小鼠海马神经元细胞使用说明
小鼠海马神经元细胞
小鼠海马神经元细胞产品说明：
为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠海马神经元细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠海马神经元细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠海马神经元细胞产品简介：
产品名称：小鼠海马神经元细胞(Mouse hippocampal neuron cells)组织来源：小鼠海马组织区
产品规格：5×105cells/25cm2 培养瓶
小鼠海马神经元细胞简介：
海马椎体神经元是海马区的主要成分，主要功能是参与近期记忆、情绪及内脏功能调节、是老年性痴呆、癫痫等疾病的主要病灶之一。海马神经元细胞培养是研究神经细胞生物学特性和外源干扰因素作用(细胞因子)的有效细胞模型,其在神经生物学,发育生物学体外实验研究中已被广泛应用。
本公司生产的小鼠海马神经元细胞采用胰酶消化制备而来，细胞总量约为 5×105 个/瓶，细胞纯度可达 80%以上，且不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
小鼠海马神经元细胞培养基信息：
基本培养基：Neurobasal-A
添加因子：B27、丙酮酸钠、胞苷、胰岛素、白蛋白、Penicillin、Streptomycin 等。
小鼠海马神经元细胞使用方法:
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出细胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃，5% CO
培养箱中静置 6-8
2
小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 海马神经元细胞为终末分化的细胞，建议直接使用，不建议扩大培养。
3. 待细胞状态最佳时准备转孔培养，进行实验：
1) 吸出细胞瓶中的培养基，用 PBS 清洗细胞一次。
2) 加入 0.125%的弹性蛋白酶消化液约 1mL 至培养瓶中，37℃消化 1min 左右；显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化。3) 用吸管轻轻吹打混匀，按适当的比例进行转孔培养实验，放入 37℃，5%
细胞培养箱中培养。
CO
2
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察，每隔 2-3 天更换新鲜的完全培养基。
小鼠海马神经元细胞注意事项:
1. 培养基于 4℃条件下可保存 3-6 个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 该细胞只可用于科研。
备注：由于实验所用试剂与操作环境的不同，以上方法供各实验室参考。
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欧米茄手表真假鉴别方法
目录 前言 (1) 一、欧米茄手表真假鉴别方法 (2) 前言 海外代购自08年以来异军突起，如今已成为电子商务的的主力军之一，今后代购的发展，不再只是单纯的价格战服务、信誉、品质将成为新的行业指标。服务已成为电子商务发展的至关重要环节，一个优秀的海外代购网站，需要有统一完善的代购服务体系，通过优质的电子商务平台、国外分公司、国际快递合作配送中心、专业客服人员组成的服务中心，全程为消费者提供售前咨询、订单追踪、售后支持，能够真正让中国消费者买到优惠的国外商品，享受高品质的时尚生活。然而目前代购网站鱼龙混杂，一些低质的代购站点经常出现欺骗客户以及诽谤竞争对手的现象，导致有些刚接触该行业的用户遭遇精神和金钱上的伤害。特编辑代购相关的注意事项，以及代购相关的帮助文档，让用户真正了解代购这一行业，并且从中获益。
一、代购一般流程图解 来源：美国购物网(https://www.sodocs.net/doc/a8501743.html,)"（美国购物网站|美国代购网站|代购第一门户）如需转载请注明来源：美国购物网(https://www.sodocs.net/doc/a8501743.html,)"！ 欧米茄是世界著名的瑞士手表，Omega手表的各个系列无论是男表还是女表都很受关注，欧米茄的超霸系列男表设计霸气十足，阳刚大气，非常适合大男生日常佩戴。女士腕表欧米茄蝶飞系列(De Ville)人气最高，属于内涵文艺设计路线，此系列腕表设计优雅奢华，适合正式场合佩戴。下面给大家分享下欧米茄手表真假鉴别方法 1.看表壳的生产序号 欧米茄手表都有生产序号，而且是一表一号，也是唯一的，通常被刻印在手表的后盖上，或
者是在手表某个壳爪的背后，一个8位的数字。如果是机械手表的话，那个8位数字的生产序号也会出现在机芯夹板的边缘上，表壳的生产序号和机芯的是一致的。 2.欧米茄手表真假鉴别方法 3.手表机芯辨别 正品手表机芯内的夹板或摆铊上标有相应的商标标牌字样；机芯在表壳组件中稳固；假冒手表机芯的夹板或摆铊上无商标标牌字样，或商标标牌字迹粗糙、模糊、歪斜，或简单地用小铜片粘贴；有些机芯内有杂志。 4.销售价格的识别 欧米茄价位均在1000元以上，高达几万元。美国代购的欧米茄手表会比专柜价格优惠一些，大概是专柜的6折到7折。
原代海马神经元细胞培养
