环磷酰胺对小鼠免疫抑制的动物模型建立及其免疫功能的测定

环磷酰胺对小鼠免疫抑制的动物模型建立

摘要:[目的]建立环磷酰胺对小鼠的免疫抑制的动物模型，从天然免疫功能和获得免疫功能两方面检测对小鼠的影响。[方法]初次免疫设立实验组给予OVA-AL(OH)3(0.5/只)和对照组给予NS（0.5/只）；8d,10d,12d,14d分别给实验组和对照组注射NS和CTX(100mg/kg);与15d加强免疫分别注射NS和OVA-AL(OH)3(0.5/只)；22d检测免疫功能[结果]与NS-NS组相比，CTX-NS组的SI值，双向免疫及ELISA的效价无明显差别，但吞噬细胞指数及吞噬细胞百分率明显降低；与NS-OVA相比CTX-OVA组的SI 明显降低，双向免疫剂ELISA效价都降低[结论]环磷酰胺对小鼠的T淋巴细胞，B淋巴细胞以及吞噬细胞有抑制作用

Abstract:[aims] To establish animal model of cyclophosphamide in mice immunosuppression , test in mice from two aspects of natural immune function and immunity function [methods] Primary immune to set up the experimental group given OVA-AL(OH)3 and The control group given NS ; the 8th,10th,12th,14th day give the experimental group NS and the control group CTX ,and the 15th strengthen the immune;the 22th test the immune function [results] Compared with NS - NS group, the SI value of CTX - NS group, bidirectional immune potency and ELISA has no obvious difference, but the phagocyte index and phagocytes percentage decreased obviously; Compared with NS - OVA CTX - SI of OVA group was obviously lower, bidirectional immune agent ELISA titer were reduced [conclusion] Cyclophosphamide in mice of T lymphocyte, B lymphocyte and phagocytes have inhibition

关键词：环磷酰胺 CTX 免疫抑制动物模型淋巴细胞

建立一种环磷酰胺免疫抑制小鼠模型，并将其与正常小鼠进行对照，通过检测小鼠的天然及获得免疫功能对比其改变与不同，从而可知环磷酰胺对免疫抑制的作用，有利于进一步进行对临床应用抗肿瘤的研究。

1.材料与方法

1.1 材料

1.11 实验动物：ICR小鼠4只，雌性，20~22g，清洁级，吉林大学实验动物中心。

1.12 重要器材：显微镜，离心机，超净台，细胞计数板，细胞培养箱，酶标仪，打孔器，加样器（200μl,20μl），酶标板，EP管

1.13实验试剂：CTX(山西普德药业公司)，生理盐水（NS），OVA+AL(OH)3，苦味酸，培养液（IMDM）5%FCS,ConA(10μg/ml),MTT(5μg/ml),白细胞计数液（2%冰醋酸），二甲亚砜（DMSO）,1.5%琼脂，PBS，洗液（PBS-Tween20），封闭液BSA

（0.5%~1%的牛血清白蛋白），酶标抗体（HRP-GaM）,显色底物，终止液，3%鸡红细胞悬浮液，3%淀粉溶液，Giemsa-wright’s染液

1.2方法

1.21 小鼠模型的建立：初次免疫设立实验组给予OVA-AL(OH)3(0.5/只)和对照组给予NS（0.5/只）；8d,10d,12d,14d分别给实验组和对照组注射NS和CTX(100mg/kg);与15d加强免疫分别注射NS和OVA-AL(OH)3(0.5/只)；22d检测免疫功能

1.22 T淋巴细胞功能检测（MTT法）实验动物摘眼球取血后无菌操作取脾脏和胸腺，制备单细胞悬液，进行细胞计数，调细胞浓度至1x107/ml,培养48小时，加入MTT，继续培养2小时，小心吸取上清，加入DMSO震荡是颗粒溶解，用酶标仪测定吸光度值A570nm，结果测量：用酶标仪测定光密度值A570nm（用空白孔调零），记录结果。结果判定：SI(刺激指数)=Con A刺激孔A值/对照组A值

1.23B淋巴细胞功能检测

双向免疫扩散法：实验动物摘眼球取血，分离血清。制备琼脂糖凝胶后进行铺胶，待琼脂糖凝固后与载玻片上打梅花孔。将血清倍比稀释，稀释度为1:2,1:4,1:8,1:16.与梅花孔中央加入Ag（OVA 0.1mg/ml）,周围的孔依次按顺序加入生理盐水，1:1，1:2,1:4,1:8,1:16 待测血清，放入湿盒，37 0C扩散24小时后记录结果。

ELISA法：包被：用0.05M pH9.6碳酸盐包被缓冲液将抗原(OVA，10μg/ml)稀释。100 μl/well加入聚苯乙烯酶标板中，4℃过夜。封闭：弃孔内溶液。加入150 μl/well 洗液, 43℃ 60mins。加样：弃封闭液，加倍比稀释的待测免疫血清100 μl/孔， 43℃孵育40mins，孵育结束后，用PBS-T 3min/次。酶抗：酶标抗体，100μl/well ，置43℃孵育40mins，用PBS-T 3min/次。显色：于各反应孔中加入新鲜配制的底物溶液100μl/well，室温下避光显色。终止：加50 μl/well2M硫酸(终止液)。结果判定：肉眼观察：与阴性对照孔相比有明显呈色反应的为阳性孔，相对应的抗体的最高稀释度为该抗体的效价。酶标仪测量：490nm滤光片下测光吸收值（A），与阴性对照孔A 值相比其比值≥2，相对应的最高抗体稀释度为该抗体的效价。

1.24吞噬细胞功能测定小鼠腹腔巨噬细胞鸡红细胞试验：实验前2天，给小鼠腹腔注射3%淀粉溶液。给小鼠腹腔注射3%鸡红细胞悬液0.5ml ,一小时后想腹腔打2ml 生理盐水，反复吹打后吸取腹腔液。取20μl 加到玻璃板上，加Giemsa-wright’s染液20μl 静置2分钟盖上盖玻片显微镜下观察。结果判定：用40倍镜查找观察200个巨噬细胞，计数其中未吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数、吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞数及被吞噬的鸡红细胞数，计算吞噬百分率及吞噬指数。

吞噬百分率=有吞噬作用的巨噬细胞数／计数的总巨噬细胞数（200）×100％吞噬指数=有吞噬作用的巨噬细胞吞入的鸡红细胞总数／计数的总巨噬细胞数（200）2.结果

2.1 淋巴细胞转化实验结果：

CTX-NS与NS-NS组的刺激指数对比有增高和降低两种结果，结果出现误差。CTX-OVA与NS-OVA组对照组的刺激指数相对降低，可知CTX可抑制小鼠T淋巴细胞增殖及转化的功能

2.2 双向免疫扩散法实验结果：

NS-NS,CTX-NS,NS-OVA,CTX-OVA分别为0 0 1:8 0

除了NS-OVA的效价结果为1：8外其余均显示为阴性，可知CTX可降低小鼠免B淋巴细胞功能

2.3 ELISA法实验结果：

NS-NS,CTX-NS,NS-OVA,CTX-OVA 分别为0 0 1：409600 1:1280

NS-NS组和CTX-NS组结果均为0，无特异抗原。与NS-OVA相比CTX-OVA的效价低，说明CTX有明显降低小鼠B淋巴细胞功能的作用

2.4吞噬细胞功能测定结果：

得出NS-OVA组的实验数据出现明显错误，舍之。而与NS-NS组相比CTX-NS组的吞噬指数降低，吞噬百分比明显降低，可得，CTX有明显降低小鼠吞噬细胞吞噬功能的作用

