实验一 物染色体压片技1.
实验一植物染色体压片技术
一、实验原理:
植物染色体压片技术是利用化学或物理的方法,将具有分裂能力的细胞保持原有的分裂状态,并对其染色体进行染色,压片后观察它的染色体分裂的一种方法。
二、实验目的:
植物染色体压片技术是细胞遗传学和细胞分类学等研究中应用最为普遍的基本技术,是其他新技术所不能完全取代的,是从事染色体研究的工作者首先应该掌握的一项基本的实验方法。
三、材料的制备:
黑麦根尖(2n=14
根尖材料的制备:
1.浸泡:大、油、壳→浸泡24h(23~25℃;小、裸的不浸泡。
2. 发根:将材料放入具有团粒结构条件的土壤中培养(锯木屑、土壤、砾石、麦杆、谷草;最适温度(23~32℃;培养24h→再放入0~4℃冰处理1~7天。目的:(1使分裂速度减慢,根尖长度整齐一致;
(2调节工作时间。再将材料从冰箱中取出又放回最适温度条件下培养1~2天;待根尖长度为1.5~2Cm即可处理。
3. 愈伤材料的制备:(适合春、夏两季用刀片将树杆割去保护组织露出伤口,用75﹪乙醇消毒包裹一天,再用50~75ppm赤霉素处理;几天后长出白色幼嫩的愈伤组织即可固定。
四、预处理:
1. 方法:(化学和物理两种
(1 化学方法:(适合所有生物
a. 秋水仙素0.05~0.2﹪(白色粉末,易溶于水的巨毒药品;
b. 0.002M 8-羟基喹啉(淡黄色晶体,用少量的乙醇溶解再稀释,
对禾本科植物的随体表现很清楚;
C.а-溴萘饱和液(淡黄色的乳浊液,易溶于乙醇和苯;难溶于水,
100ml水中倒入1~2滴剧烈的振动5分钟;
(以上abc三种药剂在15~18℃温度下处理3~5h
d. 对二氯苯饱和液(淡黄色的晶体,难溶于水;具有强烈的腐蚀
性,只能处理1~1.5h。
(2 物理方法:(适合禾本科作物,本次实验所采用
冰水混合物在0~4℃温度下处理24h。
预处理的目的破坏或抑制纺锤体形成;增加中期图象,改变细胞质的粘度,使染色体缩短变粗,易于染色体的显带及研究。五、固定:
卡诺氏Ⅰ 3︰1 (乙醇︰醋酸;
卡诺氏Ⅱ 6︰3︰1 (5︰3︰2(乙醇︰氯仿︰醋酸;
固定的目的利用药剂迅速杀死正在分裂的细胞,使之保持细胞中的染色体处于被固定前的原有状态。
六、保存:
冲洗置换,从95﹪~70﹪的乙醇梯度置换;每次置换需停留
20~30min,目的是将固定液中的醋酸从材料中置换掉,最后将材料保存在70﹪的乙醇中备用。
七、解离:(酸解、酶解
1、1mol/HCl 在60℃水浴中处理5~10min;
2、0.2mol/HCl 在25℃水浴中处理1~1.5h;
3、酶解纤维素酶+果胶酶。
解离的目的使胞间层的果胶类物质解体,利于细胞分散,有助于压片;同时解离也可适当清除部分细胞质,使细胞质背景趋于透明化,
便于观察染色体。常用的解离方法主要有酸解法和酶解法。
八、染色:
1、0.5﹪的醋酸洋红,5~30min;
2锡夫试剂、减性品红、石炭酸品红。
染色的目的是为了更好的鉴别染色体。本次实验用的染料是0.5﹪的醋酸洋红。
九、制片:
制得10张分裂相好的片子,保存在片盒内,以备显带实验所用。
十、揭片:
将制片在未干燥之前,在-176℃液氮中冷冻50~70秒,取出后迅速地揭片。
实验二植物染色体去壁、低渗、火焰
干燥制片技术
一、实验原理:
用此法可以显著提高染色体的分散程度和平衡性,可以减少染色体的变形、断裂等现象,也可以减轻细胞质对染色体的覆盖。使染色体各组成部分——长臂、短臂、着丝粒、随体、染色单体等都显示得比较清楚,有利于染色体测量和显带的分析。此法也很简单,首先用酶解法去除植物细胞壁,再利用热胀冷缩的原理,将植物细胞在冰片上用火焰烧烤,用力甩片能使细胞膜破裂,不需要特殊设备,同时也省去了繁杂的压片手续,显著提高了制片的效率。
二、实验目的:
学习植物染色体标本制备去臂、低渗法的技术,为染色体显带实验提供了优良的标本。
三、实验步骤:
1、分生组织材料的制备:需要量大,方法与第一次实验相同。
(对于不容易压片技术的材料可用该种方法。比如小染色体或多染色体、以及机械组织含量高的和木本植物的根尖等。而比较珍稀的材料或容易制作的材料可不用此法。
2、常规处理:分为活体材料和离体材料两类。本实验采用离体材
料,用物理的方法进行预处理。(方法与上次实验相同。(活体处理:前低渗:加入0.075mkcl前低渗液,在25℃下处理30分钟。
作用:让kcl渗入到细胞中,细胞浓度加大,细胞内的水分渗透出来,便于后面实验步骤的药剂顺利进入细胞。后面的实验步骤与离体材料的相同。
3、解离:将根放在0.2MHCL中,在25℃下浸泡1h。作用:以软化细胞壁,去除细胞壁之间的果胶质。
4、前低渗:用自来水冲洗材料,再用25℃的蒸馏水浸泡0.5h 作用:可置换出细胞内的HCL,使细胞充分吸水。染色体在细胞内处于游离状态,在制片时便于染色体分散。
5、酶解去壁:倒掉蒸馏水,加入2%的纤维素酶与果胶酶的混合液,在35-37℃下处理1h。作用:对细胞壁所含的纤维素、半纤维素和果胶质进行消化。
6后低渗:用镊子夹住根部抖落分生区,将其它部分丢弃,收集分生区组织,转入指形管,沉淀10min后吸出酶液,加蒸馏水浸泡0.5h。作用:可置换出酶液。使细胞充分吸水膨胀,染色体游离在细胞质中,制片时便于染色体分散,是关键步骤。
7、固定:吸去蒸馏水,加3︰1的甲醇固定液,静置15min。作用:置换出细胞内的水分,便于燃烧。(甲醇固定液作用有:①具有一定的脆性,甩片时容易使细胞膜破裂。2能改善染色,有助于以后实验时的吉姆萨染色。
8、制备悬浮液:吸去上清液,以1︰10的比例加入新鲜的固定液(即一份细胞,10份固定液,用吸管不停的吸放以捣碎组织,制成均匀的细胞悬液。
9、标本片制备：将冷冻的载玻片斜放 30-45°角，点上酒精灯，吸 2-3 滴细胞悬液在该片上，加热烧烤，此时用力甩片，制作 10 张标本片。
实验三植物染色体 Giemsa—C 带技术一、实验原理：染色体显带技术是借助于特殊的处理程序，使染色体显现出深浅不同的染色带。染色带的数目、部位、宽窄与浓淡具有相对的稳定性。从而在以往染色体形态特征（长度、着丝粒位置、臂比、随体等）以外又增添了一类新的标志。染色体分带技术能有效地鉴别染色体，研究染色体的结构与功能。 C 一带是植物吉姆萨分带的一种类型，是染色体经过 C 一带程序处理，使染色体着丝粒两侧出现带纹，故名 C 一带。二、实验目的：掌握植物染色体吉姆萨分带技术和方法。三、实验步骤： 1、制片：选取前两次实验(压片法、去壁低渗法制备的片子各 10 张。 2、干燥：两种方法⑴
