植物组织培养(实验报告—)

名词解释

1.细胞的全能性：指植物体的任何一个有完整细胞核的活细胞都具有该植物的全套遗传基因和产生完整植株的潜在能力。

2.分化：指细胞、组织、器官或整株植物从分生组织或幼小状态发育为成熟状态的过程，并在生理、形态上发生的变化。其最大的特征是失去分裂能力。

3.脱分化：植物离休的器官、组织、细胞在人工培养基上，经过多次细胞分裂而失去原来的分化状态，形成无结构的愈伤组织或细胞团的过程，使其回复到胚性细胞的状态。其特征是已失去分裂能力的细胞重新获得了分裂能力。

4.再分化：指由脱分化的细胞再度分化成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至最终再生成完整的植株的过程。

5.试管苗：指在无菌离体条件下，对植物组织、细胞、器官进行组培所获得的的再生植株。

6.根芽激素理论：根和芽的分化由生长素和细胞分裂素的比率所决定，这一比率高时促进生根，比率低时促进茎芽的分化，比率适中时，组织则倾向于以一种无结构的方式生长。通过改变培养基中这两类生长调节物质的相对浓度可以控制器官的分化。

7.污染：批在组培过程中，由于真菌、幼苗等微生物的侵染，在培养容器内滋生大量的菌斑，使试管苗不能生长和发育的现象。

8.褐变：指在组培过程中，培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而死亡的现象。

9.玻璃化现象：指试管苗因生理失调而引起的嫩茎、叶片出现半透明状和水渍状的现象。

10.无菌操作：亦称接种。指将经过表面灭菌后的植物材料在无菌环境中切碎或分离出器官、组织或细胞转移到无菌培养基上的过程。由于整个过程均在无菌条件下进行，所以将这个过程称为无菌操作。

11.植物组织培养：指在无菌条件下，将离体的植物器官(如叶、花、未成熟的果实、种子)、组织(如形成层、花药组织、胚乳)、胚胎(如成熟和未成熟的胚)、细胞或原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，使其长成完整的植株或生产具有经济价值的其他产品。这是广义的植物组织培养概念，而狭义的植物组织培养是指以植物各部分离体组织或愈伤组织为外植体的离体无菌培养。

12.培养基：培养基是提供植物或其他生物生长发育所需各种养分的介质。

13.胚状体：亦称体细胞胚。指在组培过程中，由植物体细胞所形成的类似于合子胚的结构。它具有根、茎结构，能够一次性形成再生植株。其与正常的受精卵发育方式相似，在形成过程中也要经过原胚、球形胚、心形胚等阶段。

14.外植体：由活体植物上切取下来，用以进行离体培养的那部分组织或器官。

15.愈伤组织：原指植物在受伤后伤口表面形成的一团无序生长的薄壁细胞，在组织培养中，是指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。其特点是：细胞分裂快，结构疏松，缺少结构组织，颜色浅而透明。

16.初代培养：是指在组培过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段。即无菌接种完成后，送入培养室的外植体在适宜的光、温、气等条件下被诱导成无菌短枝(或称茎梢)、不定芽(丛生芽)、胚状体或原球茎等中间繁殖体的过程。

17.中间繁殖体：通过初代培养所获得的不定芽、无菌茎梢、胚状体或原球茎等无菌材料。

18.继代培养：中间繁殖体由于数量有限，所以需要将他们切割、分离后转移到新的培养基中培养增殖的过程。

19.繁殖系数：指单位植物种苗的收获量与接种量之比。

20.原球茎：亦称绿色小球。多指兰科植物的茎尖经组培，形成一个扁形球状物，，其基部生有假根。它们在形态上与种子萌发时由胚形成的原球茎相似。

21.悬浮培养：亦称植物细胞悬浮培养。指使细胞团在液体培养基中进行培养的一种方法。通常可分为成批培养和连续培养两种类型。

22.后生遗传变异：亦称驯化现象。指细胞在发育、分化过程中，对基因表达的调控上所发生的变化，其不涉及基因结构的变化。后生遗传变异在取消诱发条件后，还能通过细胞分裂在一定时间内继续存在。在一般情况下，它不通通过再生过程遗传给植株，因而这种变异无法继续表现在再生植株的二次组培中。

23.嵌合体：亦称异源嵌镶体。植物体的突变往往只影响分生组织的一部分，使突变的组织呈扇状或层状。用这种分生组织所繁殖的植物，因同时具有两个或多个遗传性状不同的组织，而表现出不同的性状和特点的现象。

