李斯特氏菌的检验

李斯特氏菌的检验

李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南

非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发觉的，为纪念近代消毒手

术之父、英国生理学家约瑟夫李斯特（1827～1912），1940年被第

三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。单核细胞增生李斯特氏

菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染

后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然

界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的平安具有危急，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威逼人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必需加以重视。

李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证明是李

斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严峻的可引起血液和脑组织感染，

许多国家都已经实行措施来掌握食品中的李斯特菌，并制定了相应

的标准。

其中单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增生李斯

特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。

试验步骤

1. 增菌培育

将未开封的测试片贮藏在8℃的环境下，并在包装上标示的有效

期内使用。在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。取回的样品应在4℃下处理、存放和运输，假如是冷冻样品，则在检验前要保持冷冻状态。

取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤（EB）的均质杯中进行均质，然后转入三角瓶中，30℃培育4h，加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸和放线菌酮，连续培育20h和44h.。

2. 分别

共培育24h和48h后，取EB培育物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3 LPM琼脂平板上划线。PALCAM琼脂可替代LPM琼脂。将OXA和PALCAM平板置于35℃培育24-48h，LPM平板在30℃培育24-48h。然后，把LPM平板放于解剖镜载物台上，以450角入射光从平板下面照耀平板，通过目镜垂直向下观看查找可疑菌落。李斯特氏菌在LPM平板上呈有光泽的兰色或灰色。用已知阳性菌和阴性菌划线的平板作对比。

已开封的测试片，将开口反折，用胶带封好。

加入七叶苷和Fe3 的LPM平板不用斜射光系统，选择可疑菌落的方法与在OXA上选择可疑菌落的方法相同。在OXA平板上李斯特氏菌菌落四周有一个黑色环，其它菌也可形成黑色环，但形成时间要在两天以上。李斯特氏菌在PALCAM和OXA平板上的菌落特征相像。在PALCAM和OXA或LPM平板上挑取5个或更多的典型菌落，分别

划线于TSAYE平板上以得到更纯、更典型的单个菌落。食品检验中

在TSAYE平板上纯化是必需的，由于在PALCAM和OXA或LPM平板上

分别菌落时可能沾有不行见的受抑微生物。挑取5个典型菌落的缘

由是一个样品中可能分别到一种以上的李斯特氏菌。30℃TSAYE平

板培育24-48h，假如不用于动力观看，也可在35℃培育。

3. 鉴定步骤

为防止暴露于潮湿的环境中，请不要冷藏已开封的测试片。将胶

带封好的测试片贮藏在低温干燥的地方，保持时间不超过1个月。

请勿将测试片放在温度25℃和(或)相对湿度50%的环境中。

1）观看TSAYE平板通过斜射光观看，查找呈兰灰至兰色菌落。

在TSAYE上用已知菌作对比。

2）从30℃或更低温度下培育的TSAYE平板上挑取典型菌落做成

湿玻片在油镜下观看。湿玻片用0.85%生理盐水菌悬液制成。假如

菌量太少，菌体黏附于载玻片上而呈现非运动性。李斯特氏菌是细

短杆菌，可见稍微的旋转及翻滚。与已知的李斯特氏菌的对比相比，球形、大的杆状且快速泳动的都不是李斯特氏菌。

3）挑取典型菌落进行过氧化氢酶试验，李斯特氏菌呈过氧化氢

酶阳性反应。

4）取16-24h的培育物进行革兰氏染色，李斯特氏菌呈革兰氏阳

性杆菌。但是陈旧培育物革兰氏染色会发生变化，而且菌体可成球形。在染色过重的玻片上菌体有呈栅状排列的趋势，易误认为白喉

菌而错判。

4. 用涂抹棒、海棉或其它采样设备收集环境样本。潮湿采样设备

的液体应10 mL。潮湿剂可以是无菌水、缓冲蛋白胨水(Buffered Peptone Water, BPW)，或中和缓冲液，如Letheen肉汤或

Dey/Engley (DE)中和肉汤。

5）挑取典型菌落接种于TSBYE肉汤管中，35℃培育24h用做糖

类发酵和其它生化项目试验。TSBYE肉汤管在4℃下可存放几天，也

可反复接种。

6）在TSAYE平板上挑取典型菌落刺种到5%的绵羊血或马血琼脂

平板上，刺种时避开触到平板底部和使琼脂裂开，同时设阳性对比（单核细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌）和阴性对比（英诺