自然干燥松树、洋葱 15 天，(不超过 3 过月；禾本科作物 2—15 天。⑵无水乙醇干燥只需要 1—12 小时即可。(目的：①染色体具有后熟的作用；②去除染色体上的蛋白质；③使材料凝固在片子上。本实验采用自然干燥方法。 3、酸处理：两种方法⑴用 45%醋酸在时温下处理 1—1.5 h；⑵用 0.2MHCl，在时温下处理 1—1.5 h，或 25℃下处理 10—
12min；（处理完毕用，用 30℃的蒸馏水过一次）作用：①去除制片上的杂质和染色体上的蛋白质；②破坏细胞质；③使第一次染色褪色。④与染色体上的DNA 或某些减基结合，使染色体上不同程度减基脱落，有助于程度不同的显带。应选用⑵种方法。(酸处理是变性的过程。应注意控制时间，如果处理恰倒好处感觉染色体饱满，带纹丰富；如果处理不够，染色体上的色差不明显，观察不到带纹；如果处理过度，染色体很薄，带纹也不丰富。 4、减处理：两种方法⑴强减NaOH、KOH；室温处理，不得超过 20 秒；(大约 15 秒⑵弱减 Ba(OH2 饱和溶液，在 25℃下处理 10-12min。减处理也是使染色体变性的过程，作用是与染色体上的 DNA 减基结合，消化 DNA。处理完毕不能直接倒去减液，以防止 Ba(OH2 与空气中 CO2 结合生成的碳酸钡薄膜覆盖在制片材料的表面，影响后续工作的正常进行，所以必须用流动的自来水冲洗，以去除表面的薄膜以及水中的沉淀物,冲洗完毕用 30℃蒸馏水漂洗浸泡几分钟，置换出减液。 5、盐处理：用 2×SSC 盐溶液(0.3MNaCl+0.03MNaC6H5O7 2H2O，在 60℃下处理 1.5h。盐处理是使染色体复性的过程，作用(1 调节 PH 值；(2修饰 DNA 上的减性基团和酸性基团。1.5h 后倒去盐溶液，加入 30℃蒸馏水浸泡几分钟，置换出盐溶液。 6、染色：取吉姆萨母液(1％浓度10-15ml,用磷酸缓冲液 (PH6.8-7.2稀释至 1000ml（比较新鲜的母液 15ml,氧化 1 年
以上的母液 10ml）。在 25℃下染色 80min。
第三讲 染色体畸变电子教案
陇东学院课程教案 课题及课时： 第九章染色体畸变授课类型理论课 授课时间第周第节 教学目标： 掌握染色体畸变的类型及发生机制。 熟悉染色体畸变发生的原因。 了解染色体畸变的分子细胞生物学效应。 教学要点：染色体畸变的类型及发生机制。 教学重点和难点： 重点：染色体畸变的类型和发生机制。 难点：染色体畸变的发生机制。 教学手段与方法：情境导入，多媒体演示、理论讲授 教学过程： 【导入新课】 染色体畸变是体细胞或生殖细胞内染色体发生的异常改变。畸变的类型和可能引起的后果在细胞不同周期和个体发育不同阶段不尽相同。染色体畸变包括染色体数目变异和染色体结构变异。据调查，在新生活婴中染色体异常的发生率为0.7%，在自发流产胎儿中约有50%是由染色体畸变所致。 第一节染色体畸变发生的原因 染色体畸变可以自发的产生，称为自发畸变；也可以通过物理的、化学的和生物的诱变作用而产生，称为诱变畸变；还可由亲代遗传而来。 母亲受孕时年龄孕母年龄愈大，子代发生染色体病的可能性愈大，可能与母体卵子老化有关。 物理因素人类染色体对辐射甚为敏感，孕妇接触放射线后，其子代发生染色体畸变的危险性增加。 病毒感染传染性单核细胞增多症、流行性腮腺炎、风疹和肝炎等病毒都可以引起染色体断裂，造成胎儿染色体畸变。 化学因素许多化学药物、抗代谢药物和毒物都能导致染色体畸变。 遗传因素染色体异常的父母可能遗传给下一代。 第二节染色体数目异常及其产生机制 多数真核生物的体细胞中，都具有两个染色体组，这样的生物体和它们的体细胞都称为二倍体(2n)。二倍体的生殖母细胞经过减数分裂产生的配子中只有一个染色体组,称为单倍体(n)。某一染色体的数目的增减称为非整倍性改变；成套的染色体组数目的增减则称为整倍性改变（见染色体倍性）。非整倍性和整倍性改变统称为异倍性改变。 一、非整倍性改变
八体外哺乳动物细胞染色体畸变试验
九、体外哺乳动物细胞染色体畸变试验 In Vitro Mammalian Cells Chromosome Aberration Test 1 范围 本规范规定了体外哺乳动物细胞染色体畸变试验的基本原则、要求和方法。 本规范适用于检测化妆品原料及其产品的致突变性。 2 规范性引用文件 OECD Guidelines for Testing of Chemicals ( No.473, July 1997) 3试验目的 本试验是用于检测培养的哺乳动物细胞染色体畸变，以评价受试物致突变的可能性。 4 定义 染色体型畸变(Chromosome-type aberration)：染色体结构损伤，表现为在两个染色单体相同位点均出现断裂或断裂重组的改变。 染色单体型畸变(Chromatid-type aberration)：染色体结构损伤，表现为染色单体断裂或染色单体断裂重组的损伤。 染色体数目改变(Numerical aberration)：所用细胞株的正常染色体数目的变化。 结构畸变(Structural aberration)：在细胞分裂的中期相阶段，用显微镜检出的染色体结构改变，表现为缺失、断片、互换等。 有丝分裂指数(Mitotic index)：中期相细胞数与所观察的细胞总数之比值；是一项反映细胞增殖程度的指标。 5 试验基本原则 在加入和不加入代谢活化系统的条件下，使培养的哺乳动物细胞暴露于受试物中。用中期分裂相阻断剂（如秋水仙素或秋水仙胺）处理，使细胞停止在中期分裂相，随后收获细胞，制片，染色，分析染色体畸变。 6 试验方法 6.1 试剂和受试物制备 6.1.1 阳性对照物：可根据受试物的性质和结构选择适宜的阳性对照物，阳性对照物应是已知的断裂剂，能引起可检出的、并可重复的阳性结果。当外源性活化系统不存在时，可使用甲磺酸甲酯（methyl methanesulphonate (MMS)）、甲磺酸乙酯（ethyl methanesulphonate(EMS)）、乙基亚硝基脲(ethyl nitrosourea)、丝裂霉素C(mitomycin C)、4-硝基喹啉-N-氧化物（4-nitroquinoline-N-oxide）。当外源性活化系统存在时，可使用苯并（a）芘[benzo(a)pyrene]、环磷酰胺(cyclophosphamide)。 6.1.2 阴性对照物：应设阴性对照，即仅含和受试物组相同的溶剂，不含受试物，其它处理和受试物组完全相同。此外，如未能证实所选溶剂不具有致突变性，溶剂对照与本实验室空白对照背景资料有明显差异，还应设空白对照。 6.1.3 受试物 6.1.3.1 受试物的配制：固体受试物需溶解或悬浮于溶剂中，用前稀释至适合浓度；液体受试物可以直接加入试验系统和/或用前稀释至适合浓度。受试物应在使用前新鲜配制，否则就必
实验一 物染色体压片技1.
