石斛的多糖提取及其多酚物质的抗氧化性研究
目录
1、综述 (2)
1.1 铁皮石斛简介 (2)
1.2 铁皮石斛国内外研究的进展 (3)
1.3 铁皮石斛的育种与繁殖 (4)
1.4 本文研究的意义 (5)
2、铁皮石斛的水分测定及其多糖的提取 (5)
2.1水分的测定 (5)
2.2多糖的提取 (6)
3、铁皮石斛乙酸乙酯萃取多酚物质抗氧化性的研究 (6)
3．1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取母液及浓度梯度的配制 (6)
3.2 实验测定原理及方法 (8)
3.2.1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除DPPH自由基的测定 (8)
3.2.2 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除羟基自由基（.OH）的测定 (8)
-）的测定
3.2.3 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除超氧阴离子自由基（·O
2 (9)
3.2.4 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物还原能力的测定 (10)
4、结果与讨论 (10)
4.1 对DPPH自由基的清除能力 (10)
4.2 对羟基自由基（.OH）的清除能力 (11)
-）的清除能力 (12)
4.3 对超氧阴离子自由基（·O
2
4.3 还原能力的测定 (13)
5、结论 (13)
参考文献： (14)
铁皮石斛的多糖提取及其多酚物质的抗氧化性研究
专业：环境科学学号：200911201066 姓名：许永佳指导老师：苏小建
内容摘要：石斛多达五十余种，是市场上常见的名贵中草药和保健品。研究表明，植物的多糖及多酚含量很大程度决定了它的功效。本次实验，我们主要用铁皮石斛为主原料，选取水提醇沉法来提取它的多糖并测其含量。然后用极性较大的乙酸乙酯来萃取获得多酚物质，通过其对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用以及其还原能力的测定，探讨铁皮石斛多酚物质的抗氧化活性，并与人工合成抗氧化剂BHT对自由基清除能力及还原能力进行比较。实验结果表明：石斛的多糖含量为4.73%，它的多酚物质具有很强的抗氧化性，优于合成物BHT。
关键词：铁皮石斛；多糖；抗氧化性；自由基； BHT
1、综述
1.1 铁皮石斛简介
铁皮石斛[D-officinale]，俗称吊兰,是兰科石斛属植物。茎，直立，圆柱形，节间披有白色的膜质鞘；叶，纸质，长圆状披针形，尖端钝并钩转，基部有抱茎的鞘；花，白色，生于老茎上部节间，唇瓣菱形，喉部有一紫红色的斑块。铁皮石斛为名贵草药，药名为黑节草，拥有滋阴润肺、养胃生津、明目清热、增强免疫力、医治失音沙哑、抗衰老等功效。野生铁皮石斛生于海拔100——3000米之间的山地半阴湿岩石、树皮上，喜温暖湿润气候和半阴湿的环境，不耐寒。铁皮石斛的鲜茎可直接食用，可炖汤，可泡茶，可浸酒[1]，通常加工成制成药品或饮料，如铁皮枫斗、铁皮石斛功能性饮料等。近年来以其为原料生产的高级保健品远销欧美和东南亚沿海发达地区。
早在1400多年前的《神农本草经》和400多年前的《本草纲目》等古典中药书籍中，就将铁皮石斛列为药材中的上品。《道藏》则称：“铁皮石斛、天山雪莲、三两人参、百二十年首乌、花甲之茯苓、肉苁蓉、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草为九大仙草”。由于铁皮石斛的生长环境特殊及其自身繁殖慢等原因，野生铁皮石斛资源稀缺。目前铁皮石斛主要生长于在中国安徽西南部（大别山）、浙江东部（鄞县、天台、仙居）、福建西部（宁化）、广西西北部（天峨）、四川、云南东南部（石屏、文山、麻栗坡、西畴）。
1.2 铁皮石斛国内外研究的进展
通过对有关铁皮石斛的文献资料进行统计（图一），我们可以清楚的发现：2004年基本是铁皮石斛研究的拐点，在1995—2003这9年中，文献较少，年平均产量为23篇左右；但是在2004—2012这9年中，文献资料竟达到了2051篇之多，年平均产量为228篇左右，后9年的平均产量是前9年的平均产量的近10倍。另外， 1995年前关于铁皮石斛的文献资料是非常少的，基本可以忽略不
图一铁皮石斛文献年增长趋势图
表1 铁皮石斛的研究内容
研究内容1989—1993
篇（%）
1994—1998
篇（%）
1999—2003
篇（%）
2004—2009
篇（%）共计
组织培养5（62.5%）5（50%）11（30.6%）80（40.2%）101（39.9%）人工种植0 0 9（25%）26（13.1%）35（13.8%）种源鉴定2（25%）0 5（13.9%）28（14.1%）35（13.8%）化学成分0 2（20%）1（2.8%）26（13.1%）29（11.5%）内生菌1（12.5%）0 6（16.7%）20（10.1%）27（10.7%）药理作用0 3（30%）4（11.1%）16（8%）23（9.1%）综述0 0 0 3（1.5%）3（1.2%）共计8（3.2%）10（4%）36（14.2%）199（78.7%）253（100%）
由表1我们可以知道：对于铁皮石斛的研究大多在它的种植方面，并且这方面效果明显（因为铁皮石斛在种源鉴定方面的论文增长明显）。此外，在化学成分方面的研究[2—3]为后面相当一段时间内的大趋势，这个在未来是研究的重点。我们再和图一进行比较，2004年是研究铁皮石斛的大拐点，从这以后的研究基本直线增长。
我国对铁皮石斛的研究基本在它的药理、药性及保健功效方面。但是，由于近年来科技突飞猛进，我们对铁皮石斛的研究开始涉及到化学、生物等各个方面。例如：铁皮石斛生物碱提取纯化研究[4]、铁皮石斛种质资源研究中的DNA条形码初探[5]等。对于铁皮石斛，它已经超出一般意义上的药物和保健品。它的化学成分正一步一步被人们所熟知，我们提取它的主要成分用于各个研究领域。
1.3 铁皮石斛的育种与繁殖
铁皮石斛现在属于频临灭绝的物种，我们首要的还是要研究它的育种与繁殖问题。如今，在这方面的研究我们是成果颇丰的，铁皮石斛已经基本转为人工种植了。
我们主要以种子为实验体来进行组织培养，包括种子萌发、原球茎增殖、原球茎分化、生根与壮苗四个步骤。叶秀麟等[6]取用2——6个月种龄的种子进行组织培养实验后发现，种龄越长，萌发率越高。当把六个月的种子接入改良后的
培养基中培养，萌发率可以达到90%。曾宋君等[7—8]用相似的方法亦得到基本一致的结论。除种子作为植物体外，以铁皮石斛的茎尖、茎段、幼叶种胚苗、幼根为外植体，均可培养出组培苗[9]。大致过程为：茎尖、茎段→诱导形成不定芽→不定芽增殖→不定芽分化→生根壮苗、形成完整试管苗。
目前浙江、安徽、广西等地都有铁皮石斛的种植基地，他们的品种也是各不相同。如今的铁皮石斛在全球拥有大概1500多种杂交种，很多品种在抗虫害等方面都有优良性能。我国较为出名的有“仙斛1号”、“中科3号”、“惠农1号”、“惠农2号”等品种。
1.4 本文研究的意义：
多糖具有广泛的生物活性和功能，功能性多糖一般为天然产物提取，多糖的含量直接关系到药物的药性，并且植物多糖的含量和其含水量实密不可分的，于是我们测定了铁皮石斛的含水量并提取测定了其多糖含量。
英国学者Harman1956年创立自由基衰老学说以后，自由基生命科学的研究便日益深入。自由基（Free radical）攻击生命大分子造成组织细胞损伤，是引起机体衰老的根本原因，也是诱发肿瘤等恶性疾病的重要起因。自由基是机体的
—）、羟基自有效防御系统，生物体内常见的自由基有：超氧阴离子自由基（·O
2
由基（·OH）、烷氧基自由基（RO·）等[10]。摄入抗氧化性物质可有效抵消自由基氧化对人体的损害，但是，目前人们常用的抗氧化剂主要是通过人工合成的，如BHT、叔丁基羟基茴香醚（BHA）等。人工合成的抗氧化剂会对机体产生一定毒性和致癌作用[11]，而一些天然植物含有黄酮类、酸酚等多酚类抗氧化成分。于是，我们对铁皮石斛的抗氧化性作了研究。
2、铁皮石斛的水分测定及其多糖的提取
2.1水分的测定
取三只烘干的烧杯，编号。将样品切段后放入烧杯，称量其质量，放入1050C 的烘箱中。等四个小时后取出烧杯冷却称量，再放入烘箱中30min后再取出称量。