24.原生质体融合

25.早熟萌发

26.单倍体植株

27.外植体

28.愈伤组织培养：

29.玻璃化现象

30.体细胞胚

31.无病毒苗

32.植板率

33.cDNA检测法

选择题

1．一植株下列（B ）部位病毒的含量最低。

A 叶片细胞

B 茎尖生长点细胞

C 茎节细胞

D 叶柄细胞

2．对于不易生根，较难形成完整植株的植物来说，最好的脱毒方法是（C ）。

Ａ茎尖脱毒Ｂ愈伤组织脱毒

Ｃ微尖嫁接脱毒Ｄ花药脱毒

3．培养基的pH一般是（ C ）。

A 4.8～5.0

B 5.0～5.6

C 5.8～6.0

D 6.0～7.0

4．下列不属于生长素类的植物激素是（A ）。

A Kt

B IAA

C NAA

D IBA

5．1962年，Murashige和Skoog为培养烟草花叶细胞设计了（B ）培养基，其特点是无机盐浓度较高。

ＡＷhiteＢＭＳ

ＣN6ＤＭiller

6．第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是（B ）。

A Morel

B Haberlandt

C Schleiden

D White

7．下列不属于大量元素的盐是（C ）。

A NH4NO3

B KNO3

C ZnSO4·7H2O

D MgSO4·7H2O

8．在组织培养中，IAA、ZT和GA必须用（B ）法灭菌

Ａ高压灭菌Ｂ过滤灭菌

Ｃ干燥灭菌Ｄ照射灭菌

9．要配置母液浓度为0.1mg/ml的IBA 500ml，需要IBA（B ）mg。

A 20

B 50

C 100

D 1000

10．下列不属于微量元素的盐是（A）

A CaCL2·2H2O

B ZnSO4·7H2O

C H3BO3

D CuSO4·5H2O

11．对于不易生根，较难形成完整植株的植物来说，最好的脱毒方法是（C ）。

A．茎尖脱毒B．愈伤组织脱毒

C．微尖嫁接脱毒D．花药脱毒

12．禾本科植物的花粉培养一般采用下列哪种培养基（B ）。

A．B5 B．N6

C．H D．尼许

13．培养基的pH一般是（C ）。

A．4.8～5.0 B．5.0～5.6

C．5.8～6.0 D．6.0～7.0

14．下列不属于生长素类的植物激素是（A ）。

A．Kt B．IAA

C．NAA D．IBA

15．1962年，Murashige和Skoog为培养烟草花叶细胞设计了（B ）培养基，其特点是无机盐浓度较高。

A．White B．MS

C．N6 D．Miller

16．第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是（B ）。

A．Morel B．Haberlandt

C．Schleiden D．White

17．花药培养中，大多数植物适宜的花粉发育时期是（B ）。

A．四分孢子期B．单核后边期

C．双核期D．三核期

18．能打破种子休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发的激素是（A ）。

A．GA B．IAA；

C．NAA D．ZT

19．在成批培养过程中，细胞数目呈（C ）曲线变化。

A．Y型B．X型

C．S型D．Z型

20．要配置母液浓度为0.1mg/ml的IBA 500ml，需要IBA（B ）mg。

A．20 B．50

C．100 D．1000

21.第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是_________：

A Morel；

B Haberland；

C Schleiden；

D White

22.下列培养基中_______无机盐的浓度最低。

A MS培养基；

B B5培养基；

C White培养基；N6培养基

23.高温易被破坏分解的植物激素是_________。

A IAA；

B GA；

C NAA；

D Zt

24.细胞悬浮成批培养过程中，细胞的生长，大致经历________四个时期。

A 对数生长期；

B 停止期；

C 延缓期；

D 减慢期

25.下列不属于活性炭在组织培养中作用的是_______。

A吸附有毒物质；B减少褐变，防止玻璃化；

C创造黑暗环境，增加培养基的通透性，利于根的生长；

D增加培养基中的养分；

26.下列不属于细胞分裂素类的植物激素是_________。

A 6-BA；

B NAA；

C Zt；

D Kt

27.下列不属于大量元素的盐是_________。

A NH4NO3；

B KNO3；

C ZnSO4.7H2O；

D MgSO4.7H2O