3.讨论

鉴于实验数据的局限性以及实验操作过程中的失误以及实验结果的误差，对本次实验结果进行如下分析：OVA与NS-OVA组对照组的刺激指数相对降低，可知CTX可抑制小鼠T淋巴细胞增殖及转化的功能；双向免疫NS-NS,CTX-NS,CTX-OVA效价为0，NS-OVA效价为阳性1：8.尤与实验组CTX-OVA相比可知环磷酰胺对小鼠B淋巴细胞免疫有抑制作用；ELISA实验NS-OVA的效价比CTX-OVA明显增大，可知环磷酰胺对小鼠B淋巴细胞免疫抑制作用很强；吞噬细胞功能测定实验中，NS-OVA小组的实验结果由于操作过程中出现了过错，结果明显有不正确之处，舍去不允与考虑，而NS-NS组与CTX-NS组数据相比CTX-NS组的吞噬百分率明显降低，吞噬指数也降低，说明，CTX 对在没有抗原影响的情况下对小鼠的吞噬细胞吞噬功能仍有抑制作用。

参考文献：

高芃，钱嘉林，刘长喜，严卫星环磷酰胺对小鼠免疫抑制的动物模型建立北京环境与职业医学 2004年8月第21卷第4期

唐超明，李汉贤环磷酰胺免疫抑制小鼠模型的建立及其在肾包膜下移植中应用山西临床医药杂志 2000年9月第9卷第9期

赵弋清，罗霞，陈东辉，余梦瑶，杨志荣不同剂量环磷酰胺诱导正常小鼠免疫抑制的对比研究免疫学杂志第21卷第3期 2005年6月

齐丽娟，宋雁，王伟，崔文明，张馨，刘兆平，孙拿拿，李宁用环磷酰胺建立小鼠免疫抑制动物模型卫生研究 2010年5月30日

李乐群，汪静雪，宋德懋，范少光，梅林环磷酰胺条件性免疫抑制反应动物模型的建立及有关机制的分析

环磷酰胺冲击疗法在狼疮性肾炎中的应用进展

环磷酰胺冲击疗法在狼疮性肾炎中的应用进展狼疮性肾炎引发肾功能衰竭的死亡率极高，而以往肾上腺皮质激素等激素 治疗方式起效慢、并发症多，且具有明显的毒副作用，如今医学界多使用环磷酰胺冲击疗法治疗狼疮性肾炎，本研究将对该疗法的药理原因、优势特点及弊端等做出阐述。 标签：环磷酰胺；冲击疗法；狼疮性肾炎；系统性红斑狼疮；进展 系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一类自身免疫系统疾病，其病因尚不明确，多导致自身抗体与抗原结合为循环免疫复合物，对自身组织和器官造成损害，根据其累及的器官和组织的区别，可分类为狼疮性肾炎（lupus nephritis，LN）、神经精神性狼疮、狼疮性肺炎、狼疮性心肌炎以及狼疮性肝炎等。其中肾脏是SLE最常见的累及器官，引发狼疮性肾炎后，若患者无法得到及时治疗，其恶化为肾衰竭速度很快，蒋萍萍等[1-2]在对多例LN患者的治疗、护理中发现，SLE死亡病例中，30%以上是由于狼疮性肾炎导致的肾功能衰竭，死亡率很高。环磷酰胺（Cyclophosphamide，CTX）是一类具有细胞毒性的免疫抑制剂，自19世纪50年代以来，CTX冲击治疗LN逐渐被医学界广泛关注，许进雄[3]认为其良好的疗效和较低的副反应率，是其目前临床广泛应用的主要原因。 1?LN治疗现状 在SLE患者中，肾累及的机率很高，几乎所有患者均伴有不同程度的肾脏损害。陈山源等[4-6]对SLE的病理及诊断研究中发现，该病累及严重的患者会出现LN病理学特征：肾脏组织内存在大量免疫复合物、补体、炎症细胞等沉积，肾单位遭到破坏，形成晚期纤维化。因此，梁春红[7]认为，治疗LN的重点为减轻肾脏炎症、修复肾脏功能和避免或减缓其肾衰竭进程。20世纪60年代，医学界多用大剂量皮质激素对LN进行治疗，疗效较为可观，但何庆南[8]的研究表明，激素治疗会导致许多并发症的出现，且无法有效减缓肾衰竭进程，因此，70年代初有人提出了CTX治疗手段，经张延等[9]不断优化与改善，该疗法短期效果明显，副作用率低，至今仍为临床LN治疗的首要方法。 2?CTX冲击疗法介绍 2.1?CTX的药理作用 CTX是一类人工合成的烷化免疫抑制剂，合成原料为氮芥与磷酸胺基，在临床免疫抑制方面应用广泛。原型CTX并无细胞毒作用，但在生物体内，肝微粒体酶和细胞色素P-450可将其氧化裂解为醛磷酰胺（Aldophosphamide），经血液循环到达细胞后，醛磷酰胺可进一步分解为具有高细胞毒和烷化作用的磷酰胺氮芥，可与分裂旺盛细胞的DNA形成烷化交叉连接，作用于细胞分裂的S期和G2期，是一种影响核酸的复制的细胞周期非特异性药物，使细胞分裂受到阻滞。吴小川[10]在对LN的病理分型治疗中发现，CTX对静息状态下的细胞影响不大，对免疫细胞有较大的影响：（1）前期可显著降低B淋巴细胞的数量，中后期同时抑制T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖；（2）抑制淋巴细胞在接受抗原刺激后的母细胞转化；（3）降低体内免疫球蛋白指标。 2.2?CTX冲击治疗的优势 按照左正才等[11]制定CTX冲击治疗方案，每隔一定时间给予CTX静脉注射：（1）小剂量：400 mg/次，1次/2周，持续3个月后减少为1次/4周；（2）