表2 铁皮石斛含水量的测定
1号样2号样3号样
放样品烧杯质量（g）46.166 55.602 37.319
第一次冷却称量（g）42.603 50.907 33.290
第二次冷却称量（g）42.599 50.907 33.288 含水量（%）71.94% 81.54% 76.91%
平均含水量（%）76.80%
2.2多糖的提取
多糖的提取[12]首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。我们这里选用溶剂提取法——水提醇沉法。
水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。多糖为极性大分子化合物，根据相似相溶的原理，提取时我们选用极性强的水、醇为溶剂。利用植物中大多数成分如生物碱盐、有机酸类、氨基酸、多糖等易溶于水和醇的特性，用水提取，并将其提取液浓缩，加入适当的乙醇反复数次沉降，除去其不溶物质。由于多糖不溶于乙醇，我们加入80%的乙醇，使多糖从提取液中沉淀出来。虽说该法提取比较耗时，提取率也不高，但是该法不需要特殊设备，非常适合实验室采用。
实验过程大致如下：选材称量→切段→榨汁→乙醇回流提取（3—5次）→粗纤维与多糖细浆分离（过80目和50目筛子）→旋转蒸馏→回收→多糖浸膏。铁皮石斛样为403.161g，得到的浸膏为19.088g，多糖的获得率为4.73%。
3、铁皮石斛乙酸乙酯萃取多酚物质抗氧化性的研究
3．1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取母液及浓度梯度的配制
称取铁皮石斛乙酸乙酯提取物0.5 g，溶于95%乙醇溶液，并用乙醇定容至100 mL容量瓶,取10个10 mL容量瓶，分别配制成0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、
0.8mg/mL、1.0mg/mL、1.2mg/mL、1.4mg/mL、1.6mg/mL、1.8mg/mL、2.0 mg/mL 浓度梯度的乙醇样液。
主要试剂的配制
DPPH溶液（0.008 mg/ml ）：称取DPPH粉末0.002 g，用乙醇定容于250 mL 棕色容量瓶中，避光保存，现配现用。
pH=7.4磷酸缓冲溶液：称取磷酸二氢钠0.7800 g，蒸馏水定容于25 mL 容量瓶中；称取磷酸氢二钠7.1628 g，用蒸馏水定容于100 mL容量瓶中；分别从中移取19 mL和81 mL于100 mL容量瓶中。
H
2O
2
（0.01%）：移取30%的过氧化氢0.25 mL，用蒸馏水定容至25 mL
容量瓶中。用水再稀释30倍。
邻二氮菲（0.75 mmol/L）：称取邻二氮菲粉末0.0149 g，用乙醇定容至100 mL容量瓶中。
硫酸亚铁氨（0.75 mmol/L）：称取硫酸亚铁氨0.0294 g, 用蒸馏水定容于100 mL容量瓶中。
盐酸（0.1 mol/L）：移取2.12 mL浓盐酸用蒸馏水定容至250 mL容量瓶中。
Tris-HCl缓冲液（pH=8.0，0.05mo1/L）：称取三羟甲基氨基甲烷2.4228 g，用蒸馏水定容至100mL，并从中移取27.5 mL与25 mL 0.1 mol/L盐酸混合，用蒸馏水定容至100 mL容量瓶，避光保存。
盐酸（10 mmol/L）：移取10 mL 0.1 mol/L盐酸，用蒸馏水定容至100 mL 容量瓶中。
邻苯三酚溶液（2.5mmol/L）：称取0.0316g邻苯三酚用10mmol/LHCl溶液溶解后定容至100mL，避光保存。
pH = 6.6磷酸缓冲溶液：称取磷酸氢二钠7.1628 g，定容于100 mL中，称取磷酸二氢钠3.1202g，定容于100 mL容量瓶中，并分别从中移取37.5 mL和62.5 mL于100 mL容量瓶中。
三氯化铁溶液（0.1%）：称取三氯化铁粉末0.1 g,用蒸馏水定容至100 mL。
铁氰化钾溶液（1%）：称取铁氰化钾粉末1 g,用蒸馏水定容至100 mL，注意现配现用。
三氯乙酸溶液（10%）：称取三氯乙酸粉末10 g,用蒸馏水定容至100 mL。
3.2 实验测定原理及方法
3.2.1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除DPPH自由基的测定
测定原理
二苯代苦味酰自由基（DPPH）是一种稳定的自由基，可以长时间保存。它在517nm处有一强吸收，当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与所接受的电子数成定量关系[13—14]。因而，国内外广泛将此法用于自由基清除剂的筛选研究。该法可以用来表征某种物质对自由基的清除能力，通常用清除率表示。清除率越大，表明该物质清除自由基的能力越强。本试验通过测试对DPPH自由基的清除能力来评定铁皮石斛乙酸乙酯萃取物的抗氧化活性。
测定方法
本实验参考文献的测定方法并加以改进。取0.008mg/mL的DPPH乙醇溶液4.0 mL，分别取0.5mL不同质量浓度（0.20–-2.00 mg/mL）的铁皮石斛乙酸乙酯萃取物加入到DPPH乙醇溶液中，摇匀，于28 ℃水浴锅中水浴恒温30分钟，然后在515 nm下迅速测其吸光度记为A样品，同时测定不含提取物的空白样品记为A空白，清除率SC (%)计算公式为：
SC (%) = (1- A
样品
/ A空白) × 100%
式中A样品为试样的吸光度，A空白为空白样品的吸光度。
3.2.2 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除羟基自由基（·OH）的测定[15—17]
测定原理
邻二氮菲2Fe2+在536 nm处有最大吸收，根据Fenton反应原理，H
2O
2
与Fe2+
混合产生·OH，而羟自由基可以把邻二氮菲2Fe2+氧化为邻二氮菲2Fe3+，使邻二氮菲2Fe2+在536 nm处的最大吸收峰变弱或消失。若在反应体系中加入具有清除·OH功能的被测物，被测物便会与邻二氮菲2Fe2+竞争·OH，从而使氧化反应减慢，消耗邻二氮菲2 Fe2+的量就会减少，因此溶液在536 nm处的最大吸收峰变化程度就小。因此可根据536 nm处吸光度的变化程度判断被测物清除·OH的能力。我们采用固定反应时间法，在相同体积的反应体系加入一系列不同浓度的
铁皮石斛皮萃取物，在536nm处测量各浓度下的吸光度A，便能测定被测物对·OH 的清除作用。
测定方法
羟基自由基（.OH）清除活性的测定参照文献方法。向10 mL比色管中依次加入0.4 mL 0.75 mmol/L的邻二氮菲溶液，1.0 mL pH =7.4的磷酸缓冲溶液，0.3 mL 0.75 mmol/L硫酸亚铁氨溶液和0.2mL铁皮石斛皮萃取物乙醇溶（0.2–2.00/mL），
最后加入1.0 mL 0.01%的H
2O
2
溶液，以二次蒸馏水定容至刻度。在37℃水浴中恒
温60 min，于536 nm下测吸光度A。，以上每加1次试剂均需摇匀，同时测定不含萃取物的空白样品，作自由基清除率-浓度图。按下式计算样品对.OH的清除率: SC (%) = (A
样
- A损) / (A未损- A损) × 100%。
式中A样为加样液的吸光度，A损为不加样液、样液用溶剂代替的吸光度，A未损为不
加样液和H
2O
2
的吸光度(三者均以蒸馏水空白为参比)。
3.2.3 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除超氧阴离子自由基（·O
2
-）的测定
测定原理
采用邻苯三酚自氧化法测定。邻苯三酚在碱性条件下能够迅速自氧化形成中
间产物超氧阴离子自由基（·O
2
-）[18]，此自由基能促进邻苯三酚的自氧化，当加
入清除剂后能够清除其中的超氧阴离子自由基（·O
2
-），从而使邻苯三酚的自氧
化速率降低，其自氧化反应速率被抑制的大小显示·O
2
-被清除程度的强弱。
由于邻苯三酚的自氧化是一类链式反应，在其自氧化过程中，超氧阴离子自
由基（·O
2-）不断被消耗又不断生成，当达到平衡时自由基（·O
2
-）的浓度保持
恒定。邻苯三酚在自氧化过程中，生成在325nm处有最大吸收的中间产物（此值是通过紫外扫描而得到），当加入的清除剂对邻苯三酚自氧化的抑制越强，则生成在325 nm处有光吸收的中间产物就会越少，测得的吸光度也就越低。而当pH < 9时，邻苯三酚的自氧化率与·O
2