实验一植物染色体压片技术 一、实验原理: 植物染色体压片技术是利用化学或物理的方法,将具有分裂能力的细胞保持原有的分裂状态,并对其染色体进行染色,压片后观察它的染色体分裂的一种方法。 二、实验目的: 植物染色体压片技术是细胞遗传学和细胞分类学等研究中应用最为普遍的基本技术,是其他新技术所不能完全取代的,是从事染色体研究的工作者首先应该掌握的一项基本的实验方法。 三、材料的制备: 黑麦根尖(2n=14 根尖材料的制备: 1.浸泡:大、油、壳→浸泡24h(23~25℃;小、裸的不浸泡。 2. 发根:将材料放入具有团粒结构条件的土壤中培养(锯木屑、土壤、砾石、麦杆、谷草;最适温度(23~32℃;培养24h→再放入0~4℃冰处理1~7天。目的:(1使分裂速度减慢,根尖长度整齐一致; (2调节工作时间。再将材料从冰箱中取出又放回最适温度条件下培养1~2天;待根尖长度为1.5~2Cm即可处理。 3. 愈伤材料的制备:(适合春、夏两季用刀片将树杆割去保护组织露出伤口,用75﹪乙醇消毒包裹一天,再用50~75ppm赤霉素处理;几天后长出白色幼嫩的愈伤组织即可固定。 四、预处理:
1. 方法:(化学和物理两种 (1 化学方法:(适合所有生物 a. 秋水仙素0.05~0.2﹪(白色粉末,易溶于水的巨毒药品; b. 0.002M 8-羟基喹啉(淡黄色晶体,用少量的乙醇溶解再稀释, 对禾本科植物的随体表现很清楚; C.а-溴萘饱和液(淡黄色的乳浊液,易溶于乙醇和苯;难溶于水, 100ml水中倒入1~2滴剧烈的振动5分钟; (以上abc三种药剂在15~18℃温度下处理3~5h d. 对二氯苯饱和液(淡黄色的晶体,难溶于水;具有强烈的腐蚀 性,只能处理1~1.5h。 (2 物理方法:(适合禾本科作物,本次实验所采用 冰水混合物在0~4℃温度下处理24h。 预处理的目的破坏或抑制纺锤体形成;增加中期图象,改变细胞质的粘度,使染色体缩短变粗,易于染色体的显带及研究。五、固定: 卡诺氏Ⅰ 3︰1 (乙醇︰醋酸; 卡诺氏Ⅱ 6︰3︰1 (5︰3︰2(乙醇︰氯仿︰醋酸; 固定的目的利用药剂迅速杀死正在分裂的细胞,使之保持细胞中的染色体处于被固定前的原有状态。 六、保存:
医学遗传学课程习题-第十章《染色体畸变》
医学遗传学课程习题 第十章染色体畸变 一、教学大纲要求 1．掌握染色体畸变的概念、类型和形成机理 2．掌握异常核型的描述方法 3．了解染色体畸变的研究方法 二、习题 （一）A型选择题 1．四倍体的形成原因可能是 A．双雌受精B．双雄受精C．核内复制 D．不等交换E．染色体不分离 2．如果在某体细胞中染色体的数目在二倍体的基础上增加一条可形成 A．单倍体B．三倍体C．单体型D．三体型E．部分三体型 3．近端着丝粒染色体之间通过着丝粒融合而形成的易位称为 A．单方易位B．串联易位C．罗伯逊易位D．复杂易位E．不平衡易位4．如果染色体的数目在二倍体的基础上减少一条则形成 A．单体型B．三倍体C．单倍体D．三体型E．部分三体型 5．一个个体中含有不同染色体数目的三个细胞系，这种情况称为 A．多倍体B．非整倍体C．嵌合体D．三倍体E．三体型 6．某一个体其体细胞中染色体的数目比二倍体多了3条，称为 A．亚二倍体B．超二倍体C．多倍体D．嵌合体E．三倍体 7．嵌合体形成的原因可能是 A．卵裂过程中发生了同源染色体的错误配对 B．卵裂过程中发生了联会的同源染色体不分离 C．生殖细胞形成过程中发生了染色体的丢失 D．生殖细胞形成过程中发生了染色体的不分离 E．卵裂过程中发生了染色体丢失 8．46，XY，t(4；6)(q35；q21)表示 A．一女性细胞内发生了染色体的插入 B．一男性细胞内发生了染色体的易位 C．一男性细胞带有等臂染色体 D．一女性细胞内带有易位型的畸变染色体 E．一男性细胞含有缺失型的畸变染色体 9．若某一个体核型为46，XX/47，XX，+21则表明该个体为 A．常染色体结构异常B．常染色体数目异常的嵌合体 C．性染色体结构异常D．性染色体数目异常的嵌合体 E．常染色体结构异常的嵌合体 10．含有三个细胞系的嵌合体可能是由于以下哪种原因造成的
第三章染色体畸变与染色体病(规范标准答案)
第三章染色体畸变与染色体病（答案） 一、选择题 （一）单项选择题 1．最常见的染色体畸变综合征是： A．Klinefelter综合征 B．Down综合征 C．Turner综合征 D．猫叫样综合征 E．Edward综合征 *2．核型为45，X者可诊断为： A．Klinefelter综合征 B．Down综合征 C．Turner综合征 D．猫叫样综合征 E．Edward综合征 *3．Klinefelter综合征患者的典型核型是： A．45，X B．47，XXY C．47，XYY D．47，XY（XX），+21 E．47，XY（XX），+14 4．雄激素不敏感综合征的发生是由于： A．常染色体数目畸变 B．性染色体数目畸变 C．染色体微小断裂 D．常染色体上的基因突变 E．性染色体上的基因突变 *5．Down综合征为_______染色体数目畸变。 A．单体型 B．三体型 C．单倍体 D．三倍体 E．多倍体 6．夫妇中的一方为一非同源染色体间的相互易位携带者，与正常的配子相结合，则可形成多少种类型的合子： A．8 B．12 C．16 D．18 E．20 7．Edward综合征的核型为： A．45，X B．47，XXY C．47，XY（XX），+13 D．47，XY（XX），+21 E．47，XY（XX），+18 8．46，XX男性病例可能是因为其带含有： A．Ras B．SRY C．p53 D．Myc E．α珠蛋白基因 9．大部分Down综合征都属于： A．易位型 B．游离型 C．微小缺失型 D．嵌合型 E．倒位型 *10．下列哪种遗传病可通过染色体检查而确诊： A．苯丙酮尿症 B．白化病 C．血友病 D．Klinefelter综合征 E．Huntington舞蹈病 11．体细胞间期核内X小体数目增多，可能为： A．Smith-Lemili-Opitz综合征 B．Down综合征 C．Turner综合征 D．超雌 E．Edward综合征 12．超氧化物歧化酶（SOD-1）基因定位于： A．1号染色体 B．18号染色体 C．21号染色体 D．X染色体 E．Y染色体 *13．经检查，某患者的核型为46，XY，del(6)(p11)，说明其为_____患者。 A．染色体倒位 B．染色体丢失 C．环状染色体 D．染色体部分丢失 E．嵌合体 14．若患者体内既含男性性腺，又含女性性腺，则为： A．男性 B．真两性畸形 C．女性 D．假两性畸形 E．性腺发育不全 *15．某患者的X染色体在Xq27.3处呈细丝样连接，其为_____患者。 A．重组染色体 B．衍生染色体 C．脆性X染色体 D．染色体缺失 E．染色体易位 16．14/21罗伯逊易位的女性携带者与正常人婚配，其生下Down综合征患儿的风险是：A．1 B．1/2 C．1/3 D．1/4 E．3/4 17．染色体制备过程中须加下列哪种物质可以获得大量分裂相细胞。 A．BrdU B．秋水仙素 C．吖啶橙 D．吉姆萨 E．碱 18．倒位染色体携带者的倒位染色体在减数分裂的同源染色体配对中形成：