克李斯特氏菌），35℃培育48h。单核细胞增生李斯特氏菌呈窄小

的-溶血环。

7）在光明的光照下，观看经穿刺的血琼脂平板，单核细胞增生

李斯特氏菌和西尔李斯特氏菌围绕穿刺点产生较清楚的-溶血环，英

诺克李斯特氏菌不产生溶血现象，而绵羊李斯特氏菌产生界限明显

的较大溶血环，在此不要试图进行种间的区分，但要记录下溶血反

应的特征，CAMP试验可区分它们间的溶血反应。

8）硝酸盐还原试验（选做）。用TSBYE肉汤培育物接种于硝酸

盐肉汤中，35℃培育5天后，加入0.2mL试剂A，再加入0.2mL试

剂B，混合，消失紫红色为阳性反应，表明硝酸盐已被还原，如无

颜色消失，在试管内再加入少量锌粉，放置1h，如消失紫红色，表

明硝酸盐仍存在，未被细菌还原。只有默氏李斯特氏菌还原硝酸盐，

因此，从格氏李斯特氏菌中区分出默氏李斯特氏菌就必需进行这唯

一的试验。本试验还有一等效试验，即加入0.2mL试剂A后，再加

入0.2mL试剂C，消失橙色表明硝酸盐已被还原。如未消失颜色反应，也加入少量锌粉，若消失橙色表明硝酸盐未被还原。

5. 在无菌环境下在收集的样品中添加5 mL，20-30℃，灭过菌的

缓冲蛋白胨水(BPW)溶液。不要将Petrifilm EL测试片与Vermont

培育基(UVM)、Fraser肉汤、李斯特菌增菌培育基 (LEB)或缓冲李

斯特菌增菌培育基(BLEB)共用。

9）将TSBYE培育物穿刺到SIM和MTM试管中，室温培育7天，

每日观看，李斯特氏菌呈典型伞状生长。在MTM中伞状生长更典型。同时，30℃的TSBYE培育物在油镜下可见细菌作翻转运动。

10）将TSAYE肉汤培育物分别接种于0.5%（W/V）葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、鼠李糖、木糖发酵管内（可选用倒立发酵管），35℃培育7天，呈阳性反应的李斯特氏菌产酸不产气，李斯

特氏菌发酵鼠李糖和木糖的状况见下表。全部李斯特氏菌对葡萄糖、七叶苷、麦芽糖均能发酵，除格氏李斯特氏菌均不能发酵甘露醇。

假如在OXA、PALCAM或加七叶苷/Fe3 的LPM分别平板上菌落色素很

明显，则七叶苷试验可免做。

6. 混合，蠕动或旋转样品与BPW的混合液将近一分钟。将样品置

于室温(20-30℃) 1h，最久不超过 1.5 h，以修复损伤的李斯特菌。将TSBYE肉汤培育物接种到3mLTSBYE肉汤中，35℃培育24h，接

种2支TSAYE琼脂斜面，35℃培育24h。用3mL0.01mol/l磷酸盐缓

冲液将斜面菌苔洗下，菌悬液于80℃水浴中加热1h，以2500r/min 离心30，弃去2mL上清夜，将剩余液与沉淀混匀制成菌悬液，进行血清学玻片凝集试验。

单核细胞增生李斯特氏菌检验操作规程

单核细胞增生李斯特氏菌测定 1 提示 1.1 注意无菌操作。 2目的 用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）的测定 3检测依据 《食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌测定（GB 4789.30-2016）》。 4适用范围 本法适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的测定。 5试验材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 5.1冰箱。 5.2 恒温培养箱。 5.3 均质器。 5.4 显微镜。 5.5 电子天平。 5.6 锥形瓶。 5.7 无菌吸管、微量移液器及吸头。 5.8 无菌平皿。 5.9 无菌试管。 5.10 离心管。 5.11 无菌注射器。 5.12 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)ATCC19111或CMCC54004,或其他等效标准菌株。 5.13 英诺克李斯特氏菌(Listeriainnocua)ATCC33090,或其他等效标准菌株。 5.14 伊氏李斯特氏菌(Listeriaivanovii)ATCC19119,或其他等效标准菌株。 5.15 斯氏李斯特氏菌(Listeriaseeligeri)ATCC35967,或其他等效标准菌株。 5.16 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC25923或其他产β-溶血环金

5.17 马红球菌(Rhodococcusequi)ATCC6939或NCTC1621,或其他等效标准菌株。 5.18 小白鼠:ICR体重18g～22g。 5.19 全自动微生物生化鉴定系统。 6.培养基和试剂 6.1 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE):。 6.2 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂(TSA-YE):。 6.3 李氏增菌肉汤LB(LB1,LB2):。 6.4 1%盐酸吖啶黄(acriflavineHCl)溶液:。 6.5 1%萘啶酮酸钠盐(naladixicacid)溶液:。 6.6 PALCAM 琼脂:。 6.7 革兰氏染液:。 6.8 SIM 动力培养基:。 6.9 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR)和V-P试验用]:。 6.10 5%～8%羊血琼脂:。 6.11 糖发酵管:。 6.12 过氧化氢试剂:。 6.13 李斯特氏菌显色培养基。 6.14 生化鉴定试剂盒或全自动微生物鉴定系统。 6.15 缓冲蛋白胨水:见A.11。 7检验程序 第一法单核细胞增生李斯特氏菌定性检验