原代海马神经元细胞培养 溶液的配制： (1) 4%多聚甲醛溶液：4g多聚甲醛溶于100ml pH=7.4的0.01mol/l PBS中，混匀过滤， 室温保存。 (2)磷酸盐缓冲液（PBS）（0.01mol?l-1）：KH2PO4，0.1g；Na2HPO4?12H2O，1.7g；KCl， 0.1g；NaCl，4.0g，双蒸水加至500ml，pH=7.2～7.4。用0.2μm滤膜过滤，4℃保存。 (3) 1%蛋白酶的配制：用磷酸缓冲液（pH=7.2～7.4）配制成浓度为1%的胰蛋白酶母液 冻存。使用时，用解剖液稀释至0.25%。 (4) 培养皿涂被多聚赖氨酸：配制0.01%的多聚赖氨酸，分装冻存。将上述多聚赖氨酸 放入培养皿中涂两遍，自然晾干后备用。 (5) 解剖液：葡萄糖，3.0g；蔗糖，7.5g；NaCl，8.0g；KCl，0.4g；Na2HP04?7H20，0.18g； KH2PO4，0.03g；HEPES，2.14g；加双蒸水1000ml，调pH=7.0～7.4，过滤，4℃保存。 (6) 种植液：DMEM 79%，胎牛血清，10%；马血清，10%；谷氨酰胺培养液1%。 (7) 饲养液：Neurobasal培养基，97%；谷氨酰胺培养液，1%；B-27，2%。 (8) 阿糖胞苷：用双蒸水配制成浓度为l mg?ml-1的母液储存。用0.2μm滤膜过滤，-20℃ 储存。使用时，取6μl母液加入2ml培养液中，终浓度为3μg?ml-1。（根据实验情况调整浓度） 大鼠原代海马神经元细胞的培养 (1) 新生SD大鼠（＜12h），75%酒精浸泡消毒后断头，剥离出全脑并将其放入盛有解 剖液的培养皿中。 (2) 在解剖液中解剖大脑，分离出海马，移入另一盛有解剖液的培养皿中。在分离出全 部的海马后，去除血管等组织，然后用剪刀将海马分成数小块，放入盛有0.25%胰蛋白酶的培养皿中，将培养皿放入9%CO2、37℃消化20min。 (3) 将培养皿中的海马碎片移入离心管中，去除含胰蛋白酶的液体并用种植液将海马碎 片冲洗2～3遍，终止酶的消化作用。
购买欧米茄表入门指南
买表，买的是心头好。那好字就有多解了，要自己喜欢，要价格合适，要购买经过愉快无惊险，还要在使用过程中不给自己带来种种烦恼。每一样都要做到舒服，可就不容易了。那么，购买一块欧米茄手表如何才能做到一个“好”字？就要在这里说说我的见解了。 首先买表的心态要借用迷胡大师的一句话：“手表无贵贱，人心有高低”！买表难免会从品牌因素、知名度来考虑。表是自己戴的，但同时也是戴给别人看的，这一点我也无法免俗。但有一点觉得还是要想明白，手表只是市场定位差别，在真正的功能用途上是没有区别的。即使在宣传上出现了很多技术优势的手表，其实在手表技术上和其它的手表还是大同的，所存在的小异，算是特点，并无高下之分（同时代的东西在今天的科技背景下更多的是依靠专利，而不是技术优势）。 那么在买表前调整了心态，接着就应该了解一下品牌。欧米茄的历史去百度查比我码字要容易，但还是简要说些我了解的细节把。欧米茄在瑞士表中算是一个有历史、有技术的牌子。从百年前的19令机芯开始，到30mm（30T）机芯，到登月辉煌的321机芯，到全自动时代的翘楚561机芯（这个全自动时代从470、490机芯一直到752双历机芯结束），欧米茄一直都是瑞士表中的优秀品牌。可以这样说一直到70年代末期，欧米茄跟劳力士、真利时一直是瑞士表的中流砥柱，无论是技术还是销量上，都是主力军级别的（二十多年无数的天文台证书、市场占有率和好评都纪录了这个辉煌的时代）。80、90年代是欧米茄的衰败时期，随着1020机芯的停产，这样一个百年老厂在十几年的时间里面依靠这ETA机芯支撑着手表的内在，显然这样是不行的。也就是在这个时期欧米茄被劳力士拉开了品牌的距离。直至今日，欧米茄的复兴之路还没有完成，8500机芯的全面使用和9300机芯的出现只是复兴大业的第一步，未来的路还是很漫长的，但可以看见的是欧米茄又重新跻身一流手表的行列。 欧米茄现在使用的机芯在大三针上，主力是2500机芯和8500机芯（当然还有女款以及一些变型机芯，例如2202、2628之类的）。其中争议最大的2500机芯，作为欧米茄重回自产机芯的第一款产品，坊间的评价一直不佳，偷停一直是2500机芯挥之不去的阴影。个人评价，2500机芯的偷停是客观存在的，由于基础机芯ETA2892（1120）的设计取向（偏小和薄），在欧米茄做改造的时候无法大动干戈（这个是正常的，在机械上渐改永远比新设计要合适），因此遗留的问题也使欧米茄头疼。今时今日欧米茄全面启用8500机芯，开始放弃2500机芯，此项问题正是其因之一。但2500机芯并不是一只不可取的机芯，从价格体系上2500机芯是有很大优势的，全钢表2W左右的实际入手价格，在今天物价飞涨的时代已是不易。那么在买2500机芯的欧米茄表时如何避免偷停带来的烦恼呢？个人的看法是保养的注意和使用方法的注意。由于基础机芯的动力偏小，2500机芯的表要注意保持动力，每天戴满8个小时以及适当的手动补链是保证手表正常运行的基础把；减少戴戴停停的次数，不戴的时候用手动上链来保持动力；其次就是保养的间隔，2500机芯的手表正常的保养间隔5年一次的洗油个人认为似乎有缩短的必要，在保养时要尽量避免落入庸手，保证洗油的用油质量（现在看来由于基础机芯的选择似乎不当，同轴擒纵技术的高间隔保养时间反而无法实现，走反了！）。现在随着2500机芯的停产慢慢接近，过几年再想买块2W左右的欧米茄也不容易了，因此2500机芯还是属于可以放心购买的产品。最近2500D机芯开始进入市场了，这个算是大改的新型号2500机芯其实本质上是将机芯结构尽量向8500机芯靠拢，使用了三层擒纵轮，以保证擒纵系统不容易因为动力问题打滑，使机芯不再出现偷停的问题。现在看来2500D机芯的推出，将会很大程度延长2500机芯的寿命，可能还会长期作为中、低端的欧米茄入门级别手表的机芯。其实2500机芯到了D款也脱离了当初推出的时候的基础+添加的味道，开始变成真正的自产机芯。
氟西汀对海马神经元生长的影响
氟西汀对海马神经元生长的影响 各位读友大家好，此文档由网络收集而来，欢迎您下载，谢谢 【关键词】氟西汀;细胞培养;海马神经元;大鼠 氟西汀是5-羟色胺（5-HT）再摄取抑制剂之一，是应用较广的抗抑郁药。氟西汀除有抗抑郁作用外，尚可治疗其他中枢神经系统疾病。有研究表明，氟西汀对海马的神经保护作用是其发挥抗抑郁效应的机制之一［1］。关于氟西汀对体外培养的海马神经元生长的影响未见报道，本研究初步探讨了氟西汀对原代培养的海马神经元生长的影响。 1材料与方法 新生大鼠海马神经元的分离和培养 技术方法在参考文献［2］基础上加以改进。取出生24h内的新生SD大鼠（东南大学医学院动物实验中心提供），无菌分离出双侧海马，用显微剪剪碎，