28 培养室里的湿度一般保持在_________

A 30~40%；

B 50~60%；

C 70~80%；

D 80~90%

29.吲哚乙酸（IAA）需要用_________法灭菌。

A 灼烧灭菌；

B 干热灭菌；

C 过滤灭菌D高压湿热灭菌

30. 适宜的花粉发育时期：________。

A 单核早期；

B 双核期；

C 三核期；

D 单核中、晚期

31. 下列不属于生长素类的植物激素是________。

A Kt；

B IAA；

C NAA；

D 6-BA

32. 影响培养基凝固程度因素有________。

A 琼脂的质量好坏；

B 高压灭菌的时间；

C 高压灭菌的温度；

D 培养基的PH

33．从单个细胞或一块外植体形成典型的愈伤组织，大致经历________三个时期。

A 诱导期；

B 潜伏期；

C 分化期；

D 分裂期

多项选择题

1．响培养基凝固程度因素有（ABCD ）。

A．琼脂的质量好坏B．高压灭菌的时间

C．高压灭菌的温度D．培养基的PH 2．活性炭在组织培养中的作用有（ABC ）。

A．吸附有毒物质

B．减少褐变，防止玻璃化；

C．创造黑暗环境，增加培养基的通透性，利于根的生长；

D．增加培养基中的养分；

3．下列具有细胞全能性的细胞是：（ABCD ）。

A．成熟的老细胞B．幼嫩的组织细胞

C．愈伤组织细胞D．番茄的受精合子4．下面属于处于愈伤组织分裂期的特征是（ABCD ）。

A．细胞分裂加快

B．正在分裂的细胞体积小，内无大液泡

C．细胞的核和核仁增至最大

D．细胞中RNA的含量减少，而DNA含量保持不变

5．组织培养按培养方式可分为（AC ）。

A．固体培养B．叶培养

C．液体培养D．生根培养

6．由植物器官分离单细胞的方法有（AB ）

A．机械分离法B．酶解法

C．离心法D．振荡法

7．影响褐变的主要因素有（ABCD ）。

A．基因型B．外植体的生理状况

C．培养基的成分D．材料转移时间8．最常用的植物病毒鉴定方法有（ABCD ）。

A．抗血清鉴定法B．分子生物学鉴定法C．指示植物法D．直接鉴定法

9．根据培养基作用不同，培养基可分为下列哪几种（BCD ）。

A．基本培养基B．诱导培养基

C．增殖培养基D．生根培养基10．外植体的选择原则主要从以下哪些方面考虑？(ABCD) A．植物的基因型B．生理状态

C．取材季节D．取材部位

11．活性炭在组织培养中的作用有（ABC ）。

A．吸附有毒物质

B．减少褐变，防止玻璃化；

C．创造黑暗环境，增加培养基的通透性，利于根的生长；

D．增加培养基中的养分；

12．幼胚培养时，其发育过程有（ABC ）三种方式。

A．胚性发育B．早熟萌发

C．产生愈伤组织D．器官发生

13．组织培养按培养方式可分为（AC ）。

A．固体培养B．叶培养

C．液体培养D．生根培养

14．由植物器官分离单细胞的方法有（AB ）

A．机械分离法B．酶解法

C．离心法D．振荡法

15．影响褐变的主要因素有（ABCD ）。

A．基因型B．外植体的生理状况C．培养基的成分D．材料转移时间16．常用的植物脱毒方法有（ABCD ）

A．茎尖培养脱毒B．愈伤组织培养脱毒C．微尖嫁接脱毒 D. 花药培养脱毒17．单倍体植株染色体加倍的方法有（ABCD ）。

A．自然加倍法B．秋水仙素法

C．组织创伤法D．氟乐灵法

18．最常用的植物病毒鉴定方法有（ABCD ）。

A．抗血清鉴定法B．分子生物学鉴定法C．指示植物法D．直接鉴定法19．根据培养基作用不同，培养基可分为下列哪几种（BCD ）。

A．基本培养基B．诱导培养基

C．增殖培养基D．生根培养基20．外植体的选择原则主要从以下哪些方面考虑？( ABCD ) A．植物的基因型B．生理状态

C．取材季节D．取材部位

填空题

1．在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以_________mm、带________个叶原基为好。

0.3～0.5，1～3

2．去除植物病毒的主要方法是_______________和____________两种方法，当把二者结合起来脱毒效果最好。

茎尖培养脱毒，热处理脱毒

3．花药培养是____________培养，花粉培养属于________培养，但二者的培养目的一样，都是利用了花粉粒染色体数目的___________，最后发育成__________。

器官，细胞，单倍性，单倍体，

4．要配制培养基成分为MS+IAA1.0+6-BA2.0 的培养基2L需要吸取母液浓度均为0.1mg/ml 的IAA__________ml，6-BA___________ml。