-浓度成正比。因此通过测定某物质对邻苯三
酚自氧化的抑制作用,即可表征其对·O
2
-的清除作用。
测定方法
超氧阴离子自由基（.O
2
-）的清除活性测定参照文献[19—20] 的测定方法。取4 mL pH = 8.0 Tris–HCl缓冲液(50 mmo1/L)，4.2 mL蒸馏水, 混匀后在25 ℃水浴中
保温20 min。取出后立即加入温度为25 ℃，0.3 mL 3 mmol/L 邻苯三酚溶液中 (以10 mmo1/L HCl配制)，立刻计时并迅速摇匀，然后在波长325 nm下测定吸光值，1 min后记录数据，每隔30 s记一次，每隔一分钟测取一次吸光度。计算线性范围内每分钟吸光值的增加△A0。空白管用l0 mmol/L HCl代替邻苯三酚的HCl溶液。
取同浓度的铁皮石斛萃取物进行实验，在加入邻苯三酚前,先加入一定体积的样品溶液，然后按上述方法操作，计算线性范围内每分钟吸光值的增加△A，计算抑制率。作抑制率-浓度图。超氧阴离子自由基清除率按下式计算：SC (%) = (△A
- △A) / A0 × 100%
式中，△A0为邻苯三酚的自氧化速率；△A为加入样品溶液后邻苯三酚的自氧化速率,单位均为吸光值每分钟的增加值。
3.2.4铁皮石斛乙酸乙酯萃取物还原能力的测定
测定原理
鲁士蓝法，其原理是样品中具有还原能力的成分可以将铁氰化钾还原成为亚
铁氰化钾，亚铁氰化钾再与三价铁离子作用形成普鲁士蓝[Fe(Fe(CN)
6)
3
]，普鲁
士蓝在700nm下吸光值越高，表示样品的还原能力越强。一般情况下,样品的还原能力与其抗氧化活性之间有显著的相关性，还原能力的高低可以间接反映抗氧化能力的强弱。
测定方法
还原能力的测定参照文献[21—22]的测定方法。在6支10 mL具塞刻度比色管中依次加入 2.5 mL pH = 6.6的磷酸缓冲溶液、1mL不同浓度的铁皮石斛萃取物（0.40、0.60、1.0、1.20、1.40、1.80mg/mL）、2.5 mL 1%的铁氰化钾溶液。将混合物放在50 ℃水浴中反应20 min，再加入2.5 mL 10%的三氯乙酸，混匀后以3000 r/min进行离心分离10 min，取上层清液1.0 mL（经过滤膜过滤），往清液中加7.0 mL蒸馏水和0.5 mL 0.1%的三氯化铁溶液，在700 nm处测吸光值。吸光度越高，说明混合物的还原能力越强。作吸光度-浓度曲线图。
4、结果与讨论
4.1 对DPPH自由基的清除能力
由图二我们可知：随着铁皮石斛多酚浓度的增大，其对DPPH自由基的清除能力
也随之变强。铁皮石斛多酚浓度小于1.4mg/mL时，其浓度与清除率成一定的量效关系；大于1.4mg/mL时，清除率不再随浓度的增大而变大，而是比较稳定。作为阳性对照的BHT，在与铁皮石斛多酚浓度相同时，其对DPPH的清除率低于铁皮石斛多酚。但是，在其浓度为1.2mg/mL时，它的清除率也基本不再随BHT 浓度的增大而增大。在两者浓度均为最大时，它们的清除率分别为73.8%和63.6%，并且铁皮石斛多酚浓度在1.4mg/mL时对DPPH的清除率已经大于BHT浓度在2.0mg/mL时对DPPH的清除率。由此，我们可以得出结论：铁皮石斛多酚对DPPH自由基具有很好的清除能力。
图二铁皮石斛多酚与BHT对DPPH的清除率对比
4.2对羟基自由基（·OH）的清除能力
通过对图三进行对别分析：随着铁皮石斛多酚和BHT浓度的增大，二者对羟基自由基的清除率是稳步增长的，并且铁皮石斛多酚的清除率远高于BHT的清除率。当铁皮石斛多酚的浓度为1.5mg/mL时，它的清除率(56.1%)基本与BHT浓度2.0mg/mL的清除率(56.4%)大致相同。并且，当铁皮石斛浓度为2.0mg/mL时，它的清除率居然高达89.7%。故而，铁皮石斛多酚对羟基自由基有相当高的清除活性，且远高于阳性对照BHT对羟基自由基的清除活性。
浓度（mg/mL）
图三铁皮石斛多酚与BHT对羟基自由基的清除率对比
-）的清除能力
4.3 对超氧阴离子自由基（·O
2
我们对图四观察可知，浓度与清除率的量效关系与图三的趋势大致一样。铁皮石斛多酚和BHT对超氧阴离子自由基的清除活性均随浓度的增大而增强。铁皮石斛多酚浓度1.3mg/mL时的清除率(72.1%)与BHT浓度2.0mg/mL时的清除率(72.3%)几乎相等。并且在两者浓度都为最高时，它们的清除率分别达到83.6%和72.3%，均表现出对清除超氧阴离子自由基较强的活性。Array浓度( mg/mL )
图四铁皮石斛多酚与BHT对超氧阴离子自由基的清除率对比
4.3 还原能力的测定
在对图五的分析中，我们发现铁皮石斛多酚和BHT的吸光度均随其浓度的增大而增大，虽说它们均有一定的量效关系，但是两者关系变化趋势之间联系不是很密切。虽二者均具有一定的还原能力，但是铁皮石斛多酚浓度在1.2mg/mL时的吸光度(0.282)与BHT浓度在1.8mg/mL时的吸光度(0.283)是相同的。我们据
浓度（mg/mL）
图五铁皮石斛多酚与BHT还原能力的对比
5、结论
实验结果表明，铁皮石斛的含水量为76.8%；多糖含量为4.73%。铁皮石斛乙酸乙酯萃取的多酚物质有很好的清除DPPH自由基、Fenton反应体系产生的羟基自由基和邻苯三酚自氧化法产生的超氧阴离子自由基的能力，显示出较强的抗氧化活性，并呈一定的量效关系。
同时，铁皮石斛乙酸乙酯萃取多酚物表现出很好的抗氧化活性，其对—自由基的清除达到最佳量效关系时的浓度和清除率分别为1.60、DPPH、·OH和·O
2
2.00、2.00 mg/mL和70.3%、89.7%、85.0%，以上结果均优于相同浓度的人工合成抗氧化剂BHT。同时，铁皮石斛乙酸乙酯萃取物还有很好的还原能力，浓度为1.8mg/mL时，吸光值为0.317，其还原能力也优于相同浓度的BHT。
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Study on antioxidant activity of polysaccharides and
polyphenols extracted from Dendrobium candidum
Major:Environmental Science No:200911201066
Author:Xu Yongjia Supervisor:Prof Su Xiaojian abstract：Dendrobium stem up to more than 50 kinds, are common on the market of rare Chinese herbal medicine and health products. Studies have shown that, Plant polysaccharide and polyphenol content largely determines its efficacy. This experiment, our mainly materials is Dendrobium candidum. Choose the best method extract its polysaccharide and measure its content. Then, with ethyl acetate to the larger polar extraction of polyphenols, through clear the free radicals DPPH、·OH free radicals、·O2__free radicals and determine its reducing, antioxidant activities of polyphenols of Dendrobium candidum, and with the synthetic antioxidant BHT on the free radical scavenging ability and reducing power were compared. The experimental results show that, Polysaccharides content of Dendrobium candidum is 4.73%, and has a strong antioxidant polyphenols it, even better than that of compound BHT.