D-Hank#39;s液清洗2或3次，将剪碎的海马组织转移至离心管中，加入等量%的胰酶（美国Sigma公司），37℃消化30min，中间振摇1或2次，加入10%的DMEM/F12（美国Gibco公司）5ml，轻轻吹打15次，然后1000r·min-1离心5min，制成单细胞悬液，置于CO2培养箱（德国Heraeus公司产品）中，差速贴壁30min，去除成纤维细胞，吸取未贴壁的细胞，并用200目的不锈钢滤网过滤，收集过滤后的单细胞悬液于培养皿中，然后至离心管中，取一滴单细胞悬液进行计数，并用DMEM/F12将细胞密度调到1×106ml-1，然后接种于200μg·ml-1多聚赖氨酸（美国Sigma公司）包被的6孔培养板中，转移至培养箱内培养，4h后换为无血清培养基，即含2%B27的Neurobasl培养基（美国Gibco公司），以后每3天半量换液1次。使用培养6d的神经元进行染色鉴定。 大鼠海马神经元的鉴定 烯醇化酶（NSE）免疫细胞化学染
神经元细胞培养
神经元细胞培养 1. 孕16 d SD 大鼠经戊巴比妥钠麻醉后，碘酒、75%乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放入预冷的D-Hanks’平衡盐液中。 2. 在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层，除去脑膜，剪碎组织成约1mm3 大小，加入胰酶-EDTA 消化液并放入37℃孵箱内消化20 min，中间摇晃一次。 3. 随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液(DMEM＋10%FBS)的离心管内终止消化液作用5 min。 4. 用滴管吸出组织转移到装有预冷的DMEM＋10%FBS 的离心管内，用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次，静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤2～3 次。 5. 将所收集的上清经200 目筛网过滤。 6. 过滤后的细胞悬液于800 rpm 离心5 min，弃上清，管内加入新鲜培养液(DMEM＋20%FBS)并吹打成单细胞悬液。 7. 细胞计数，调整细胞密度按（700000个）1.5×105/cm2 种入6 孔板内，放入CO2 孵箱中培养。 (1)把细胞悬液用(DMEM＋20%FBS)悬浮，种到培养皿上6－12 h 后，全量换成2% B27 的neurobasal 培养基，继续培养，3 d 半量换液。（+0.5mmol/L谷氨酰胺） 鉴定 1.形态学的观察，在DIC下可以很清楚的看到神经元特有的形态，轴突树突以及胞体非常 明显。 2.免疫学鉴定：正如楼上几位所说，NF（神经丝）或者tubulin 或者MAP2等都是目前 鉴定神经元的Marker,不论你好似免疫荧光还还是免疫组化，阳性表达即可！ 3.在进一步你可一做mRNA水平的实验，也就是RT-PCR了。这就更能支持2的阳性表达 了。 4.电生理学的鉴定：测定神经元特有的电生理学也是证据之一啊！ 从以上几个方面去做，应该能证明是神经元了！ 错误之处还请赐教！ TUJ1
胎鼠海马神经元培养及其鉴定
［作者简介］李玉（1965～），男，云南昆明市人，医学硕士，副教授，主要从事癫痫外科和功能神经外科临床研究 工作. 昆明医学院学报2011，（5）：17～19Journal of Kunming Medical University CN 53-1049/R 胎鼠海马神经元培养及其鉴定 李玉1），王波1），但齐琴2 ） （1）昆明医学院第一附属医院神经外科，云南昆明650031；2）昆明医学院神经科学研究所，云南昆 明650031 ）［摘要］目的建立胎鼠海马神经元体外培养方法，观察细胞生长情况，免疫组织化学染色鉴定神经元特 异性．方法取胎鼠海马，分裂获得细胞悬液，接种于24孔板，经2h 差速帖壁去除成纤维细胞，将细胞液转移并继续培养，以获娶纯度较高的海马神经元．培养第5、11、15天观察细胞和突起生长情况，用NeuN 抗体以免疫组化SP 二步法染色鉴立神经细胞．结果培养头3d ．细胞生长缓慢，5d 时细胞开始生长，可见突起， 11d 时突起连成网状．经Neun 染色培养细胞呈阳性反应，证明是神经元．结论 本方法获取生长良好，纯度 较高的海马神经元． ［关键词］胎鼠；海马神经元；Neun ；培养 ［中图分类号］Q831.1+1［文献标识码］A ［文章编号］1003－4706（2011）05－0017－03 I dent ificat ion and Cult ur e of Hippocampus Neur ons in Fet al Rat s LI Yu 1），WANG Bo 1），DAN Qi －qin 2 ） （1）Deat.of Neurosurgery ；2）Institute of Neuroscience ，Kunming Medical University ， Kunming Yunnan 650031，China ） ［Abstract ］Objective To establish the protocol for culturing hippocampus neurons in vitro and explore the neuronal growth character istics ．Methods Tissues from hippocampus of fatal rats were harvested ，then digested into cell suspension by using 0.125%trypsin ．