶、电炉、分析天平等）、37℃水浴箱、721型风光光度计、坐标纸等 原理： 丙氨酸和α-酮戊二酸在血ALT的作用下生成丙酮酸及谷氨酸，在酶反应达到规定时间时，加入2.4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。生成的丙酮酸与入2.4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸入2.4二硝基苯腙，苯腙在碱性条件下显红棕色。根据显色之深浅，求得血清中丙氨酸氨基转移酶活力。 试剂： 1. 0.1molPH7.4磷酸盐缓冲液称取磷酸氢二钠（Na2HPO4AR）11.928g,磷酸二氢钾（KH2PO4AR） 2.176g，加少量蒸馏水溶解并稀释至1000mL。 2. ALP基质液称取DL丙氨酸[CHCH（NH）COOH]1.79g，α-酮戊二酸[COOH （COCOOH）29.2mg于烧杯中，加入0.1mol/L PH7.4磷酸盐缓冲液80mL,煮沸溶解后待冷，用摩尔NaOH溶液调节PH至7.4（约加入0.5ml），再用0.1mol/LPH7.4磷酸盐缓冲液稀释至100mL,混匀，加氯仿数滴，置冰箱保存数周。 3．1mmol/L2.4-二硝基苯肼溶液称取 2.4-二硝基苯肼[（NO）CHNHNH AR]19.8mg，用10mol/L HC110mL溶解，然后加蒸馏水至100mL，置棕色瓶内，冰箱保存。 4．0.4mol/L NaOH溶液。 5．2mmol/L丙酮酸标准液精确称取丙酮酸钠[CHCOCOONa AR]22.0mg于

肝脏中转氨酶活力的测定

实验九肝脏中转氨酶活力的测定 一、实验目的 1. 了解转氨酶的性质和临床意义； 2. 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法 二、实验原理 本实验以丙氨酸的氧化脱氨基为例，分别测定谷丙转氨酶，谷氨酸脱氢酶活性外，又通过抑制剂观察肝组织中的联合脱氨基作用。在谷丙转氨酶的催化下，丙氨酸和α-酮戊二酸作用生成丙酮酸和谷氨酸。次反应可逆，平衡点近于1.0无论正向反应或逆向反应皆可用于测定此酶的活性，既可测定所产生的氨基酸，也可以测定生成的酮酸，因此可有多种测定方法。 本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸作为谷丙转氨酶作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作为辅酶，在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定其酶活力。丙酮酸能与2,4-二硝基苯肼结合，生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收峰为439-530nm，可用于测定丙酮酸的含量。 α-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱与丙酮酸二硝基苯腙有差别，在520nm波长比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较丙酮酸二硝基苯腙为低（约相差3倍）。经转氨基作用后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加，因此在波长为520nm 处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸和α-酮戊二酸的摩尔浓度呈线性关系，故可借此测定谷丙转氨酶的活力。 三、实验材料、试剂和仪器 （一）材料与试剂 猪肝脏、乙醇、0.4mol/LNaOH 标准丙酮酸溶液（1mL 相当于500μg）：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于100mL 的0.05mol/L的H2SO4中，此液需临用前配制。 谷丙转氨酶底物：称取L-丙氨酸0.90g 及α-酮戊二酸29.2mg，先溶于pH7.4 的0.1mol/L 磷酸缓冲液中，然后用1mol/L NaOH 调至pH7.4，再加pH7.4 的0.1mol/L 磷酸缓冲稀释至100mL，贮藏于冰箱内，可保存一周。（试验了一下pH 接近7.5，中间未调整pH 值） 0.1mol/L 的磷酸缓冲液（pH7.4）：称取13.97gK2HPO4（如果是K2HPO4·?H2O，则需称取18.31g）和2.69gKH2PO4 溶于1000mL 蒸馏水中。 0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液：称取2,4-二硝基苯肼20mg 溶于少量1mol/L 盐酸中，加热溶解后，利用1mol/L 盐酸稀释至100mL。 （二）仪器/器具 电子天平、分光光度计、剪刀、移液管、组织破碎机 四、实验步骤 1. 肝匀浆制备与稀释

