已知标准液的浓吸和吸光度时,y=kx+b,求k值根据图表举例计算

已知标准液的浓吸和吸光度时,y=kx+b,求k值根据图表举例

计算

在化学实验中，我们常常需要测量溶液的浓度。为了准确测量浓度，我们需要用标准液来做比较。标准液的浓度已知，我们只需要测量其吸光度，就可以通过光度法来计算待测溶液的浓度。

在实验中，我们通常会绘制出标准曲线，即吸光度与浓度的关系曲线。这个曲线可以用线性方程 y=kx+b 来描述，其中 y 是吸光度，x 是浓度，k 是斜率，b 是截距。

当我们已知标准液的浓度和吸光度时，就可以用 y=kx+b 这个公式来求解 k 值。例如，我们已知标准液的浓度为 0.1 mol/L，吸光度为 0.2，假设截距 b 为 0，那么我们可以通过以下公式来计算 k 值：

k = (y - b) / x = (0.2 - 0) / 0.1 = 2

这个 k 值就代表了吸光度与浓度之间的线性关系斜率。通过这个 k 值，我们就可以计算待测溶液的浓度了。

当然，在实验中，我们通常会做多组测量，绘制出多个点的吸光度与浓度的关系图表。通过这个图表，我们可以更直观地看出吸光度与浓度之间的线性关系，并计算出对应的 k 值。这样，我们就可以更准确地测量待测溶液的浓度了。

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酶标仪的工作原理及基本结构

酶标仪的工作原理及基本 结构 Prepared on 22 November 2020

酶免测试的工作原理 吸光度测试的准确性对于酶免测试结果的重要性 酶标仪的组成部分和工作原理 第一节比色分析的基本理论 许多化学物质具有颜色，有些无色的化合物也可以和显色剂作用而生成有色物质。事实证明，当有色溶液的浓度改变时，颜色的深浅也随着改变。浓度越大，颜色越深；浓度越小，颜色越浅。因此，可以通过比较溶液颜色深浅的方法来确定有色溶液的浓度，对溶液中所含的物质进行定量分析。如纳氏管比色法，它是按浓度由高到低，配好一系列标准浓度管，然后拿待测样品和标准管逐个比较，看和哪一个标准管的颜色最相近，便读取该标准管的浓度值为待测样品的浓度值，这就是（目视）比色法。这种方法虽然比较简便，但是系列标准管不易保存，误差较大。后来改用光电检测元件代替目视来测量被测溶液中物质的含量，这种方法叫光电比色法。利用这种方法制成的仪器叫光电比色计。 光电比色计属于吸收光谱仪器范围。 一、光的性质 从物理学中我们知道，光具有波动和微粒两种性质，通称光的波粒两象性。在一些场合，光的波动性比较明显；在另一些场合，光则主要表现为微粒性。 首先，光是一种电磁波。可以用描述电磁波的术语，如振动频率（υ）、波长（λ）、速度（c ）、周期（T ）来描述它。我们日常所见到的白光，便是波

长在400～760nm之间的电磁波，它是由红橙黄绿青蓝紫等色，按照一定比例混合而成的复合光。不同波长的光被人眼所感受到的颜色是不同的。在可见光之外是红外线和紫外线。各种色光及红外线、紫外线的近似波长范围如表1所示。 表1 各种色光及红外线、紫外线的近似近波范围单位：nm 除了波动性外，光还具有微粒性。在辐射能量时，光是以单个的、一份一份的能量（E＝hυ）的形式辐射的。式中υ是光的频率，h为普朗克常量。同样，光被吸收时，其能量一份一份地被吸收的。因此，我们可以说，光是由具有能量（hυ）的微粒所组成的，这种微粒被称为光子。由式中可知，不同波长的光子具有不同的能量。波长越短，即频率越高，能量越大。反之亦然。光子的存在可以从光电效应中得到充分的证明。 二、光的互补及有色物质的显色原理 若把某两种颜色的光按照一定的比例混合，能够得到白色光的话，则这两种颜色的光就叫做互补色。图1中处于直线关系的两种光为互补色。如绿光和紫光为互补色，黄光和蓝光为互补色等等。

生化检验中的定标 各种空白

定标的意义： 定标就是要找出一个参考点，就是一个K值（或F值）。它是由仪器与试剂状态确定下来的。当我们测定一个标本时，无论您是用手工的方法或全自动生化分析仪，测出来的值只是一个吸光度，这个吸光度对我们没有什么意义，我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性。那就要乘上一个K值，计算并打印出来的结果对我们就有意义了。K值就是我们通过定标找出来的。一般上最低要求是由试剂空白与标准品。经过仪器测定出两个吸光度。 标准液的浓度我们是知道的，这两个吸光度可以由仪器测出，这样就得出一个K值。无论什么样的标本，用其吸光度乘以K值我们就得到了答案。因此，K值具有非常决定性的意义，可以决定标本的准确性。 K值的决定因素： 我们看看K值会受到什么影响呢？ 第一，标准液的浓度一定要准确（标准液最好与标本一样是以血清为基质的）。 第二，标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。吸光度受仪器状况、试剂状况的影响，如果您的仪器相当稳定，试剂是影响K值的一个主要因素。 如何确定K值是正确的？ 一般我们用质控血清来检查，最好是两种水平的质控来检查，如果质控结果很好，可以说K 值是准确的，用这个K值计算出来病人的结果也是准确的，所以K值非常关键。 K值的真面目： K值实际上代表了斜率，截距代表试剂空白，试剂空白每天都在变化，所以K值的稳定性决定您的仪器与试剂，如果仪器与试剂都十分稳定，那K值也很稳定。 多长时间定一次标合适？ 这要看您试剂的稳定性，质控结果不好，有些项目做试剂空白可以解决，有些项目要做两点定标。 酶的项目如何确定K值： 一是计算出来的理论K值；