生物学评价试验要求样板2017
公司名称 样品名称 生物学评价试验要求 1. 要求 1.1 细胞毒性：细胞毒性反应应不大于X级。 1.2 皮内反应：试验样品与溶剂对照平均记分之差应不大于X。 1.3 皮肤刺激：试验样品的原发性刺激指数应小于X。 1.4迟发型超敏反应：试验样品应无迟发型超敏反应。 1.5 热原：在试验条件下，3只家兔体温升高均应低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和应低于1.3℃，无热原反应。 1.6 与血液相互作用试验： 1.6.1 血栓形成：样品与对照比，无统计学差异或优于对照，如有差异，样品与对照的百分比在85%-115%之间。 1.6.2 凝血：样品与对照比，无统计学差异或优于对照，如有差异，样品与对照的百分比在85%-115%之间。 1.6.3 血小板：样品与对照比，无统计学差异或优于对照，如有差异，样品与对照的百分比在85%-115%之间。 1.6.4 血液学：样品与对照比，无统计学差异或优于对照，如有差异，样品与对照的百分比在85%-115%之间。 1.6.5 补体系统：样品与对照比，无统计学差异或优于对照，如有差异，样品与对照的百分比在85%-115%之间。 1.6.6 溶血：试验样品的溶血率应小于5%。 1.7 急性全身毒性：在试验观察周期内，试验样品应无急性全身毒性反应。 1.8植入试验：植入后试验样品组和对照材料组的局部生物学反应相比较，应无显著性差异。 1.9亚急/亚慢/慢性毒性试验：试验样品应无亚急/亚慢/慢性毒性反应，且试验样品组和对照组相比较，应无显著性差异。 1.10 眼刺激：试验样品应不引起眼刺激反应。 1.11 口腔刺激：试验样品的刺激指数应不大于X。 1.12 阴道刺激：试验样品的刺激指数应不大于X。 1.13 阴茎刺激：试验样品的刺激指数应不大于X。
染色体 实验报告
染色体标本的制备及组型实验 生命科学学院张瀛 【实验目的】 1．掌握染色体标本的制作方法。 2．认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。 【实验用品】 小白鼠，秋水仙素，生理盐水，0.3%KCl液，固定液，铜网，酒精灯，离心机，注射器，剪刀，镊子，载玻片，滴管，显微镜等。 【实验原理】 染色体标本制作的原理 细胞分裂中期染色体形状较为清楚，故使用中期细胞，并以每条染色体相对独立存在为 染色体标本制作的四大要点 1）PHA：促细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞。 2）秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。（相同作用：秋水仙胺、长春碱、鬼臼素） 3）低渗作用：水进入细胞内，使细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体分散开。 4）空气干燥：使细胞和染色体展开。 5）固定：用camoy`s solution（甲醇：冰醋酸=3:1）作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白来说，变形后硬度增加，保持了染色体的“即时形态”，对细胞膜蛋白来说，变形使细
胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。 染色体标本制作的意义 根据染色体的特征（数目、形态、大小等）制作染色体组型图。 染色体标本制作的应用 1） 生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类。 染色体数目：兔-44条，猫-38条，狗-78条，马-64条，人-46条，小鼠-40条（18对端着丝粒染色体，第17、18对为亚端着丝粒染色体），大鼠-42条，鸡-78条。 2） 临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断及研究。 因此，染色体组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽取羊水）。 染色体组型 把真核生物的一个体细胞中的各个染色体按其长度、形状和着丝粒的位置排列成一定顺序的过程，即为染色体组型。 染色体核型 染色体组型是染色体核型的模式表达。 染色体组型及分群依据 主要根据染色体的相对长度，着丝粒的位置，其次是臂的长短，以及次级缢痕或随体的有无等方面。 描述染色体的四个参数 相对长度：可用来表示每条染色体的长度。 臂指数：可用来确定臂的长度。 为了更准确的区别压中部和亚端部着丝粒染色体，Levan 提出划分标准： 1．0-1．7之间：中部着丝粒染色体（M ） 1．7-3．0之间：亚中部着丝粒染色体（SM ） 3．0-7．0之间：亚端部着丝粒染色体（ST ） 7．0以上：端部着丝粒染色体（T ）
遗传毒性试验
遗传毒性试验能检出DNA损伤及其损伤的固定。 根据检测的遗传学终点分为4种类型: 1检测基因突变（比如：Ames试验）; 2检测染色体畸变（比如：微核试验）; 3检测染色体组畸变（比如：体外CHL细胞染色体畸变、精原细胞染色体畸变试验）; 4检测DNA原始损伤（比如：单细胞凝胶电泳分析(singlecellgeleletrophoresis,SCGE)）。以上检测结果为呈阳性（除外假阳性）的化合物，为潜在人类致癌剂和/或致突变的物质。 FDA于2006年制定了遗传毒性试验结果的综合分析法指导原则（Guidanceforindustyandreviewstaff:Recommendedapproachestointegrationofgenetict oxicologystudyresults） 对遗传毒性试验的阳性结果评价和处理： ICHS2（R1）中的遗传毒性结果评价和追加试验策略。 目前已建立的遗传毒性短期检测法已超过200种。 1 现行组合试验方案，用一组试验配套进行试验。200多种检测方法中,真正经过验证有合适灵敏度和特异度的大概不到10种。目前多数国家规定,如体内诱变试验显示1个或以上试验呈阳性结果,则需要进行生殖细胞遗传毒性测试。 2 各类遗传毒性试验方法的研究进展 2.1 检测基因突变 2.1.1 Ames试验Ames试验是检测化学物质基因突变的常用方法。常规的Ames试验选用四个测试菌株(TA97、TA98、TA100、TA102),最近有人提出增加TA1535测试菌株,该菌株特别适用于检测混合物的致突变性。