建立小鼠肿瘤模型的研究进展

建立小鼠肿瘤模型的研究进展 摘要：建立一种理想的肿瘤动物模型对研究肿瘤的发病、治疗和预防有重大的意义。其中小鼠肿瘤模型具有生长周期快、易获得、易操作等优点被基础实验研究所广泛采用，如何选择和建立一个合适的小鼠肿瘤模型对肿瘤的整个研究有着举足轻重的作用。 关键字：肿瘤，动物模型，小鼠 肿瘤，是一种严重威胁人类健康的多发病和常见病。对肿瘤的研究一般都是在人类疾病动物模型的基础上展开的。建立一个完全反映人类疾病的动物模型比较困难，但可依据不同的实验目的选择相应的动物实验模型。 1.实验动物的选择 可用作肿瘤模型的动物有很多，小鼠肿瘤模型作为其中一种常用模型主要因为有以下几个优点。（1）易获得，常用的肿瘤模型小鼠通常采用SPF级小鼠，SPF级小鼠一般医学院校及研究所都能买到。（2）生长周期短，一般小鼠肿瘤模型两周左右就能长大，能大大缩短实验周期。（3）易操作，小鼠的动物实验操作一般简便，因此可适当增加组内样本数量，使实验数据更具说服力。 2.理想的建立肿瘤模型应具备的条件 （1）肿瘤生长的过程应与人类肿瘤生长过程相似，做到尽可能复制出与人类肿瘤相同的模型。 （2）制作模型的方法简单易行。 （3）动物模型的重复性要好，要能满足实验的多次重复试验结果稳定性好。 （4）采用的建模方法对实验人员和环境无危害或危害较小。 3.肿瘤来源的选择 现在世界上保有近500种的动物移植瘤，但常用于筛药的不到40种，多数为小鼠肿瘤，其次是大鼠和仓鼠移植瘤，包括小鼠L1210淋巴白血病，P1534淋巴白血病，艾氏腹水瘤，Friehd病毒白血病，肉瘤180，白血病P388，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，Walker-256，吉田肉瘤，肉瘤45，Liol淋巴瘤，Dunning 白血病，Ｗagner癌肉瘤，白血病L5170Y，P1798淋巴肉瘤，LPC-1浆细胞瘤，淋巴瘤8，B16或Cloadman黑色素瘤，Ridaway骨肉瘤，Gardner 淋巴肉瘤，肉瘤37，P315白血病，Mur hy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，Geurin氏癌，仓鼠十二指肠腺癌和人体肉瘤HSL第1代杂交鼠移植。它们对抗癌药作用的敏感性大致可分

环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病的分析

环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病的分析 发表时间：2016-10-10T09:32:04.443Z 来源：《系统医学》2016年12期作者：金艳芝 [导读] 环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病具有明显的效果，不良反应较少，而且可以在一定程度上提高患者的生存质量。 云南省建水县人民医院肾脏风湿内科 654399 【摘要】目的：分析比较环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病的治疗效果。方法：选取自2015年3月至2016年3月在我院接受治疗的80例患者的资料，按治疗方法将其分为观察组和对照组，各组40例，观察两组治疗后的治疗效果和不良反应。结果：观察组的治疗效果明显高于对照组的治疗效果（P<0.05），不良反应明显低于对照组，两组比较差异显著（P<0.05），具有统计学意义。结论：环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病具有明显的效果，不良反应较少，而且可以在一定程度上提高患者的生存质量，值得在临床上推广使用。 【关键词】环磷酰胺；风湿免疫疾病；治疗分析 【中图分类号】R593.2 【文献标识码】A 【文章编号】2096-0867（2016）12-209-01 随着社会的发展，风湿类疾病的发生率也在逐渐升高，年龄也在逐渐小龄化，风湿免疫类疾病是一种免疫系统类的疾病，是一种对人体伤害较大的慢性疾病［1］。环磷酰胺目前在临床上被广泛应用于风湿类疾病的治疗。本文针对风湿免疫类疾病用环磷酰胺冲击治疗的方法进行研究，为以后临床治疗的发展提供理论基础，现在将具体情况汇报如下。 1资料与方法 1.1一般资料 选取自2015年3月至2016年3月在我院接受治疗的80例患者的资料，按治疗方法将其分为观察组和对照组，观察组患者男性10例，女性30例，年龄26～66岁，平均年龄46岁，病程为2～6年，平均病程（3.4±1.6）年。对照组患者男性10例，女性30例，年龄28～72岁，平均年龄50岁，病程为3～9年，平均病程为（4.8±1.9）年。通过对两组患者的年龄、病程等基本资料进行比较发现差异不明显P>0.05，具有可比性。 1.2方法 观察组使用环磷酰胺进行治疗，每半月静脉注射环磷酰胺600mg，持续静脉滴注6个月，然后每两个月继续静脉滴注600mg，同时使用相应的抗炎药进行原发病的治疗，并且使用泼尼松进行基础治疗，根据患者身体和病情的发展维持一定的剂量长期治疗，并观察患者的不良反应和治疗效果，及时进行记录［2］。 对照组使用柳氮磺吡啶进行治疗，参照观察组的疗法和用量维持长期治疗，定期观察患者的不良反应和治疗效果，及时记录。 1.3观察指标 对两组患者在治疗中进行观察，记录患者的治疗效果和不良反应，患者临床症状消失，无不良反应为显效；患者临床症状有明显好转，无明显不良反应为有效，患者症状无好转，有明显不良反应为无效。 1.4统计学方法 通过SPSS15.0对全文统计数据进行计算，治疗的有效率和不良反应为计量资料，采用t检验，以P<0.05表示结果差异较明显，具有统计学意义。 2结果 2.1对两组患者的治疗效果进行比较，具体情况如表1所示。 3讨论 环磷酰胺的英文名称为CTX，在机体外起不到抗肿瘤，抗风湿的作用，进入体内后经肝脏的降解功能转化成醛磷酰胺，醛磷酰胺再次分解后作用于病毒细胞，达到治疗的效果［3］。因为环磷酰胺可以干扰DNA及RNA的功能，因此对于严重骨髓抑制的患者禁忌使用，妊娠期和哺乳期的妇女也禁用此药。临床广泛应用于风湿类疾病的治疗［4］。虽然很多对应治疗的药物在开发研制，但目前来说，环磷酰胺的冲击治疗效果相对是最好的。另外其毒副作用相对较小，价格合理，可以被广大患者和家属所接受。 环磷酰胺的冲击治疗能够在一定程度上能够抑制细胞的生长，通常被应用于治疗持续、难治的、系统性的风湿类的症状［5］。采用该方法的治疗能够有效的缓解患者的症状，能够减少激素对风湿疾病的治疗量。冲击治疗效果较好，能有效延长患者的生命，在一定程度上提高患者的生活质量。风湿类疾病一旦发病，患者会疼痛难忍，风湿类疾病容易侵犯关节，严重时会导致关节畸形。关节肿胀，患者会有烧灼感，疼痛异常等临床症状。 本文选取在我院接受治疗的80例患者的资料，在患者及家属同意的情况下进行分组治疗，对观察组的风湿免疫类疾病患者用环磷酰胺

青蒿琥酯对CLP免疫抑制模型小鼠的保护作用及其作用机制的研究

目录 英文缩略词对照表 (1) 英文摘要 (3) 中文摘要 (10) 论文正文青蒿琥酯对CLP免疫抑制模型小鼠的保护作用及其作用机制的研究 (16) 第一章前言 (16) 第二章小鼠CLP脓毒症免疫抑制模型的建立与评价 (19) 2.1 材料与方法 (19) 2.2 实验结果 (24) 2.3 小结 (37) 第三章青蒿琥酯对CLP脓毒症免疫抑制小鼠的治疗作用 (38) 3.1 材料与方法 (38) 3.2 实验结果 (42) 3.3 小结 (54) 第四章青蒿琥酯对CLP脓毒症免疫抑制模型小鼠治疗作用的机制研究 (55) 4.1 材料与方法 (55) 4.2 实验结果 (62) 4.3 小结 (78) 全文总结 (79) 参考文献 (90) 文献综述脓毒症免疫抑制发生机制及治疗药物的研究进展 (95) 参考文献 (101) 研究生期间相关成果 (106) 致谢 (107) 万方数据