20，40

5．比值的高低决定了外植体的发育方向，比值低时促进芽的生长，这时细胞分裂素占主导地位；比值高促进根的生长，这时生长素占主导地位。

细胞分裂素，生长素

6．在组织培养中，不耐热的物质用___________灭菌，而培养基常用_____________灭菌。

过滤法，湿热法

7．组织培养中有三大不易解决的问题是_______、_______与__________。

污染、褐变、玻璃化

8．组织培养中培养室的温度一般控制在__________，湿度一般控制在___________。

25℃±2℃，70%~80%

9．植物组织培养根据培养方式可分为_____________和_____________。

固体培养，液体培养

10．烘箱用于干燥玻璃器皿的温度可以设在_________的范围内，用于高温干燥灭菌则需在____________的温度下1-3小时；用于烘干植物材料的温度是______________。

100-130℃，160-180℃，80℃

11．植物胚胎培养包括幼_________、_________、_________、_________以及子房培养。

胚培养、成熟胚培养、胚珠培养、胚乳培养

12．一粒成熟的种子含有一个________，构成胚的所有细胞几乎都处于__________的状态和旺盛的细胞_______能力，这些细胞叫胚性细胞，或叫分生性细胞或未分化细胞。其特征是具有_________。

胚，未分化，分裂，分裂能力

13．一个已分化的细胞或组织若要表现其全能性，一般要经历两个过程：________和_________。

脱分化，再分化

14．中间繁殖体由于数量有限，所以需要将他们切割、分离后转移到新的培养基中培养增殖，这个过程就称为继代培养。继代培养是继__________之后的连续数代的扩繁培养过程，旨在繁殖__________的无根苗，最后能达到边繁殖边生根的目的。

初代培养，相当数量

15．根据培养物的进程和培养基的作用不同，培养基可分为诱导(启动)培养基、_________________及________________________。

增殖(扩繁)培养基，壮苗生根培养基。

16．根据其营养水平不同，分为___________和___________。

基本培养基，完全培养基

17．外植体的消毒原则是既要_________离体材料表面的全部微生物，又不_____________植物材料。

杀死，损伤或只轻微损

18．胚胎培养是将植物的和母体分离，培养在已知化学成分的培养基上，胚胎培养包括、、、以及和培养。

19．细胞平板培养法一般包括、、、、和五个步骤。

20．无病毒原种苗只是脱除了原母株上的特定病毒，并末增加，因而在自然条件

下易变而丧失其利用价值，同时受自然条件影响，无病毒原种易。正确保存无病毒原种苗的方法有和两种。

21．花粉植株的形成有两条途径：一是划分形成，再分化诱导成苗，二是花粉分化成而直接成苗。

22．植物组织培养的发展过程大致可分为三个阶段：

⑴阶段（初至30年代中）

⑵阶段（30年代末至年代中）

⑶阶段（年代至现在）

23请写出下列响应的名称或代号

A.维生素C

B.NAA

C.6-BA

D.吲哚-3-丁酸

E.水解酪蛋白

F．CM

G．IAA

H．维生素B1

I．维生素C

J．NAA

K．6-BA

24．愈伤组织的形成一般要经过、、三个时期。

25．FDA染色法是常用且比较理想的检测原生质体活性的方法，FDA本为荧光极性，可自由透过原生质体质膜，在原生质体内易受的分解，而产生荧光的，它不能自由进出原生质体的质膜，所以在荧光显微镜下可观察到的原生质体，表明是有活力的原生质体，的原生质体，则是无活力的原生质体。

26．在花药培养中花粉粒经或途径形成孢子体（植株）。

27．在细胞培养中，目前常用酶和酶从植物不同组织中直接制备单细胞，然后再通过培养、培养或培养方法，即可获单细胞系。

28．植物脱毒一般包括、、、四种途径，其中脱毒效果最好的是。

29．胚乳再生植物根据细胞核变化与分化器官的表现可分为和两类。

30．植物组织培养按培养的方式分为_______培养和_______培养。

31．植物组织培养的应用有：______、__ __、、______、、等。

32．花粉细胞通过和途径形成再生植株

33．在组织培养中，不耐热的物质用__________法灭菌，而培养基常用___ _______法灭菌。

34．6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值_________促进根的生长，这时__________占主导地位；比值________促进芽的生长，这时__________占主导地位。

35．在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以________mm、带________个叶原基为好。

36．一个已停止分裂的成熟细胞转变为_________状态，并形成__________的现象称为"脱分化"。

37.植物组织培养按培养对象分为_______、_________、_________、__________、等几种类型。

判断题

1.灭菌是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有有生命的物质全部杀死。(√)