目前出现的新生菌株具有更高的敏感性和特异性,如 YG7014、TG7108,缺乏编码O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基化转移酶的ogtST基因,专用于对烷化剂引起的DNA损伤检测;引入乙酰转移酶基因的YG1024、YG1029菌株,对硝基芳烃和芳香胺的敏感性比原菌株高100倍以上[4]。测试代谢活化系统一般采用由Aro-clor1254(PCBs)诱导大鼠肝微粒体酶的S9;国外也有用人肝S9的报道,试验证明其代谢活性明显高于鼠S9[5,6]。为了克服S9制备上的困难和不稳定性,Josephy等将沙门氏菌的芳香胺N-乙酰转移酶基因和人类细胞色素P-450基因Cyp1A2引入细胞,构建了在无外源S9时也可检出芳香胺诱变性的Ames测试菌株如DJ4501A2[7]。 2.1.2 TK基因突变试验TK基因突变试验是一种哺乳动物体细胞基因正向突变试验,近年来其应用价值有明显的提高。TK基因编码胸苷激酶,该酶催化胸苷的磷酸化反应,生成胸苷单磷酸(TMP)。如果存在三氟苷(TFT)等嘧啶类似物,则产生异常的TMP,掺入DNA中导致细胞死亡。如受检物能引起TK基因突变,胸苷激酶则不能合成,而在核苷类似物的存在下能够存活。TK基因突变试验可检出包括点突变、大的缺失、重组、染色体异倍性和其他较大范围基因组改变在内的多种遗传改变。试验采用的靶细胞系主要有小鼠淋巴瘤细胞L5178Y以及
压片法制片
1. 压片法 在生物技术上，除用切片法观察细胞外，还可用压片法，尤其是观察细胞中的染色体数目，用压片法最为合适，不仅省事，结果也比切片法好。压片法是将材料置载玻片上，用解剖刀或解剖针拨开，加染液一滴，盖以盖玻片，施以压力，使材料破碎，细胞分散，然后进行观察。压片法种类很多，下面介绍两种： (1). 醋酸——洋红法 此法多用于制备幼小花药，观察花粉母细胞减数分裂的压片。而对根尖压片有时染色不好(但对洋葱根尖染色较好)。其步骤如下： a. 将花药或根尖(先切成0.5cm长)，投入卡诺氏固定液中固定1刻钟至l小时，然后移至70％酒精中保存。 b. 取固定保存的材料放入盐酸酒精解离液(95％酒精一份，浓盐酸一份，将二者混合即成)中5～8分钟。或置1N盐酸(取比重1.19的盐酸82.5毫升，加水至1000毫升即成)中于60℃的水浴温度下，处理6～8分钟，至透明为止。 c. 用清水冲洗干净解离液。 d. 取洗净的材料，放在载玻片上，用醋酸洋红染液(或醋酸苏木精染液)染色5～10分钟。 e. 然后将材料移至另一清洁的载玻片上。重新用染液装片，覆以盖玻片，以铅笔的橡皮头端轻轻压盖玻片，使材料呈现分散的薄层，置镜下观察。 (2). 铁矾——苏木精法 此法一般用于细胞有丝分裂中的染色体计数，由于染色体被染成紫兰黑色，用于显微照相，效果较好。（由于各种植物有自己的特殊性，因此，取材的时间、取材的部位、预处理的时间、固定的时问、水解的时间、染色的时间等，都有可能不同。在此只作了大致的介绍，具体材料还需作预备实验进行摸索。另外还要注意，各次水洗一定要洗干净沾在材料上的药液，以免影响下一个步骤的结果。）染色步骤如下(以蚕豆根尖作材料为例)： a. 取材：将蚕豆种子萌发。待种子根长至1cm左右，在上午8时～11时之间，切下长约0.5cm的根尖，进行预处理。 b. 预处理：目的使分裂细胞的染色体缩短和比较分散，便于压片观察。预处理是在固定以前进行，方法是将材料切下放入以下溶液： 0.05～0.2％秋水仙碱水溶液中处理2～5小时； 或：对二氯苯饱和水溶液中处理3-5小时； 或：8-羟基奎啉(0.004～0.005％)，处理2～12小时； 或：富民隆乳剂(0.01％)，处理24～48小时； 或：在0～3℃下冷冻处理24小时。 c. 固定：通常用95％酒精—冰醋酸(3：1)固定液固定1～24小时。固定后换入70％酒精中保存。一般可保存1～2星期，如放入冰箱中(3～8℃)则可保存数月。(4) 离析：将保存在70％酒精中的根尖，用刀纵切成两半，换入蒸馏水，然后移入1N盐酸中，在60℃的水浴中离析10～15分钟。 d. 水洗：离析后必须用水洗净残留盐酸，否则会影响染色。 e. 媒染：将根尖移入4％铁矾水溶液中，媒染20～30分钟，然后用水洗净。 f. 染色：放入0.5％苏木精水溶液染色3～5小时，如果需要染色较久(例如过夜)则可将苏木精溶液浓度稀释。 g. 压片：用镊子夹取根尖一段，放在载玻片上，滴上一小滴醋酸，迅速捣碎根尖，盖上盖玻片，用铅笔的橡皮头轻压，使材料分散成一薄层。 h. 镜检：将材料压好后，放置显微镜下观察。
第十章染色体畸变
第十章遗传物质的改变（一）——染色体畸变（6h） 教学目的：掌握染色体结构变异的类型及遗传学效应及单倍体、多倍体、单体、三体等概念；明确染色体结构变异的细胞学鉴别；了解染色体畸变在实践中的应用。 教学重点：染色体结构变异的类型及遗传学效应、染色体数目变异的有关概念。 教学难点：染色体变异的有关遗传学效应。 第一节染色体结构的变异 一、果蝇唾腺染色体 二、染色体结构变异的类型 三、缺失 四、重复 五、倒位 六、易位 七、影响染色体结构变异的因素 第二节染色体数目的变异 一、染色体组与染色体倍性 二、整倍体 三、非整倍体 四、人类染色体数目异常和疾病 第三节染色体变化在进化中的意义
第十章遗传物质的改变（一）——染色体畸变（6h） 第一节染色体结构的变异 一、果蝇唾腺染色体 一般动植物的染色体虽有一定的形态结构特征。但在光镜下要识别每条染色体的不同区段是很难的。即使染色体上发生结构变异也不大容易发现。目前有关染色体结构变异的知识主要来自对果蝇和玉米等少数几种生物的研究。特别是果蝇的唾腺染色体。数目少，且很大，其上有易识别的标记。因此是研究染色体结构变异的好材料。果蝇唾腺染色体具有什么特点？ 果蝇唾腺染色体：在果蝇唾腺细胞中内，同源染色体进行配对，每条染色体经多次复制（10－11）。每次复制后不分开，仍并列聚合在一起。故每条染色体含有多条染色质线，故又叫多线染色体。所以看起来特别粗，约是其它体细胞染色体的200倍。 特点：①巨大性；②体细胞内同源染色体配对；③染色体着丝粒相互靠拢，形成的结构――染色中心（从染色中心伸出5个长臂和一个短臂，有的短臂包含于染色中心）；④经碱性染料着色后，每条臂上有疏密不同或相同的带纹。这些条纹均具种的特征。 唾腺染色体在遗传学研究中的一个突出优点是具有带纹。每条臂上所具有的带纹的大小和位置是恒定的。一般在同一种内的带纹一致，在不同种内表现不同。当染色体发生结构变异时，就可从的不同排列上显示出来。为了研究方便，把果蝇唾腺染色体的6个臂分为102个部。每部又分为6个分部（A－F）。每个分部里包括若干条带纹。给以编号（1、2、3……）。如3G：第三部的细胞分部第7带纹。 二、染色体结构变异的类型 （一）一般染色体的形态和结构特点（提问） 原核生物的染色体是一裸露的DNA分子。真核生物的染色体由DNA、RNA 和蛋白质（组蛋白和非组蛋白）组成。在细胞间期以染色质的状态存在；在细胞分裂期：染色质螺旋化形成染色体。每个染色体含2个染色单体。有丝分裂中期