乳与乳制品病原微生物检验方法单增李斯特菌的检验

乳与乳制品病原微生物检验方法单增李斯特菌的检验 YLNB 4.6 1. 仪器及器材 1.1 恒温培养箱：30±1℃、24±1℃ 1.2 恒温水浴锅：46±1℃。 1.3 显微镜：10×～100× 1.4 离心机：4000 r/min 1.5 均质器或灭菌乳钵。 1.6 灭菌平皿：直径90mm。 1.7 灭菌试管： 16mm×160mm 1.8 灭菌吸管：1mL（具有0.01mL刻度）、10mL（具有0.1mL 刻度）。 1.9 冰箱：0－4℃ 1.10 锥形瓶：100mL、500mL。 1.11 架盘药物天平：0g～500g,精确至0.5g。 1.12 离心管：30mm×300mm。 1.13 灭菌注射器：1 1.14 单核细胞增生李斯特氏菌标准株。 1.15 马红球菌。 1.16 小白鼠：16g～18g。 2. 培养基和试剂

2.1含0.6%酵母浸膏的胰酪大豆肉汤(TSB－YE)：见附录 A1。 2.2含0.6%酵母浸膏的胰酪大豆琼脂(TSA－YE)：见附录 A2。 2.3 EB增菌液：见附录A3。 2.4 LB增菌液(LB1，LB2)：见附录A4。 2.5 三糖铁(TSI)琼脂：GB/T4789.28中4.26，4.27。 2.6 SIM动力培养基：见附录A5。 2.7 血琼脂：GB/T4789.28中4.6。 2.8 改良的Mc Bride(MMA)琼脂：见附录A5。 2.9 硝酸盐培养基：GB/T 4789.28中 3.17。 2.10 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)：GB/T4789.28中 3.4。 2.11 糖发酵培养基：GB/T4789.28中 3.2。 2.12 过氧化氢酶试验：GB/T4789.28中4.38。 2.13 盐酸吖啶黄(AcriflavineHCl)(Sigma)。 2.14 萘啶酮酸钠盐(Naladixicacid)(Sigma)。 3. 检验程序 单核细胞增生李斯特氏菌检验程序如下： 检样25g(ml) EB增菌液225ml LB1增菌液225ml

微生物检验实验室李斯特菌属标准操作规程

微生物检验实验室李斯特菌属标准操作规程 1.概述 李斯特菌属包括产单核细胞李斯特菌、伊氏李斯特菌、斯氏李斯特菌等菌种，其中产单核细胞李斯特菌对人和动物致病。 2.标本类型 血液、脑脊液、尿液、痰、穿刺液、脓液标本。 3.鉴定 3.1形态与染色：革兰阳性小杆菌，大小为（0.4~0.5um）×(1~2um),直或微弯，常呈V字形成对排列，偶尔可见双球状；无芽胞，无荚膜，在22~25℃形成周鞭毛，有动力，37℃时 鞭毛很少或无。 3.2培养特性：在血琼脂平板上形成较小、圆形、光滑而有 狭窄β溶血环的 菌落；在液体培养基中呈均匀浑浊生长；在半固体培养基中，动力自穿刺线向四周蔓延生长，呈倒伞状。 3.3生化反应：触酶试验阳性；分解葡萄糖、鼠李糖、水杨苷，不分解蔗糖、木糖、甘露醇；吲哚、尿素酶和硝酸盐还原试验阴性，甲基红、VP和CAMP试验阳性。 3.4鉴别要点： 3.4.1本菌特征：革兰阳性短杆菌，菌落较小，有狭窄的℃时无动力；触酶试验阳性，37℃时有动力，25溶血环；β．

分解葡萄糖、水杨苷，不分解甘露醇。 3.4.2 与肠球菌的鉴别本菌具有耐盐、耐碱、耐胆汁等特点，易误为粪肠球菌，两者可用触酶试验加以鉴别。 3.4.3 与无乳链球菌的鉴别本菌也可能因培养条件不同而 呈链状，37℃培养往往无动力，CAMP试验阳性，常误为B 群链球菌；链球菌触酶试验阴性可与之鉴别。 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片染色观察菌落特征，在血平板上挑取可以菌落，涂片染色镜检。 3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》 3.5.3 鉴定从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传 统生化反应进行细菌鉴定。 4.药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件. 5.质量控制 参见《质量控制程序》 6.检验结果解释与分析 本菌容易被认为是污染的杂菌（类白喉杆菌）而丢弃。幼龄培养呈革兰阳性，48h后多转为革兰阴性。因此当遇到25℃培养有动力的杆菌，而按照革兰阴性杆菌鉴定不符时，应 考虑到李斯特菌的可能。．

李斯特菌检验

李斯特氏菌 李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发现的，1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。李斯特氏菌 - 概况 李斯特菌 李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发现的，为纪念近代消毒手术之父、英国生理学家约瑟夫·李斯特（1827～1912），1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。 单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。 李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。其中单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。李斯特氏菌 - 特点 李斯特菌快速检测试剂盒 1、分布广：存在于土壤、水域(地表水、污水、废水)、昆虫、植物、蔬菜、鱼、鸟、野生动物、家禽。 2、生存环境可塑性大：能在2-42℃下生存(也有报道0℃能缓慢生长)能在冰箱冷藏室内较