Key words:Dendrobium candidum；Polysaccharide；Resistance to oxidation；Free radicals；BHT
石斛中多糖含量的测定
题目石斛中多糖含量的测定 学生姓名高换楼学号1111034082所在学院化学与环境科学学院 专业班级化工1102班 指导教师季晓晖 完成地点陕西理工学院 2015 年 06 月 08 日
石斛中多糖含量的测定 高换楼 （陕西理工学院化学与环境科学学院化工专业1102班，陕西汉中723001） 季晓晖 [摘要] 石斛为我国常用贵重药材，有养阴清热、益胃生津的功效，石斛一直备受国内外研究者的重视。本文利用蒽酮-硫酸法对铁皮石斛多糖的含量进行了测定，并采用正交试验得到最佳实验方案，在石斛粉碎程度为粉末、液料比为50mL/g、提取2次，每次3小时的情况下多糖提取率最高。本文的实验结果为今后铁皮石斛多糖提取的质量评价及其进一步开发和利用提供参考依据。 [关键词] 石斛；多糖；蒽酮-硫酸法；抗氧化性；测定； Determination of Dendrobium polysaccharide content GAO Huanlou （Grade 02, Class 11, Major chemical engineering, School of chemical and environmental science Dept, Shaanxi University of Technology, Hanzhong 72300x, Shaanxi） Tutor: JI Xiaohui Abstract: Dendrobium is in common use in our country precious medicinal herbs, the effect of nourishing yin and clearing heat, nourishing stomach fluid, Dendrobium has attracted a lot of attention of researchers at home and abroad. The anthrone-sulfuric acid method of Dendrobium officinale polysaccharide content were measured, and using the orthogonal test and the optimum solution is obtained. In Dendrobium degree of comminution is in the form of powder, liquid to solid ratio for 50mL/1g, extraction 2 times, every time 3 hours of polysaccharides extraction rate was the highest. The experimental results for the quality evaluation of future Dendrobium officinale polysaccharide extraction and its further development and utilization to provide reference. Key words: Dendrobium; polysaccharide; anthrone-sulfuric acid method; antioxidation; determination;
药用石斛种类
药用石斛种类 药用石斛有多少种？药用石斛到底有多少种？石斛，兰科多年生草本植物之一，世界有兰科植物700属近2000种，我国有170属1200余种。我国有石斛74种，世界上有40种石斛有药用价值。主要分布于亚洲热带和亚热带，澳大利亚和太平洋岛屿，我国大部分分布于西南、华南、台湾等地。石斛兰的主要品种有铁皮石斛、金钗石斛、紫皮石斛、鼓槌石斛等。可入药，名为石斛，对人体有驱解虚热，益精强阴等疗效。随着花卉产业的兴起，石斛兰也成为了一种观赏植物。由于石斛兰具有秉性刚强、祥和可亲的气质，被誉为父亲之花。石斛现常指代各类石斛制品，包括：霍山米斛、金钗枫斗、铁皮枫斗，铜皮枫斗，黄草石斛等。霍山石斛是唯一有文献记载的石斛品种。金钗石斛是我国古文献中最早记载的兰科植物之一，2000年以前《神农本草经》中就有记载。铁皮石斛是所有石斛中药用价值最高的一种，被《道藏》誉为中华九大仙草之首，千年以来它一直和灵芝，人参，冬虫夏草等一样被列为上品中药。 《名医别录》（据《本草纲目》转载）谓："石斛生六安山谷水旁石上……"。这里对石斛的产地及生境作了第一次的记载。又名耳环石斛、霍山石斛、金霍斛、仙斗、风斗、西枫斗，霍斛，石斛等；现在常指代各类石斛制品，包括：铁皮枫斗、铜皮枫斗、黄草等。其主要保健功能：滋阴润肺，益胃补肾，建脑明目，降火良药，并具生津止渴，补五脏虚劳，清肺止咳，防感冒，抗疲劳的功效。 安徽省霍山石斛，属兰科多年生草本植物，生长于悬崖峭壁之间，终年饱云雾雨露之滋润，受日月阴阳之精华。以基入药，具有生津润喉、清热消炎、清音明目、防癌抗癌之功能，是驰名国内外的珍稀名贵中药材。《本草纲目》称它
铁皮石斛多糖的功效
铁皮石斛多糖的功效 了解过铁皮石斛的朋友，都知道铁皮石斛的功效卓著，可以滋养阴津、提高免疫、增强体质、补益脾胃、护肝利胆、清虚热、强筋壮骨、降低血糖、抑制肿瘤、明亮眼目、滋养肌肤、延年益寿等等令人诱惑的功效。 很多朋友也听说过，铁皮石斛之所以能有如此多的功效，是因为含有石斛多糖。 糖？ 最近不是报道说，糖不利身体健康吗？！ 此多糖，非彼糖。 糖尿病的人不可以吃糖，但是可以吃石斛多糖。 石斛多糖属于活性多糖的一种。在国内，活性多糖的提法比较新，应用也很少。但在国外，特别是日本，普遍多了。活性多糖是功能性食品的一种，在保健范畴之内。 活性多糖的生理功能 （一）多糖的免疫调节功能 免疫调节作用是大多数活性多糖的共同作用，也是它们发挥其他生理和/或药理作用（抗肿瘤）的基础。活性多糖可通过多条途径、多个层面对免疫系统发挥调节作用。大量免疫实验证明，活性多糖不仅能激活T、B淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞(NK)等免疫细胞，还能活化补体，促进细胞因子的生成，对免疫系统发挥多方面的调节作用。 （二）抗肿瘤的功能 据文献报道，已有50个属178种的提取物都具有抑制S-180肉瘤及艾氏腹水瘤等细胞生长的生物学效应，明显促进肝脏蛋白质及核酸的合成及骨髓造血功能，促进体细胞免疫和体液免疫功能。 （三）活性多糖的抗突变作用
在细胞分裂时，由于遗传因素或非遗传因素的作用，会产生转基因突变。突变是癌变的前提，但并非所有突变都会导致癌变，只有那些导致癌细胞产生恶性行为的突变才会引起癌变，但可以肯定，抑制突变的发生有利于癌症的预防。多种活性多糖表现出较强的抗突变作用。（四）降血压、降血脂、降血糖的功能 冬虫夏草多糖对心律失常、房性早博有疗效；灵芝多糖对心血管系统具调节作用，可强心、降血压、降低胆固酵、降血糖等。试验结果表明，蜜环茵多糖(AMP)能使正常小鼠的糖耐量增强，能抑制四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖升高；研究也发现，蘑菇、香菇、金针菇、木耳、银耳和滑菇等13种食用茵的子实体具有降低胆固醇的作用，其中尤以金针菇为最强。腹腔给予虫草多糖，对正常小鼠、四氧嘧啶小鼠均有显著的降血糖作用，且呈现一定的量效关系。云芝多糖、灵芝多糖、猴头菇多糖等也具降血糖或降血脂等活性。活性多糖可降低血脂，预防动脉粥样硬化斑的形成。 （五）活性多糖对多种病毒，如艾滋病毒(HIV-1)、单纯泡疹病毒(HSVl，HSV-2)、巨细胞病毒(CMV)、流感病毒、囊状胃炎病毒(VSV)、劳斯肉瘤病毒(RSV)和反转录病毒等有抑制作用。香菇多糖对水泡性口炎病毒感染引起的小鼠脑炎有治疗作用，对阿拉伯耳氏病毒和十二型腺病毒有较强的抑制作用。 （六）活性多糖的抗氧化作用 已发现许多活性多糖具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的活性，起到保护生物膜和延缓衰老的作用。 （七）活性多糖的其它功能 除具有上述生理功能外，活性多糖还具有抗辐射、抗溃疡和抗衰老等功能。具有抗辐射作用的活性多糖有灵芝多糖、猴头多糖等。具有抗溃疡作用的活性多糖有猴头多糖、香菇多糖等。具有抗衰老作用的活性多糖有香菇多糖、铁皮石斛多糖、虫草多糖、灵芝多糖、云芝多糖和猴头菌多糖等。
几种市售枫斗的多糖含量测定
几种市售枫斗的多糖含量测定 .烈斗 浙江省医学科学琏1999年9月(邑弟39期 , 多 .j 几种市售枫斗的多糖含 药帕研究所(3l0013)兰李亚芳 中药枫斗是以石斛属多种植物的茎经过 特殊加工制成的干燥品,亦称耳环石斛.传统 认为质重,嚼之粘牙,无渣者为优,老药工凭 此来判断枫斗的优劣,但无内在的质量评价 标准.近年来,石斛多糖的研究引起人们的重 视,并证明石斛多糖是评价枫斗的重要生理 活性物质之一ll.J.我们于l997年2月～ l999年6月采用苯酚一硫酸比色法,测定r 几种市售枫斗的多糖含量. 一 ,材料与方法 ∈一)材料: 1.样品:铁皮枫斗1(福建),铁皮枫斗2 (福建),枫斗1(云南),枫斗2(云南),小环叉 直条枫斗(云南),野生枫斗(云南),野生紫皮 扭斗(云南),儿洲牌铁皮枫斗(广西): 2仪器:7230型分光光度计(上海分析 仪器厂)