实验一 物染色体压片技1
实验一植物染色体压片技术 一、实验原理： 植物染色体压片技术是利用化学或物理的方法，将具有分裂能力的细胞保持原有的分裂状态，并对其染色体进行染色，压片后观察它的染色体分裂的一种方法。 二、实验目的： 植物染色体压片技术是细胞遗传学和细胞分类学等研究中应用最为普遍的基本技术，是其他新技术所不能完全取代的，是从事染色体研究的工作者首先应该掌握的一项基本的实验方法。 三、材料的制备： 黑麦根尖(2n=14) 根尖材料的制备： 1.浸泡：大、油、壳→浸泡24h(23~25℃)；小、裸的不浸泡。 2. 发根：将材料放入具有团粒结构条件的土壤中培养（锯木屑、土壤、砾石、麦杆、谷草)；最适温度(23~32℃)；培养24h→再放入0~4℃冰处理1~7天。目的:(1)使分裂速度减慢，根尖长度整齐一致； (2)调节工作时间。再将材料从冰箱中取出又放回最适温度条件下培养1~2天；待根尖长度为1.5~2Cm即可处理。 3. 愈伤材料的制备：(适合春、夏两季)用刀片将树杆割去保护组织露出伤口，用75﹪乙醇消毒包裹一天，再用50~75ppm赤霉素处理；几天后长出白色幼嫩的愈伤组织即可固定。
四、预处理： 1. 方法：(化学和物理两种) (1) 化学方法：(适合所有生物) a. 秋水仙素0.05~0.2﹪(白色粉末，易溶于水的巨毒药品)； b. 0.002M 8-羟基喹啉(淡黄色晶体，用少量的乙醇溶解再稀释， 对禾本科植物的随体表现很清楚)； C.а-溴萘饱和液(淡黄色的乳浊液，易溶于乙醇和苯；难溶于水， 100ml水中倒入1~2滴剧烈的振动5分钟)； （以上abc三种药剂在15~18℃温度下处理3~5h） d. 对二氯苯饱和液(淡黄色的晶体，难溶于水；具有强烈的腐蚀 性，只能处理1~1.5h)。 (2) 物理方法：(适合禾本科作物，本次实验所采用) 冰水混合物在0~4℃温度下处理24h。 预处理的目的破坏或抑制纺锤体形成；增加中期图象，改变细胞质的粘度，使染色体缩短变粗，易于染色体的显带及研究。五、固定： 卡诺氏Ⅰ 3︰1 (乙醇︰醋酸); 卡诺氏Ⅱ 6︰3︰1 （5︰3︰2）(乙醇︰氯仿︰醋酸); 固定的目的利用药剂迅速杀死正在分裂的细胞，使之保持细胞中的染色体处于被固定前的原有状态。 六、保存： 冲洗置换，从95﹪~70﹪的乙醇梯度置换；每次置换需停留
刘祖洞遗传学第三版答案_第10章_染色体畸变
第十章遗传物质的改变（1）- 染色体畸变 1 什么叫染色体畸变？解答：染色体畸变是指染色体发生数目或结构上的改变。（1 ）染色体结构畸变指染色体发生断裂，并以异常的组合方式重新连接。其畸变类型有缺失、重复、倒位、易位。（ 2 ）染色体数目畸变指以二倍体为标准所出现的成倍性增减或某一对染色体数目的改变统称为染色体畸变。前一类变化产生多倍体，后一类称为非整倍体畸变。 2 解释下列名词： （1）缺失；（2）重复；（3）倒位；（4）易位。 解答：缺失：缺失指的是染色体丢失了某一个区段。重复：重复是指染色体多了自己的某一区段倒位：倒位是指染色体某区段的正常直线顺序颠倒了。易位：易位是指某染色体的一个区段移接在非同源的另一个染色体上。 3 什么叫平衡致死品系？在遗传学研究中，它有什么用处？解答：紧密连锁或中间具有倒位片段的相邻基因由于生殖细胞的同源染色体不能交换，所以可以产生非等位基因的双杂合子，这种利用倒位对交换抑制的效应，保存非等位基因的纯合隐性致死基因，该品系被称为平衡致死系。平衡致死的个体真实遗传，并且它们的遗传行为和表型表现模拟了具有纯合基因型的个体，因此平衡致死系又称永久杂种。 平衡致死品系在遗传学研究中的用处： 1）利用所谓的交换抑制子保存致死突变品系- 平衡致死系可以检测隐形突变 （2）用于实验室中致死、半致死或不育突变体培养的保存（ 3 ）检测性别 4解释下列名词： （1）单倍体，二倍体，多倍体。 （2）单体，缺体，三体。
（3）同源多倍体，异源多倍体。 解答： （1）单倍体（haploid）:是指具有配子体染色体数目的个体。 二倍体（diploid）:细胞核内具有两个染色体组的生物为二倍体。 多倍体（polyploid）:细胞中有3个或3个以上染色体组的个体称为多倍体。 （2）单体（monosomic）:是指体细胞中某对染色体缺少一条的个体（2n -1 ）缺体（nu llosomic）:是指生物体细胞中缺少一对同源染色体的个体（2n —2），它仅存在于多倍体生物中，二倍体生物中的缺体不能存活。 三体（trisomic）:是指体细胞中的染色体较正常2n个体增加一条的变异类型，即某一对染色体有三条染色体（2n + 1 ）。 （3）同源多倍体：由同一染色体组加倍而成的含有三个以上的染色体组的个体 称为同源多倍体。 异源多倍体：是指体细胞中具有2个或2个以上不同类型的染色体组。 5用图解说明无籽西瓜制种原理。 解答：优良二倍体西瓜品种 1，人工加倍 早四倍体X二倍体$ 早三倍体X二倍体$ 样联会紊乱 三倍体无籽西瓜 6异源八倍体小黑麦是如何育成的？ 解答：普通小麦X黑麦
粉末直接压片法
粉末直接压片法 “药片者，即以一种或数种药物或与辅药和后制成之固体片状物。”作为大家日常生活中最常接触到的药物剂型之一，片剂出现的年代相当久远——如古罗马时期的英格兰地区，在制作一种治疗视力模糊的药物时，会将药物成分与树胶或其它粘性物质混合在一起，硬化并印制成片状，易于在应用时溶解。 虽然以现代人的眼光看，古老片剂的原料及工艺都相当令人忧心，但从中体现的基本的压片方法却一直影响着后世。如今，为了适应现行药品生产质量管理规范（GMP）及现代医疗对片剂质量的要求，即使片剂已在临床应用上处于主导地位，但在处方开发中，仍需要对其不断地进行工艺创新，如何研制出畅销片剂也成为了众多制药企业共同的战略目标。 目前的制片工艺主要可分为4小类，分别为『湿法制粒压片法』、『干法制粒压片法』、『粉末直接压片法』及『半干式颗粒压片法』。其中，粉末直接压片法具备操作简单、生产周期短、生产成本低、工艺适应性强等特点，被认为是目前最值得推广的一种片剂制备工艺。 一、粉末直接压片法简介 粉末直接压片法是指不经过制粒过程直接把药物和辅料的混合物进行压片的方法。粉末直接压片法避开了制粒过程，因而具有省时节能、工艺简便、工序少、适用于湿热不稳定药物等突出优点。目前，各国的直接压片品种不断上升，有些国家高达60%以上。 但需要注意的是，由于大多数药物的理化性能无法满足粉末直接压片的要求，因此需要选用性能优越的新型辅料来改善药物的流动性和可压性。1963年喷雾干燥乳糖以及微晶纤维素的首次出现，从根本上改善了粉末的流动性能，突破了粉末直接压片工艺的主要技术瓶颈，对于制药工业具有里程碑式的意义。 二、粉末直接压片法的优势 1、提高片剂的崩解性能 片剂的崩解主要是依靠片剂中的崩解剂通过毛细管作用或膨胀作用来促使片剂崩解。采用粉末直接压片法制备片剂时，其崩解剂不会由于前期接触水分而降低崩解性能，从而保证了良好的崩解特性。 2、提高难溶性药物片剂的溶出性能 由于溶解度小的药物受其比表面积和药物成品表面性质的影响较大。采用粉末直接压片工艺，选用亲水性好的辅料（例如乳糖）作为填充剂，在保证片剂迅速崩解的