K = （TV x 1000）/（SV x L x s）二是用有酶项目的定标液得出K值：目前各公司可以提供多项目的定标液，不仅有底物类的项目，也有酶类的项目。 生化检验中的各种空白概念 时间：2009-5-8 9:54:09，点击:61 对所谓〃试剂空白〃〃样本空白〃〃水空白〃〃杯空白〃等〃空白〃名词，有些同行可能感到困惑.特此汇集了一下各种言论（包括本论坛高手们发表的一些意见）并结合自己的理解，总结如下，希望大家指正和补充： 空白概念区别要点：**空白=只含**的空白（吸光度） 1、试剂空白： 由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度，所以从理论上说，所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除。试剂本身的吸光度就是试剂空白。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把样本换成蒸馏水来测量。 在传统手工方法中，每次测定都要做至少三个管：测定管、标准管、空白管。其中空白管是试剂加蒸馏水，测出来也就是试剂空白。因为操作环境、仪器状态、试剂稳定性等变异，所以要求每次都要测定试剂空白，称为实时试剂空白。 在全自动分析仪上，大体上是模拟手工操作。但许多全自动分析仪为追求速度，在设计上采用一些折中方法来测定试剂空白。以日立全系列生化仪为例。该系列分析仪是做不了实时试剂空白，因为它们全是先加入样本后加试剂，为了折中，只好在定标时做一个试剂空白，保存起来，需要扣除试剂空白时再减这个预先保存的值。这种做法，对于比较稳定的试剂来讲，对结果影响不大。 通俗的讲，日立的仪器工作流程中首先是将标本加入到比色杯中，然后依次加入R1试剂、 R2试剂，所以试剂空白在每个测定项目曲线中是无法看到的。但是7170从CALIBRATION中是可以看到的，S1ABS就是代表试剂空白吸光度，在CALIBRAT ION画面里的下方找到Reaction Monitor （反应监察），其中STD（1）就是代表试剂空白反应曲线.为了减小误差，日立仪器会连续做两次测定，所以你看到FIRST和SECOND两条，计算时是取他们的平均值。做试剂空白目的之一就是观察试剂是否稳定，积极采取措施纠正。对于日立的这种试剂空白测定很多仪器都采用这种方法，也叫做试剂空白校准。 总的说来，自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度，该吸光度是通过校准确立的。2、样本空白： 由于溶血、脂血、黄疸等情况，会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本身吸光度的测量，即样本空白，可以去除这方面的影响。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。自动生化仪上，很难界定样本空白。与消除样本空白有关的大约有如下几点：

生化分析仪常用分析方法共有三大类,分别为终点法、固定时间法和动力学法

生化分析仪常用分析方法共有三大类，分别为终点法、固定时间法和动力学法。 终点法：指经过一段时间的反响，反响到达平衡，由于反响的平衡常数很大，可认为全部底物(被测物)转变成产物，反响液的吸光度不再变化，只与被测物的浓度有关。这类方法通常称为“终点〞法，更确切地说应称“平衡〞法。 单试剂单波长终点法：t1时刻参加试剂〔体积为V〕，t2刻参加样本 〔体积为S〕，然后搅拌并反响，之后开始测量反响液的吸光度， 在t3时刻反响到达终点，t3－t2为测定时间。 反响度R＝At3－At2-1×V/(V＋S)，或R＝At3－ARBLK。 其中：Ati为i时刻的吸光度，ARBLK为试剂空白吸光度。 单试剂双波长终点法：根本上同“单试剂单波长终点法〞，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1－Aλ2。 双试剂单波长终点法：t1时刻参加第一试剂(体积为V1)，t2时刻参加样本(体积为S)之后立即搅拌，t3时刻参加第二试剂(体积为V2) 并立即搅拌，t4时刻反响到达终点。t3-t2为孵育时间,t4-t3为测定时间。 在工程参数中，如果反响起始时间设为0，那么反响度R=A时刻吸光度-双试剂空白吸光度。如果反响起始时间小于0，那么反响度R=At4 -双试剂空白吸光度-t3到t2间设定点的吸光度×〔V1＋S〕/(V1＋S＋V2)。 双试剂双波长终点法：根本上同“双试剂单波长终点法〞，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1－Aλ2。 固定时间法：又称为一级动力学法、二点动力学法等，指在一定的反响时间内，反响速度与底物浓度的一次方成正比，即v=k[S]。由于底物在不断的消耗，因此整个反响速度在不断的减小，表现为吸光度的变化越来越小。这类反响到达平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反响刚启动时反响较复杂，杂反响较多，必需经过一段延迟时间才能进入稳定反响期。