第三军医大学硕士学位论文 1 英文缩略词对照表 英文缩写 英文全称 中文全称 APCs AP antigen presenting cells ammonium persulfate 抗原呈递细胞 硫酸铵 AS artesunate 青蒿琥酯 ATCC American type culture collection 美国典型菌种保藏中心 ATP BASO Adenosine Triphosphate basophile granulocyte 三磷酸腺苷 嗜碱性粒细胞 CARS compensatory anti-Inflammatory response syndrome 代偿性抗炎反应综合征 CASP colon ascendens stent peritonitis 升结肠支架腹膜炎 CD leukocyte differentiation antigen 白细胞分化抗原 CFU colony forming unit 菌落形成单位 CLP cecal ligation and puncture 盲肠结扎穿孔术 DAB Diaminobenzidine 二氨基联苯胺 DSM DW dried skim milk distilled water 脱脂奶粉 蒸馏水 ECL EOS enhanced chemilumine scence eosinophile granulocyte 增强化学发光液 嗜酸性粒细胞 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 GM-CSF granulocyte-macrophage colony-stimulating factor 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 HLA-DR human leukocyte antigen DR 人类白细胞 DR 抗原 HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 ICU intensive care units 重症监护室 IFN interferon 干扰素 IL interleukin 白细胞介素 IRAK Interleukin-1 receptor-associated kinase 白细胞介素1受体相关激酶 LPS LYMPH lipopolysaccharide lymphocyte 脂多糖 淋巴细胞 万方数据

环磷酰胺冲击治疗肾病综合征的护理体会

环磷酰胺冲击治疗肾病综合征的护理体会 【摘要】目的探讨环磷酰胺(CTX)冲击治疗肾病综合征的护理经验,以防止或减轻并发症的发生。方法CTX剂量以8—10mg/kg冲击治疗肾病综合征，在CTX 冲击前.中.后均采用不同的护理方法和措施。结果25例肾病综合征患者的临床症状均明显缓解，其中2例出现严重胃肠道症状，3例出现一过性白细胞减少，经积极治疗护理后好转结论CTX冲击治疗肾病综合征是有效可行的方法，为取得满意的效果，护理工作显得很重要。 【关键词】肾病症状；环磷酰胺；护理 肾病综合征是由多种肾脏疾病引起的具有共同临床表现的一组综合征①泼尼松是治疗肾脏疾病的首选药物，但部分患者应用后效果欠佳，选用环磷酰胺（CTX）冲击治疗肾病综合征，并联合应用泼尼松，对于保护肾功能，延缓病情进展，降低复发率，较单一泼尼松效果好。我科自2002年1月—2006年1月来收治25例肾病综合征患者进行泼尼松联合CTX冲击治疗取得良好效果，现将有关护理体会做一报道 1.临床资料 1.1一般资料本组25例，男14例，女11例，年龄18—52岁，病程3个月—5年。全组病例均符合原发性肾病综合征的诊断标准②均为单纯应用泼尼松疗效不佳即为难治性肾病综合征患者。 1.2冲击治疗方法所有病例均采用激素联合CTX治疗，常规口服泼尼松 1mg/kg.d ,CTX以每月冲击一次，6次后改每3个月一次，总疗程2年，每次8—12mg/kg，加生理盐水100ml静脉滴注，每1—2周查白细胞，血小板1次，每次冲击治疗前后查肝肾功能 1.3疗效判断标准实验室检查，尿蛋白持续转阴，临床症状消失为显效，尿蛋白+~~++，临床症状缓解为有效，尿蛋白持续++~~+++，临床症状无明显好转为无效。

用环磷酰胺建立小鼠免疫抑制动物模型

1材料与方法 1. 1. 2 主要试剂环磷酰胺、RPMI 1640 培养 液( 含L-谷氨酰胺，)、Hanks 液( HyClone)、MTT 试剂、 PBS 缓冲溶液( pH 值7. 2 ～ 7. 4，HyClone)、丝裂霉素C、SA 缓冲液，绵羊红细胞，补体( 豚鼠血清)、都氏试剂、LDH 基质液、 P815 细胞( 购于协和医科大学基础医学细胞中心)、YAC-1 细 胞、FITC-Anti-CD3、PE-Anti-CD4、PerCP-Anti-CD8 荧光抗体)。 1. 2 动物与分组 Balb /C 小鼠90 只，雌性，6 ～ 8 周龄，体重18 ～ 22g。颗粒饲料，室温(22 ± 2)℃，湿度60% ～ 80% 。 动物在实验室条件下检疫1 周后，实验分为3 项处理进 行，(1) 处理一:测定动物体重、脾脏重量及系数;(2) 处理二: 测定NK 细胞活性，细胞毒性T 细胞活性;(3) 处理三:测定血 清半数溶血值。每项处理随机分为空白对照组、CTX-1 组和 CTX-2 组。 1. 3 实验方法和测定指标 1. 3. 1 剂量选择试验前经急性经口毒性试验确定CTX 的LD50为240mg / kg，以1 /4 LD50做为本试验中CTX-1 组的 CTX 剂量，即60 mg / kg 环磷酰胺，用蒸馏水配制，每日经口给予。CTX-2 组每日经口给予蒸馏水，试验结束前一天经腹腔 注射给予动物200 mg / kg 环磷酰胺［2，3］( 用蒸馏水配制)。另设空白对照组，蒸馏水代替受试物，每日经口给予。动物灌胃 容积为0. 3ml /10g，每周称量体重调整灌胃量，连续灌胃4 周 后测定各项免疫指标。 1. 3. 2 血液中T、B 淋巴细胞分类计数［4］动物处死前眼 眶内眦静脉取血，EDTA-K2抗凝，每只设定3 支流式试管进行 测定，每管加入50μl 抗凝血。分别在3 管中加入CD3 /CD19 ，CD3 /CD4 /CD8.不同荧光素标记的单克隆小鼠抗体。每管加 入2ml FACS 红细胞裂解液，室温下避光保存20min。1200r / min 离心5min，弃去上清液。每管再加入2ml PBS，1200r /min 离心5min，弃去上清液。加入0. 5ml PBS 混匀后上流式细胞仪进行检测。 1. 3. 3 细胞毒性T 淋巴细胞活性试验［5，6］ 1. 3. 3. 1 脾细胞悬液的制备( 效应细胞) 无菌取脾，用4 层 纱布将脾磨碎，制成单细胞悬液。用Hank＇s 液洗2 次，每次离 心10min(1000r /min)。弃上清将细胞浆弹起，加入0. 5ml 灭 菌水20s，裂解红细胞后再加入5ml Hank’s 液，混匀后1000r / min，10min 离心，用1ml 含10% 小牛血清的RPMI1640 完全培 养液重悬，调整细胞浓度为2 × 107 个/ml;加0. 5ml 此细胞悬 液于24 孔培养板，留一孔不加脾细胞作为对照孔。 1. 3. 3. 2 制备刺激细胞1000r /min，10min 离心处于对数生 长期的P815 细胞，用5ml DMEM 培养液悬浮P815 细胞于 15ml 离心管中，计数细胞。加入丝裂霉素C，相当于50μg / (2 ～ 5) × 107 个细胞。用锡纸包裹离心管以避光，在37℃水浴 30min。用Hank’s 液洗P815 细胞3 次，之后Hank’s 液悬浮