单核细胞增生李斯特氏菌检验检测细则

单核细胞增生李斯特氏菌检验检测细则 1、目的 根据《中华人民共和国国家标准》GB/T4789.30-2003单核细胞增生李斯特氏菌检验进行单核细胞增生李斯特氏菌检验。 2、适用范围 适用于食品和食物中毒样品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。 3、职责 检测人员负责按照本规程对被测样品进行检测；校核人员负责对检测操作人员是否规范以及检测结果是否准确进行审核；授权签字人负责综合管理和检测报告的签发。 4、试剂及器材 4.1 单核细胞增生李斯特氏菌标准菌株 4.2 马红球菌 4.3 小白鼠：16-18g 4.4 TSB-YE 4.5 TSA-YE 4.6 EB增菌液 4.7 李氏增菌液（LB1，LB2） 4.8 三糖铁琼脂 4.9SIM动力培养基 4.10 琼脂 4.11 改良的Mc Bride琼脂（MMA） 4.12 硝酸盐培养基 4.13 缓冲葡萄糖蛋白胨水 4.14 糖发酵培养基 4.15 过氧化氢 4.16 1%盐酸丫啶黄溶液 4.17 1%萘啶酮酸盐溶液 5、仪器设备 5.1 恒温培养箱：30±1℃、24℃±1℃ 5.2 恒温水浴锅：46±1℃ 5.3 离心机：4000r/min 5.4 显微镜 5.5 均质器 6、检测步骤 6.1样品的收集及处理：无菌取样25g（ml）放灭菌均质器中加225mlEB和LB1 增菌液中，充分搅拌成均质。如不能及时检验，可暂存4℃冰箱。 6.2增菌培养：EB增菌液30℃培养48小时，LB1增菌液225ml放30℃培养24 小时，吸取0.1ml，加入10ml LB2增菌液中二次增菌。 6.3分离培养：将EB增菌液和LB2二次增菌分离于选择培养基MMA琼脂平板 上，培养30℃48小时，挑选可疑菌落，用白织灯45。角斜光照射平板。

李斯特氏菌的检验

李斯特氏菌的检验 李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南 非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发觉的，为纪念近代消毒手 术之父、英国生理学家约瑟夫李斯特（1827～1912），1940年被第 三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。单核细胞增生李斯特氏 菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染 后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然 界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的平安具有危急，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威逼人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必需加以重视。 李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证明是李 斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严峻的可引起血液和脑组织感染， 许多国家都已经实行措施来掌握食品中的李斯特菌，并制定了相应 的标准。 其中单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增生李斯 特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。 试验步骤 1. 增菌培育 将未开封的测试片贮藏在8℃的环境下，并在包装上标示的有效

期内使用。在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。取回的样品应在4℃下处理、存放和运输，假如是冷冻样品，则在检验前要保持冷冻状态。 取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤（EB）的均质杯中进行均质，然后转入三角瓶中，30℃培育4h，加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸和放线菌酮，连续培育20h和44h.。 2. 分别 共培育24h和48h后，取EB培育物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3 LPM琼脂平板上划线。PALCAM琼脂可替代LPM琼脂。将OXA和PALCAM平板置于35℃培育24-48h，LPM平板在30℃培育24-48h。然后，把LPM平板放于解剖镜载物台上，以450角入射光从平板下面照耀平板，通过目镜垂直向下观看查找可疑菌落。李斯特氏菌在LPM平板上呈有光泽的兰色或灰色。用已知阳性菌和阴性菌划线的平板作对比。 已开封的测试片，将开口反折，用胶带封好。 加入七叶苷和Fe3 的LPM平板不用斜射光系统，选择可疑菌落的方法与在OXA上选择可疑菌落的方法相同。在OXA平板上李斯特氏菌菌落四周有一个黑色环，其它菌也可形成黑色环，但形成时间要在两天以上。李斯特氏菌在PALCAM和OXA平板上的菌落特征相像。在PALCAM和OXA或LPM平板上挑取5个或更多的典型菌落，分别

