黄曲霉毒素

黄曲霉毒素是一种强烈的致癌物质，能使人体或动物的免疫功能丧失，诱导畸形、癌症的发生。黄曲霉毒素是毒性极强的化合物，AFB1的急性毒性为成年人半至死量（LD50）10.0。黄曲霉毒素急性中毒症状主要表现为呕吐、厌食、发热、黄疸和腹水等肝炎症状。而黄曲霉毒素的“三致”（致突变、致癌、致畸性）危害性，更引起人们的关注。黄曲霉毒素是目前所知致癌性最强的化合物，对鱼类、禽类、家畜和灵长目类动物的实验肿瘤诱导作用极大，并且能同时诱导多种癌症。黄曲霉毒素对人的致癌性虽然缺乏直接证据，但大量的流行病学调查均证实，黄曲霉毒素的高摄入量和人类肝癌的发病率密切相关。因此，世界各国对食品中的黄曲霉毒素的含量做出了严格的规定。

黄霉菌是微生物世界的一个大家族，黄曲霉菌是这个大家族的一员。黄曲霉菌本身是无毒的，但在其繁殖代谢的过程中可分泌出有毒的物质黄曲霉毒素。黄曲毒素是一种剧毒物质，它损害动物的肝脏，引起肝细胞坏死、肝纤维化、肝硬化等病变。黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质之一。

1 主要可诱发肝痛，还能诱发胃癌、肾癌、直肠癌及乳腺、卵巢、小肠等部位的肿瘤黄曲霉毒素对人体健康威胁很大。目前已确定其化学结构，黄曲霉毒素B1、B2、C1、G2等17种，其中趴毒性最大。食物中的花生、花生油、玉米、大米、棉籽等最容易污染上黄曲霉寿素，小麦，大麦也常被污染，豆类一般污染较轻，工业化生产的发酵制品如面酱。咸肉、火腿、香肠等肉类食品，亦能受到黄曲霉菌的污染。我国卫生标准规定，花生、花生油、玉米中，黄曲霉毒素含量不超过20微克/公斤；大米、食用油不得超过10微克/公斤；其它粮食、豆类、发酵食品不得超过5微克/公斤；婴儿食品中不得有黄曲毒素。

2 受黄曲霉菌污染的粮及食品不能食用

轻度污染的粮及其他食品，可以用一些简单的方法将毒素破坏掉或除去。日常生活中可以用以下方法去毒：

2．1 剔除霉变粮粒因毒素主要集中在霉变的粮粒中，凡表面长有黄绿色霉菌，或破损皱缩、变色、变质的花生米和玉米，都有可能污染黄曲霉毒素。在食用前应仔细挑选，剔除霉变粒。2．2 提高加工精度稻谷污染黄曲霉菌后，米中的毒素主要集中在米糠层，如果在稻谷加工时，将糙米碾得精一点，尽量除去米糠层，可降低大米中毒素的含量。玉米中的黄曲霉毒素有 54~72％集中在皮层和胚中，如在加工时提取胚，可除去大部分毒素。用含黄曲霉毒素的玉米制成玉米淀粉，毒素的含量仅为原有含量的1％。

2．3 水洗去毒将污染上黄曲霉菌的大米用清水反复搓洗五六次，一直洗到水清时再煮饭，可除去大部分毒素。

2．4 加热去毒蒸煮、爆炒或油炸可减少一部分黄曲霉毒素。轻度污染的花生米，爆炒可使黄曲霉毒素B1、C1含量分别减少65％和62％；若用油炸，可使黄曲霉毒素Bl、 Cl含量分别减少69％和67％。大米煮成米饭，一般能破坏20％的黄曲霉毒素。用高压锅煮米饭，去毒效果比普通锅煮饭好。

2．5 植物油中的去毒在含黄曲霉毒素的植物油中，加入活性白陶土或活性炭等吸附剂，搅拌后静置沉淀，取上层清油，毒素含量大为降低。如在含毒花生油中加入1．5％的白陶土，可使含毒量从每公斤100微克降至10微克以下。用含黄曲霉毒较低的植物油烹调食物时，先将油倒入锅内烧至冒微烟(约120℃时)，可除去油中90％以上的毒素。如果菜肴中加葱、姜、蒜等辛香料，对除去黄曲霉毒素效果更为理想。

2．6 山苍子去毒用中药山苍子或山苍子胶丸均可，每百公斤粮食用十四五粒胶丸。用法是先把胶丸剖开，放在小瓶中，用透气纱布扎住瓶口，然后连瓶埋人米缸中，盖上缸盖，让芳香油自然挥发，熏蒸粮食，即可消除黄曲霉毒素。将山苍子野果或干果直接埋人粮食中，亦可收到良好的效果。3 黄曲霉素的去除方法

黄曲霉毒素的污染是一个全球性的难题。黄曲霉在食品的加工、生产、贮存、运输等各个

环节都能生长，并且分泌黄曲霉毒素B1。动物摄入了黄曲霉毒素污染的饲料，其乳、肉、蛋中能积累、残留黄曲霉毒素。目前，常用理化法、生物法和酶解法去除黄曲霉素。 3.1 理化去除法

黄曲霉毒素主要存于发霉变色、破损的食品原料中，用挑选法除去含黄曲霉毒素的霉坏原料是非常简单的方法。但对于粉状和液体类物品中污染的黄曲霉毒素，吸附剂的吸附和化学物质的浸提法去毒较好。活性碳是有机物质热解时形成的不溶解性粉末，它能吸附多种药物及有毒物质。人们将其作为吸附剂吸附肠道中的有害物质。水貂的饲料中分别加入0、34和102μg/kgBW黄曲霉毒素B1，同时加入1.0%的活性碳，喂养77天。在

102μg/kgBW黄曲霉毒素B1 组，活性碳的加入使水貂的死亡率降低了50%，可预防34μg/kgBW组水貂的死亡，同时活性碳减轻了肝脏损伤的程度。皂土也称膨润土，类似于木炭，本身具有结晶体的微小结构，可以吸附其它分子，同时也可吸收大量水分而膨胀。研究认为：2%的皂土能吸附磷酸盐缓冲液中400μg的黄曲霉毒素B1，吸附率为90~100%。皂土与黄曲霉毒素形成的复合物用氯仿抽取，可抽提5~23%黄曲霉毒素B1。天然沸石的水合钠钙硅铝酸盐（hydrated sodium calcium aluminosilcate HSCAS）具有结合黄曲霉毒素的特性，不但能够减轻牛的黄曲霉毒素中毒症状，且能吸附牛奶中黄曲霉毒素M1 ，去除鲜乳中的黄曲霉毒素M1 。

黄曲霉毒素不溶于水、己浣等，易溶于氯仿、甲醇、苯等其它有机溶剂。根据这一特点，用水处理污染毒素的花生粉之后，再用氯仿提取，则很容易去掉花生粉中的黄曲霉毒素。用56%丙酮、42%己烷、2%的水（重量比）浸提榨过油的花生饼。可以除去98~99%的黄曲霉毒素。近年来，日本研究以二甲醚作为除去花生及制品中的黄曲霉素的有效溶剂。用二甲醚浸提后，黄曲霉毒素可全部除去，而二甲醚沸点低，在处理品中的残留量仅为10ppb。但是化学浸提液去除毒素，残留量大，对食品中的营养物质破坏性强，降低其营养价值，应用上受到限制。氨、醛法处理黄曲霉毒素污染的花生、玉米去毒效果良好。在含水量为15%、压力 202.6kpa，温度93℃时；处理含有110ppb的黄曲霉素的花生粉，经15min后，去毒率为100%；在30℃下，用氨水（含氨26%）熏蒸粉碎的玉米，密封储存2~6天，去毒率达100%，这种方法对玉米品质无影响，目前，国外已将黄曲霉素的氨、醛处理法用于生产。此外，酸碱去毒法、加热去毒、紫外线处理、盐类去毒、氧化剂去毒也是较好的去除黄曲霉毒素的方法。