高中生物练习-染色体畸变可能引起性状改变(2)(教师版)
第4章生物的变异第3节染色体畸变可能引起性状改变（二） 1.如图为某二倍体植物单倍体育种过程,下列叙述正确的是 A.①中发生了染色体数目变异 B.②一般采用花药离体培养的方法 C.③中秋水仙素抑制着丝粒分裂 D.④中选到的植株中1/4为纯合体 【答案】B 【解析】①中发生了基因重组;②一般采用花药离体培养的方法获得单倍体植株;③中秋水仙素抑制细胞有丝分裂过程中纺锤体的形成;③秋水仙素处理后得到AABB、AAbb、aaBB、aabb,所以④中选到的宽叶、抗病植株都是纯合体。 2.通过单倍体育种将宽叶不抗病(AAbb)和窄叶抗病(aaBB)两个烟草品种培育成宽叶抗病(AABB)新品种。下列关于育种过程的叙述正确的是 A.将AAbb和aaBB杂交得到AaBb的过程实现了基因重组 B.对F1的花药进行离体培养,利用了细胞的全能性 C.需要用秋水仙素处理萌发的F1种子,使染色体加倍 D.育种过程中淘汰了杂合个体,明显缩短了育种年限 【答案】B 【解析】将AAbb和aaBB杂交,由于AAbb和aaBB都是纯合体,所以得到AaBb的过程没有发生基因重组;对F1的花药进行离体培养,获得单倍体植株,利用了植物细胞的全能性;单倍体育种过程中,F1的花药进行离体培养获得单倍体植株,单倍体植株高度不育,无种子,然后需要用秋水仙素处理单倍体幼苗,使染色体加倍;单倍体育种过程中,获得的都是纯合体,所以明显缩短了育种年限。 3.如图表示将二倍体植株①和②杂交得到③,再将③作进一步处理。对此分析错误的是
A.由⑤得到⑥的育种原理是基因重组 B.图中秋水仙素的作用是使染色体数目加倍 C.若③的基因型是AaBbdd,则⑨的基因型可能是aBd D.③至④的过程中,所产生的变异都有利于生产 【答案】D 【解析】由⑤得到⑥的育种是杂交育种,其原理是基因重组;图中秋水仙素的作用是抑制细胞分裂过程中纺锤体的形成,使染色体数目加倍;若③的基因型是AaBbdd,能产生4种配子,则⑨的基因型可能是aBd,也可能是ABd、Abd或abd;基因突变具有有害性,所以由③至④过程中产生的变异大多数不利于生产。 4.除草剂敏感型的小麦经辐射获得了抗性突变体,敏感和抗性是一对相对性状。关于突变体的叙述,正确的是 A.若为基因突变所致,则再经诱变不可能恢复为敏感型 B.若为一对碱基缺失所致,则该抗性基因一定不能编码肽链 C.若为染色体片段缺失所致,则该抗性基因一定是隐性基因 D.若为染色体易位所致,则四分体内一定发生过非姐妹染色单体片段交换 【答案】C 【解析】基因突变具有不定向性,敏感基因可以突变成为抗性基因,抗性基因也可以突变为敏感基因;若为一对碱基缺失所致,则该抗性基因可能不编码肽链,也可能编码的肽链发生改变;除草剂敏感型的玉米经辐射获得抗性突变体,突变体若为一条染色体片段缺失所致,则缺失片段中含有敏感基因,说明该抗性基因一定为隐性基因;若为染色体易位所致,则发生在非同源染色体之间;四分体时期非姐妹染色单体片段交换发生在同源染色体之间。 5.下列有关遗传和育种的叙述,正确的是 A．杂交育种都要通过杂交、选择、纯合化等手段培养出新品种 B．基因工程育种的原理是基因突变 C．多倍体育种中使用秋水仙素处理二倍体西瓜的幼苗,得到的植株是嵌合体而不是四倍体 D．单倍体育种的后代都是单倍体 【答案】C 【解析】杂交育种时若所需优良性状为隐性性状,则不需要进行纯合化,A错误； 基因工程育种的原理是基因重组,B错误；使用秋水仙素处理二倍体西瓜的幼苗,幼苗长出的地上部分是四个染色体组,但地下部分没有加倍还是两个染色体组,故得到的植株是嵌合体而不是四倍体, C正确；单倍
压片法实验报告
题目：压片法实验报告 目的：掌握压片法的基本技术，以葱为例观察植物有丝分裂的各个时期,并对葱的染色体计数。 材料：葱根尖。 方法与操作步骤 一、取材：上午8:30取洁净的葱根尖，取尖端2-3cm长于称量瓶中。 二、前处理：为了得到更多中期分裂项的细胞，同时使染色体缩短和良好分散， 可对根尖进行预处理。处理方法为：浓度为0.002M的8-羟基喹啉前处理3小时 三、固定：卡诺氏（无水乙醇：冰醋酸=3:1）固定液（用量应在材料大小的20 倍以上）固定9个小时。 四、解离 1、用蒸馏水冲洗材料后，用50%乙醇处理30分钟。 2、1mol／L盐酸解离37分钟。 3、软化45%冰醋酸处理30min。 五、染色：改良苯酚品红染色10-18个小时。 六、制片 1、取一个根尖放于一张洁净的载玻片的中间。 2、切取根尖端的3-4mm。 3、在材料上滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片。 4、用食指和中指固定住盖玻片，然后用笔平整的一端撞击盖玻片，用吸水纸吸 取多余水分。 七、镜检 1、镜检时先用10*10倍需找比较适合观察的各分裂相细胞。 2、然后在换10*40倍进一步观察所选细胞的染色体分散效果如何，是否在一个近似的平面上。选取染色体分散比较好，且近似在一个平面上的中期分裂相的细胞做染色体计数；选取典型的各分裂时期观察有丝分裂的前期、中期、后期和末期。 3、将10*40倍下选好的细胞换到油镜（10*100）倍观察，在100倍物镜下观察需要滴香柏油在盖玻片上。 结果与分析 一、结果分析 1、染色体计数的观察如下列图片所示
2n=16 2n=16
2n=16 通过以上的观察数出葱染色体条数为2n=16。
染色体畸变习题
第十章染色体畸变 一、教学大纲要求 1．掌握染色体畸变的概念、类型和形成机理 2．掌握异常核型的描述方法 3．了解染色体畸变的研究方法 二、习题 （一） A 型选择题 1．四倍体的形成原因可能是 A. 双雌受精 B .双雄受精 C .核内复制 D.不等交换 E ?染色体不分离 2. 如果在某体细胞中染色体的数目在二倍体的基础上增加一条可形成 A. 单倍体B .三倍体C .单体型D .三体型E .部分三体型 3. 近端着丝粒染色体之间通过着丝粒融合而形成的易位称为 A. 单方易位B ?串联易位C ?罗伯逊易位D ?复杂易位E ?不平衡 易位 4. 如果染色体的数目在二倍体的基础上减少一条则形成 A.单体型B .三倍体C .单倍体D .三体型E .部分三体型 5. 一个个体中含有不同染色体数目的三个细胞系，这种情况称为 A.多倍体B .非整倍体C .嵌合体D .三倍体E .三体型 6. 某一个体其体细胞中染色体的数目比二倍体多了3 条，称为 A.亚二倍体B .超二倍体C .多倍体D .嵌合体E .三倍体 7. 嵌合体形成的原因可能是