2.消毒是杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。(√)

3.草莓一般利用花药培养进行脱毒。（√ ）

4.禾本科植物和芸薹科植物的花粉培养的最适时期是单核晚期。（×）

5.在小麦胚培养过程中，小麦胚的褐色面向上。（√ ）

6.由性细胞发育而成的胚叫做合子胚，而由体细胞发育而成的胚叫做胚状体。(√)

7.一个已分化的细胞若要表现其全能性，首先要经历脱分化过程。（√ ）

8.由胚乳培养获得的三倍体植株，也一定要进行染色体倍数的检查。（√ ）

9.一般来说，光照强度较强，幼苗容易徒长，而光照强度较弱幼苗生长的粗壮。（×）

10.经过花药培养所获得的植株都是单倍体。（×）

11.幼年细胞和组织比成年细胞和组织诱导愈伤组织容易。（√ ）

12.一般的说，PH值高于6.5时，培养基全变硬；低于5时，琼脂不能很好地凝固。（√ ）

13.在配制6-BA母液时，要先加少量的1mol的HCl溶解，再加蒸馏水定容。（√ ）

14.无病毒苗指一点病毒也没有的苗。（×）

15.通过子房的培养，即可能等到单倍体植株，有能得到二倍体植株。（√ ）

16.用于外植体、手、超净台等的表面消毒酒精浓度越大，消毒效果越好越好。（×）

17.1/2 MS培养基的所有成分都是MS培养基用量的一半。（×）

18.利用芦荟的吸芽和侧芽进行组织培养时，采集外植体是最好用手掰，而不用刀割。（√ ）

19.组织培养中，一般木本植物比草本植物易发生褐变。（√ ）

20.诱发融合产生的一定是异核体。（×）

21.植物病毒遗传信息大多数都是DNA。（×）

22.禾本科植物和芸薹科植物的花粉培养的最适时期是单核早期。（√ ）

23.在叶片培养时，叶组织上表皮朝上接种在培养基上有利于愈伤组织的生长和分化。（√ ）

24.幼胚培养需要的培养基比成熟胚简单。（×）

25.由性细胞发育而成的胚叫做胚状体，而由体细胞发育而成的胚叫做合子胚。

26.在配制培养基时，加入琼脂的作用是丰富培养基的营养成分。（×）

27.培养是指把接种后的培养材料放在培养室里，使之生长脱分化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程。(√)

28.用10倍的大量母液配制10L培养基，其用量为100ml。

29.在细胞的成批培养整个过程中，一般要先后经过对数生长期、延迟期、减慢期、静止期这四个阶段。

30.在诱导器官分化培养中，愈伤组织能否变绿是芽分化的前提。

31.一般来说，幼年植株的花药反应能力较好。

32.一般来说，在配制生根培养的培养基是，应降低无机盐浓度，增大蔗糖浓度，有利幼苗发根。

33.经高压高温灭菌后，培养基的PH值会下降0.5个单位左右。

34.植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水迹状，这种现象通常称为玻璃化现象。玻璃化苗一般增殖容易，生根也较普通苗容易。