李斯特氏菌检测方法介绍—科标检测

李斯特氏菌检测 李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发现的，为纪念近代消毒手术之父、英国生理学家约瑟夫·李斯特（1827～1912），1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。 单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。 李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。 科标检测在微生物检测领域拥有丰富的经验，可以针对食品、医药、化妆品、农产品、一次性产品以及工业产品等进行微生物检测以及产品微生物污染分析，为客户提供快速、高效、权威的第三方微生物检测服务，保证产品质量安全，专业得到了国内、国际知名企业的广泛认可。 实验步骤 1. 增菌培养 将未开封的测试片贮藏在≤8℃的环境下，并在包装上标示的有效期内使用。在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。 取回的样品应在4℃下处理、存放和运送，如果是冷冻样品，则在检验前要保持冷冻状态。取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤（EB）的均质杯中进行均质，然后转入三角瓶中，30℃培养4h，加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸和放线菌酮，继续培养20h和44h.。 2. 分离 共培养24h和48h后，取EB培养物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3 LPM琼脂平板上划线。PALCAM琼脂可替代LPM琼脂。将OXA和PALCAM平板置于35℃培养24-48h，LPM平板在30℃培养24-48h。然后，把LPM平板放于解剖镜载物台上，以450角入射光从平板下面照射平板，通过目镜垂直向下观察寻找可疑菌落。李斯特氏菌在LPM平板上呈有光泽的兰色或灰色。用已知阳性菌和阴性菌划线的平板作对照。 已开封的测试片，将开口反折，用胶带封好。 加入七叶苷和Fe3 的LPM平板不用斜射光系统，选择可疑菌落的方法与在OXA上选择可疑菌落的方法相同。在OXA平板上李斯特氏菌菌落周围有一个黑色环，其它菌也可形成黑色环，但形成时间要在两天以上。李斯特氏菌在PALCAM和OXA平板上的菌落特征相似。 在PALCAM和OXA或LPM平板上挑取5个或更多的典型菌落，分别划线于TSAYE平板上以得到更纯、更典型的单个菌落。食品检验中在TSAYE平板上纯化是必须的，因为在PALCAM和

(十)-单核细胞增生李斯特氏菌检验标准操作程序

DBS22 DBS22/019—2012 吉林省食品安全地方标准 食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测 2013年发布 2013年实施 吉林省卫生厅发布

前言 本标准根据GB/T1。1—2000《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则》的要求编写. 本标准分为两种检测方法： 第一法:单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法； 第二法：MPN计数法。 其中第一法适用于污染较严重的食品，第二法适用于单核细胞增生李斯特氏菌含量较低而杂菌含量较高的食品。 本标准负责起草单位：吉林省疾病预防控制中心、长春市疾病预防控制中心. 本标准负责起草人:刘桂华、龚云伟、李月婷、赵薇

吉林省食品安全地方标准 食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测 1 范围 本操作程序规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)的定量检验方法. 本操作程序适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量检验。 2 设备和材料 除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2。1 冰箱：2℃～5℃和—18℃. 2.2 恒温培养箱：30℃±1℃、36℃±1℃. 2.3 均质器。 2.4 显微镜:10×～100×. 2。5 电子天平:感量0。1 g。 2.6 锥形瓶:100 mL、500 mL。 2。7 无菌吸管:1 mL（具0。01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）。 2.8 无菌平皿:直径90 mm。 2。9 无菌试管：16 mm×160 mm.。 2。10 离心管:30 mm×100 mm. 2。11 无菌注射器:1 mL。 2。12 金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）。 2.13 马红球菌（Rhodococcus equi）。 2。14 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 3。1 含0。6％酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤（TSB-YE)：见附录A中A。1. 3。2 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）：见附录A中A.2。 3。3 李氏增菌肉汤LB(LB1，LB2)：见附录A中A.3。 3。4 1%盐酸吖啶黄（acriflavine HCl）溶液：见附录A中A。3.2。1。 3.5 1％萘啶酮酸钠盐(naladixic acid）溶液：见附录A中A.3。2.1. 3。6 PALCAM琼脂：见附录A中A.4。 3.7 革兰氏染液：见附录A中A。5。 3。8 SIM动力培养基：见附录A中A。6. 3。9 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR）和V-P试验用]：见附录A中A。7。3.10 5%—8％羊血琼脂：见附录A中A.8。 3。11 糖发酵管：见附录A中A.9。 3。12 过氧化氢酶试验:见附录A中A.10。 3。13 李斯特氏菌显色培养基。 3。14 API listeria 10300生化鉴定试剂盒。

单增李斯特氏菌及其检测方式

单增李斯特氏菌及其检测方式 —、单增李斯特氏菌 单増李斯特氏菌，学名Usteria monocytogenes ,—种革兰氏阳性菌，是李斯特菌属。李斯特菌属(Listeria)共分为2个群，7个种：第一群包括单核细胞増生性李斯特菌(L monocytogenes , LM)(亦称产单核细胞李斯特菌)、伊氏李斯特菌(L ivanovii)(亦称绵羊李斯特菌)、英诺克李斯特菌(Linnocua)(亦称无害李斯特菌)、丰氏李斯特菌(L welshimei)、塞氏李斯特菌(L seeligeri),第二群包括格氏李斯特菌(L grayi)和莫氏李斯特菌(L mulTayi)0其中，单増李斯特菌是唯一能引发疾病的人畜共患病的。它能引发人、畜的李氏特菌病，感染后要紧表现为、和单核细胞増多。 二、单增李斯特氏菌检测方式 1.细菌培育法 该菌营养要求不高，兼性厌氧，最适在含有C02的微需氧环境中生长，生长温度范围°＜：45。＜：, 最适温度为30°C-37°C ,能在一般冰箱冷藏室生长，是一种典型的耐冷性细菌，同时还具有耐盐性。LM 在一般琼脂平板上呈细小直径约、半透明露珠样菌落。在血琼脂平板上有P溶血环。在显色培育基上呈蓝绿色。 2.生化鉴定法 该菌要紧生化特性如下： ®触酶阳性； ②氧化酶阴性； ③发酵多种糖类； ④产酸不产宅；