After planted into wells for 2hours ，cell suspension was transferred into next well for continuing incubation ．The cell growth was observed at day 5，11and 15．Neurons specific Enolase （NSE ）antibody ，recognized specifically NSE antigen in cultured cells ，was used to identify neurons by SP-two-step staining method ．Results After incubated for 2hours ，transferred suspensions in wells showed some pure neurons ，which is identified by NSE staining ．However ，they grew slowly during 1～3days ，then grew well from 5th day ，with gradual increasing the neuritis outgrowth ．Conclusion Purified neurons with neurite outgrowth states can be acquired by this method. ［Key words ］Fetal rats ；Hippocampus neurons ；NSE staining ；Culture 海马神经元细胞培养是研究神经细胞生物学特性和外源干扰因素作用（细胞因子）的有效细胞模型，其在神经生物学，发育生物学体外实验研究中已被广泛应用[1-3]．然而，要获得纯度较高， 生长状态较好的海马神经元也不是一件易事．本实验长期从事海马神经细胞生物特性及其应用研究，故需建立该细胞模型．鉴于胚胎来源的细胞 生长状态较成年动物来源者好[4，5] ．本实验建立大
欧米茄手表官方网站
欧米茄手表官方网站,Omega欧米茄官网 瑞士名表欧米茄手表在全球130个国家，透过优秀的经销商所出售的手表，每一块均是现代年青人“梦魅以求”的腕上时计，代表了他们对“欧米茄手表世界”的认同和追求。在“欧米茄手表世界”里，有陪伴人类征空的超霸专业系列——第一块也是唯一一块“一步登月”的“月球表”(Moon Watch)；成为廿一届奥林匹克运动会的指定时计，获得无数准确时计及最佳设计的奖项。欧米茄手表是全球杰出人士——包括国际名模辛迪?克劳馥及世界一级方程式冠军车手迈克尔?舒马赫的必然选择。在美国，欧米茄手表是最受欢迎，最畅销的品牌手表。由路易士·勃兰特始创于1848 年，欧米茄手表标志着制表历史上的光辉成就，傲视同侪。产品早于1892 年，欧米茄手表推出全球第一块打簧手表，两年后，即1894年，生产了举世闻名的欧米茄手表19令机芯，这一机芯的制造融汇了当时革命性的先进技术，以其数项出色的功能，如以表冠调校时间，逐正式品牌命名为欧米茄手表，令到欧米茄手表成为当时瑞士首屈一指的制表厂商。欧米茄手表是希腊字母中的最后一个字母，具有完美、成就、美轮美奂和卓越之意。自此时起，欧米茄手表以其先进的科技结合卓越的制表艺术，稳占表坛的领导地位，创造了无数骄人的成就。 欧米茄手表官方网站:https://www.sodocs.net/doc/a8501743.html, 1848年路易士、勃兰特在瑞士小城拉绍德封市创立怀表组装工场。 1889年 LOUIS BRANDT&GILS公司于1880年迁往比尔市后，成为瑞士最大的制表商，雇员600人同，每年腕表产量达10万枚。 1894年 LOUIS BRANDT&GILS公司发明创新的“欧米茄手表19令机芯，之后公司以欧米茄手表为名。1917-18年第一次世界大战期间，欧米茄手表担任英国皇家飞行军及美国陆军指定的腕表供应商。1932年欧米茄手表在洛杉矶首次为奥运会提供计时服务，自此以后经常担任全球各地体育盛事正式计时。1936年欧米茄手表创下泰丁敦天文台KEW-TEDDINGTON所有类别的计时精确度纪录。 1939年第二次世界大战期间，欧米茄手表凭著名闻遐迩的30毫米腕表机芯，获英国皇家空军选为指定腕表供应商。 1948年欧米茄手表推出第一款海马表，以其性能可靠和坚固耐用的特性闻名于世。 1949年欧米茄手表研创全球第一台先进的终点摄影装置。 1952年欧米加星座系列天文台表面世，瞬间成为品牌顶级系列，同年并推出世界首创为运动比赛而设的石英电子计时器OTR。 1955年世界第一款自动上链女装腕表面世，欧米茄手表LAKYMATIC。 1957年欧米茄手表第一款超霸计时表面世。 1960年欧米茄手表推出首款海马碟飞表，其后于1967年推出碟飞系列。 1961年欧米茄手表追踪纪录仪OMEGASCOPE面世，可在荧幕上显示运动员比赛的计时结果。 1965年美国国家宇航局严格测试多个钟表品牌后，最后选定欧米茄手表超霸专业计时表为太空任务的指定腕表。 1968年推出KYNAMIOC腕表，是欧米茄手表腕表系列中最畅销的系列。 1969年 7月21日，欧米茄手表超霸专业计时表成为第一只由宇航员配戴登月的腕表，伴随人类在地球的卫星上跳出历史性第一步，令举世震撼。 1970年欧米茄手表荣获美国国家宇航局颁发“史诺比奖“表彰超霸专业计时表在阿波罗13号太空计划中发挥斗争作用，化解危机。 1974年欧米茄手表推出全球首创的海洋系列天文台表，每月计时误差低至1秒，其表现比普通石英腕表
(完整版)OMEGAdna提取说明书