35.“KT/IAA的比值高时，利于根分化，比值低时，利于芽分化，比值适中时，产生愈伤组织。”此为激素控制理论。激素控制理论最早是由Steward提出的。

36.山梨醇、甘露醇是我们常用的渗透压稳定剂，且易被吸收，可促进细胞增殖和生长。

37.花粉在单核靠边期时最易做花粉培养，因为此时期的花粉对离体培养的刺激最敏感。

38.外植体中已分化的活细胞，在外源激素的诱导下通过脱分化后形成愈伤组织，这一过程被大致划分为三个时期（诱导期、形成期和分裂期）。

39.幼年细胞和组织比成年细胞和组织诱导愈伤组织容易。

40.一般的说，PH值高于6.5时，培养基全变硬；低于5时，琼脂不能很好地凝固。

41.在配制6-BA母液时，要先加少量的1mol的HCl溶解，再加蒸馏水定容。

42.未成熟胚较小、较嫩、颜色浅，易培养；成熟胚较大、较硬、颜色较深，不易培养。

43.环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求80％-90％的相对湿度。

44.经过花药培养所获得的植株都是单倍体。

45.压高温灭菌后，培养基的PH值会下降0.5-1个单位左右。

46.细胞分裂素的浓度过低，易导致玻璃化现象。

47.在植物幼胚培养中，我们选用的蔗糖浓度为4%，因为这样的蔗糖浓度已足够幼胚的生长发育所需。

48.升汞（氯化汞）是我们常用的外植体表面消毒剂浓度为0.1-1%，消毒时间为2-10分钟。

49.用于愈伤组织培养的外植体，一般在0.5~1cm，因太大会增加污染机会，太小，则不便操作，生长缓慢。

50.在细胞的成批培养整个过程中，一般要先后经过对数生长期、延迟期、减慢期、静止期这四个阶段。

51.在实验操作中，往往使用95%的酒精进行消毒，因为95%浓度的酒精比75%酒精的消毒效果要好。

52.花粉在单核靠边期时最易做花粉培养，因为此时期的花粉对离体培养的刺激最敏感。

53.实验证明，通过早期茎尖培养，利用顶芽、腋芽增殖，是最少发生突变的方法。

简述题

1．以菊花茎段培养为例简述无菌操作规程？

（1）先用水和肥皂清洗双手，然后穿上灭菌后的专用实验服、帽子与鞋子，进入接种室，打开超净工作台的紫外灯，照射20分钟，然后关闭紫外灯。

（2）在准备室将菊花嫩茎剪成1.0～１.5cm长茎段，每段带一芽，放入已灭菌的培养瓶中，带入无菌超作室。用70%的酒精擦拭双手及超净工作台，点燃酒精灯。把剪刀、镊子等放入95%的酒精中，在火焰上灭菌。

（3）先用70%酒精消毒30秒，倒掉酒精，再倒入0.1%的HgCl2溶液消毒5～8分钟，无菌水冲洗3～4次。用剪刀在广口瓶内，将茎段两端各剪去一小段，使剩下的茎段大约为1.0cm 左右。

（4）打开培养基，用火焰灼烧一下培养基的瓶口和瓶盖，用镊子夹住茎段，插入培养基中，在灼烧一下瓶口和瓶盖，拧好盖子。接种过程中常用70%的酒精擦拭工作台和双手，用火焰灼烧手术刀和镊子。

（5）接种完毕后，整理超净工作台，将培养瓶放在25℃的培养室中培养，清洗所有工具。

2．试管苗与野生苗生境有何差异？

试管苗生境与野生苗生境的比较

生境

光照

温度

相对湿度

养分

气体

菌态

试管苗

弱，易调控

适宜且恒定

高

丰富

光下CO2低，有害气体量高

无菌

野生苗

强，波动大

波动性大

较低，波动大

较贫瘠

各种气体成分较恒定

有菌

3．试管苗与野生苗在形态结构及功能上的差异？

试管苗与野生苗形态结构与功能上的差异

叶片及其功能

根系及其功能

试管苗

角质层薄，水孔多，气孔的生理活性差，保水能力差；此外，叶绿体的光合性能也差。根系不发达，吸水能力差。

野生苗

角质层较厚，水孔少，气孔的生理活性强；叶绿体的光合性能好。

根系发达，吸水能力强。

4．简述茎尖脱毒原理？

（1）利用植物细胞的全能性，在特定条件下可获得不同的细胞、组织、器官，可能产生无病毒的细胞、组织、器官。

（2）根据病毒在植物体内分布特点，一般距离植物顶端分生组织越近，病毒浓度越低。

（3）根据病毒的运输途径，一般病毒是通过维管束和胞间连丝进行运输的，在植物顶端分生组织维管系统尚未形成，因此茎尖病毒浓度低。

（4）另外，顶端分生组织细胞生长旺盛、代谢活跃，病毒无法复制。

综上所述利用茎尖培养可达到脱毒效果。

5．以矮牵牛叶片培养为例简述组织培养的大概步骤或工序？

（1）配制培养基MS+BA1+NAA0.1，并进行灭菌。

（2）采集外植体：采集矮牵牛的肥厚嫩叶装入广口瓶中带回实验室。

（3）外植体的灭菌和消毒：取回的外植体先用洗衣粉清洗叶表面。然后装入广口瓶带入无菌超作室。用70%的酒精擦拭双手及超净工作台，点燃酒精灯。把手术刀、镊子等放入95%的酒精中，在火焰上灭菌。用70%酒精消毒30秒，倒掉酒精，再倒入0.1%的HgCl2溶液消毒5～8分钟，无菌水冲洗3～4次。