环磷酰胺冲击疗法治疗难治性肾病综合征的临床疗效

龙源期刊网 https://www.sodocs.net/doc/ea12357419.html, 环磷酰胺冲击疗法治疗难治性肾病综合征的临床疗效 作者：白敬恩魏云彪李宏 来源：《中国现代医生》2015年第20期 [摘要] 目的探讨环磷酰胺冲击疗法治疗难治性肾病综合征的临床疗效。方法回顾性分析难治性肾病综合征患者58例的临床资料，其中27例采用环磷酰胺冲击疗法联合激素治疗为观察组，31例患者单纯给予激素治疗为对照组；比较两组患者的临床疗效。结果观察组完全缓解率为66.7%，显著高于对照组（P0.05）。结论在常规治疗基础上给予环磷酰胺冲击疗法治疗难治性肾病能够显著提高缓解率。 [关键词] 环磷酰胺；冲击疗法；激素；难治性肾病综合征 [中图分类号] R692.3 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）20-0080-03 Clinical efficacy of cyclophosphamide pulse therapy for refractory nephrotic syndrome BAI Jing'en WEI Yunbiao LI Hong Department of Nephrology， Lvliang City People's Hospital in Shanxi Province， Lvliang 033000， China [Abstract] Objective To discuss clinical efficacy of cyclophosphamide pulse therapy for refractory nephrotic syndrome. Methods The clinical data of 58 cases with refractory nephrotic syndrome were respectively analyzed. 27 cases of observation group were treated by cyclophosphamide pulse therapy， and 31 cases of control group were treated by hormone therapy alone. Clinical efficacy of two groups was compared. Results Remission rate of observation was 66.7%， which was higher than control group（P0.05）. Conclusion Remission rate is improved with cyclophosphamide pulse therapy for refractory nephrotic syndrome. [Key words] Cyclophosphamide； Pulse therapy； Hormone； Refractory nephrotic syndrome 肾病综合征（nephrotic syndrome，NS）可由多种病因引起，以肾小球基膜通透性增加和 表现为大量蛋白尿低蛋白血症、高度水肿、高脂血症的一组临床症候群。激素是治疗肾病综合征的常用药物，但是对于难治性肾病单纯使用激素治疗，效果欠佳。环磷酰胺是烷化剂类抗肿瘤药，除了抗肿瘤外，还具有很强的免疫抑制作用，临床上也用于肾病综合征以及免疫性疾病的治疗[1，2]。我院采用环磷酰胺冲击疗法联合激素治疗难治性肾病综合征，取得了较好的效果，现将结果报道如下。

小鼠肿瘤模型

小鼠肿瘤模型 肿瘤模型我们一般常用的就是小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。其中用得最多的是皮下模型，另外还有腹水（或者尾静脉注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他们了。 小鼠模型分三大类：第一类是以S180、EAC、H22等为代表的，他们的宿主小鼠多选用KM，可产生腹水，也可在皮下成瘤。多以腹水传代，实验时抽取腹水，经过一定稀释后皮下接种构建模型，接踵后第二天开始给药，给药7到10天，接种10天后结束试验，剥取肿瘤称瘤重。 1. 关于构建瘤种 可以用体外细胞株培养后，用PBS悬浮至1~3×106/0.1ml/mouse，i.p接种即可，最好用6号左右的针头，就是常用的2ml一次性注射的针头。 2. 关于腹水传代 观察到第一代的种鼠肚子较大后（一般约8~9天左右），可以传代，传代时取1ml 注射器，用2ml注射器的针头，种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可，注意不要把针头插得很深，尽量浅一点，还可以把老鼠拎起来，利用重力，让腹水集中在某处便于抽取，一般抽个0.5ml就可以了，不用离心，直接用PBS3~6倍稀释后，接种到新的老鼠腹腔，腹水颜色为白色或者略有发黄都是正常的，但是血性腹水说明不好，需要注意调整，第二代以后，尽量6~7天的时候传代，不要等的时间太久，否则腹水容易血性。三代后可用于试验。 3. 关于接种进行试验 这个时候抽取的腹水需要量比较多，一般需要处死种鼠后，小心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤，注意不要弄破肌肉，然后，用镊子（最好是哪种前面有倒勾的镊子，学名好像是唇型镊）拎起腹部的肌肉，用剪刀剪开一个小口，然后用玻璃滴管或者去掉针头的注射器吸取腹水。然后进过一定的稀释后，接种到小鼠的腋下。关于稀释量，各个实验室的情况都不一样，最好摸索一下，开始的时候可以适当的计数，但是要用台盼兰染色后计活细胞数。接种部位在小鼠腋下，但是不要深入到腋窝里面，会给以后的操作带来麻烦。接种时的进针处离接种处远一点，让针头在皮下多走一段，不容易污染。有的人接种的时候喜欢针头向上用力，紧贴着表皮往里走，然后注射的时候感觉阻力较大，打出来的皮丘又紧又圆，这样的接种，会使肿瘤与皮肤严重粘连，不利于最后肿瘤的剥取。也不要紧靠肌肉，肿瘤会与肌肉严重粘连。应该在两者之间，进针的感觉轻松自如，针头很自由，虽然打出来的肿瘤不会很圆很漂亮，但是相对好剥取一些。 4. 关于观测指标 主要是按时称体重，试验结束后剥取肿瘤称瘤重。因为出瘤已经是接种后的第6天左右了，第10天就结束时间，瘤体积的数据意义就不大。小鼠肿瘤很难剥，这是没有办法的，只能耐心，没有太好的办法，剥多了以后，手上会掌握一些巧力，有一些帮助，但是我们还是很头痛小鼠肿瘤试验结束。肿瘤组织周围经常会有一些血窦的形成，弄破后会有血和黄色的液体流出，正常的，但是剥瘤子的时候不要把它弄破，会严重影响瘤重。按照SFDA的规定，平均瘤重小于1g，或

环磷酰胺(说明)

【通用名】环磷酰胺 【规格】12片*2板/盒 【制造商】天津金世制药有限公司 【适应症】本品为目前广泛应用的抗癌药物，对恶性淋巴瘤、急性或慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤有较好的疗效，对乳腺癌、睾丸肿瘤、卵巢癌、肺癌、头颈部鳞癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤及骨肉瘤均有一定的疗效。 用法用量成人常用量：口服每日2～4mg/kg,连用10～14天，休息1～2周重复。儿童常用量：口服每日2～6mg/kg,连用10～14天，休息1～2周重复。 【不良反应】骨髓抑制：白细胞减少最常见，最低值在用药后1～2周，多在2～3周后恢复。对血小板影响较小。可影响肝功。胃肠道反应：包括食欲减退、恶心及呕吐，一般停药1～3天即可消失。泌尿道反应：可致出血性膀胱炎，表现为膀胱刺激症状、少尿、血尿及蛋白尿，系其代谢产物丙烯醛刺激膀胱所致，但环磷酰胺常规剂量应用时，其发生率较低。其他反应尚包括脱发、口腔炎、中毒性肝炎、皮肤色素沉着、月经紊乱、无精子或精子减少及肺纤维化等。禁忌症、抗癌药物，必须在有经验的专科医生指导下用药。凡有骨髓抑制、感染、肝肾功能损害者禁用或慎用。对本品过敏者禁用。妊娠及哺乳期妇女禁用。 【性状】复方环磷酰胺为糖衣片，除去糖衣后显白色。