3试剂:苯酚试剂:苯酚(分析纯)l0 加水l50g混匀,溶解即得,置淙色瓶内,冰箱'巾备用;其它试剂(无水乙醇,硫酸等)均为国产分析纯 (二)方法: 多糖的提取与含量测定,参照文献方法i 二,结果 (一)葡萄糖标准液吸光度测定结果:标 准品浓度在495,9.90,1485,1980,2475 297O,3465,396O时,吸光度分别为o069, O135,0203,0287,0366,0428,0500 0.587,以吸光度A为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程: A=一0010536+0.Ol4923C.r= 25 量测定 z,7/ 丁委静张治国户.f 09994 (二)换算因素 塑重量—— 多糖液葡萄糖浓度(g/m])×多糖稀释因素结果:f为1504. (三)几种市售枫斗多糖含量见表1. 表1几种枫斗的多糖含量 三,讨论 ()结果表明,不同种石斛加工成的枫 斗.多糖含差别很大,已测的几个样品中多糖含最高低相差约4倍
石斛的多糖提取及其多酚物质的抗氧化性研究
目录 1、综述 (2) 1.1 铁皮石斛简介 (2) 1.2 铁皮石斛国内外研究的进展 (3) 1.3 铁皮石斛的育种与繁殖 (4) 1.4 本文研究的意义 (5) 2、铁皮石斛的水分测定及其多糖的提取 (5) 2.1水分的测定 (5) 2.2多糖的提取 (6) 3、铁皮石斛乙酸乙酯萃取多酚物质抗氧化性的研究 (6) 3．1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取母液及浓度梯度的配制 (6) 3.2 实验测定原理及方法 (8) 3.2.1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除DPPH自由基的测定 (8) 3.2.2 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除羟基自由基（.OH）的测定 (8) -）的测定 3.2.3 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除超氧阴离子自由基（·O 2 (9) 3.2.4 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物还原能力的测定 (10) 4、结果与讨论 (10) 4.1 对DPPH自由基的清除能力 (10) 4.2 对羟基自由基（.OH）的清除能力 (11) -）的清除能力 (12) 4.3 对超氧阴离子自由基（·O 2 4.3 还原能力的测定 (13) 5、结论 (13) 参考文献： (14)
铁皮石斛的多糖提取及其多酚物质的抗氧化性研究 专业：环境科学学号：200911201066 姓名：许永佳指导老师：苏小建 内容摘要：石斛多达五十余种，是市场上常见的名贵中草药和保健品。研究表明，植物的多糖及多酚含量很大程度决定了它的功效。本次实验，我们主要用铁皮石斛为主原料，选取水提醇沉法来提取它的多糖并测其含量。然后用极性较大的乙酸乙酯来萃取获得多酚物质，通过其对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用以及其还原能力的测定，探讨铁皮石斛多酚物质的抗氧化活性，并与人工合成抗氧化剂BHT对自由基清除能力及还原能力进行比较。实验结果表明：石斛的多糖含量为4.73%，它的多酚物质具有很强的抗氧化性，优于合成物BHT。 关键词：铁皮石斛；多糖；抗氧化性；自由基； BHT 1、综述 1.1 铁皮石斛简介 铁皮石斛[D-officinale]，俗称吊兰,是兰科石斛属植物。茎，直立，圆柱形，节间披有白色的膜质鞘；叶，纸质，长圆状披针形，尖端钝并钩转，基部有抱茎的鞘；花，白色，生于老茎上部节间，唇瓣菱形，喉部有一紫红色的斑块。铁皮石斛为名贵草药，药名为黑节草，拥有滋阴润肺、养胃生津、明目清热、增强免疫力、医治失音沙哑、抗衰老等功效。野生铁皮石斛生于海拔100——3000米之间的山地半阴湿岩石、树皮上，喜温暖湿润气候和半阴湿的环境，不耐寒。铁皮石斛的鲜茎可直接食用，可炖汤，可泡茶，可浸酒[1]，通常加工成制成药品或饮料，如铁皮枫斗、铁皮石斛功能性饮料等。近年来以其为原料生产的高级保健品远销欧美和东南亚沿海发达地区。 早在1400多年前的《神农本草经》和400多年前的《本草纲目》等古典中药书籍中，就将铁皮石斛列为药材中的上品。《道藏》则称：“铁皮石斛、天山雪莲、三两人参、百二十年首乌、花甲之茯苓、肉苁蓉、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草为九大仙草”。由于铁皮石斛的生长环境特殊及其自身繁殖慢等原因，野生铁皮石斛资源稀缺。目前铁皮石斛主要生长于在中国安徽西南部（大别山）、浙江东部（鄞县、天台、仙居）、福建西部（宁化）、广西西北部（天峨）、四川、云南东南部（石屏、文山、麻栗坡、西畴）。
鼓槌石斛的病虫害防治
鼓槌石斛的病虫害防治 鼓槌石斛，花的姿态很优雅，还比较的玲珑可爱，颜色也是非常鲜艳，等到盛开的时候带着缕缕幽香，非常好闻，所以它的观赏价值是非常高的。一般都是可以作为切花，也可以用来盆栽进行观赏，家里面养上几盆的话是非常热闹的。这么美丽的花卉也是不忍心看着它被虫子伤害，所以平时的时候一定要进行病虫防治，该怎么做是要看什么病症来治疗的，一起看下吧。 1.黑斑病 得了这种病害的时候，它的嫩叶上面就会开始出现黑褐色的小斑点，然后斑点的周围是黄色，开始慢慢的扩散到叶片上面，严重的时候黑斑在叶片上面就会形成片，最后让叶子开始枯萎脱落。这种病一般都是在初夏的时候开始发生，所以我们就一定要及时防治，一般都是用一些专门的药物进行喷洒，来进行预防和控制它的发展。 2.煤污病 刚开始的时候它会让整个植株叶片的表面上盖上了一层类似煤烟的粉末状的物体，严重的影响了叶子的光合作用，就让植株生长也停止了。一般在3到5月的时候是这个病害的主要发病时间。我们这时候都会找来一些多菌灵进行进行一定的调制，然后进行1到2次的喷雾，就可以很好的把它们给杀死。得到根本的解决。
3.菲盾蚧 这种害虫主要是寄生在鼓槌石斛的叶片边上或者是叶子的背面，来去吸取它的汁液，就会让植株的叶片开始枯萎，严重的时候还会让整个植株都会死掉的。同时还能引发新的煤污病。这时候我们一定要提前防治，这种害虫都是在5月低的时候正是它开始产卵的时间，这时候我们就用一些乐果乳油进行调制把它们进行喷杀，效果是非常好的。还有一些已经成为盾壳但是数量不多的，可以把它的老枝叶给剪掉，然后在放在一起都烧掉，达到彻底的防治。 4.蜗牛 它主要是躲在叶子的背面去吃叶肉或者是咬茎来伤害花瓣。这种害虫一年可以发生好多次，只要一发生，危害是很大的，常常一个晚上就能把整个植株吃的差不多了。那我们就可以放一些毒诱饵，放在它们经常活动的地方去杀死它们。另外在栽培的周边环境可以配撒一些药物进行防治也是不错哟。
齿瓣石斛多糖含量测定比较
齿瓣石斛多糖含量测定比较 石斛是中国名贵中药材，多糖是石斛的主要有效成分之一。本文测定了不同产地，种植方式以及不同部位的齿瓣石斛多糖含量，对齿瓣石斛栽培应用有重要意义。 标签：齿瓣石斛多糖；含量测定；比较 石斛属（Dendrobium）是兰科第二大属，全球约有1500种，主要集中分布在我国华南和西南地区[1]。石斛为我国名贵中药，具有滋阴清热、益胃生津等功效。齿瓣石斛化学成分类型多样，其中糖类也是重要化学成分，广西的加工品一级枫斗含量高达45.89%[2]。本文对不同齿瓣石斛多糖含量进行测定比较。 1仪器和试药 1.1仪器UV-2450紫外分光光度计（日本岛津）；电子天平；分析天平（FA200413）。 1.2试药对照品：D-无水葡萄糖（中国食品药品检定研究院，批号：110833-201205）。 1.3试剂双蒸水：自制；无水乙醇，95%乙醇，苯酚。 1.4药材见表1。 2实验方法 2.1紫外可见分光光度法测定石斛多糖含量[3]。 2.1.1对照品溶液的配置取D-无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1 ml含94.66ug的溶液，即得。 2.1.2供试品溶液的制备取石斛鲜品茎约60 g，精密称定，置于九阳豆浆机中，选择五谷模式榨汁，加水定容至1000ml，混匀，离心（转速为4000转/min）20min，上清液稀释8倍，精密量取2ml置10ml塑料离心管中，精密加入无水乙醇10ml，摇匀，冷藏1 h，离心，弃上清，加80%乙醇洗涤2次，每次8ml，离心，弃上清，沉淀用热水溶解，转移至25ml容量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。 2.1.3标准曲线的绘制精密量取对照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置10 mL具塞棕色试管中，加水补至1.0 ml，加5%苯酚溶液（临用时配）1.0 ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5.0mL，置沸水浴加热20min，取出，立即置冰水浴中冷却5 min后取出，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法在488nm