黄曲霉毒素（Aflatoxins）是生长在食物及饲料上的黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，特曲霉也能产生黄曲霉毒素，但产量较少。目前已分离鉴定出的黄曲霉毒素有17种，主要是黄曲霉毒素B1（C17H12O6）、B2（C17H14O6）、G1（C17H12O7）、G2 （C17H14O7）以及由B1和B2在体内经过羟化而衍生成的代谢产物M1（C17H12O7）、M2（C17H14O7）等。

黄曲霉毒素是一组化学结构类似的化合物。黄曲霉毒素的基本结构为二呋喃环和香豆素，B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素），前者为基本毒性结构，后者与致癌性有关。B1的毒性（其毒性比氰化钾毒性高）及致癌性极强且耐热（B1的分解温度为268℃左右，一般烹调加工破坏很少），在天然污染的食品中以B1最为多见。1988年国际肿瘤研究机构(International Agency for Research on Cancer，IARC) 将黄曲霉毒素B1列为人类致癌物；1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物，被证明对人和动物的肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。黄曲霉毒素主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米等上；在水中的溶解范围为10～20mg/l，可大量溶解于氯仿、甲醇、二甲基亚砜等中等极性的有机溶剂中，不溶于己烷、石油醚和乙醚；易被碱或强氧化剂破坏；进入人体后主要经消化道吸收，大部分分布在肝脏、肾脏，少部分分布在血液、肌肉、脂肪组织等中，其在体内的代谢过程主要为羟基化作用、去甲基作用和环氧化作用。

人类接触黄曲霉毒素的主要来源是污染的食物，有两种通过膳食的摄入途径，①是由受黄曲霉毒素(主要为B1)污染的植物性食物中摄入；②是经饲料而进入奶或乳制品(包括乳酪、奶粉等)的黄曲霉毒素(主要为M1)。

危害

黄曲霉毒素对人和动物健康的危害均与黄曲霉毒素抑制蛋白质的合成有关。1961年科学家发现被黄曲霉污染的花生饼粕能诱发大鼠肝癌，1962年发现致癌物为黄曲霉毒素。黄曲霉毒素具有致癌性、致突变性及致畸性，能使鱼类、禽类、猴等实验动物、家禽及灵长类诱发实验性肝癌，主要病变为肝脏出血、坏死、胆管增生、肝硬化等。据报道，以含有B10.1mg/kg 的饲料喂鳟鱼，6个月后可出现肝癌；以含有B10.015mg/kg的饲料喂大鼠，经68～82周皆发生肝癌；国内进行的黄曲霉毒素致癌动物实验发现用含有黄曲霉毒素的饲料喂养的老鼠先后出现肝癌、前胃乳头状瘤、前胃鳞状上皮癌、纤维组织瘤、肾小管腺瘤、泪腺瘤、垂体腺瘤和甲状腺瘤等。此外，M1、G1及B2也有致癌作用。B1的半致死量(LD50)分别为大鼠(雄100g)7.2mg/kg；大鼠(雌 150g)17.9mg/kg；小鼠

9.0mg/kg；兔0.30～0.50mg/kg；猫0.55mg/kg；猴2.2～3.0mg/kg。黄曲霉的毒 (LD50)大小顺序为B1、M1、G1、B2、G2。黄曲霉毒素对植物、微生物、两栖动物、鸟类、甲壳动物、软体动物、昆虫等都有毒害作用，在植物的生长、收获、加工、贮藏、运输等过程中都可以发生黄曲霉毒素的污染。

食用受黄曲霉毒素污染的食品，会出现急性中毒。临床表现以黄疸为主，并有呕吐、厌食和发烧等症状。重症者在2～3周后将出现腹水、下肢水肿，甚至死亡，死亡前出现胃肠道出血。

在流行病学调查中发现，凡食物中黄曲霉毒素污染严重和人类实际摄入量较高的地区，肝癌发病率也高。

预防

黄曲霉毒素危害性大，存在范围广，为了预防黄曲霉毒素中毒事件的发生，维护人类健康，世界上已有70多个国家和地区对食品中黄曲霉毒素的含量作了限量要求。下面是一些国家和地区对食品中的黄曲霉毒素的检验检疫要求：

①美国联邦政府有关法律规定人类消费食品和奶牛饲料中的黄曲霉毒素含量(指 B1+B2+G1+G2的总量)不能超过20ug/kg，人类消费的牛奶中M1的含量不能超过0.5ug/kg，其他动物饲料中的含量不能超过300ug /kg；

②欧盟于1999年1月1日开始执行的EC No. 1525/98法规，规定直接提供给人类食用的食物及组成食品的组分中的黄曲霉毒素B1的含量不能超过2ug/kg，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的总量不得超过4ug/kg；

③日本规定食品中黄曲霉毒素B1的含量不能超过10ug/kg；

④我国食品中黄曲霉毒素B1允许量标准（GB2761-81）规定为玉米、花生仁、花生油中不得超过20μg/kg，玉米及花生仁制品（按原料折算）中不得超过20μg/kg，大米、其他食用油中不得超过10μg/kg，其它粮食、豆类、发酵食品中不得超过5μg/kg，婴儿代乳食品中不得检出，其他食品可参照以上标准执行；牛乳及其制品中黄曲霉毒素M1限量卫生标准（GB9676-88）规定为：牛乳及其制品中黄曲霉毒素M1不得超过0.5μg/kg。目前，测定食

品中的黄曲霉毒素的方法有薄层层析法、液相色谱法、放射免疫分析方法、酶联免疫法、免疫层析法、微柱筛选法、金标试纸法等。我国现行使用的国家标准GB/T 5009.22-1996规定了食品中黄曲霉毒素B1的测定方法、GB/T 5009.23-1996规定了食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定方法、GB/T 5009.24-1996规定了食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定方法。此外，卫生部于1990年11月发布了《防止黄曲霉毒素污染食品卫生管理办法》。

预防黄曲霉毒素危害人类健康的主要措施是防止食品被黄曲霉毒素污染，并尽量减少人类随同食品摄入黄曲霉毒素的可能性，所以日常生活中要加强对食品的防霉去毒工作，要降低食品中的水分、降低食品存放温度和氧气浓度、保证食品存储仓库干燥、通风，使得黄曲霉菌不易生长；对于受黄曲霉毒素污染的食品可采用淘选、吸附（植物油）、烹调、碾磨（粮食）、化学法（食品和动物饲料）等方法去毒。

黄曲霉毒素B检测试剂盒操作办法

黄曲霉毒素B检测试剂 盒操作办法 文件编码（GHTU-UITID-GGBKT-POIU-WUUI-8968）

黄曲霉毒素B1检测试剂盒操作方法2/50ppb 一、样品的准备/萃取 1.获取具有代表性的样品，使用Romer系列II型研磨机研磨，使至少95%的研磨样品能够通过20目筛网，彻底混合并对样品进行二次取样。 2.称取4g研磨样品于干净并可密封的广口瓶中。加入20mL70/30（v/v）甲醇/水萃取溶液并密封广口瓶。注意：样品与萃取溶液比例应为1：5（w:v），振荡或均质3分钟。 3.静置样品，用滤纸过滤萃取上清液，收集待检滤液。 4.用提供的分析缓冲液对滤液进行1：2稀释。例如，将50μL待检滤液加入50μL分析缓冲液中，混匀准备进行随后检测。 二、检测步骤 1．将适量的标记颜色的稀释孔条放入微孔板架上，稀释条孔的数目需使每个标准品 （0,2,5,20&50ppb）或样品能够对应一个稀释孔。 2．将等量的有抗体包被的微孔条放入微孔板架上，未使用的有抗体包被的微孔条需放回装有干燥剂的原铝箔袋内并密封保存。 3．按照240μL/孔或2mL/条的体积计算所需的酶联偶合物用量。从绿色瓶盖的瓶中量取所需用量的酶联偶合物至一个酶联偶合物试剂槽中（如多道移液器所用的试剂槽）。使用8道移液枪移取100μL酶联偶合物至每个稀释孔中。 4．使用单道移液枪，移取50μL标准品和样品至已装有100μL酶联偶合物的稀释孔中。用移液枪反复吸送3次以充分混合孔中液体。每当移取一个标准品或样品时，单道移液枪必需更换上新吸头。注意确保最后将吸头中的液体排空。