材料与仪器：离心机（至少14000g）、1.5ml或2ml无核酸酶离心管、水浴锅、无水乙醇、氯仿、异戊醇、无酶水。 试验之前：先用absolute ethanol稀释DNA Wash Buffer Concentrate,每瓶DNA Wash Buffer Concentrate加80ml（200份装） 试验步骤： 1.使用mortar和pestle在liquid nitrogen中研磨样品（不超过50毫克），放入1.5ml microcentrifuge tube。 2.加350ulBuffer ML1和25ul Proteinase K,涡旋混匀，60℃孵育（最少30分钟），大多数孵育不超过4小时或者37℃孵育1晚。 3.裂解产物加350ul氯仿和异戊醇的混合溶液（24:1），涡旋混匀。10000g室温离心2min，转移上清液到1.5ml microcentrifuge tube，避免含有污染物和抑制剂的乳白色界面。 4.估计步骤3 supernatant体积，加等集体的Buffer MBL，涡旋15s混匀，70℃孵育10min。 5.加步骤3等体积的无水乙醇，涡旋15s混匀。（tips:300ul上清液+300ul Buffer MBL+300ul absolute ethanol） 6.把柱子和提供的2ml收集管装配好，加步骤5的溶液750ul，10000g 室内离心1min,倒掉被离心的液体，重复利用提供的2ml收集管。 7.把步骤5剩余的混合物按照步骤6的方法离心，但抛弃提供的2ml 收集管。 8.把柱子放在新的2ml收集管，加500ul HB Buffer,10000g，30s，第一次洗柱子。
海马神经元细胞免疫荧光检验
海马神经元细胞免疫荧光检验 神经元鉴定： 一、烯醇化酶鉴定： 培养细胞用100%乙醇固定---10min---PBS漂洗5min×3次---3%H2O2室温孵育30min，目的用于去除内源性过氧化物酶---PBS 漂洗5min×3次---5%羊血清（0.3%TritonPBS配制），室温封闭30min 以减少排特异背景颜色------加第一抗体特异烯醇化酶（chemicon，1:1000），4℃冰箱孵育18~24小时---PBS漂洗5min×3次---加入2步法：PV9000试剂Ⅰ,37℃，30min---PBS漂洗5min×3次---PV9000试剂Ⅱ,37℃，30min---PBS漂洗5min×3次---DAB显示红棕色；70%，80%，90%，100%I，100%II 梯度酒精透水；二甲苯Ⅰ，Ⅱ透明2次，每次30min---中性树胶灯片---镜下观察。 二、β-微管蛋白Ⅲ（β-tubulinⅢ）荧光显示： 培养细胞用预冷PBS液轻柔漂洗3次，4%多聚甲醛固定，1h，4℃---吸去多余甲醛---PBS漂洗5min×3次---0.25%triton，室温，15min---3%H2O2室温孵育30min，目的用于去除内源性过氧化物酶---PBS漂洗5min×3次---5%羊血清（0.3%TritonPBS配制），室温封闭30min以减少排特异背景颜色------弃血清，加入β-tubulinⅢ抗体（1:100稀释），4℃，过夜---PBS漂洗5min×3次---滴加FITC 标记的山羊抗小鼠lgG（体积比1:200稀释），37℃，1h---DAPI复染10min---抗荧光猝灭封片液封片---荧光显微镜观察---选择10个视野，统计学处理。
神经元原代培养
神经元原代培养 一、准备 1. 试剂 1）胎牛血清灭活：血清室温自然融解，摇匀。选用与血清瓶同规格的对照瓶一个，并加入与血清等体积的水。对照瓶内插入1～2支温度计(保证测试温度的准确性)。将血清瓶与对照瓶同时放入恒温水浴箱，待温度计所示温度上升至56℃时，定时30分钟。灭活后分装，10ml/瓶，一瓶放在培养箱做无菌实验，其余-20～-70℃保存。 2）D-Hank’s液(g/L)：NaCl: 8, KCl: 0.4, KH2PO4: 0.06, Na2HPO42H2O: 0.06, NaHCO3: 0.35; 酚红：0.02，超纯水溶解，调节PH至7.2，高压灭菌（购自南方医院临床试验中心）。 3）多聚赖氨酸：避光，用超纯水配制好后过滤，200μl或400μl/tube分装, -20度储存。母液浓度为5mg/ml，工作液浓度为0.1mg/ml（购自Sigma，P2636，100mg）。配置方法：20ml超纯水溶解，分装为1ml/管。用时加入49ml超纯水稀释为0.1mg/ml的工作液。 4）50mM谷氨酸：超纯水溶解，滤过除菌，分装50μl/tube，-20℃保存。使用时需将终浓度调整为25μM（购自Sigma，G8415，100g，分子量：147.13）。配制方法：电子天平称量谷氨酸1.4713g，即0.01mol=10mmol，溶于200ml超纯水中，配制为50mM的谷氨酸母液。 例：500ml的Neurobasal Medium中加入Glutamate母液（50mM）250μl，此时终浓度约为25μM。 5）胰蛋白酶：0.25%（购自Hyclone，SH30042.01，100ml）。 6）阿糖胞苷（AraC）母液：10mM，(阿糖胞苷，1：1000稀释用)（购自Sigma，C1768，100mg，分子量：243.22）；配制方法：100mg/243.22≈0.41mM，加入41ml超纯水溶解，配制成10mM的AraC母液。 AraC工作液：10μM（半量换液，终浓度5μM）； 7）DNAse I（）（购自ROCHE，，100mg，1mg=2000U，用dH2O配成10mg/ml 母液，过滤分装100μl/tube，每次使用50-100μl） 8）培养基 FBS DMEM/F12：购自Hyclone，SH30023.01B，500ml
成年小鼠海马神经细胞培养及其鉴定