石斛拉丁名
石斛拉丁名 石斛属(Dendrobium)为兰科中最大的一个属，包括约1100种植物，主要分布于热带亚洲和太平洋岛屿。我国约63种石斛属植物，目前供作药用的石斛属植物39种。国产石斛分布于秦岭、淮河以南，从纬度而言，大多数种类都集中在北纬15°30′～25°12′之间，向北种类逐渐减少，最北界不超过北纬34°24′。从垂直看，海拔100~3000米的高度都有分布。石斛属植物是以热带东南亚中心向着亚热带性气候条件发展的类群，我国的云南、广西、广东、贵州、台湾为国产本属植物的分布中心。 石斛兰是树兰亚科的成员，它的学名Dendrobium也反映了这一点：dendrobium一词源自希腊语，dendro就是树木，而bium就是生长的意思。 矮石斛 Den.bellatulum 2012年 棒节石斛 Den.findlayanum 2012年 报春石斛 Den.primulinum 杯鞘石斛Den. Gratiosissimum 翅萼石斛Den cariniferum 2011年12月 长苏石斛Den.brymerianum 2012年月 串珠石斛 Den.falconeri
齿瓣石斛 Den.devonianum 翅梗石斛Den. Trigonopus 2012年月 大苞鞘石斛 Den.wardianum 独角石斛 Den. Unicum 2012年6 月 短棒石斛 Den.capillipes 2012年月 叠鞘石斛 Den.denneanum 2012年月 兜唇(天宫)石斛Den. aphyllum Den.pierardii 天宫石斛(细茎) 大魔鬼石斛 Den. Spectabile 2012年8月21日 法氏石斛 Den.farmeri 晶帽石斛 Den.crytallinum 金钗石斛Den. N obile 2012年 6月 聚石斛 Den.lindleyi Den.aggregatum 龟背石斛 具槽石斛 Den.sulcatum 尖刀唇石斛Den. Heterocarpum 2012年月 喉红石斛 Den.christyanum 2012年月 红花石斛Den.miyakei 黑毛石斛 Den.williamsonii 红龙石斛 Den.Nestor 2012年8月21日
石斛总多糖提取工艺及测定方法研究
石斛总多糖提取工艺及测定方法研究 发表时间：2018-11-23T14:12:36.320Z 来源：《医药前沿》2018年27期作者：许磊 [导读] 确定石斛总多糖的最佳提取工艺及含量测定方法。方法：通过正交实验，采用苯酚-硫酸法测定的多糖含量为指标 许磊 （天津民祥生物医药股份有限公司天津 300000） 【摘要】目的：确定石斛总多糖的最佳提取工艺及含量测定方法。方法：通过正交实验，采用苯酚-硫酸法测定的多糖含量为指标，研究提取温度、提取次数、提取时间、料液比对石斛总多糖提取率的影响。结果：石斛总多糖最佳提取工艺条件为提取温度为100℃、提取时间为2h、料液比为5:4。结论：该工艺简单、方便、快捷，可用于不同品种石斛总多糖的提取。 【关键词】石斛；总多糖；单因素；正交试验；含量测定 【中图分类号】R284.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）27-0368-02 石斛为兰科植物马鞭石斛、铁皮石斛、环草石斛、黄草石斛的新鲜或干燥茎，被称为“九大仙草”之首，为珍稀、名贵、道地中草药，当下多以其总多糖含量的高低来判断石斛品质的优劣。本研究以总多糖含量为指标，通过正交实验，优化并最终确定了石斛总多糖的最佳提取工艺，以期为石斛总多糖的提取工艺研究提供参考和借鉴。 1.材料与试剂 石斛采自安徽省霍山县，无水葡糖糖、苯酚、硫酸等化学试剂均为分析级，实验用水均为Milli-Q超纯水机制备（密理博（上海）贸易有限公司）。紫外分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；LC-4016型低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）；十万分之一天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；双层铁皮电炉（上海日用电炉厂）。 2.方法与结果 2.1 石斛中总多糖含量的测定 2.1.1对照品溶液的制备 取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，于100mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，制成每1mL含90μg/mL的溶液，即得对照品储备液。 2.1.2供试品溶液的制备 取石斛粉末（过三号筛）约0.12g，精密称定，加水80mL，加热回流2小时，放冷，转移至100mL量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2mL，置15mL离心管中，精密加入无水乙醇10mL，摇匀，冷藏1h，取出，离心（转速为每分钟4000转）20min，弃去上清液（必要时滤过），沉淀加80%乙醇洗涤2次，每次8mL，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25mL量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。 2.1.3总多糖含量的测定 精密量取供试品溶液1mL，置10mL具塞试管中，精密加入5% 苯酚溶液 1mL，摇匀，再精密加硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（2015药典通则0401），在488nm的波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量，计算，即得。 总多糖提取率=总多糖质量/原药材的干品重量×100%。 2.1.4标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分别置10mL具塞试管中，各加水补至1.0mL，振摇，精密加入5%苯酚溶液l.0mL（现配现用，注意避光），摇匀，再精密加硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰水浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（2015药典通则0401），在488nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。在9.016～90.160 μg/mL范围内线性良好（y=0.00881x+0.11252，R2=0.99904）。 2.1.5精密度实验 按标准曲线确定的范围内，精密吸取葡萄糖对照品溶液6份，各1mL，按照2.1.3项下操作测定吸光度，计算RSD=2.4%，精密度良好，符合方法学要求。 2.1.6稳定性实验 在标准曲线确定的范围内，精密吸取2.1.2项下制备的供试品1mL，分别于0h，2h，4h，6h按照2.1.3项下操作测定吸光度，计算其RSD=0.88%，稳定性良好，符合方法学要求。 2.1.7重复性实验 在标准曲线确定的范围内，精密量取2.1.2项下制备的供试品1mL，按照2.1.3项下操作测定吸光度，连续测定6次，计算RSD=3.2%，重复性良好，符合方法学要求。 2.1.8加样回收率实验 取已知含量的石斛粉末100mg，精密称定，共六份，分别加入适量的对照品溶液，按照2.1.3项下操作测定吸光度，计算提取回收率，RSD=3.4%，加样回收率合格，符合方法学要求。 2.2 石斛总多糖提取工艺考察 以提取温度、提取时间、料液比、提取次数为因素，选用L9（34）正交表进行正交实验（表1）。进而得到石斛总多糖加热回流提取的最优条件。石斛总多糖最佳提取条件正交实验表见表2。
各种石斛种类介绍
各种石斛种类介绍 各种石斛种类介绍石斛现常指代各类石斛制品，包括：霍山米斛、金钗枫斗、铁皮枫斗，铜皮枫斗，黄草石斛等。霍山石斛是唯一有文献记载的石斛品种。各种入药石斛简介霍山石斛：俗称米斛，是兰科石斛属的草本植物，最早见载于清代赵学敏《本草钢目拾遗》，距今有 200 年以上历史。中国国家地理标志产品。主产于大别山区的安徽省霍山县，大多生长在云雾缭绕的悬崖峭壁崖石缝隙间和参天古树上。霍山石斛能大幅度提高人体内 sod(延缓衰老的主要物质)水平，对经常熬夜、用脑、烟酒过度，体虚乏力的人群，经常饮用非常适宜。霍山石斛有明目作用，也能调和阴阳、壮阳补肾、养颜驻容，从而达到保健益寿的功效。 金钗石斛：又名金钗石、扁金钗、扁黄草、扁草。为多年生草本，最早记载石斛产地的《名医别录》曰：“石斛生六安山谷水旁石上。”《新修本草》、《本草图经》及以后诸家本草均沿用《名医别录》的记载。茎丛生，上部稍扁而稍弯曲上升，高 10～60cm，粗达 1.3cm。有滋阴清热，生津止渴。用于热病伤津、口渴舌燥、病后虚热等功效。紫皮石斛：紫皮石斛是以齿瓣石斛为代表的一类兰科石斛属植物;又名齿瓣石斛，为兰科植物齿瓣石斛。产云南东南部至西部。生于海拔达 1850 米的山地密林中树干上。分布于不丹、印度东北部、缅甸、泰国、越南。模式标本采自印度东