⑤不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二塘； ⑥不利用枸檢酸盐，40%胆汁不溶解； ⑦D引嗥、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、乌氨酸均阴性； ® VP、甲基红实验和精氨酸水解实验阳性； ®对碱和盐抗击力强，60・70°C经5-20分钟可杀死，70%酒精5min. %石碳酸、％氢氧化钠、% 福尔马林20min可杀死此菌。 ⑩该菌对青霉素、氨苯青霉素、四环素、磺胺均灵敏。 3.血清凝集法 依照菌体抗原和鞭毛抗原，L M分为16个血清型：1/2比l/2b. l/2c. 3a. 3b、3c、4a、4ab. 4b. 4c、4d、4e、五、6a. 6b、7e抗原结构与毒力无关,对人致病的要紧为血清型l/2a. l/2b. 4b,占全世界本病病例约90%。 关于血清凝隼法用的诊断血清方面推荐天津生物芯片公司生产的单増李斯特氏菌全套诊断血清产品，该菌最多见的0:3,0:5,0:8和0:9型的诊断血清被纳入这套产品，详情如下: 二十三、单增李瞬菌诊断 血清

ISO李斯特菌

国标标准ISO11290-1 1996 (E) 食品和动物饮料微生物学----单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法 ------第一部分检测方法 1. 范围 2. 参考标准 3. 定义 4. 原理 5. 培养基和试剂 6. 设备和玻璃器皿 7. 取样 8. 待检样品前处理 9. 程序 10. 结果表达 11. 检测报告 附录： A.检测程序图 B.培养基和试剂的组成和配制 C.亨氏斜射光镜检

食品和动物饮料微生物学----单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法 ------第一部分检测方法 警告：为了保障实验室人员的健康，强烈推荐在适当装备、由有经验的微生物专家控制以及检测中的所有培养物得以谨慎处理 的实验室进行单核增生李斯特氏菌检测；尤其是强烈建议孕妇不要从事单核增生李斯特氏菌的培养工作。 1 . 范围 本ISO11290详细说明了单核增生李斯特氏菌检测和计数方法。 在绪论中受讲座白^局限性，本ISO11290适用于供给人类消费或作为动物饲料的产品。 2 . 参考标准 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不 包括勘误内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。IEC和ISO成员保留目前有效的国际标准的注册。 ISO6887: 1983微生物学一微生物检测中稀释液制备的一般导则 150: 1996,食品及动物饲料微生物学一微生物检测通则 3 . 定义 本部分ISO11290提供以下定义： 3.1 单核增生李斯特氏菌：在因体选择性培养基上形成典型菌落，并且当进行鉴定和确认其形态的、生理的和生化特征与本部分ISO11290的描述一致的微生物。 3.2 单核增生李斯特氏菌的检测：依据本部分ISO11290实施细则确定单核增生李斯特氏菌在给定单位质量或 体积的样品中存在与否。 4 .原理 在本部分ISO11290的限定范围内，检测单核增生李斯特氏菌需要四个连续的阶段（见附录A检测程序图）。 注意：1:单核增生李斯特氏菌可能存在量少，并与大量的其它细菌混杂，因此需要选择性增菌。同时必须检测受到损伤的李斯特氏菌，降低添加于初级选择性增菌培养基的抑制剂浓度可以至少部分达到此目的。 4.1 在选择性试剂浓度有所降低的选择性液体增菌培养基（半Fraser肉汤）中进行初级增菌 接种于含有1体积氯化锂、1/2体积的口丫咤黄素和1/2体积的蔡咤酸的半Fraser肉汤培养液，其一可用作检测部分（9.1）的稀释液，30c培养24h。 4.2 应用含全浓度选择性试剂的液体增菌培养基（Fraser培养液）进行二级增菌 把4.1得到的初级培养物接种于高选择性二级液体增菌培养基，35c或37c培养48h。 4.3 筛选、分离和鉴定 把4.1和4.2步的培养物接种到两种因体选择性培养基上a） Oxford （b） PALCAMT 30C、35或37c培养24h后检查，如有必要，继续培养24h后再次检查典型的单核增生李斯特氏菌可疑菌落。