5．使用换有全新吸头的8道移液枪，快速移取每个稀释孔中的液体各100μL至相应的有抗体包被的微孔中。室温下放置15分钟。注意不要摇动微孔板去混匀孔中液体，以免引起孔与孔之间的污染。 6．将孔中的液体甩入水槽中，用去离子水或蒸馏水冲洗每个孔，然后将微孔中的水甩入水槽中。如此方式反复冲洗5次。注意在冲洗过程中不要将微孔条从微孔板架上取下，每条微孔条带应被固定在微孔板架上。 7．冲洗完毕后，将几张吸水纸巾放置在平整的桌面上，使微孔板倒置扣击纸面，以尽可能地将残留的水分排出。用干布或纸巾擦干微孔板底反面的水珠。 8．按照120μL/孔或1mL/条的体积计算所需的底物用量。从蓝色瓶盖的瓶内量取所需用量的底物至一个底物试剂槽中（例如适用于8道移液枪的试剂槽中），使用8道移液枪移取100μL底物至每个微孔中，室温下放置5分钟。 9．按照120μL/孔或1mL/条的体积计算所需的终止液用量。从红色瓶盖的瓶中量取所需用量的终止液至一个终止液试剂槽中（例如适用于8道移液枪的试剂槽中），使用8道移液枪依序（顺序与加入底物的顺序相同）向每个微孔中加入100μL终止液终止反应。颜色应由蓝变黄。 10．用酶标仪在450nm滤镜及示差滤镜630nm下读取结果，记录每个微孔的吸光度OD 值。注意在读取数据前，微孔中应没有气泡，否则将影响分析结果。 三、试剂盒提供材料 96孔（12X8）抗体包被的微孔板（铝箔袋封装） 96孔（12X8）绿色稀释微孔板（标记颜色） 5瓶黄曲霉毒素标准品，各1.5mL(0,2,5,20&50ppb) 1瓶25mL黄曲霉毒素酶联偶合物（绿色瓶盖） 1瓶15mL底物溶液（蓝色瓶盖）

黄曲霉毒素B检测试剂盒操作方法

黄曲霉毒素B1检测试剂盒操作方法2/50 ppb 一、样品的准备/萃取 1. 获取具有代表性的样品，使用Romer 系列II型研磨机研磨，使至少95%的研磨样品能够通过20目筛网，彻底混合并对样品进行二次取样。 2. 称取4g 研磨样品于干净并可密封的广口瓶中。加入20mL 70/30（v/v）甲醇/水萃取溶液并密封广口瓶。注意：样品与萃取溶液比例应为1：5（w:v），振荡或均质3分钟。 3. 静置样品，用滤纸过滤萃取上清液，收集待检滤液。 4. 用提供的分析缓冲液对滤液进行1：2稀释。例如，将50μL待检滤液加入50μL分析缓冲液中，混匀准备进行随后检测。 二、检测步骤 1．将适量的标记颜色的稀释孔条放入微孔板架上，稀释条孔的数目需使每个标准品（0, 2, 5, 20 & 50ppb）或样品能够对应一个稀释孔。 2．将等量的有抗体包被的微孔条放入微孔板架上，未使用的有抗体包被的微孔条需放回装有干燥剂的原铝箔袋内并密封保存。 3．按照240 μL/孔或2 mL/条的体积计算所需的酶联偶合物用量。从绿色瓶盖的瓶中量取所需用量的酶联偶合物至一个酶联偶合物试剂槽中（如多道移液器所用的试剂槽）。使用8道移液枪移取100μL酶联偶合物至每个稀释孔中。 4．使用单道移液枪，移取50μL标准品和样品至已装有100μL酶联偶合物的稀释孔中。用移液枪反复吸送3次以充分混合孔中液体。每当移取一个标准品或样品时，单道移液枪必需更换上新吸头。注意确保最后将吸头中的液体排空。 5．使用换有全新吸头的8道移液枪，快速移取每个稀释孔中的液体各100μL至相应的有抗体包被的微孔中。室温下放置15分钟。注意不要摇动微孔板去混匀孔中液体，以免引起孔与孔之间的污染。 6．将孔中的液体甩入水槽中，用去离子水或蒸馏水冲洗每个孔，然后将微孔中的水

黄曲霉毒素中毒

黄曲霉毒素中毒(AflatOXiCOSiS) 奶牛因长期或大量摄食经黄曲霉、寄生曲霉污染的饲料所致的中毒性疾病称黄曲霉毒素中毒。其临床特征是消化机能紊乱、神经症状和流产；剖检见肝变性、坏死和纤维化硬变。 病的发生 1961年Loosmore等首先报道了反刍兽的黄曲霉毒素中毒。20世纪60年代初，在英国东南部一些农场，约有l0万只火鸡死亡，病因不明，以肝坏死为特征，称为“火鸡X病”。经研究确定此病为黄曲霉毒素所致。 牛的黄曲霉毒素中毒的自然病例日趋增多。奶牛和肥育牛发病较高，尤以犊牛更为常见。由于黄曲霉和寄生曲霉广泛存在于自然界中，被污染的饲料不仅对牛，而且对鸭、鹅、鸡、猪、马和人都呈现中毒作用，同时黄曲霉毒素(AFT)还具有极强的致癌作用，因此现已引起世界各国的普遍重视。 病因 各种饲料如干花生苗、花生饼、玉米粉、谷类、豆类及其饼类、棉籽粉、酒糟，以及贮藏过的混合饲料，由于保管、贮存不当，在高温、高湿的坯境条件，极易为黄曲霉、寄生曲霉生长，产生黄曲霉毒素。有的是动物食人受黄曲霉污染饲料后在体内形成代谢产物——黄曲霉毒素。AFT是一类结构类似的化合物，都含有二呋喃环和香豆素。目前已明确其结构的有十多种，主要有AFTB1、AFTB2、AFTG1、AFTG2、AFTM1和AFTM2。其中以AFTBl含量最高，毒性最大。所以当奶牛长期或大量摄取这些饲料后，即能引起中毒。AFT毒性比氰化钾还大。肝脏是AFT的靶器官。由于其品种、年龄、性别及个体的耐受性不同，因此中毒量各异。实验表明，体重183kg的肥育牛，采食含其毒素650—800ug／kg饲料的日粮，经17．5周后有轻度病变；奶牛每日每千克体重摄人o．5mg黄曲霉毒素，19周后出现产乳量降低，乳中可检出毒素；断乳犊牛采食含黄曲霉素0．22～2．2mg／kg体重的日粮，16周后出现了生长缓慢、肝损伤，甚至死亡；海伏特公犊，每千克体重口服0．1～1．0mgAFT，42d内3头牛无死亡；口服1．2—1．6mg 的3头牛，2头死亡，日服1．8mg的3头牛全部死亡。 Patterson指出，饲料中含有AFT 100ug／kg即对牛有害。对3月龄犊牛，AFT 中毒量为110ug／kg饲料，对成年牛低于这一剂量仍能引起中毒。 临床症状 急性中毒食欲废绝，精神沉郁，拱背，惊厥，磨牙，转圈运动，站立不稳，易摔倒。黏膜黄染，结膜炎甚至失明，对光过敏反应；颌下水肿；腹泻呈里急后重，脱肛，虚脱；约于48h内死亡。 慢性中毒犊牛表现是食欲不振，生长发育缓慢，惊恐、转圈或无目的徘徊，腹泻，消瘦。成年牛表现前胃弛缓，精神沉郁，采食量减少，奶产量下降，黄疸；妊娠牛流产，排足月的死胎，或早产。因奶中含有黄曲霉毒素，故可引起哺乳犊牛中毒。由于毒素抑制淋巴细胞活性，损伤免疫系统，故机体抵抗力降低，易引