北部。“龙陵紫皮石斛”已获得“中国紫皮石斛之乡”称号。与其他石斛一样，紫皮石斛具有增强体质、滋阴养血、补五脏、抗衰老、预制肿瘤、延年益寿等功效。 铁皮石斛：为兰科多年生附生草本植物。生于海拔达 1600 米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐-5℃的低温。铁皮石斛具有独特的药用价值，以其茎入药，中药名：石斛，属补益药中的补阴药，《中国药典》：益胃生津，滋阴清热。铁皮石斛等少数品种之嫩茎，扭成螺旋状或弹簧状，晒干，商品称为耳环石斛，又名枫斗。一般生长在海拔 100-3000米高度之间，常附生于树上或岩石上，喜温暖。湿润和半阴环境，不耐寒，对生长的环境条件要求苛刻。产于安徽省霍山县的霍山石斛是石斛中的极品，但是由于其生长环境极为特殊，产量稀少，市面上只有少数品牌如福临门铁皮石斛能买到正宗的霍山石斛。虽然铁皮石斛的药性功能冠盖石斛之首，但目前市场上流通的铁皮石斛，基本都为人工栽培品种。铁皮石斛具有滋阴润肺养胃生津、补五脏之虚劳、抑制癌细胞增生有恒好的作用，尤其用于治疗各种消化道和呼吸道疾病。 其他入药石斛 环草石斛：也叫美花石斛、小环草、小黄草，为兰科植物环草石斛的茎。环草石斛附生于树上或林下岩石上，性味甘、微寒，可生津益胃;滋阴清热;润肺益肾;明目强腰，但石斛碱有抑制呼吸的作用。 马鞭石斛：又名流苏石斛、大黄草、马鞭杆、旱马棒。生于岩石或树上。药材产于广西、贵州、云南，可人工栽培。茎含对
铁皮石斛多糖的研究进展课件
铁皮石斛多糖的研究进展 xx （xx，xx，xx） 摘要：以系统的文献调研为基础,对兰科石斛属植物铁皮石斛多糖的含量、药理作用、提取方法和组成加以综述。该文对其多糖的含量、药理作用、提取方法和组成等方面做了详细而全面的总结,为今后铁皮石斛药用资源的更好的开发利用提供参考。 关键词: 铁皮石斛多糖药效药用资源 1 引言 铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo),是兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年生附生草本植物[1],一种名贵珍稀濒危的中药材。自古以来就有“植物熊猫”、“救命仙草”的美誉。其主要分布于安徽西南部（大别山）、浙江东部（鄞县、天台、仙居）、福建西部（宁化）、广西西北部（天峨）、四川（地点不详）、云南东南部（石屏、文山、麻栗坡、西畴）。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上[2]。铁皮石斛具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效,位列“中华九大仙草之首”,被录入2010版药典[3]。由于铁皮石斛在自然条件下生长的环境较为苛刻，加上人们过度采挖，导致野生的铁皮石斛资源濒临灭绝。目前铁皮石斛已经实现了人工栽培，但一般也不易成活。铁皮石斛主要含有多糖、生物碱、氨基酸、酚类化合物等化学成分。现代药理研究表明铁皮石斛在增强免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、降血糖、生津、镇咳等方面有多种功效[4]。本文就铁皮石斛多糖的含量、药理作用、提取方法和组成等方面研究工作进行概
述。 2 铁皮石斛多糖含量的研究 近年来,铁皮石斛多糖的研究得到了人们越来越多的关注。由于铁皮石斛多糖是铁皮石斛的主要成分，其含量较高,还具有提高免疫力、抗氧化、抗肿瘤等功效,使得铁皮石斛在医学上具有极大的应用前景。 多糖的含量测定方法有苯酚-硫酸法[5]、3,5-二硝基水杨酸法[6]、分子光谱法[7]等。 2.1 不同器官组织、不同生长期多糖含量不同 无论是野生苗还是人工栽培苗，都是茎中多糖含量最高，又尤以二年生的茎中多糖含量最高。 何铁光[8]发现，野生铁皮石斛茎中的多糖含量随年份不同含量差异较大，多年生茎中的多糖含量最高，其次是叶。华允芬[9]也发现铁皮石斛的多糖含量是茎>根；尚喜雨[10]对铁皮石斛的组培苗、野生植株、栽培植株中多糖的含量及分布进行了系统的分析和研究，也发现铁皮石斛的多糖含量很高，尤以茎段为最；不同部位的含量存在一定差异，茎部的差异要大于根、叶。这说明传统用药上铁皮石斛以茎为入药部分在主要化学成分分析上是合理的。 何铁光[11]对铁皮石斛的组培产物原球茎的多糖含量进行了测定，发现原球茎与野生品的多糖和总氨基酸含量相近。初步证明以组织培养获得的铁皮石斛原球茎代替其野生品是解决铁皮石斛资源紧缺的有效途径。
新手种各种石斛详解
石斛主要有两种种植的方式，挂板和盆栽，长江以南的地区和手贱（没有讽刺的意思，本人也是如此）喜欢浇水的人比较适合挂板，其他地方最好还是用盆栽， 挂板其实杉木板就可以了，便宜易到手又轻便，蛇木好是好但一是贵，二本身蛇木也是国家保护植物，另外，其实棕榈树树杆锯开来效果不比蛇木差哦！ 盆栽的话建议浅的瓦盆紫砂盆，其他的也可以，不建议用深盆因为不好浇水，植料可以选小石子碎砖瓦粗沙树皮椰子壳等等，10厘米以上的盆不建议纯水苔，因为浇水不好掌握，石子等无机物用的多的要勤施薄肥，水苔等有机物用的多的要注意2-3年要换植料，也可以用直接用国兰植料（很多花鸟市场有卖）加三分之一的粗沙小石子，这个比较适合北方的朋友 新手建议使用那种碗状的一次性透明塑料饭盒做盆，便宜又好观察水分，就是看上去低端了点，底下和边上打孔透水透气，南方的可以多打，北方的少打点，土豪请无视此点直接上紫砂盆，高端大气也好用。 浇水要至少植料干了一半再浇（饭盒的好处来了），南方全干了再浇都不嫌迟。施肥我都是施农用复合肥，比说明上说的再稀释10倍从新芽长根开始每第三次浇水之前施次肥，高端人士可以用专用的兰花肥或者缓释肥，我没用过，但是听花友介绍说效果不错还省事，因为我化肥用的多，每2-3个月我会放自来水狂浇次盆避免肥料沉积使植料盐碱化，（第一次死石斛就是因为这个，没看天气预报，狂浇之后下了大半个月的雨，水苔干不了，天热又湿，一盆喉红烂掉了） 还有些其他的乱七八糟的东西，想到了再说吧，先介绍下我对石斛品种的认识， 第一个是我最推荐新手养的，也是最传统的石斛，金钗石斛，很多书上如果单说石斛的，都是指金钗石斛 金钗石斛：我养过没？养过死过没？这还真没死过开过花没?基本年年开 为什么推荐金钗石斛呢？一是好养，二是好看，三是药效好，四是人工种植普遍不破坏生态，五是价格低。 这玩意是传统的石斛，花色艳丽而且花大我家养的一般花径有7.8厘米除了大苞鞘就它最大了，☆ 耐热，耐晒，说来也可怜，这花在我家从来没享受过特殊待遇。这花过了中秋要少浇水施肥，冬天更要少浇水，要狠狠心让他落叶，不然第2年全长高芽，没几朵花。赤水那边人工仿野生种的金钗多，1.2块钱就能买一苗，有10多块钱就能入一从不错的植株新手值得入手，推荐指数★★★★★ 第二个鼓槌石斛：我养过没？养过死过没？没死过开过花没?基本年年开 这玩意很有意思，杆子很粗，一根能顶其他石斛一把，再个他冬天一般不掉叶，叶子可以长两三年，蛮适合做盆栽的，但是这个品种要晒，尤其是秋天，不晒胖不起来， 这个也比较耐热，夏天没死过，据说怕冷？我没试验过极限低温，冬天会搬进房间，应该5度以上不成问题，花大概3.4厘米，花瓣有点厚像打了蜡，唇瓣有点丝绒的感觉，有粟斑（图一）黄斑（图2）两种花色，花有香味，这点比金钗好，但是花期不长一朵花大概开一周，有人说这玩意能开一个月，但我家的确实每年都只有差不多一周多一点点（这里补充下，金钗差不多一朵花能开大半个月）（孔雀道人原创，转载请注明作者） 鼓槌现在云南思茅还是哪也有大规模人工种植了，但是主要还是靠挖野生的，淘宝上卖3 5块钱一茎
石斛种植技术2013-5
编辑：钱万春
石斛种植技术 石斛生长习性 石斛属植物为附生植物，生境独特，对小气候环境要求十分严格。野生石斛一般寄生在海拔500~3000米的原始森林树干上和悬崖峭壁上。多生于温凉高湿的阴坡、半阴坡微酸性岩层峭壁及树干上，群聚分布，上有林木侧方遮阴，下有溪沟水源，冬春季节稍耐干旱，但严重缺水时长叶片落尽，裸茎渡过不良环境，到温暖季节重新萌发枝叶。常与地衣、苔藓植物以及抱石莲、伏石蕨、卷柏、石豆兰等混生。石斛以其密集的须根系附着于石壁砂砾上吸收岩石水分和养料，裸露空中的须根则从空气中的雾气、露水吸收水分，依靠自身叶绿素进 行光合作用。因此，石斛受小气候环境中水分，尤其是空气湿度的严格限制，分布地域极为狭窄。在实践中，人们通过观察野生石斛生长环境和生长过程，摸出了一套人工栽培技术。人工种植主要品种及分布 石斛因品种不同，其标志性成分也不一样，适应的人群也有所区别。如，铁皮石斛含黑节草多糖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。多糖水解物主要含甘露糖、葡萄糖，还要微量阿拉伯糖和木糖。紫皮石斛、霍山米斛以多糖含量为主，金叉石斛以石斛碱为主，束花石斛含古豆碱及顺反束花石斛碱，鼓槌石斛、流苏石斛等含毛兰素等成分。根据野生石斛资源分布及遵循中药道地原