单核增生李斯特氏菌检测概述

单核增生李斯特氏菌检测概述 单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性的致病菌，能够在低温下生存繁殖，并在恶劣环境中形成生物被膜，使其对抗不良条件。该菌可引起人类的李斯特菌病（Listeriosis），也是一种可以通过食品传播的重要病原体。李斯特菌病在免疫功能低下的人群中很容易引起严重感染，包括孕妇、老年人、免疫抑制患者和新生儿。 检测单核增生李斯特氏菌的方法主要包括传统的培养方法和现代的分子生物学方法。 1.传统培养方法 传统的培养方法是检测单核增生李斯特氏菌的主要方法之一、常用的培养基包括PALCAM（Polymyxin, Acriflavine, Lithium chloride and Cycloheximide）和OXOID Listeria Selective Agar等。培养温度通常在30-37℃之间，因为单核增生李斯特氏菌可以在低温下生长。在培养过程中，从食品样品或其他可能受污染的样品中提取菌落，并在培养基上进行培养。培养时间通常为1-2天，培养过程中需要注意去除其他菌落的干扰。 2.分子生物学方法 分子生物学方法是现代检测单核增生李斯特氏菌的常用方法，主要包括聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR等。这些方法的优势在于其高度敏感性和特异性。通过检测单核增生李斯特氏菌特有的基因或序列，可以快速准确地鉴定与检测其存在。 3.培养与分子生物学相结合的方法

为了更好地检测单核增生李斯特氏菌，有些方法将传统培养与分子生物学相结合。这种方法通常先进行培养，然后使用PCR或实时荧光定量PCR等技术进行进一步检测和鉴定。这种方法较为耗时，但能够进一步提高检测的准确性。 需要注意的是，由于单核增生李斯特氏菌能够在低温下生存，因此在食品或样品中的检测非常重要。常见的食品样品包括生肉、海鲜、冷冻食品、奶制品等。对于食品企业来说，建立完善的食品安全管理体系和进行规范的监测是防止单核增生李斯特氏菌传播的重要措施。 总之，对于单核增生李斯特氏菌的检测，传统培养方法和分子生物学方法是最常用的方法，它们具有各自的优势和适用场景。在食品安全监测中，需要综合应用不同的检测方法，以提高检测的准确性和可靠性，从而保障公众的健康和食品的安全。

李斯特菌血常规的化验指标

李斯特菌血常规的化验指标 李斯特菌是一种常见的细菌，也是一种可以引起严重疾病的病原菌。李斯特菌感染可以导致李斯特菌病，这种疾病可能会影响人体的多个器官系统，尤其是对于免疫系统较弱的人群来说，李斯特菌病可能是致命的。因此，对于疑似感染李斯特菌的患者进行快速的检测和诊断非常重要。 血常规是一种常见的检测方法，可以通过检测血液中的各种指标来判断人体的健康状况。对于疑似感染李斯特菌的患者，血常规也可以提供一些有用的信息。下面就来介绍一下李斯特菌血常规的化验指标。 1. 白细胞计数 白细胞计数是血常规中最基础的一个指标，可以反映人体免疫系统的活跃程度。对于疑似感染李斯特菌的患者，白细胞计数可能会升高，因为免疫系统正在积极地对抗病菌。但是，白细胞计数升高并不一定意味着感染了李斯特菌，也可能是其他原因导致的。 2. 中性粒细胞计数 中性粒细胞是一种重要的免疫细胞，可以吞噬和消灭病菌。中性粒细胞计数也可以反映免疫系统的活跃程度。对于疑似感染李斯特菌的患者，中性粒细胞计数可能会升高，因为中性粒细胞正在积极地对抗病菌。但是，中性粒细胞计数升高并不一定意味着感染了李斯特菌，也可能是其他原因导致的。 3. C-反应蛋白

C-反应蛋白是一种炎症指标，可以反映人体炎症反应的程度。对于疑似感染李斯特菌的患者，C-反应蛋白可能会升高，因为病菌感染会引起炎症反应。但是，C-反应蛋白升高并不一定意味着感染了李斯特菌，也可能是其他原因导致的。 4. 血小板计数 血小板是一种重要的血液成分，可以促进血液凝固和止血。对于疑似感染李斯特菌的患者，血小板计数可能会降低，因为病菌感染会导致血小板减少。但是，血小板计数降低并不一定意味着感染了李斯特菌，也可能是其他原因导致的。 5. 肝功能指标 肝功能指标可以反映肝脏健康状况，包括肝酶、总胆红素、直接胆红素等指标。对于疑似感染李斯特菌的患者，肝功能指标可能会异常，因为李斯特菌感染可能会影响肝脏功能。但是，肝功能指标异常并不一定意味着感染了李斯特菌，也可能是其他原因导致的。 总之，李斯特菌血常规的化验指标可以提供一些有用的信息，但是这些指标并不能确定是否感染了李斯特菌，需要结合其他临床和实验室检测结果来进行综合判断。如果怀疑自己感染了李斯特菌，应该及时就医并进行相应的检测和诊断。同时，注意饮食卫生、避免食用可能含有李斯特菌的食品，可以有效预防李斯特菌感染。