饲料中常见霉菌毒素的中毒症及危害

饲料中常见霉菌毒素的中毒症及危害（综述） 易中华1 吴兴利2 （1 江西农业大学动物科技学院江西南昌330045 ；2 中国农业大学动物科技学院北京100094 ） 饲料霉变的典型特征是产生霉菌毒素，可造成高达10％的经济损失，是饲料工业和畜牧业 生产中不可忽视的问题。霉菌毒素不但对动物产生毒害作用，而且可通过食物链危及人类健康。动物对霉菌毒素的临床反应与其它化学毒物的反应相似，表现为急性、亚急性或慢性病症，并具 有剂量和时间依赖关系。急性中毒可产生毁灭性影响，而且由于可疑饲料在检测前就被采食，中毒难以诊断和治疗。由于大量化学结构不相关的霉菌毒素产自不同真菌，很难准确指出某特定疾病发作是何种毒素造成的。动物慢性中毒症可降低生产性能、降低体重和饲料转化效率、降低肉和蛋的产量、抑制免疫并增加疾病发生率、损害重要组织器官、扰乱繁殖性能，引起的经济负面影响是急性发病和死亡的几倍。饲料和食品中的霉菌毒素有致癌的潜在危险，还有一些微妙的未知毒性作用，这与全球关注的健康危机紧密相关。现将饲料中几种常见霉菌毒素的中毒症及危害介绍如下： 1 黄曲霉毒素（Aflatoxins ） Aspergillus flavus ）的一种代谢产物，目前已发现黄黄曲霉毒素是黄曲霉（ 曲霉毒素及其衍生物有20种，以毒素B1、B2、G1和G2的毒力最强，在紫外线照射下，B1、B2呈蓝紫色荧光，G1、G 2呈黄绿色荧光，它们都具有致癌作用，导致动物和人类肝损害和肝癌， 其中又以B1 的致癌性最强。当B1 进入机体后，在肝细胞内质网中的混合功能氧化酶的催化下，转变为环氧化黄曲霉毒素B1,再与DNA及RNA吉合，并发生变异，使正常肝细胞转化为癌细胞。 可见，黄曲霉毒素是一种肝毒性很强的毒素。黄曲霉毒素作用机理是影响细胞膜，抑制RNA合成并干扰某些酶的感应方式，中毒症状无特异表现，按症状的严重程度不同，临床可表现为发育迟缓、腹泻、肝肿大、肝出血、肝硬化、肝坏死、脂肪渗透、胆道增生等。其毒性因剂量、中毒持续时间、动物种类、品种、饲粮或营养状况等因素不同而不同（见图 1 ）。家畜对黄曲霉毒素的 易感性其顺序是：小鸭＞小猪＞犊牛＞肥育猪＞成年牛＞绵羊。 图 1 黄曲霉毒素攻毒递增剂量与豚鼠肝脏变化。上排最左边豚鼠未接毒，下排最右边豚鼠接毒剂量最大。注意到，豚鼠肝的苍白色随黄曲霉毒素剂量的增加而增加。 黄曲霉毒素摄入剂量过大时可致死，亚致死量可产生慢性毒性，长期摄入低剂量黄曲霉毒素可致癌（Sin nhuber 等，1977；Wogan和Newberne，1967）。一般情况下，动物年龄越小，其敏感性越高；雌性动物比雄性动物具有更强的耐受性；营养状况越差越容易发病；怀孕母畜比未怀孕母畜更容易产生反应。黄曲霉毒素已引起人们对公共卫生问题的强烈关注，因为黄曲霉毒素广 泛存在于被污染的花生、玉米、大豆、油类等食物中，是人类致癌的潜在因子。虹鳟鱼是早期研究黄曲霉毒素的试验动物，它们对黄曲霉毒素很敏感，其半数致死量按等比例混合黄曲霉毒素B1和G1计算为0.5?1.0 mg/kg（Lee等，1991）。饲粮中黄曲霉毒素的肝细胞恶性瘤致病几率高达8.0 x 10-8。虹鳟鱼在早期发育阶段对性疾病很敏感。将鱼苗或胚胎浸在黄曲霉毒素含量为0.5 mg/kg 的水中半小时，9 个月后30％?40％的鱼患有肝细胞癌（Sinnhuber 等，1977）。根据Lee 等（1991）综述黄曲霉毒素在对鱼的毒性，黄曲霉毒素导致加利福尼亚州鱼苗孵化场黄曲霉毒素中毒症流行，并很可能是鱼肝癌流行的原因。据调查，受黄曲霉毒素污染的棉籽粕是发病的原因。虹鳟鱼采食含黄曲霉毒素的饲料后，逐渐发展为肝癌（Sin nhuber 等，1977）黄曲霉毒素的中毒症在哺乳仔猪、生长猪、育肥猪和种猪上有报道。临床和病理症状包括：体增重减速，饲料转换效率下降，中毒性肝炎，肾病变，全身出血（Hoerr 和Andrea ，1983 ；Miller 等，1981 ，1982）。黄曲霉毒素对猪的毒性作用因年龄、饲粮、含量和中毒持续时间等的变化而 变化。猪从断奶至上市，饲粮黄曲霉毒素耐受量为0.3 mg/kg（Monegue 等，1977）。猪饲喂了毒素含量

2015版新药典黄曲霉毒素检测方案

2015年药典黄曲霉毒素测定法 本法系用高效液相色谱法测定药材及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相，流速0.8mL/min；采用柱后衍生法检测: 光化学衍生法：光化学衍生器（254nm. PriboFast-KRC光化学柱后衍生 器.Pribolab-MDU光化学柱后衍生器）；以荧光检测器检测，激发波长λex =360nm(或365nm)，发射波长λem =450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1.0μg/m L、0.3μg/m L、1.0μg/m L、0.3μg/m L、）0.5mL，置10mL于量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。(Pribolab STD#1082-2 AFT混合标准品：AFT B 1 和AFT G 1：1.0μg/mL，AFT B 2 和AFT G 2 ：0.3μg/mL ） 供试品溶液的制备： 1. 取供试品粉末约15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入精密加入70%甲醇溶液75mL，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11,000r/min, ? 真菌毒素等物质的高效粉碎、萃取，保证检测结果的准确性和精确度。 粉碎样品在不锈钢杯中通过电机旋转驱动刀同时进行劈裂、碾碎、掺合等过程。使物料搅拌粉碎,转速高达22000以上,全金属机身和不锈钢杯子,抗有机溶剂的腐蚀,可以实现在2-3分钟高效实现真菌毒素的均质、萃取等关键环节。 优点： ●高速震荡3分钟即可完成整个真菌毒素及 其他物质的萃取过程； ●转速两档可调，低速12000r/min， 高速22000r/min； ●全金属机身，不锈钢材质，抗有机溶剂腐蚀； ●可广泛应用于食品检验、科学研究、医学治疗、化工制药等行业； ●本机构造方面均合于无菌操作的要求； ●通过CE认证。 应用:

中国药典黄曲霉毒素检测过程有关问题解析

致力于打造高品质文档中国药典黄曲霉毒素检测过程有关问题解 析 黄曲霉毒素( aflatoxin，AF) 是由黄曲霉( asperillusflavus) ，寄生曲霉( asperillus parasiticus) 等真菌产生的一类分子结构相似的次级代谢产物，是一类毒性和致癌性很强的化合物，为第一类致癌物，是人类原发性肝癌的主要致病因素之一。中药材在生长和储存过程中，若环境条件适宜便会滋生霉菌从而产生黄曲霉毒素。目前黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫法、液相色谱-质谱联用法等，中国药典20XX年版第二增补本采用高效液相色谱柱后衍生法测定。本文就中国药典黄曲霉毒素检验过程中常遇到的问题以及无衍生快速检测黄曲霉毒素的方法进行初步探讨。 1 仪器与试药 Agilent1200 型高效液相色谱仪; Pickering Vector-PCX 柱后衍生装置; Waters 含FLR 检测器的ACQUITYUPLC H-Class 系统; SB-5200D 超声清洗器( 宁波新芝生物科技有限公司) ; K2042 高速离心机( 美国Kingdom) ; AE-100 电子天平( 瑞士Mettler) 。免疫亲和层析柱( A、B、C 公司) ; 玻璃纤维滤纸( 北京中检维康科技有限公司) ; 黄曲霉毒素混合对照品溶液( 美国SUPELCO 公司，批号: LB74656，黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1浓度分别为0.302、0.965、0.306、1.021 g /mL) 。甲醇、乙腈均为色谱纯，所用水为纯化水。地龙( 批号11008ZY04) 为汕头美宝制药有限公司提供; 陈皮( 批号110901) 为广州中一药业有限公司提供; 薏苡仁( 批号20XX0101B) 为广州市香雪制药股份有限公司提供; 柏子仁 A、B、C 分别购自广州大参林、广州同健和广州采芝林药店，批号自编。 2 方法与结果 2.1 供试品溶液的制备 取本品粉末约5 g( 过二号筛) ，精密称定，加入黄曲霉毒素( aflatoxin，AF) 是由黄曲霉( asperillusflavus) ，寄生曲霉( asperillus parasiticus) 等真菌产生的一类分子结构相似的次级代谢产物，是一类毒性和致癌性很强的化合物，为第一类致癌物，是人类原发性肝癌的主要致病因素之一。中药材在生长和储存过程中，若环境条件适宜便会滋生霉菌从而产生黄曲霉毒素。目前黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫法、液相色谱-质谱联用法等，中国药典20XX年版第二增补本采用高效液相色谱柱后衍生法测定。本文就中国药典黄曲霉毒素检验过程中常遇到的问题以及无衍生快速检测黄曲霉毒素的方法进行初步探讨。 2.2 超高效液相色谱和荧光检测器无衍生法快速检测黄曲霉毒素 2.2.1 线性关系、检测限和定量限精密吸取黄曲霉毒素混合标准品溶液( 黄曲霉毒素B1浓度为102.1 ng /mL) ，分别加50%甲醇制成浓度为每毫升含AFB10.204 2、0.408 4、2.042 0、6.126 0、20.420 0ng 的标准品溶液，摇匀，即得。分别精密吸取对照品溶液2 L，注入色谱仪中，记录峰面积，以浓度( ng /mL) 为横坐标，积分值为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明 4 种黄曲霉毒素线性关系良好。按进样浓度分别为信噪比的3 ∶1 和10 ∶1 计算检测

黄曲霉毒素中毒DOC

病因：黄曲霉毒素中毒病是由曲霉所产生的毒素引起的一种中毒病。可以发生于多种动物和禽类，在家禽中以鸭和火鸡易感。不同品种和不同龄的鸭其敏感性亦不相同，例如麻鸭比京鸭敏感，雏鸭比成年鸭更为易感。 分布：黄曲霉毒素分布的范围广，凡是被黄曲霉污染了的粮食和饲料都有黄曲霉毒素存在的可能。黄曲霉素有多种，其中以B1产生最多，毒性最。产生黄曲霉毒素的必要条件是：有合适的培养基，诸如花生、大豆、玉米、麦、干草等；要有适宜的温度和湿度(最温度范围为24℃一30℃，最适相对湿度为80％以上)，以及适当的培养时间。这在我国南方的自然条件较适合，故易发生黄曲霉毒素中毒病例。鸭采食了含有黄曲霉毒素的饲料而发生，至于发病与否取决于采食毒素的量、鸭的日龄等多种因素。病鸭最初症状为采食量减少，精神萎顿，衰弱无力，拱背和尾下垂，步态不稳(图141)，倒地后常不能站立，叫声嘶哑。生长缓慢，羽毛脱落，腿和趾部可出现紫色出血斑点。雏鸭于死前常有共济失调，抽搐，角弓反张。 剖检：皮下胶样浸润，眼和蹼皮下出血以及肝脏病变(图14． 2)。1周龄左黄曲霉毒素中毒病患鸭拱背和尾下垂。右的雏鸭，常见肝脏肿大，色发灰黄，肾苍白肿大，或有小点出血。胸脏亦可能有出血点．3周龄以上的中鸭肝脏病变明显，肝苍白，萎缩与肝硬变。在较大的鸭见肝肿大、发黄、质脆，此外，尚可见心包积液和腹水，肾肿胀出血与胰脏出血。病程长者，则肝实质见有结节状增生- -肝癌(图14．3)。 防治：有效药物治疗，经验证明，一旦更换掉含有黄曲霉毒素的饲料后，很快即停止生病死亡．平时预防应注意加强粮食和饲料的保管工作，尤其在温暖

多雨季节更应注意防霉。 黄曲霉素中毒是一种常见的中毒病，发霉的玉米、花生、谷、豆饼、米糠中往往有大量的黄曲霉菌株生长繁殖，在使这些饲料发生霉变的同时产生了很多黄曲霉毒素。 1．症状不同年龄鸡吃入不同的毒素表现出不同的症状。雏鸡中毒时往往未有明显的症状而突然死亡，病程稍长的则表现为食欲减退，精神委顿，贫血，衰弱，排血色粪便，最后衰竭死亡。 2．防治坚持不喂发霉的饲料，尤其是不喂发霉的玉米。饲料仓库如果被黄曲霉毒素所污染，要用福尔马林熏蒸或用过氧乙酸喷雾，以消灭霉菌的孢子。被黄曲霉毒素污染的用具可用2％次氯酸钠溶液消毒，或在浓石灰乳中浸泡消毒。病鸡粪便含有毒素，要彻底清除，集中用漂白粉处理，以免污染地面和水源。 1. 病因 在温暖潮湿的地区或季节，玉米、花生、大米等被产毒黄曲霉污染，鸭、鹅吃了这种饲料即可发生中毒。 黄曲霉毒素有十几种，其中以黄曲霉毒素B1的毒性最大，家禽少量食入即可引起慢性肝损害；若食入量过大，可引起肝炎；若长期食入，则可引起肝癌。雏鸭的敏感性高。 2. 症状