A.卵裂过程中发生了同源染色体的错误配对 B. 卵裂过程中发生了联会的同源染色体不分离 C. 生殖细胞形成过程中发生了染色体的丢失 D. 生殖细胞形成过程中发生了染色体的不分离 E. 卵裂过程中发生了染色体丢失 8. 46，XY，t（4 ；6）（q35 ；q21）表示 A. —女性细胞内发生了染色体的插入 B. —男性细胞内发生了染色体的易位 C. 一男性细胞带有等臂染色体 D. —女性细胞内带有易位型的畸变染色体 E. —男性细胞含有缺失型的畸变染色体 9. 若某一个体核型为46，XX/47，XX，+21 则表明该个体为 A.常染色体结构异常 B .常染色体数目异常的嵌合体 C. 性染色体结构异常 D .性染色体数目异常的嵌合体 E. 常染色体结构异常的嵌合体 10. 含有三个细胞系的嵌合体可能是由于以下哪种原因造成的 A. 减数分裂中第一次有丝分裂时染色体不分离 B. 减数分裂中第二次有丝分裂时染色体不分离 C. 受精卵第一次卵裂时染色体不分离 D. 受精卵第二次卵裂之后染色体不分离 E. 受精卵第二次卵裂之后染色体丢失 11. 某种人类肿瘤细胞染色体数为56 条，称为
实验七染色体核型分析
实验七染色体核型分析
【实验项目】染色体核型分析 实验室名称显微分析实验室实验室地 点 学时2 实验 类型 验证每组 人数 2-4 选做 或必 做 必做 实验目的通过几种生物染色体标本的观察，掌握染色体核型分析的方法 内容提要生物染色体标本的观察；染色体核型的分析 重点难点染色体核型的分析方法 主要 仪器 及耗 材 显微镜、尺子、剪刀 实验七：染色体核型分析 〖实验目的和要求〗 观察分析细胞有丝分裂中期染色体的长短、臂比和随体等形态特征；学习染色体组型分析的基本方法和技能。 〖实验原理〗 染色体组型分析是细胞遗传学研究的基本方法，是研究物种演化、分类以及染色体结构、型态与功能之间的关系所不可缺少的重要手段。染色体组是指二倍体生物配子中所含的染色体总称，常以“Ｘ”表示。同一物种的同一染色体组内各染色体的形态、结构和连锁群是彼此不同的，但它们却相互协调，共同决定生物性状的发育。 研究染色体组型的方法，一是靠有丝分裂时染色体的形态特征，另一是靠减数分裂时染色体的形态和
特征。本实验着重介绍有丝分裂的染色体组型分析。 细胞有丝分裂中期是识别染色体个性特征的最佳时期，而染色体组型分析就是进行染色体特征的鉴别和描述，其形态的鉴别主要依据染色体的长度、着丝粒位置、付缢痕的有无和位置、随体的有无、形状和大小等资料进行分析。现分别介绍如下： 1.染色体长度，同一染色体组内各染色体的长度是不 一致的，其绝对长度可在显微镜上测量，或用放大照片测量后换算。由于染色体制片过程中使用的药剂及方法不同，另外供观察的细胞分裂不可能保证同一时期，故染色体的收缩有差异而导致绝对长度在同一物种或个体不同细胞间发生差异，针对这种情况，在分析中常用染色体的相对长度来表示。 在染色体长度测量中，对染色体的两条臂要分别测量，一般随体不计入染色体长度内。 2.着丝粒的位置：每条染色体都有一着丝粒，其位 置可因不同染色体而异。由于着丝粒把染色体分为两个染色体臂：长臂和短臂，它们的比率（即臂比）便可确定着丝粒的位置。 3.付缢痕的有无和位置：有些染色体上除着丝粒， 还另有一不着色或缢缩变细的区域称符缢痕。 4.随体的有无、形状和大小：有些染色体在短臂的 末端有一棒状小体称为随体，随体和染色体臂之间常以付缢痕相隔，具随体的染色体称SAT染色体。 〖材料和方法〗 细胞有丝分裂永久制片或其中期染色体图象的放大照
实验二十八植物染色体压片法
遗传学实验指导
实验须知 一、实验课的目的 1、培养锻炼科学的思维方法、实事求是的科学态度和严格的科学作风，提高分析问题解决问题的能力。 2、通过实验加深对理论的理解，学习掌握基本的分子生物学实验技能与实验方法，为今后的学习和研究打下一定的基础。 3、培养学生爱护公物、爱护集体、团结互助的优良道德品质。 二、实验课的要求 1、课前必须预习，了解基本原理和主要步骤及意义，写出预习报告。 2、上实验课必须穿白大衣，带实验讲义和实验报告纸。 3、遵守实验制度，注意安全（如水、电、煤气、强酸、强碱、有毒物质等）。 4、实验中要正规操作，动手动脑主动进行实验；掌握关键，力求得出准确结果；仔细观察，认真思考，及时做好记录；综合分析得出正确结论。 5、在实验过程中不许大声喧哗，有问题及时请教老师。 6、器材、药品等按规定使用，严禁乱用乱放。 7、爱护仪器，实验过程中因个人未能按实验要求操作而导致的器材损坏，按规章制度进行赔偿。 8、实验结束后，相关器材要彻底清洗干净，放到指定位置。 9、废弃物按要求分类收集、处理。 10、值日生要打扫干净实验台、地面等，并负责关好门窗，检查水、电、煤气等。 11、因故不能上实验者应有请假手续，是否进行补课由教研室研究决定。
目录 实验须知 1 实验一洋葱根尖压片与有丝分裂观察 3 实验二染色体组型分析 5 实验三减数分裂 7 实验四人工诱发多倍体植物 9 实验五植物的离体培养和快速繁殖 11 实验预习报告格式要求 13 实验报告格式要求 13
实验一洋葱根尖压片与有丝分裂观察 一、实验原理 植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。 二、实验目的 1、学习根尖染色体压片法。 2、掌握有丝分裂过程。 三、实验材料 洋葱（Aillumcepa）的鳞基 四、实验器具和药品 1.用具：染色板，载玻片，盖玻片，指管，温度计，试剂瓶，滴瓶，镊子，解剖针，毛边纸。 2.药品：无水酒精，70％酒精，冰醋酸，对二氯苯或秋水仙素，碱性品红，石碳酸，甲醛，山梨醇，二甲苯。 卡诺固定液的配制：用3份无水酒精，加入1份冰醋酸（现配现用）。 染色液的配制： 配方Ⅰ.石碳酸品红（Carbol.fuchsin），先配母液A 和B。 母液A：称取3 克碱性品红，溶解于100 毫升的70％酒精中（此液可长期保存）。 母液B：取母液A10 毫升，加入90 毫升的5％石碳酸水溶液（2 周内使用）。 石碳酸品红染色液：取母液B45 毫升，加入6 毫升冰醋酸和6 毫升37％的甲醛。此染色液含有较多的甲醛，在植物原生质体培养过程中，观察核分裂比较适宜，后来在此基础上，加以改良的配方Ⅱ，称改良石碳酸品红，可以普遍应用于植物染色体的压片技术。 配方Ⅱ：改良石碳酸品红 取配方Ⅰ.石碳酸品红染色液2—10 毫升，加入90—98 毫升45％的醋酸和1.8 克山梨醇（sorbitol）。此染色液初配好时颜色较浅，放置二周后，染色能力显著增强，在室温下不产生沉淀而较稳定。 五、实验说明 1.根尖由于取材方便，是观察植物染色体最常用的材料，有些植物种子难以发芽，或仅有植株而无种子，也可以用茎尖作为材料。 2.植物细胞分裂周期的长短不尽相同，通常在十到几十小时之间，温度明显地影响分裂周期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特定温度下长根，掌握有丝分裂高峰期，以便得到更多的有丝分裂的细胞。 3.前处理的目的是降低细胞质的粘度，使染色体缩短分散，防止纺锤体形成，让更多的细胞处于分裂中期，一般在分裂高峰前，把根尖放到药剂中处理3—4 小