谷丙转氨酶的参考范围分析

谷丙转氨酶的参考范围分析 发表时间：2015-09-10T15:48:10.843Z 来源：《健康世界》2015年1期作者：张向前 [导读] 河南电力医院郑州 450001 现阶段人们生活水平提高，生活压力和生活习惯较之以前有很大的改变，相关的检查项目参考范围的制定还需要结合当地实际，才能更有效地判断谷丙转氨酶是否增高及其意义。 河南电力医院郑州 450001 摘要：目的：探讨郑州地区22岁至45岁之间健康成人的谷丙转氨酶参考范围。方法：选取河南电力医院2013年1月至2014年11月经检查肝、肾、心、脑、肌肉等无器质性疾患，近期无特殊用药史等的健康男性3106例，健康女性2835例，清晨空腹抽取3毫升血液检测谷丙转氨酶的含量。结果：经统计学软件分析，该组数据接近正态分布，经计算男性的医学参考范围为4.1～49.2U/L，女性的医学参考范围为3.3～48.0U/L。 谷丙转氨酶（GPT）通常也被称为丙氨酸氨基转移酶（ALT），它能将氨基酸的氨基通过酶促作用转移到酮基上，生成相应的酮酸与氨基酸反应，在正常的新陈代谢过程中，血清内谷丙转氨酶的维持一定的活性。谷丙转氨酶广泛存在于各组织细胞，以肝脏含量最多，其次是心肌细胞内，血清中酶活性很低。当这些组织病变，细胞坏死或通透性增强时，细胞内酶释放入血，使血清中ALT活性增高。血清ALT 测定主要用于肝脏病的诊断。谷丙转氨酶主要存在于肝细胞浆内，细胞内浓度高于血清中1000-3000倍。只要有1%的肝细胞被破坏，就可以使血清酶增高一倍。谷丙转氨酶升高在临床是很常见的现象，肝脏是人体最大的解毒器官，肝脏是不是在正常，对人体来说是非常重要的，谷丙转氨酶升高是肝脏功能出现问题的一个重要指标，在常见因素里，各类肝炎都可以引起谷丙转氨酶升高，这是由于肝脏受到破坏引起的。一些药物如抗肿瘤药，结核药，都会引起肝脏功能损害。大量喝酒、食用某些食物也会引起肝功能短时间损害。因此，谷丙转氨酶被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。 1 资料与方法 1.1 一般资料。选取河南电力医院2013年1月-2014年11月来我院体检的年龄在22岁-45岁之间，经检查肝、肾、心、脑、肌肉等无器质性疾患，近期无特殊用药史，抽血前一天正常饮食，无喝酒，无剧烈运动的人群，男性女性进行分组。 1.1 检验方法。清晨空腹抽取3毫升静脉血加入干燥管中，室温静置1小时后3500转离心15分钟取血清。仪器选用Beckman1200，原装配套试剂，由具有资格的专业人员按标准操作规程进行谷丙转氨酶的检测。 1.3 数据处理。运用专业的统计学软件对数据进行分析。 2 结果 经统计学软件分析，这两组数据符合正态分布，因此利用参考范围所对应的正态分布区间进行计算，得出男性谷丙转氨酶的均值为26.65 U/L，标准差为11.51，女性谷丙转氨酶的均值为25.65 U/L，标准差为11.40，即郑州地区22-45年龄段男性谷丙转氨酶的95%参考值范围是4.1～49.2U/L，女性谷丙转氨酶的95%参考值范围为3.3～48.0U/L。 3 讨论 谷丙转氨酶受的影响因素较多，例如大量或长期饮酒时，谷丙转氨酶会升高；服用对肝脏有损伤的药物或是某些化学制剂中毒等，也会引起谷丙转氨酶高；此外，健康人在肝功能检查前，剧烈运动、过度劳累等也会引起谷丙转氨酶增高的；各类急、慢性病毒性肝炎，脂肪肝，肝硬化、肝癌等肝脏疾病均可导致转氨酶高；胆囊炎、胆石症等胆道疾病急性发作时，血清转氨酶会升高；当患有急性心肌梗塞、心肌炎、心力衰竭等心脏疾病时，谷丙转氨酶和谷草转氨酶均升高。当需要判断谷丙转氨酶是否升高时，需结合当地的尤其是本实验室参考范围来定。如果谷丙转氨酶（ALT）血清值超过正常上限2－3倍，并持续两周以上，表明有肝胆疾病存在的可能，但须排除嗜酒、化学药物中毒等对肝脏的损害；接触化学物质如四氯化碳、某些重金属、砒霜等可引起中毒性肝炎）及生理状态下，如过度劳累、剧烈活动（乳酸在体内大量生成、积聚，使机体相对缺氧及低血糖，致使肝细胞膜通透性增加，引起转氨酶升高）月经期时等都可能使转氨酶暂时性升高；孕妇怀孕期间，胎儿的长大会对孕妇肝脏造成很大负担，从而导致转氨酶升高；某些感染性疾病例如流行性感冒、麻疹、血吸虫病、大叶性肺炎、肺结核等病症，也会使转氨酶偏高。某些外界因素引起的谷草转氨酶一过性增高，需要排除生理性因素再复查一次，若谷丙转氨酶持续增高，应进一步检查，例如检测乙肝五项等，以确定谷草转氨酶的原因进行对症治疗。当患有肝炎相关的疾病时，谷丙转氨酶的偏高仅仅是反映肝脏出现了炎性反应，而真正的传染性的时期是肝炎病毒感染的早期（临床上称为潜伏期），此期无症状，肝脏也无炎性反应，转氨酶正常，一旦肝脏出现炎症反应，转氨酶升高时，血中病毒滴度往往是很快下降，传染性明显减弱，各型病毒性肝炎中病毒的变化都有这种规律，所以认为转氨酶升高即表示病人有传染性，完全是一种误解。一般情况下，谷丙转氨酶降低没有临床意义。 现阶段人们生活水平提高，生活压力和生活习惯较之以前有很大的改变，相关的检查项目参考范围的制定还需要结合当地实际，才能更有效地判断谷丙转氨酶是否增高及其意义。因此，还有更多的检验项目需要进行统计以得出最适合本实验室的参考范围。参考文献： [1]陈彬，李克，林昆等.用多指标百分位数法确定医学参考值[J].西部医学；2013年02期. [2]刘瑾，王兰兰，蔡蓓等.1481例男性正常人血清甲胎蛋白、癌胚抗原以及总前列腺特异性抗原95%参考值范围的确定[J].华西医学，2006年03期. [3]颜进明，李明，王超等.对某院体检谷丙转氨酶异常状况的分析[J].求医问药，2011年10期