食品中单增李斯特菌检测

食品中单增李斯特菌检测 食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测 实验目的 1）了解单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性。 2）熟悉单核细胞增生李斯特氏菌的分离鉴定方法。 基本原理 单核细胞增生李斯特菌(L. monocytogenes)归属于李斯特菌属(Listeria)。单核细胞增生李斯特菌是李斯特菌属中唯一对人致病的病菌。李斯特菌是一种细胞内寄生菌，它不仅可能存在于肉类产品中，也可能存在于乳制品、蔬菜、沙拉及海产品等日常食物里面。此菌广泛分布于自然界中，在土壤、排污下水、地表水、青贮饲料、烂菜中均可分离到。人也可作为无症状携带者。据报道，健康人粪便中该菌的携带率为0.6％～16％，4％～8％的水产品、5％～10％的奶及其制品、30％以上的肉制品及15％以上的家禽均被该菌污染。李斯特菌能在1～45℃的温度下生存，能在家用电冰箱的冷藏室内较长时间生长、繁殖。 该菌为革兰氏阳性短杆菌，有的菌体略弯曲，两端钝圆，大小约为0.4～0.5μm ′0.5～2.0μm。多单在，有时是V字型排列。无芽孢，不产生荚膜。在陈旧培养物中或粗糙型菌落的菌体长度可达6～20μm 或更长的丝状。在20～25℃培养时可产生2～4根鞭毛而运动，但在37℃培养时鞭毛发育不良，无运动性。 本菌需氧或兼性厌氧，生长温度为1～45℃，最适温度为30～37℃。对营养要求不高，可在普通琼脂培养基中生长，但在血琼脂培养基或胰酪胴琼脂上生长更好。加入0.2％～1％(W/V)的葡萄糖及2％～3％(V/V)的甘油生长更佳。在含1%(W/V)NaCl的复合培养基中能生长。在4℃可缓慢增殖，形成菌落约需7d。 在液体培养基中培养18～24h后，肉汤呈轻度均匀混浊，数天后形成粘稠沉淀附着于管底，摇动时沉淀呈螺旋状，继续培养可形成颗粒状沉淀。不形成菌环、菌膜。

李斯特菌检验及快检技术的研究报告

李斯特菌检验及快检技术的研究报告 李斯特菌是一种被广泛认为对人体有害的食品中毒病原菌，其分布广泛且传染性较强。因此，在食品安全控制中尤为重要。本文主要介绍李斯特菌的检验方法和快检技术的最新进展。 一、李斯特菌的检验方法 （一）传统培养法 传统的李斯特菌检测方法是通过样品的预处理、富集和分离步骤来完成的。李斯特菌需要在富集培养基中生长，通常选择一种或多种具有选择性和增菌性的富集培养基，如LPM （리스테리아\r모노사이토제식\r보피드학）和HWA （하모니방법）等。在此基础上，使用不同的培养基和方法，如PALCAM（Polymyxin A、Acriflavine、Lithium Chloride、Ceftazidime、Aesculin、Mannitol）或Oxford等培养基，可以 有效地筛选和鉴定李斯特菌。 （二）分子生物学检测法 分子生物学技术对于敏感性和特异性都要求更高，因此被广泛应用于李斯特菌检测。PCR（聚合酶链式反应）是其中的一个典型应用，它可以在分子水平上鉴定李斯特菌，并且具有快速、灵敏、特异的优势。与传统的培养方法相比，PCR可以在几 个小时内从食品病原菌中检测出李斯特菌，同时避免了富集培养的步骤，具有高度的可重复性和快速性。

二、快速检测技术的研究进展 由于李斯特菌的高度危害性和迅速传播性，快速检测技术在食品安全保障方面变得至关重要。目前，研究者正在寻找各种快速检测方法，以检测李斯特菌的存在和数量。 （一）基于拉曼光谱的检测技术 近年来，拉曼光谱技术已经成为基于光谱学的分析方法的重要应用。对于肉类、水果、蔬菜等样品等食品，无需处理即可直接检测李斯特菌。使用Raman光谱技术可以获得高质量的特 征光谱，并且具有快速、无损伤、可重复性高的优点，因此被视为一种有前途的李斯特菌检测方法。 （二）基于表面增强拉曼光谱的检测技术 通过在样品表面添加纳米颗粒，可以增强红外或拉曼光谱的信号，从而提高检测灵敏度。基于表面增强拉曼光谱技术的引入，为李斯特菌检测技术的集成光谱学提供了新的方法。因此，研究人员已经开始尝试如何在李斯特菌检测过程中整合表面增强拉曼光谱技术。 总之，随着生物技术和光谱学技术的发展，李斯特菌检测技术将不断发展。未来，我们可以预见到，不仅检测方法会变得更加便捷和快速，人们对于食品安全的要求也会更加严格。近年来，李斯特菌食品中毒事件频发，引起了广泛关注。根据中国国家卫生健康委员会2019年发布的《2018年全国食品安全宣