则，各地种植的品种也不相同。 当前，人工种植的石斛品种主要有铁皮石斛、霍山米斛、紫皮石斛（齿瓣石斛）、水草石斛、束花石斛、鼓槌石斛、刚节石斛、叠鞘石斛、虫草石斛、铜皮石斛。 安微霍山以传统霍山米斛为主，浙江基本上种植铁皮石斛，四川种植有金叉石斛、铁皮石斛、紫皮石斛，广西种植铁皮石斛。云南品种最为复杂，有铁皮石斛、紫皮石斛、水草石 斛、马鞭石斛、刚节石斛、鼓槌石斛。广东种植铁皮石斛、虫草石斛。福建、海南、江西、湖南等地以种植铁皮石斛为主。贵州以种植金叉石斛、铁皮石斛、细茎石斛为主。 种植核心要领 野生石斛一般寄生在原始森林树干上和悬崖峭壁上，根系长期裸露在空气中，产地森林茂密，阳光透过厚厚的树叶照射到石斛上。石斛生长的森林湿度大，空气清新，有徐徐微风。实践中，人们仔细观察野生石斛生长环境和生长过程，模拟野生石斛生长所需的光照、温度、
石斛中多糖含量的测定
题目石斛中多糖含量的测定 学生高换楼学号1111034082 所在学院化学与环境科学学院 专业班级化工1102班 指导教师季晓晖 完成地点理工学院 2015 年06 月08 日
石斛中多糖含量的测定 高换楼 （理工学院化学与环境科学学院化工专业1102班，723001） 季晓晖 [摘要] 石斛为我国常用贵重药材，有养阴清热、益胃生津的功效，石斛一直备受国外研究者的重视。本文利用蒽酮-硫酸法对铁皮石斛多糖的含量进行了测定，并采用正交试验得到最佳实验方案，在石斛粉碎程度为粉末、液料比为50mL/g、提取2次，每次3小时的情况下多糖提取率最高。本文的实验结果为今后铁皮石斛多糖提取的质量评价及其进一步开发和利用提供参考依据。 [关键词] 石斛；多糖；蒽酮-硫酸法；抗氧化性；测定； Determination of Dendrobium polysaccharide content GAO Huanlou （Grade 02, Class 11, Major chemical engineering, School of chemical and environmental science Dept, Shaanxi University of Technology, Hanzhong 72300x, Shaanxi） Tutor: JI Xiaohui Abstract: Dendrobium is in common use in our country precious medicinal herbs, the effect of nourishing yin and clearing heat, nourishing stomach fluid, Dendrobium has attracted a lot of attention of researchers at home and abroad. The anthrone-sulfuric acid method of Dendrobium officinale polysaccharide content were measured, and using the orthogonal test and the optimum solution is obtained. In Dendrobium degree of comminution is in the form of powder, liquid to solid ratio for 50mL/1g, extraction 2 times, every time 3 hours of polysaccharides extraction rate was the highest. The experimental results for the quality evaluation of future Dendrobium officinale polysaccharide extraction and its further development and utilization to provide reference. Key words:Dendrobium; polysaccharide; anthrone-sulfuric acid method; antioxidation; determination;
石斛种类划分
石斛种类划分 石斛种类划分 石斛，兰科多年生草本植物之一，世界有兰科植物700属近2000种，我国有170属1200余种。我国有石斛74种，世界上有40种石斛有药用价值。主要分布于亚洲热带和亚热带，澳大利亚和太平洋岛屿，我国大部分分布于西南、华南、台湾等地。石斛兰的主要品种有铁皮石斛、金钗石斛、紫皮石斛、鼓槌石斛等。可入药，名为石斛，对人体有驱解虚热，益精强阴等疗效。随着花卉产业的兴起，石斛兰也成为了一种观赏植物。由于石斛兰具有秉性刚强、祥和可亲的气质，被誉为父亲之花。石斛一药，顾名思义，是专指生于岩石上的石斛。至于附生于树木上的石斛属植物，古代本草亦有记载，称之为木斛。《本草经集注》曰：“生栎树上者名木斛，其茎形长大而色浅。……今始安亦出木斛，至虚长，不入丸散，惟可为酒渍，煮汤用尔。俗方最以补虚，疗脚膝。”《本草图经》曰：“惟生石上者胜。亦有生栎木上者，名木斛，不堪用。”《本草衍义》曰：“今人多以木斛浑行，医工亦不能明辨，世又谓之金钗石斛，盖后人取象而言之。然甚不经，将木斛折之，中虚如禾草，长尺余，但色深黄光泽而已。”考以上本草所述木斛，是指附生于树木上而茎长达30cm以上（长尺余）的石斛属植物，主要如马鞭石斛Dendrobium fimbriatum Hook.、黄草石斛Dendrobium chrysanthum Wall.、环草石斛Dendrobium loddigesii Rolfe.及金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.的药材。这些木斛，随其所附生的树木
不同而药性亦有所不同。前人认为，木斛根本不能作为生于石上而茎长9～12cm 左右（长三、四寸）的石斛药用。 关于石斛的混乱品种，历代本草中亦有记载。如《新修本草》曰：“今荆襄及汉中、江左又有二种：一者似大麦，累累相连，头生一叶而性冷；一种大如雀髀，名雀髀斛，生酒渍服，乃言胜干者。亦如麦斛，叶在茎端。其余斛如竹，节间生叶也。”《本草图经》曰：“其江南生者有二种：一种似大麦，累累相连，头生一叶，名麦斛；一种大如雀髀，名雀髀斛。” 【中药别名】 ①石斛:金钗石斛、吊兰花、扁金钗(广西)，扁黄草、大黄草(贵州)。②粉花石斛:美花石斛、小环草(广西)，小黄草(贵州)。③束花石斛:大黄草、水打棒、水马棒(贵州)。④流苏石斛:旱马鞭、马鞭杆(贵州)。⑤铁皮石斛:铁皮兰(广西)、黑节草(贵州、云南)。 【考证】 石斛始载於《神农本草经》，列为上品。《名医别录》曰:｀生六安山谷、水旁石上，七月、八月采茎阴干。＇陶弘景日:｀今用石斛出始兴。生石上，细实，桑灰汤沃之，色如金，形似蚱蜢髀者为佳。＇《本草图经》载:｀石斛，今荆、湖、川、广州郡及温、台州亦有之〕以广南者为佳。多在山谷中，五月生苗，茎似竹节，节节间出碎叶，七月开花，十月结实，其根细长，黄色。＇《本草纲目》载:｀石斛丛生石上，其根纠结甚繁，干则自软。其茎叶生皆青色，干则黄色。开红花。节上自生根须。人亦折下，以砂石栽之，或以物盛挂屋下，
常见的几种石斛种类
铁皮石斛 铁皮石斛，它因表皮呈铁绿色而得名。为兰科多年生附生草本植物。喜半阴湿的岩石和湿度较大的原始森林高大树干上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。铁皮石斛具有独特的药用价值，以其茎入药。中药名：石斛，属补益药中的补益药。《中华人民共和国药典》中说：石斛能益胃生津，滋阴清热。铁皮石斛等少数品种之嫩茎，扭成螺旋状和弹簧状，晒干，商品称为耳环石斛，又名枫斗。
流苏石斛 流苏石斛，又称马鞭石斛，产广西南部至西北部、贵州南部至西南部、云南东部至西南部。海拔600-1700米，生于密林中树干上或山谷阴湿岩石上。分布于印度、尼泊尔、锡金、不丹、缅甸、泰国、越南。目前主要用于药品原料和中医临床，产地很容易种植，其生长快、 产量高。
金钗石斛 金钗石斛，又名：金钗石、变金钗、扁黄草、扁草。为多年生草本。茎丛生，上部稍扁而稍弯曲上升，高10-60厘米，粗达1.3厘米。有滋阴清热，生津止渴的功效。用于热病伤津、口渴舌燥，病后虚热等功效。主要产四川、广西、云南、贵州。四川、贵州人工种植较多，产地种植容易。 球花石斛 球花石斛，以其花的形状得名。茎直立或斜立，圆柱形，粗壮，长12-46厘米，粗7-16毫米，其间收狭为细圆柱形，不分枝，具数节，节间长2-7厘米，黄褐色并且具光泽，有数条纵棱。产云南耿马、澜沧、沧源、景东、思茅、墨江、勐海、勐腊、景洪、盐源、玉溪、金平、屏边、马关、麻栗坡；附生于海拔750-1800米的山地林中树干上。花型漂亮，产地可做盆景销售。
鼓槌石斛 鼓槌石斛，为兰科石斛属多年生附生草本植物。生于海拔520-1620米，阳光充足的常绿阔叶林中树干上或疏林下岩石上。分布于印度东北部、缅甸、泰国、老挝、越南。 其喜高温、高湿的半阴环境，栽培种要给与充足的水分，但又不能过于潮湿，否则容易引起腐烂，在干燥的晴天，否则容易引起腐烂，在干燥的晴天，要经常向植株喷水，以增加空气的湿度。鼓槌石斛对温度敏感，最好能在10-145°C的昼夜温差范围内，否则很难枝繁花茂。栽植宜用壁上多孔的花盆，介质与一般附生兰相似。每俩年换盆一次，时间可在花期过后，新芽尚未长出的春季。