（4）接种：将灭菌后的叶片放在已灭菌的装有无菌滤纸的培养皿中，用手术刀将叶片切成0.5cm×0.5cm的小叶片。打开培养基，用火焰灼烧一下培养基的瓶口和瓶盖，用镊子夹住叶片，放入培养基中，在灼烧一下瓶口和瓶盖，拧好盖子。接种过程中常用70%的酒精擦拭工作台和双手，用火焰灼烧手术刀和镊子。

（5）培养：将接种后的培养基放在培养室中，培养条件为25℃±2℃，湿度为70%～80%。

（6）试管苗驯化：经过增殖培养和生根培养的矮牵牛试管苗在半遮阴的自然光下锻炼，并在培养瓶内加少量的自来水，逐渐使试管苗由无菌向有菌过度，然后进行移栽。

6．生长素类在植物组培中有何主要作用？并简述其稳定性与溶解性？

作用：在组织培养中，生长素主要用于诱导愈伤组织形成，促进根的生长。此外，协助细胞分裂素促进细胞分裂和伸长。

稳定性：天然的生长素热稳定性差，高温高压或受光条件易被破坏。在植物体内也易受到体内酶的分解。组织培养中常用人工合成的生长素类物质。图3-5生长素类

除了IAA外，其他生长调节剂对热和光均稳定。

溶解性：生长素类多溶于酒精、丙酮等有机溶剂。配制母液时多用稀NaOH溶液助溶，然后用蒸馏水定容。生长素类常配成0.1mg/ml～0.5 mg/ml的母液贮于冰箱中备用。

7．细胞分裂素类在植物组培中有何主要作用？并简述其稳定性与溶解性？

作用：①抑制顶端优势，促进侧芽的生长。当组织内细胞分裂素／生长素的比值高时，诱导愈伤组织或器官分化出不定芽；②促进细胞分裂与扩大，延缓衰老；③抑制根的分化。因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化、茎、苗的增殖，而避免在生根培养时使用。

③稳定性与溶解性所有细胞分裂素对光、稀酸和热均稳定。但它的溶液在常温中时间长了会丧失活性。能溶解于稀酸和稀碱中，所以在配制常用稀HCl助溶，然后用蒸馏水定容。在植物组培中常配制成1 mg/ml，贮藏在低温环境中。

8．简述活性炭在植物组培中的作用？

加入活性炭的目的主要是利用其吸附性，减少一些有害物质的不利影响，例如能吸附一些酚类物质，可减轻组织的褐化（这在兰花组培中效果很明显）。其次，活性炭能使培养基变黑，有利于某些植物生根。再次，发现0.3%活性炭能降低玻璃化苗的发生率；最后还发现活性炭能恢复胡萝卜悬浮培养细胞胚状体的发生能力。

9．灭菌与消毒有何区别？

灭菌与消毒的主要区别在于前者的杀菌强烈，杀死所有活细胞；后者作用缓和，主要杀死或抑制附在植物材料表面的微生物但芽胞、厚垣孢子一般不会死亡。但灭菌与消毒是相对的，如果消毒时间过长或消毒剂浓度过高，也可杀死全部活的细胞，这时，消毒就成为灭菌了。反之，灭菌剂只能起到消毒作用。

10．试管苗移栽成活率低的原因有哪些？

(1)内因内因主要有植物种类与试管苗的质量。不同种类的植物，移栽成活率不同，如菊花、薰衣草试管苗对移栽的条件要求不高，容易成活；而仙客来试管苗对移栽的条件较苛刻，稍不小心，就会引起大量死亡。此外，试管苗细长、黄化、根系发育不良，移栽时极易死亡。而试管苗叶片浓绿、茎粗壮、根系发达及长势好则容易成活。

(2)外因外因主要有环境条件、管理措施及管理人员的责任心。

A、环境条件不适如基质湿度过大引起烂根或水分不足使小苗萎蔫；温度过高加上高湿则极易引起烂苗和烂根，温度过低则使组培苗根系生长缓慢，形成僵苗，同时低温也会直接造成幼苗死亡。此外，光照过强易引起过苗度失水而死亡等。

B、管理粗放有些管理人员技术水平低、责任心不强、管理粗放，也容易降低试管苗移栽的成活率。

植物组织培养实验基本步骤。。

植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS大量元素母液的配制 将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 、KH2PO4 、 MgSO4·7H2O 、CaCl2·2H2O ，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2、MS微量元素母液的配制 将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4· 4H2O 、ZnSO4·7H2O 、 H3BO3 、KI 、CuSO4·5H2O 、CoCl2·6H2O ，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3、MS铁盐母液配制 将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：称