【药理毒理】复方环磷酰胺在体外无活性，进入体内被肝脏或肿瘤 内存在的过量的磷酰胺酶或磷酸酶水解，变为活化作用型的磷酰胺氮芥而起作用。其作用机制与氮芥相似，与DNA 发生交叉联结，抑制DNA的合成，也可干扰RNA的功能，属细胞周期非特异性药物。本品抗瘤谱广，对多种肿瘤有抑制作用。 【药代动力学】环磷酰胺口服易吸收，迅速分布全身，约1小时后 达血浆峰浓度，在肝脏转化释出磷酰胺氮芥，其代谢产物约50%与蛋白结合。静注后血浆半衰期4～6小时， 48小时内经肾脏排出50%～70%，其中68%为代谢产物，32%为原形。 【注意事项】复方环磷酰胺的代谢产物对尿路有刺激性，应用时应 鼓励患者多饮水，大剂量应用时应水化、利尿，同时给予尿路保护剂美司钠。近年研究显示，提高药物剂量强度，能明显增加疗效，当大剂量用药时，除应密切观察骨髓功能外，尤其要注意非血液学毒性如心肌炎、中毒性肝炎及肺纤维化等。当肝肾功能损害、骨髓转移或既往曾接受多程化放疗时，环磷酰胺的剂量应减少至治疗量的1/2～1/3。由于本品需在肝内活化，因此腔内给药无直接作用。孕妇及哺乳期妇女用药有致突变、致畸胎作用，可造成胎儿死亡或先天畸形。妊娠 期妇女禁用。本品可在乳汁中排出，在开始用药时必须中止哺乳。【药物相互作用】环磷酰胺可使血清中假胆碱酯酶减少，使血清尿 酸水平增高，因此，与抗痛风药如别嘌呤醇、秋水仙碱、丙磺舒等同用时，应调整抗痛风药物的剂量。此外也加强了琥珀胆碱的神经肌肉阻滞作用，可使呼吸暂停延长。环磷酰胺可抑制胆碱酯酶活性，因而

环磷酰胺冲击疗法联合激素治疗肾病综合征的疗效观察

表2 两组患者治疗前后血流变指标比较 （x ?s ，mPa ·s ） 组别例数全血黏度高切 治疗前 治疗后全血黏度中切 治疗前 治疗后全血黏度低切 治疗前 治疗后血浆黏度 治疗前 治疗后观察组237.6?1.3 6.0?1.3*9.2?1.57.1?0.9*12.9?1.8 9.0?1.8* 1.8?0.4 1.3?0.1*对照组23 7.4?1.37.1?1.0* 9.8?1.39.0?1.2* 13.0?2.012.5?2.1* 2.1?0.1 1.9?0.1* P 值 注：与治疗前比较，* P <0.05 参考文献1 鲁东志.舒血宁注射液治疗脑梗塞35例［J ］.实用中医内科杂 志，2012，19（1）：53. 2 胡晓懿.银杏叶注射液治疗肺心病的疗效分析［J ］.当代医学，2012，18（9）：138 140. 3 张弘，蔡柏蔷.第八届全国肺心病学术会议纪要［J ］ .中华结核和呼吸杂志，2012，25（8）：503 504. 4 王雁，杨义芳.银杏叶的药理作用及机制研究进展［J ］ .中国现代应用药学，2011，18（1）：1 3. 5 邓晓琴，余琴，林红，等.慢性肺心病急性期患者血液流变观察［J ］ .上海医学检验杂志，2011，10（3）：178 180.6 蒲蓉，赖幼林.刺五加注射液对肺心病高勃血症血液流变学的影 响［J ］ .云南中医中药杂志，2012，21（6）：22 23.7 陈主初，郭恒怡，王树人，等.病理生理学［M ］.北京：人民卫 生出版社，2011：157 160. （收稿日期：2014 09 13） 环磷酰胺冲击疗法联合激素治疗肾病综合征的疗效观察 吴征 作者单位：418400湖南省怀化市第二人民医院靖州分院 【摘 要】 目的 观察环磷酰胺冲击疗法联合激素治疗肾病综合征（NS ）的临床效果。方法 选取2013年3 月—2014年3月怀化市第二人民医院靖州分院收治的NS 患者60例，按不同治疗方法分为观察组与对照组，各30例。观察组患者予以环磷酰胺冲击疗法联合激素治疗，对照组患者予以常规激素治疗。观察两组患者临床疗效、不良反应及各项指标变化情况。结果 观察组患者总有效率为93.3%，高于对照组的80.0%，差异有统计学意义（P <0.05），观察组患者不良反应发生率低于对照组（P <0.05），两组患者治疗前尿蛋白定量、血浆总蛋白、血清清蛋白、血肌酐、内生肌酐清除率比较，差异无统计学意义（P >0.05），治疗后观察组患者尿蛋白定量低于对照组，血浆总蛋白、血清清蛋白高于对照组（P <0.05），治疗后两组患者血肌酐、内生肌酐清除率比较，差异无统计学意义（P >0.05）。结论 环磷酰胺冲击疗法联合激素治疗NS 的临床效果显著，可降低不良反应发生率，改善患者预后。 【关键词】 肾病综合征；环磷酰胺冲击；激素；治疗结果 【中图分类号】 R 692 【文献标识码】 B 【文章编号】 1674 3296（2015）02C-0068-02 doi ：10.15887/https://www.sodocs.net/doc/ea12357419.html,ki.13-1389/r.2015.06.043 肾病综合征（NS ）常规激素治疗后效果较差，反复发作， 患者常无法耐受治疗［1］。环磷酰胺作为治疗NS 的首选药，在 患者体内被肝细胞微粒体羟化产生具有烷化功能的代谢产物， 具有较强免疫抑制作用［2］ 。本研究旨在观察环磷酰胺冲击疗 法联合激素治疗NS 的临床效果，现报道如下。1 资料与方法 1.1 一般资料 选取2013年3月—2014年3月怀化市第二人民医院靖州分院收治的NS 患者60例，按不同治疗方法分为观察组与对照组，各30例。观察组中男18例，女12例；年龄37~61岁，平均（55.3?0.7）岁；病程（10.3? 2.4）个月。对照组中男17例，女13例；年龄38~60岁，平均（54.7?0.8）岁；病程（11.5? 3.0）个月。患者均经临床症状和体征检查，并结合相应实验室检查确诊，符合WHO 关于 难治性NS 的诊断标准［3］ 。两组患者性别、年龄、病程比较， 差异无统计学意义（P >0.05），具有可比性。 1.2 方法 对照组患者予以泼尼松、双嘧达莫、雷公藤多苷等对症治疗。观察组患者予以环磷酰胺冲击疗法联合激素治疗，12mg /kg 溶于0.9%氯化钠溶液200ml ，静脉滴注<2h ，给予水化20ml /kg ，1次/d ，共治疗1个月，累积量120mg /kg ；均在住院期间开始治疗。 1.3 观察指标 观察两组患者临床疗效、不良反应及各项指标变化情况。 1.4 疗效判定标准 （1）完全缓解：24h 尿蛋白定量<200mg ，血清清蛋白>35g /L ，尿蛋白阴性，水肿消失，血脂、肾功能等生化指标恢复正常；（2）部分缓解：尿蛋白减少至+~++，24h 尿蛋白定量<1.0g ，血清清蛋白为25~35g / L ，生化指标基本正常；（3）无效：尿蛋白、血清清蛋白均无改变，血尿、水肿无缓解，生化指标出现加重。总缓解率=