昆明医学院学报2011，（6）：29～32 CN53-1049/R Journal of Kunming Medical University 成年小鼠海马神经细胞培养及其鉴定 李玉1），但齐琴2），习杨彦彬2） （1）昆明医学院第一附属医院神经外科，云南昆明650031；2）昆明医学院神经科学研究所， 云南昆明650031） ［摘要］目的观察体外培养成年小鼠海马神经细胞生长情况及其形态学变化．方法获取成年海马组织，制成细胞悬液，接种于培养板，分别于1，3，7，10，13，15d观察细胞生长情况，用神经元特异烯醇化酶抗体经免疫组织化学染色技术鉴定神经元．结果成年海马神经元接种后1～3d，有较多的杂质和部分细胞漂浮，贴壁细胞较少量．每隔3d半量换液后，杂质不断减少，但第1周细胞生长缓慢，第7～10d才见细胞生长良好．培养15d后，大部分细胞出现有明显的颗粒等早期退化征象．免疫组化染色证实培养细胞呈现神经元特异烯醇化酶染色阳性染色，免疫阳性产物主要分布于细胞质；证明是神经元．结论体外培养成年海马神经元早期生长缓慢，7～10d才显示良好的生长状态，2周左右细胞则开始退变．提示10d以前的细胞是供体外研究用的理想细胞． ［关键词］大鼠；神经细胞；海马；细胞培养；免疫组化 ［中图分类号］Q813.1+1［文献标识码］A［文章编号］1003－4706（2011）06－0029－04 Cult ur e and Ident ificat ion of Hippocampus Neur ons in Adult Rat s LI Yu1），DAN Qi－qin1），XIYANG Yan－bin2） （1）Dept.of Neurosurgery，The1st Affiliated Hospital of Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650032；2）Institute of Neuroscience，Kunming Medical University，Kunming Yunnan650031，China） ［Abstract］Objective To observe the morphology and characteristics of hippocampus neurons in adult rats in vitro．Method The hippocampus tissues from adult rats were collected，then digested into cell suspension by using0.125%trypsin．Cell suspension was planted into wells and observed at day1，3，7，10，13，and15 after incubation．Neurons specific Enolase（NSE）antibody，recognized specifically NSE antigen in cultured cells，was used to identify neurons by SP-two-step staining method．Results During1-3days，the extensive bodies of floating cells and tissue blocks were seen，but a few cells attached to the bottom of well．The growth of attached cells was also extensively slow，specifically within1week，while it began to grow quickly after7days，and maintained till15days．Amazingly，cells exhibited aging character with more particles in cytoplasm after15 days．NSE staining showed that cultured cells were positive staining by neuronal specific enalose antibody．Conclusion Adult hippocampus neurons grow slowly during the first week，but they are better from7day to15，then begin to degenerate after15days in vitro．This suggests that neurons from hippocampus of adult rats cultured in10days could be better for related neurobiological studies. ［Key words］Adult rats；Hippocampus neurons；NSE staining；Culture ［作者简介］李玉（1965～），男，云南昆明市人，医学硕士，副教授，主要从事癫痫外科和功能神经外科临床研究工作.
欧米茄表使用说明书
如何确定我购买的是正宗欧米茄腕表 遵循如下步骤可以确定您购买的是正宗欧米茄腕表： - 只在欧米茄指定经销商处购买欧米茄腕表。 - 申请一张信用卡大小的保修卡，完整填写8位系列编号、手表编号以及经销商的完整姓名和地址。 - 如果您想确定腕表是否正宗，请携同欧米茄腕表及保修卡到指定的维修中心，让我们的维修服务员确定您购买的是否为正宗欧米茄腕表。客户服务网络 计时表（CHRONOGRAPH）与瑞士官方天文台认证腕表（CHRONOMETER）有何区别返计时表（CHRONOGRAPH）带有显示时、分和秒的指针，它们与机械系统一起透过中央计时指针测定逝去回时间，可以记录到秒，并且具有30分钟和12小时定时装置。瑞士官方天文台认证腕表（CHRONOMETER）页是以不同角度，成功通过温度、精确度和防水功能测试后，获得COSC（瑞士官方天文台）正式颁发的等首 级证书的腕表。通过这些测试至少需要15天时间。 计时腕表上的按钮具有什么功能 返回页首 位于2点钟位置的按钮可以启动或停止计时功能，位于4点钟位置的按钮用于重新计时。 海马系列专业计时腕表的排氦气阀门具有什么功能 返排氦气阀门由欧米茄为职业潜水员专门研发。在深海潜水过程中，潜水员往往会在潜水钟内进行数天作回业。