黄曲霉毒素M1检测

黄曲霉毒素M1最近算是成大明星了，准备写个黄曲霉毒素M1分析方法总结，和大家一起探讨（持续更新）！ 1、结构及理化性质 不管三七二十一，还是先上个图： 先开个头，吃个饭回来写…… 为什么说黄曲霉毒素M1，都出现在与动物相关的产品中？ 黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1在动物组织内的代谢产物，并能够进入乳汁（牛奶？），因此大家看到的检测黄曲霉毒素M1都是检的“动物组织：如肝肾、乳腺”以及乳及其制品等”。 再来一个黄曲霉毒素B1代谢途径图，黄曲霉毒素B1在体内羟化形成黄曲霉毒素M1（左上，相机不好，照的效果不太好，大家见谅，有空补一个好点的图）。新图如下：

2、黄曲霉毒素M1的相关限量标准 食品中的限量标准以GB 2761—2011为准：规定如下：

注：上述限量的检测方法：婴幼儿配方食品按GB 5009.24 规定的方法测定，乳及乳制品按GB 5413.37（GB 541337-2010 食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定）规定的方法测定。 3、分析方法 黄曲霉毒素M1的分析方法主要包括：薄层色谱法；酶联免疫吸附法，免疫亲和柱净化荧光光度法，液相色谱法，液质联用法等。 3.1 薄层色谱法： GB 5009.24-2010 食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定（用于替代“GB/T 5009.24-2003 食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定”）为薄层色谱法： 适用范围：牛乳及其制品、奶油及新鲜猪组织（肝、肾、血及瘦肉）等食品中黄曲霉毒素M1 与B1 的测定。 原理：样品经提取、浓缩、薄层分离后，黄曲霉毒素M1 与B1 在紫外光（波长365nm）下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。 3.2 酶联免疫吸附法ELISA 适用范围：ELISA适用于乳，乳粉和乳酪中黄曲霉毒素M1含量的测定。 原理：黄曲霉毒素M1偶联物包被在酶标板的小孔中，将含有黄曲霉毒素M1的样品或标准液和抗M1的抗体加入到小孔中，此事固相包被的黄曲霉毒素M1和样品、标准品中游离的黄曲霉毒素M1竞争性地与抗体进行反应。反应完全之后，用稀释过的清洗液洗小孔，将未反应的物质冲掉。再在小孔中加入过氧化物酶，温育后再次清洗，加入底物溶液，温育后产生蓝色，加入停止液，终止颜色反应，颜色变为黄色，用酶标仪在450nm处测定颜色的强度，黄曲霉毒素M1的浓度与颜色强度成反比关系。 3.3 免疫亲和柱净化高效液相色谱法 适用范围：乳，乳粉，低脂乳，脱脂乳，低脂乳粉，脱脂乳；乳粉中的黄曲霉毒素M1的最低检测限大约是0.1μg/kg，乳中的最低检测限大约是0.01μg/kg。 原理：亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，含有黄曲霉毒素M1的样品通过免疫亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1（抗原）结合，形成抗原抗体复合体。用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。HPLC-FLD测定。 3.4 C18，硅胶柱净化高效液相色谱法

黄曲霉毒素及其检测方法整体解决方案

黄曲霉毒素及其检测方法整体解决方案 一、黄曲霉毒素介绍 黄曲霉毒素(aflatoxin，简称为AF)是到目前为止所发现的毒性最大的真菌毒素。它可通过多种途径污染食品和饲料，直接或间接进入人类食物链，威胁人类健康和生命安全，对人体及动物内脏器官尤其是肝脏损害严重，该毒素是黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株的代谢产物，普遍存在于霉变的粮食及粮食制品中。黄曲霉毒素比较耐热，加热至230℃才能被完全破坏，因此一般烹饪加工也不易消除。 二、黄曲霉毒素对人体的危害 1、引起急、慢性中毒： 黄曲霉毒素是剧毒物质，其毒性相当于氰化钾的10倍，砒霜的68倍。黄曲霉毒素属肝脏毒，除抑制DNA、RNA的合成外，也抑制肝脏蛋白质的合成，黄曲霉毒索引起人类的急性中毒事件，国内外均有许多报导，最典型的是印度的霉变玉米事件，该事件直接导致了数十人丧生，数百人患上不同类型的肝脏疾病。 2、致癌性： 黄曲霉毒素有极强的致癌性，长期摄入黄曲霉毒素会诱发肝癌。它诱发肝癌的能力比二甲基亚硝胺大75倍，是目前公认的致癌性最强的物质之一。另据世界卫生组织报导，黄曲霉毒素含量在30~50ug/kg时为低毒，50~100ug/kg时为中毒，100~1000ug/kg时为高毒，1000ug/kg以上为极毒。鉴于黄曲霉毒素对人类的巨大危害性，我国对其在食品中的含量作了严格规定，其中，乳制品中黄曲霉毒素最高允许量为5ug/kg（即5ppb）。 三、黄曲霉毒素的种类 黄曲霉毒素主要有4种：即B1、B2、G1、G2，其中B1被认为是主要的有毒物质，有2种这些毒素的代谢产物M1和M2。其中黄曲霉毒素B1主要存在于农产品，动物 饲料，中药等产品中；黄曲霉毒素M 1是动物摄入黄曲霉毒素B 1 后在体内经羟基 化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳、 肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见。黄曲霉毒素M 1 的毒性和致癌 性与黄曲霉毒素B 1 的基本相似。由于牛乳及其制品是人类、特别是婴儿的主要食

I667-01黄曲霉毒素测定法一部检验标准操作规程

1.目的：建立黄曲霉毒素测定法(一部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。 2.依据： 2.1. 《中华人民共和国药典》2010年版一部。 3.范围：适用于所有用黄曲霉毒素测定法(一部)测定的供试品。 4.责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。 5.正文： 5.1. 本法系用高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉 毒素（以黄曲霉毒素B 1、黄曲霉毒素B 2 、黄曲霉毒素G 1 和黄曲霉毒素G 2 总量计）， 除另有规定外，按下列方法测定。 5.1.1. 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40：18：42）为流动相，流速每分钟0.8ml；采用柱后衍生法检测，衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；以荧光检测器检 测，激发波长γ ex =360nm（或365nm），发射波长γ em =450nm。两个相邻色谱峰的 分离度应大于1.5。 5.1.2. 混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素 B 1、黄曲霉毒素B 2 、黄曲霉毒素G 1、 黄曲霉毒素G 2 标示浓度分别为1.0μg/ml、 0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。 5.1.3. 供试品溶液的制备：取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲和柱（AflaT-est@P），流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

黄曲霉毒素的知识

黄曲霉素的相关知识 20世纪60年代，美国东南部的一些农场，大约有10万只火鸡不明原由地突然死亡，一时间造成了极度恐慌和不安，其震惊的程度不亚于二三年前的疯牛症，关于病因当时也弄不清，只得取名为X 病，这就是美国闻名的“火鸡X病”事件。后来经过食品、毒理和细菌学方面专家的通力合作，终于找出了引起火鸡大批死亡的原因：他们从饲料玉米粉中分离出一种前所未知的由黄曲霉菌产生的毒素，命名为“黄曲霉毒素”。 另报道。1974年印度西部曾发生一次急性黄曲霉毒素中毒事件。居民吃了发霉（黄曲霉菌感染）的玉米后，有397人发生急性中毒肝炎，死亡106人。还有成批的狗发生腹水和黄疸，多在2～3周内死亡。该毒素中毒的症状主要为发热、呕吐、食欲不佳，继而出现黄疸，重者可出现腹水。可见黄曲霉毒素之危害严重性。发霉的食物中的花生、花生油、玉米、大米、棉籽等最容易污染上黄曲霉素，小麦，大麦也常被污染，豆类一般污染较轻，工业化生产的发酵制品如面酱。咸肉、火腿、香肠等肉类食品，亦能受到黄曲霉菌的污染。 有两种通过膳食的摄入途径： 一是由受黄曲霉毒素(主要为B1)污染的植物性食物中摄入；