肿瘤动物模型的构建——白血病篇知识讲解

肿瘤动物模型的构建——白血病篇

肿瘤动物模型的构建——白血病篇 导读白血病（Leukemia）是一种常见的恶性血液疾病，俗称血癌。据统计，白血病是儿童恶性肿瘤的头号原因，在儿童及35岁以下成人中发病率位居第一[1]。同时也是十大恶性肿瘤之一。目前，白血病具体的发病原因至今尚未研究透彻，因此建立合适的白血病动物模型，对于白血病发病机制及药物研发具有重要意义。 本期为大家综述了白血病的基本情况及小鼠模型的分类、建立方法和应用。 第一章：白血病基本常识白血病是常见液体瘤 白血病是常见的液体瘤，与结肠癌、肝癌等实体瘤不同的是，它是造血干细胞的异常分化和过度增殖导致，因此肿瘤细胞会遍布全身，会侵犯身体的每个脏器，造成全身衰竭。 造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，具有长期自我更新和分化成各类成熟血细胞的能力。如下图为造血干细胞可分类形成各种血细胞，如红细胞、血小板和白细胞： 造血干细胞分化成各类血细胞（图片来自https://www.sodocs.net/doc/ea12357419.html,网站）白血病致病因素有哪些呢？ 现阶段认为白血病的发病因素：化学因素、电离辐射、药物、毒物、病毒、遗传因素等有关。

白血病主要分为四类 根据白血病细胞的成熟程度和自然病程，白血病可分为急性和慢性两大类，临床上，白血病共分为四大类：急性髓系白血病（AML）、急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性髓系白血病（CML）和慢性淋巴细胞白血病（CLL）。儿童白血病90%以上是急性的，其中急性白血病中70%～80%是ALL。 第二章：实验研究所用白血病模型首先，来了解一下常用的细胞株白血病中常用的小鼠品系 用于建立白血病小鼠模型的小鼠可分为近交系和突变系。根据不同类型和目的选择不同的小鼠品系，具体如下图所示： 最后说说常用的动物模型，主要分为三类： 一、异种移植模型 异种移植模型是最常用的淋巴瘤动物模型。根据实验目的选择相应的小鼠品系和细胞株后，通常细胞的接种方式为皮下注射、腹腔注射和尾静脉注射。 皮下注射和腹腔注射操作简单，很快在接种部位形成肿瘤或腹腔内形成多发性肿瘤，适合筛选针对白血病的药物。但该类模型与白血病临床病人实际情况差距较大。异种移植型白血病模型异种移植示意图[2]

环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病的效果研究

环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病的效果研究 发表时间：2017-01-20T11:10:32.123Z 来源：《心理医生》2016年32期作者：高飞飞王 [导读] 风湿免疫疾病主要是指侵犯关节、肌肉、骨骼和关节周围软组织等部位的疾病。 （山东省威海市立医院风湿科山东威海 264200） 【摘要】目的：研究环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病的效果。方法：选取我院2015年1月—2016年9月期间收治的风湿免疫疾病患者80例为研究对象，将其随机均分为对照组和试验组。对照组使用醋酸泼尼松和羟氯喹联合甲氨蝶呤进行治疗，试验组使用醋酸泼尼松和羟氯喹联合环磷酰胺冲击治疗。比较两组患者的患者治疗后临床症状发作情况，并对两组患者不良反应发生情况进行比较。结果：试验组患者治疗后晨僵时间、关节压痛个数和关节肿胀个数均明显少于对照组，两组数据差异显著（P＜0.05）。试验组不良反应发生率低于对照组，但两组数据差异无显著性（P＞0.05）。结论：环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病的效果显著，具有较高临床推广价值。【关键词】环磷酰胺;冲击治疗;风湿免疫疾病 【中图分类号】R164.7 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）32-0059-02 风湿免疫疾病主要是指侵犯关节、肌肉、骨骼和关节周围软组织等部位的疾病，其中常见的主要有自身免疫性结缔组织病、系统性血管炎和关节的病变等[1]。由于风湿免疫疾病的发病原因较多，并且其病例变化十分复杂、病程迁延，因此临床上的治疗存在很大难度。本研究对环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病的临床效果进行分析，报道如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 选取我院2015年1月—2016年9月期间收治的风湿免疫疾病患者80例为研究对象，将其随机均分为对照组和试验组。对照组患者中男性患者23例，女性患者17例，患者的年龄在45～76岁，平均年龄（59.64±4.16）岁，患者的病程在3～11年，平均病程（6.25±1.14）年。试验组患者中男性患者21例，女性患者197例，患者的年龄在46～78岁，平均年龄（59.85±54.27）岁，患者的病程在4～12年，平均病程（6.59±1.08）年。两组患者的性别、年龄和病程等基本资料无显著差异（P＞0.05），具有可比性。 1.2 方法 对照组采用醋酸泼尼松和羟氯喹联合甲氨蝶呤进行治疗，其中主要是让患者按照200㎎/次，2次/d的标准服用羟氯喹，按照10㎎/次，2次/d的标准服用醋酸泼尼松，在此基础上按照12.5㎎/次的标准服用甲氨蝶呤，每7d服用1次。 试验组采用醋酸泼尼松和羟氯喹联合环磷酰胺冲击治疗的方式，其中醋酸泼尼松和羟氯喹的用法用量与对照组相同，在此基础上将400㎎环玲酰胺加入200ml生理盐水中进行静脉注射，每2d注射1次，在治疗20d后调整为没7d注射1次。 1.3 观察指标及疗效判定 观察两组患者的临床症状发作情况，并对两组患者不良反应发生情况进行比较。其中临床症状指标主要有晨僵时间、关节压痛个数和关节肿胀个数。 1.4 统计学处理 使用SPSS 22.0统计学软件对两组数据进行处理，其中计量资料用（x-±s）表示，技术资料用百分率（%）表示，采用χ2检验和t检验，以P＜0.05为两组数据差异有统计学意义。 2.结果 2.1 两组患者治疗后临床症状发作情况比较 试验组患者的晨僵时间、关节压痛个数和关节肿胀个数均明显少于对照组，两组数据相比差异有统计学意义（P＜0.05），详见表。 2.2 两组患者不良反应发生情况比较 试验组患者治疗过程中3例发生不良反应，不良反应发生率为7.50%。对照组患者治疗过程中4例发生不良反应，不良反应发生率为10.00%。试验组不良反应发生率低于对照组，但两组数据相比差异不具有统计学意义（P＞0.05）。 3.讨论 风湿免疫疾病是一种较为常见的疾病，但其治疗难度一般较大，很多患者在治疗过程中出现反复发作的情况。根据临床上对风湿免疫疾病患者的观察，其在发病后一般会出现明显的关节肿胀、关节压痛和晨僵等症状，导致患者的正常生活受到严重影响[2]。目前，临床上对风湿免疫病的治疗主要是在常规用药的基础上采用甲氨蝶呤进行治疗。其中甲氨蝶呤是一种抗风湿药物，能够有效减轻白血球导致的炎性活动，让患者骨骼受到的损害得到有效的控制[3]。但根据临床上的实际应用情况，患者在使用甲氨蝶呤治疗时必须要长时间服药，这样才能保证治疗效果。但在患者长时间服药的过程中很容易导致患者出现各种不良反应，对患者的治疗效果造成严重影响。环磷酰胺是一种免疫抑制剂，在使用环磷酰胺对风湿免疫疾病患者进行治疗时，能有效控制患者的风湿免疫疾病活动，从而降低疾病对患者身体的损害。同时，使用环磷酰胺治疗时能降低患者的激素用量，改变因长时间用药而产生的耐药性，因此其在临床上的应用十分广泛。 本研究对环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病的效果进行分析，其中试验组治疗后临床症状发作情况明显优于对照组，两组数据差异显著（P＜0.05），并且患者治疗过程中不良反应发生率很低，值得在临床上推广使用。 【参考文献】 [1]张永文,张晓立,沈思钰,蔡辉.环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病规范探讨[J].安徽医药,2014,07:1205-1208. [2]黄艾松.环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病的临床分析[J].大家健康(学术版),2015,12:75-76. [3]王利.环磷酰胺冲击治疗风湿免疫疾病的疗效探讨[J].中国实用医药,2016,28:27-28.