在到达水平面之前，潜水钟内充满氦气和氧气的混合气体。氦气分子轻于空气，可以渗入手表，并页在大气压力的作用下将水晶镜面推出。在到达水平面之前打开氦气排放阀可以将氦气排放，从而防止手首表进水。 自动上链机芯与手动上链机芯有何区别 返回自动上链机芯与手动上链机芯的区别在于上链方式的不同。手动上链腕表需要每天人工上链，而自动上页首链腕表则具有内部摩打，利用手腕的运动来自动上链。自动上链腕表通常具有至少40小时的动力储存，即使不佩戴手表，仍然能够备有足够的能量储存以保持稳定的运行。 返回页首欧米茄腕表是否具有防振功能 是。欧米茄腕表可以承受重量为5000克的振动。 欧米茄腕表是否具有防磁性能 是。欧米茄腕表具有防磁性能，符合ISO 764规定的标准。此标准根据一款腕表任意透过强度为4,800A/M，即特斯拉的磁场测试为基础制订。ISO 764测试内容包括将手表以3种不同的角度放入磁场内，接受每次长度为1分钟的测试： 返回?沿3点钟至 9点钟方向与手表平面平行的角度 页首 ?然后沿6点钟至12点钟方向
各类神经元细胞的培养方法
体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。神经细胞培养的主要优点是:(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后,能保持结构和功能 上的某些特点, 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系,这就提供了体内生长过程在体外重现的机会。(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化,便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免疫组化和电生理等手段进行研究。(3)易于施行物理（如缺血、缺氧）、化学和生物因子（如神经营养因子）等实验条件, 观察条件变更对神经细胞的直接或间接作用。(4)便于从细胞和分子水平探讨某些神经疾病的发病机制，药物或各种因素对胚胎或新生动物神经细胞在生长、发育和分化等各方面的影响。我们实验室从80年代始开展了神经细胞的体外培养工作，取得了一些经验，现将培养细胞分类及方法简要介绍如下: 一、鸡胚背根神经节组织块培养 主要用于神经生长因子（NGF）等神经营养因子的生物活性测定。在差倒置显微镜下观察以神经突起的生长长度和密度为指标半定量评估NGF的活性。 1、材料和方法 （1）选正常受精的鸡蛋，置于37℃生化培养箱内孵化，每日翻动鸡蛋一次。 （2）取孵化8-12 d 的鸡蛋, 用70% 酒精消毒蛋壳，从气室端敲开蛋壳，用消毒镊剥除气室部蛋壳。 （3）用弯镊钩住鸡胚颈部，无菌条件下取出鸡胚置小平皿内，除去头部后，腹侧向上置灭菌毛玻璃片上,用眼科弯镊子打开胸腹腔，除去内脏器官。 （4）在解剖显微镜下，小心除去腹膜，暴露脊柱及其两侧，在椎间孔旁可见到沿脊柱两侧排列的背根节（图1），用一对5号微解剖镊小心取出。 （5）置背根节于解剖溶液内，用微解剖镊去除附带组织，接种于涂有鼠尾胶的玻璃或塑料培养瓶中，在DMEM无血清培养液中培养。 2、结果 鸡胚背根神经节在含神经生长因子(NGF, 2.5S，20ng/ml)的无血清培养液中培养24 h,神经节长出密集的神经突起。而未加NGF的神经节培养24 h, 未见神经突起生长。 二、新生大鼠、新生小鼠及鸡胚背根神经节分散细胞培养 背根神经节（DRG）细胞起源于神经嵴，NGF研究先驱Levi-Montalcini的实验表明，外原性NGF能刺激DRG细胞生长发育并形成广泛的神经网络。在体外，分离培养的神经节在NGF存在的情况下，神经突起的生长在一天之内可长达数
欧米茄手表维修保养费用是多少
欧米茄手表是瑞士的一个手表品牌，一直沿袭着瑞士手表的精准化与精致感，是很多手表品牌值得借鉴的。欧米茄手表虽然品质优良，但是也是需要定期去保养的，避免损伤手表。那么，欧米茄手表保养一次多少钱呢？ 一、维修保养费用 由于手表的原材料不同，手表的保养费用有所不同，一般原料保养的价格是770元，金表需求800元以上。依照手表职业相关规定，别的还要依据欧米茄表的价格收取千分之一的检查费。保养一般需求5天才能完结，保养前请预留出足够的时刻。 二、那么欧米茄手表日常应该如何保养呢？ 欧米茄手作为日常佩戴的首饰之一，容易感染尘埃、汗渍，欧米茄手需要定期去专卖店清洗和保养，请专业的保养人员来清理。个人平常可对欧米茄表壳、表带、表头等外观处进行清洁：用软毛牙刷和手表清洗剂悄悄擦拭外壳和表带，最后用清水洗净，软布擦干，若有烘干机进行烘干处理。假如手表防水功用欠好，
清洗时要特别注意。表带是皮质的欧米茄表要用皮质清洁剂，不要沾水，避免对皮质形成危害。 欧米茄表带一段时间难免存在差错，很大程度是受到环境中磁场的影响。家用电器电脑、电视、冰箱等都会发生磁场，钱包、手包的磁扣都会引起手表磁化。磁化影响的是手表最重要的内件-摆轮游丝，一旦磁化，手表走时就不精确了。所以在日常佩带中尽可能的远离强磁场。 欧米茄手表还具有防水的功能特点，不同类型的手表防水深度不同。很多人认为防水多少米就是能够把手表放入多少米深的水中，这种主意是十分过错的。欧米茄表防水30米最好就日子防水，不要游泳的时候也佩带。不管防水深度多少，都不能够戴表进入蒸汽较多的当地如桑拿房，蒸气的热度和温差会使手表防水胶圈提早老化，失掉防水功用，无法正常维护机芯。 三、多久保养一次呢？ 正常情况下佩戴的欧米茄手表每2年-3年保养一次即可。 欧米茄手表的保养知识是关乎着每一个手表爱好者的，手表的保养方式是大同小异的。一般来说，一个中高档次的手表在两到三年保养一次为宜，次数不多不少，在保养时，需要注意送到专业的保养店，或者请专业的手表保养人员帮忙保养，不可自己盲目保养手表。 而一般每个城市都会有官方授权的保养维修中心，大家可以到这些地方去。如果你在郑州，也可以到精达亨得利名表维修中心来，精达亨得利名是实体授权的欧米茄手表特约维修服务中心，拥有官方授权，是专业的欧米茄手表售后维修保养中心，且店内配备先进的维修设备和优秀的技师，竭诚为您的爱表提供专业的保养维修服务！