二是经饲料而进入奶或乳制品(包括乳酪、奶粉等)的黄曲霉毒素(主要为M1)。不要将受黄曲霉毒素污染的饲料喂养牲畜。如黄曲霉毒素B1在奶牛体内能转化为有致癌作用的黄曲霉毒素M1而进入牛奶，进而进入人体。所以它又是一类细胞毒素。其毒性为氰化钾的10倍，为砒霜的68倍。诱发肝癌的能力比二甲基亚硝胺大75倍。其致癌能力是二甲基偶氮苯的900倍[5]，黄曲霉毒素具有诱导突变、抑制免疫和致癌的作用。主要诱发肝癌，故它是一类肝毒素。此外，还能诱发胃腺癌、肾癌、直肠癌及乳腺、卵巢、小肠等部位的肿瘤。黄曲霉毒素作用的靶器官主要是肝脏，动物中毒以全身性出血、消化机能障碍和神经系统紊乱为特征。急性中毒表现为食欲废绝，运动失调，排泄停止，肝炎，黄疸，肝脏充血、出血、肿大、变性和坏死，并伴有严重的血管和中枢神经损伤，动物中毒后几小时至数天内死亡。慢性中毒者早期症状表现为食欲不佳，体重减轻，生产性能降低，胴体和蛋壳品质下降，后期出现黄疸，脂肪肝、肝损伤及抑制动物免疫机能和致癌作用。1988年国际癌症研究总局（IARC）把黄曲霉毒素B1列为人的最强的致癌物质之一。 1 黄曲霉毒素的理化特性 ⑴黄曲霉毒素（aflatoxin）是黄曲霉、寄生曲霉和温特曲霉的代谢产物。黄曲霉毒素是一类有相似结构的化合物，都有一个二呋呋喃结构和一个氧杂萘邻酮（香豆素）结构。在紫外线下，根据荧光颜色Rf 值及结构等分别命名B1、B2、G1、G2、M1、M2、P、Q毒醇GM

黄曲霉毒素检验方法

一、目的 规范实验室检验方法。 二、内容 （一）试验准备 1、标定荧光计。 （1）、将仪器后的电源开关打开。 （2）、按SELECTTEST键，直至显示出AflaTest，按ENTER。 （3）、荧光计显示：START CALBRATION…OPEN THE LID INSERT RED VIAL 打开仪器盖，将红色的真菌毒素标定管放入。一定要确认标定管是 否已放到了仪器的底部。 （4）、仪器显示：HIGHCAL 22PPB 如果这个值正好是所选分析方法规定的设定值，请按ENTER键。否则，从键盘上所规定的设定值，确认准确无误后，按ENTER键。 （5）、仪器显示：READING HIGH CAL…SA VING HIGH INENSTTY OPEN THE LID INSERT GREEN VIAL 打开仪器盖取出红色的标定管，插入绿色的真菌毒素标定管。一定 要确认标定管是否已充分插入仪器的底部。 （6）、仪器显示：LOW CAL 1.0PPB

如果这个值正好是所选分析方法规定的设定值,请按ENTER键.否则,从 键盘上所规定的设定值,确认准确无误后,按ENTER键。 （7）、仪器显示：READING LIW CAL…SA VING HIGH INTENSITJY 接着显示：OPEN THE LID INSERT GREEN VIAL 打开仪器盖取出绿色的标定管。 （8）、仪器显示：VICAM V1.3 READY 按SELECT TEST键,仪器显示: AFLATEST, 按ENTER键。 （9）、仪器显示：START RUN TEST OPEN THE LID （10）、插入黄色的真菌毒素标定管，其读数应该在分析方法的测定范围内。 （11）、荧光屏计标定工作完毕，可经进行样品分析了。荧光计每 周需要标定一次。如果需要重新标定，请按STOP键，再按OPIONS 键，直至仪器显示：CALIBRATE TEST 然后按ENTER键，仪器显示：AFLATEST 如果不是这样，按SELECT TEST键，直至仪器显示：AFLATEST， 按 ENTER键。然后，按照上面所述操作步骤进行。如果进行样品分析，按SELECT TEST键，直至仪器显示：AFLATEST键。 2、配制AflaTest显色液（一天配制一次）。

黄曲霉毒素标准检测规程

黄曲霉毒素标准操作规程 1、目的 为了规范亲和柱净化样本中黄曲霉毒素的操作流程，特制订本操作规程。 2、范围 本标准适用于粮食、饲料、中药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测。 3、检出限和定量限 项目 岛津安捷伦 样本检出限 （μg/kg） 样本定量限 （μg/kg） 样本检出限 （μg/kg） 样本定量限 （μg/kg） AFG10.12 0.4 0.9 3.0 AFG20.08 0.2 0.3 0.86 AFB10.08 0.2 0.6 1.97 AFB20.04 0.12 0.2 0.63 4、职责 部门名称部门职责 质量管理部1、负责本制度的实施。 2、负责本制度的监督执行。 5、程序 5.1 原理 测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素B1经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉毒素B1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素B1，然后注入到分析仪器中用于检测。 5.2 溶液配制 5.2.1 70%甲醇-水溶液：取700mL甲醇，加入300ml去离子水混匀即可。 5.2.2 80%乙腈-水溶液：取800m乙腈，加入200ml去离子混匀即可。 5.2.3 1% 吐温-水溶液：取1ml 吐温-20，加入去离子水并定容至100ml。 5.2.4 黄曲霉毒素混合标准工作液：用色谱级甲醇将储备工作液分别稀释到50 ng/ml、 20 ng/ml、10 ng/ml、5 ng/ml、1 ng/ml、0.5 ng/ml。

5.3 样品前处理 5.3 1 适用于玉米、小麦等粮食作物，花生及其制品，坚果、玉米油、花生油、饲料等 样品 ----25g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过2mm 分样筛），加入5g 氯化钠与125mL 70% 甲醇-水溶液混匀； ----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液； ----取10mL 滤液加入20mL 蒸馏水稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液； ----取15mL 上样液过免疫亲和柱净化。 稀释倍数：1 5.3.2 适用于辣椒、花椒、黄豆酱等调料，面粉、麦芯粉、芝麻油及其它植物油、谷草 等样品 ----25g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过2mm 分样筛）加入125mL 80%乙腈-水溶液混匀； ----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液； ----取10mL 滤液加入40mL 蒸馏水稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液； ----取25mL 上样液过免疫亲和柱净化。 稀释倍数：1 5.3.3 适用于中药（2015 版药典规定的19 味中药等） ----15g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过2mm 分样筛）加入75mL 80%乙腈-水溶液混匀； ----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液； ----取10mL 滤液加入40mL 1% 吐温-水溶液，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液； ----取25mL 上样液过免疫亲和柱净化。

猪黄曲霉毒素中毒.doc

猪黄曲霉毒素中毒 概述：概述 黄曲霉毒素中毒主要引起肝细胞变性、坏死、出血。临诊上以全身出血、消化机能紊乱、腹水、神经症状等为特征。黄曲霉毒素主要是黄曲霉和寄生曲霉产生的有毒代谢产物。黄曲霉毒素并不是单一物质，而是一类结构极相似的化合物。黄曲霉和寄生曲霉等广泛存在于自然界中，主要污染玉米、花生、豆类、麦类、秸秆等。黄曲霉毒素主要分布在肝脏，可经肝脏微粒体混合功能氧化酶催化而发生羟化、脱甲基和环氧化反应。黄曲霉毒素影响DNA、RNA的合成和降解，蛋白质、脂肪的合成和代谢，线粒体代谢以及溶酶体的结构和功能。黄曲霉毒素还具有致癌、致突变和致畸形性。 临床症状 急性型发生于2～4月龄的仔，病精神沉郁、食欲缺乏、消瘦。可视黏膜苍白，后期黄染。一般食欲旺盛和体格健壮的发病率高。体温升高或正常，精神沉郁；粪便干硬呈球状，表面被覆黏液和血液。步态不稳，间歇性抽搐，角弓反张，皮肤表面出现紫斑。发病后期出现神经症状。 病理变化 主要病变为贫血和出血。全身黏膜、浆膜、皮下和肌肉出血；肾、胃弥漫性出血，肠黏膜出血、水肿，肝脏肿大，脾脏出血。急性病例