环磷酰胺用法

药理： 药效学 在体外无抗肿瘤活性，进入体内后先在肝脏中经微粒体功能氧化酶转化成醛磷酰胺，而醛酰胺不稳定，在肿瘤细胞内分解成酰胺氮芥及丙烯醛，酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。环磷酰胺是双功能烷化剂及细胞周期非特异性药物，可干扰DNA及RNA功能，尤以对前者的影响更大，它与DNA发生交叉联结，抑制DNA合成，对S期作用最明显。 药动学 口服后吸收完全，迅速分布到全身，少量可通过血脑屏障。环磷酰胺本身不与白蛋白结合，其代谢物约50％与蛋白结合。静注后血浆Ｔ1/2为4～6.5小时，50～70％在48小 时内通过肾脏排泄。 适应症： 适用于恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、淋巴细胞白血病、实体瘤如神经母细胞瘤、卵巢癌、 乳癌、各种肉瘤及肺癌等。 用法用量： 1.成人常用量口服每日按体重2~3mg/kg.静脉注射每次4mg/kg，每日或隔日一次。 或每次600~1200mg，每7~10日一次。 2.小儿常用量口服每日按体重2~6mg/kg，静脉注射每次2—6mg/kg，每日或隔日 一次。或每次10~15mg/kg，每周一次，以氯化钠注射液20ml稀释后缓慢注射。 [制剂与规格]环磷酰胺片50mg 注射用环磷酰胺（1）100mg（2）200mg （1）抗肿瘤：口服，一次50mg，一日3次；静注，一次每平方米400-600mg，每周一次，总量8g左右为一疗程。也可肌注，剂量同静注。动脉内注射，每次100-500mg，鞘内注射，每次50-100mg。（2）免疫抑制：一日50-150mg，两次粉服，连服4-6周。 静注，每次100-200mg，每日或隔日1次，连用4-6周。 禁用慎用： （1）孕妇用药须慎重考虑，特别在妊娠初期的三个月，由于环磷酰胺有致突变或致畸胎作用，可造成胎儿死亡或先天性畸形。本品可在乳汁中排出，在开始用环磷酰胺治疗时必 须中止哺乳。 （2）下列情况应慎用：骨髓抑制：有痛风病史、肝功能损害、感染、肾功能损害、肿瘤细胞浸润骨髓、有泌尿系结石史、以前曾接受过化疗或放射治疗。医学教育网搜集整理 肝病患者慎用。

拮抗化疗药物体外免疫抑制模型的建立及活性成分筛选

拮抗化疗药物体外免疫抑制模型的建立及活性成分筛选 以小鼠脾淋巴细胞为试验材料 , 将有丝分裂原刀豆蛋白 A(ConA)或细菌脂多糖(LPS)与化疗药物5氟尿嘧啶(5 Fu)联合使用建立了体外免疫抑制模型，并比较了多糖样品对5 Fu抑制淋巴细胞增殖的拮抗作用。结果表明 , 在供试样品中 ,F1 1[ 龙须菜 (Gracilaria lemaneiformis) 中分离多糖]和BW沪农灵芝1号(Ganoderma lucidum) 子实体中分离 ] 对 5 Fu 产生的轻度抑制有完全拮抗作用,19号[沪农灵芝1号(G. lucidum)子实体中分离] 样品刺 激淋巴细胞增殖活性最好 , 但对 5 Fu 产生的抑制基本无拮抗作用 , 表明样品刺激淋巴细胞增殖的活性与拮抗化疗药物抑制淋巴细胞增殖的活性无正相关性。 免疫抑制 ; 化疗药物 ; 多糖 肿瘤是危害人类健康的严重疾病 , 对其发生机制及治疗手段的 研究一直是医学领域的热点 [1] 。目前化疗仍是临床上治疗肿瘤的三大有效手段之一 , 化疗在杀灭患者体内的癌细胞方面有很好的效果 , 但均有不同程度的毒副作用 , 如化疗后往往会出现白细胞减少 , 特别是中性粒细胞减少 , 血小板减少等情况 [2], 严重的会造成人体免疫功能降低甚至是免疫功能缺陷 [3], 限制了化疗药物的使用 , 影响到癌症的治疗效果。因此 , 寻找能减轻化疗药物免疫抑制副作用的活性成分 , 对提高化疗药物的治疗效果和扩

大其适用范围有重要的意义。 研究表明 ,多糖具有免疫调节和抗肿瘤活性 , 其抗肿瘤活性主 要是通过调节机体的免疫功能而间接实现的 [4], 实验表明多糖在减轻化疗药物免疫抑制副作用方面效果明显 [5] 。如今多糖药物作为免疫调节剂已经成为辅助化疗、放疗和手术治疗肿瘤的重要组成部分。但多糖种类繁多、结构复杂 , 为了更好地对其进行开发利用 , 需要建立有效的活性筛选模型。常用的筛选减轻化疗药物免疫抑制副作用的模型多为动物体内模型 [6,7], 结果可信度高 , 但由于其耗时长、费用高、所需的样品量大等缺点 ,不适用于大量样品的初筛及样品分离过程中各组分活性的跟踪检测。若利用高效的体外细胞筛选模型进行初步筛选 , 获得相关的线索后再进行体内试验验证 , 将能大大提高活性成分的筛选效率。雷林生等 [8] 利用不同品系小鼠淋巴细胞相互作用后会引起淋巴细胞增殖这一特性 , 在细胞水平上考察了灵芝多糖拮抗抗肿瘤药物免疫抑制作用的效果 ,但该模型应用少、操作较复杂 ,因此需要建立方便、有效的筛选体系。 5 氟尿嘧啶 (5 Fu) 为临床上常用的化疗药物 , 主要副作用为 骨髓抑制 , 对在体内处于增殖状态的免疫细胞损伤较大。为了筛选拮抗化疗药物免疫抑制作用的样品 , 本研究取用小鼠的脾淋巴细胞,通过外加有丝分裂原刺激其增殖 , 模拟体内免疫细胞快速增殖的状态 ,再与 5 Fu 合用,建立免疫抑制模型。常用的有丝分裂原刀豆蛋白 A(ConA)和细菌脂多糖(LPS)分别刺激T淋巴细胞和 B 淋巴细胞增殖 , 为考察样品对不同淋巴细胞亚群的影响 , 本试验选用ConA和LPS两