海 马 神 经 元 培 养
海马神经元培养 （1）材料 ①孕鼠：海马：孕18d，皮层或纹状体：孕16d ②Neurobasal medium (Gibco-BRL, cat. no. 21103) L-Glutamine (Gibco-BRL, cat. no. 25030) 谷氨酰胺 Glutamic acid (Sigma, cat. no. G-1626) 谷氨酸 B27 (Gibco-BRL, cat. no. 17504) ③Poly-D-lysine (mol wt 30,000—70,000) (Sigma, cat. no. P-7280)多聚赖氨酸 ④Hank’s balanced salt solution (HBSS) (Gibco-BRL, cat. no. 14025) ⑤HBSS without Ca2+, Mg2+ (Gibco-BRL, cat. no. 14175) ⑥trypsin 胰酶 ⑦NaHCO 3 ⑧Na pyruvate (Gibco-BRL, cat. no. 11840)丙酮酸钠 ⑨Trypan blue, 0.4% 台盘蓝 ⑩巴氏吸管，前端用火抛光 刻度吸管 离心管 闪烁瓶 玻璃培养皿：小：3套 大：2套 冰袋、纱布 手术器械、筛网 培养瓶或培养板
（2）步骤 ①准备 a．配制试剂 i) Poly-D-lysine（需保存在聚苯乙烯容器中，不能保存在玻璃、聚碳酸酯或聚丙烯容器中） 配制硼酸缓冲液（pH8.4） A液（硼砂溶液）：1.907g硼砂溶于100ml纯水（0.05M），0.22μm微孔滤膜过滤除菌，4℃保存 B液（硼酸溶液）：1.237g硼砂溶于100ml纯水（0.2M）0.22μm微孔滤膜过滤除菌，4℃保存 4.5mlA液+ 5.5mlB液 5mg P-D-L溶于10ml硼酸缓冲液中，配制成0.5mg/ml贮存液，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，-20℃保存使用时用硼酸缓冲液稀释10倍。 ii)HBSS without Ca2+, Mg2+（D-Hank’s溶液）配制 不含钙、镁的HBSS粉剂：4.75g溶于400ml纯水 NaHCO3：0.175g加入溶液 1M NaOH 调节pH至7.2-7.4 纯水定容至500ml，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，4℃保存 iii）1M NaOH溶液配制 NAOH：4g 溶于100ml纯水 iv）0.125%胰酶+0.02%EDTA D-Hank’s溶液10ml EDTA 20mg 溶解后 D-Hank’s溶液80ml 胰酶125mg 溶解后 1M NaOH溶液调节pH至7.2 D-Hank’s溶液定容至100ml，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，4℃保存 v）D-Hank’s溶液配制（0.035% NaHCO3，1mM Na pyrurate，10mM HEPES，pH7.4） 不含钙、镁的HBSS粉剂： 2.375g溶于200ml纯水 NaHCO3：0.088g加入溶液 HEPES：0.596g加入溶液 Na pyrurate（100mM）： 2.5ml加入溶液 1M NaOH 调节pH至7.4 纯水定容至250ml，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，4℃保存 vi）Hank’s溶液配制（0.035% NaHCO3，1mM Na pyrurate，10mM HEPES，pH7.4） 含钙、镁的HBSS粉剂： 2.45g溶于200ml纯水 NaHCO3：0.088g加入溶液 HEPES：0.596g加入溶液 Na pyrurate（100mM）： 2.5ml加入溶液
欧米茄海马系列
欧米茄海马系列 欧米茄海马系列手表一直是潜水表中的佼佼者。欧米茄海马系列更是以其精湛的工艺，巅峰技术闻名全球。自1948年，欧米茄海马系列腕表就正式以“海马”（Seamaster）为其称号。从此开创了潜水腕表的一个又一个奇迹。 全新欧米茄海马系列海洋宇宙腕表 欧米茄海马系列海洋宇宙(Planet Ocean)腕表自2005年诞生以来，无论在专业潜水功能、外观设计风格，还是创新同轴(Co-Axial)技术方面都享有极高赞誉。2011年，欧米茄对整个海马海洋宇宙家族进行了全面升级，并为每一枚全新海洋宇宙腕表都搭载了革命性的欧米茄自产8500/8501同轴机芯、8520/8521同轴机芯或全新推出的9300计时同轴机芯。这些均机芯搭载有Si 14硅材质游丝，表现精准可靠，故此欧米茄为每一枚全新海洋宇宙腕表提供长达4年的售后服务保证。 同之前的每一枚海洋宇宙腕表一样，全新表款配备单向旋转表圈和排氦气阀门，防水深度达到600米，随时与您一同探寻水下世界。 全新海洋宇宙腕表表盘上的小时刻度覆以白色夜光涂层，同抛光拱形镀铑时针和秒针一样，可在暗光环境中发出蓝色光芒。而分针和潜水表圈上的圆点则发出绿色光芒。这一特色使得潜水时只需一眼，便可轻易读取时间。
欧米茄海马Ploprof 1200米 Ploprof 潜水表独具特色的表圈释放安全按钮位于2时位置，带有橙色阳极氧化铝圈。按下按钮，将表圈朝向任一方向旋转，然后在某一位置紧紧锁住，以确保在潜水过程中不会发生意外转动。Ploprof 潜水表带有自动排氦气阀门，位于4时位置的表圈侧缘。这一功能保证了减压过程中氦原子的排出，对于在潜水钟内操作的专业潜水员来说别有用途。 欧米茄海马系列Ploprof 1200米同轴潜水表的抛光白漆表盘上带有抛光欧米茄字母和标志。为潜水者发挥着重要作用的超大型分针为橙色氧化铝材质，便于读取时间，并覆以白色夜光涂层。 欧米茄海马Aqua T erra 年历表