呈急性中毒性肝炎，慢性病例可见肝细胞和间质组织增生。 诊断鉴别 结合病史和临诊表现(黄疸，出血，水肿，消化障碍及神经症状)和病理学变化(肝细胞变性、坏死)等情况，可进行初步诊断。确诊需要做霉菌分离培养，以及中黄曲霉毒素含量测定。 防治措施 (一)治疗无特效疗法。发现中毒时，立即停喂霉败，改喂富含碳水化合物的青绿和高蛋白。采取相应的支持疗法和对症疗法。 (二)预防禁止饲喂霉败变质的，防止饲草、发霉。应置荫凉干燥处，勿使受潮、淋雨。可通过连续水洗、化学去毒、浸泡等方法而去除霉变的毒素。如用5％～8％石灰水浸泡霉败3～5h后，即可去除大部分毒物。

中药材中黄曲霉毒素检测方案

中药材中黄曲霉毒素检测方案 黄曲霉毒素介绍 黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于药材、谷物、坚果、棉籽以及动物饲料相关的产品中。其毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，其中以B1毒性最大。当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。 背景 各级食品药品监管部门不断加大中药生产流通监管力度，努力保持中药质量总体稳定。 国家食品药品监督管理局关于规范中药生产经营秩序严厉查处违法违规行为的通知(国食药监安[2012]187号中，要求加强对重金属及有害元素、农药残留、黄曲霉毒素等安全性指标的检测和控制，切实保证中药材质量和安全，另要求企业具备与生产品种相适应的检验设备和能力，严把质量检验关。《国家药品安全“十二五”规划》，规划中明确提出“开展药品快速检验技术研究，搭建检验技术共享平台”、“加快推进药品快速检验技术在基层的应用，配置快速检验设备”、“加强县级机构快速检验能力建设”的要求。 中药中黄曲霉毒素的检测方法 2010版《药典》附录IX V 黄曲霉毒素测定采用高效液相色谱法，另外增补药典描述该法检测建立增加柱后光化学衍生法。 原理 样品经甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和柱层析净化，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上，此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性，用水将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇通过免疫亲和柱洗脱，再经光化学衍生器柱后衍生，以提高检测准确性。 主要试剂及耗材 气控操作架：含气泵 黄曲霉毒素免疫亲和柱1ml或3ml 光化学衍生器

黄曲霉毒素

黄曲霉毒素是一种强烈的致癌物质，能使人体或动物的免疫功能丧失，诱导畸形、癌症的发生。黄曲霉毒素是毒性极强的化合物，AFB1的急性毒性为成年人半至死量（LD50）10.0。黄曲霉毒素急性中毒症状主要表现为呕吐、厌食、发热、黄疸和腹水等肝炎症状。而黄曲霉毒素的“三致”（致突变、致癌、致畸性）危害性，更引起人们的关注。黄曲霉毒素是目前所知致癌性最强的化合物，对鱼类、禽类、家畜和灵长目类动物的实验肿瘤诱导作用极大，并且能同时诱导多种癌症。黄曲霉毒素对人的致癌性虽然缺乏直接证据，但大量的流行病学调查均证实，黄曲霉毒素的高摄入量和人类肝癌的发病率密切相关。因此，世界各国对食品中的黄曲霉毒素的含量做出了严格的规定。 黄霉菌是微生物世界的一个大家族，黄曲霉菌是这个大家族的一员。黄曲霉菌本身是无毒的，但在其繁殖代谢的过程中可分泌出有毒的物质黄曲霉毒素。黄曲毒素是一种剧毒物质，它损害动物的肝脏，引起肝细胞坏死、肝纤维化、肝硬化等病变。黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质之一。 1 主要可诱发肝痛，还能诱发胃癌、肾癌、直肠癌及乳腺、卵巢、小肠等部位的肿瘤黄曲霉毒素对人体健康威胁很大。目前已确定其化学结构，黄曲霉毒素B1、B2、C1、G2等17种，其中趴毒性最大。食物中的花生、花生油、玉米、大米、棉籽等最容易污染上黄曲霉寿素，小麦，大麦也常被污染，豆类一般污染较轻，工业化生产的发酵制品如面酱。咸肉、火腿、香肠等肉类食品，亦能受到黄曲霉菌的污染。我国卫生标准规定，花生、花生油、玉米中，黄曲霉毒素含量不超过20微克/公斤；大米、食用油不得超过10微克/公斤；其它粮食、豆类、发酵食品不得超过5微克/公斤；婴儿食品中不得有黄曲毒素。 2 受黄曲霉菌污染的粮及食品不能食用 轻度污染的粮及其他食品，可以用一些简单的方法将毒素破坏掉或除去。日常生活中可以用以下方法去毒： 2．1 剔除霉变粮粒因毒素主要集中在霉变的粮粒中，凡表面长有黄绿色霉菌，或破损皱缩、变色、变质的花生米和玉米，都有可能污染黄曲霉毒素。在食用前应仔细挑选，剔除霉变粒。2．2 提高加工精度稻谷污染黄曲霉菌后，米中的毒素主要集中在米糠层，如果在稻谷加工时，将糙米碾得精一点，尽量除去米糠层，可降低大米中毒素的含量。玉米中的黄曲霉毒素有 54~72％集中在皮层和胚中，如在加工时提取胚，可除去大部分毒素。用含黄曲霉毒素的玉米制成玉米淀粉，毒素的含量仅为原有含量的1％。 2．3 水洗去毒将污染上黄曲霉菌的大米用清水反复搓洗五六次，一直洗到水清时再煮饭，可除去大部分毒素。 2．4 加热去毒蒸煮、爆炒或油炸可减少一部分黄曲霉毒素。轻度污染的花生米，爆炒可使黄曲霉毒素B1、C1含量分别减少65％和62％；若用油炸，可使黄曲霉毒素Bl、 Cl含量分别减少69％和67％。大米煮成米饭，一般能破坏20％的黄曲霉毒素。用高压锅煮米饭，去毒效果比普通锅煮饭好。 2．5 植物油中的去毒在含黄曲霉毒素的植物油中，加入活性白陶土或活性炭等吸附剂，搅拌后静置沉淀，取上层清油，毒素含量大为降低。如在含毒花生油中加入1．5％的白陶土，可使含毒量从每公斤100微克降至10微克以下。用含黄曲霉毒较低的植物油烹调食物时，先将油倒入锅内烧至冒微烟(约120℃时)，可除去油中90％以上的毒素。如果菜肴中加葱、姜、蒜等辛香料，对除去黄曲霉毒素效果更为理想。 2．6 山苍子去毒用中药山苍子或山苍子胶丸均可，每百公斤粮食用十四五粒胶丸。用法是先把胶丸剖开，放在小瓶中，用透气纱布扎住瓶口，然后连瓶埋人米缸中，盖上缸盖，让芳香油自然挥发，熏蒸粮食，即可消除黄曲霉毒素。将山苍子野果或干果直接埋人粮食中，亦可收到良好的效果。3 黄曲霉素的去除方法 黄曲霉毒素的污染是一个全球性的难题。黄曲霉在食品的加工、生产、贮存、运输等各个