FeSO4·7H2O 和Na2·EDTA ，把FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4、MS有机化合物母液的配制 将有机化合物配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：肌醇、维生素B1 、烟酸、甘氨酸、维生素B6 、蔗糖，用蒸馏水依次溶解并定容至500ml后，转入500ml 细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 二、植物激素的配置 常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、 1、生长素类： （1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织

(医疗药品)药用植物组织培养实验指导

甘肃农业大学农学院 药用植物组织培养实验指导 柳福智编 农学院中草药栽培与鉴定教研室 2007年8月 前言 药用植物组织培养实验是根据中草药栽培与鉴定专业的培养要求，为学生开设的一门实验课程。药用植物组织培养实验的任务是使学生加深对药用植物组织培养基本理论的理解，掌握药用植物组织培养实验的基本操作技能，学习药用植物组织培养实验的基本知识，养成严格、认真和实事求是的科学态度，提高观察、分析和解决问题的能力，为将来参加工作打下良好的基础。 编者 2007年8月 学生实验守则 1、实验前认真预习，领会实验原理，明确本次实验的目的和要求，了解实验步骤和注意事项。

2、实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，认真记录有关数据。 3、要认真写好实验报告，实验报告要清楚、简练、整洁。 4、学生进入实验室必须严格遵守实验室规则，服从带教老师的指导。 5、爱护实验室的仪器设备，不准将实验室的仪器设备私自带出室外。 6、严格遵守操作规程及实验时应注意的事项，在使用不熟悉其性能的仪器和药品之前，应查阅有关资料或请教指导教师，不要随意进行实验，以免损坏仪器，浪费试剂，使实验失败，更重要的是预防发生意外事故。 7、实验过程中应注意防火灾、防爆炸、防腐蚀、防污染工作，牢固树立“安全第一”意识。 8、实验结束后，一切仪器试剂应放回原处，玻璃仪器要清洗干净，一些有毒、有腐蚀性的废液应倒入废液缸内。 9、实验台面要擦试干净，由值日生负责安全卫生工作，包括清理实验室，检查水、电的开关，清除垃圾和污物，关好门窗后方可离开实验室。 药用植物组织培养实验报告一般包括以下内容和要求： （1）实验名称、实验日期。 （2）实验目的写明通过本实验要达到的训练目的。

植物组织培养实验室 组培室 规划设计

植物组织培养实验室组培室规划设计 一、实验室要求理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染 源的地方，最好在常年主风向的上风方向，尽量减少污染。规模化生产的组织 培养实验室最好建在交通方便的地方，便于培养产品的运送。实验室的建设均 需考虑两个方面的问题：一是所从事的实验的性质，即是生产性的还是研究性的，是基本层次的还是较高层次的；二是实验室的规模，规模主要取决于经费 和实验性质。无论实验室的性质和规模如何，实验室设置的基本原则是：科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足3个基本的需要：实验准备(培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌)、无菌操作和控制培养。此外，还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施，使实验室 更加完善。在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的 设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规 模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养实验室时，应按组织培养 程序来没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格 无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同 时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。二、实验室组成(一)基本实 验室基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，是 组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产，年产4万-20万， 需3-4间实验用房，总面积60平方米。1、准备室(化学实验室)功能：又叫化 学实验室，进行一切与实验有关的准备工作：完成所使用的各种药品的贮备、 称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养 材料的预处理等。要求：最好有20平方米左右。要求宽敞明亮、以便于放置多个实验台和相关设备，方便多人同时工作；同时要求通风条件好，便于气体交换；实验室地面应便于清洁，并应进行防滑处理。分类：分体式-研究性质实验室，分开的若干房间将准备室分解为药品贮藏室、培养基配制与洗涤室和灭菌 室等，功能明确，便于管理，但不适于大规模生产。通间式-规模化实验室，准备室一般设计成大的通间，使试验操作的各个环节在同一房间内按程序完成。 准备试验的过程在同一空间进行，便于程序化操作与管理，试验中减少各环节 间的衔接时间，从而提高工作效率。此外还便于培养基配制、分装和灭菌的自

扬州市植物组织培养实验室建设指导方案

扬州市植物组织培养实验室建设指导方案 （试行） 一、建设目的 植物组织培养是20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。在快速繁育、种苗脱毒、远缘杂交、突变育种、基因工程和生物制品等方面都得到了应用。植物组织培养技术涉及到多项高中生命科学课程中的基础知识，例如：细胞全能性原理、细胞增殖、细胞分化、植物激素及生命的基本元素和物质等。在生物选修一《生物技术》教材中，组织培养已经作为一个专题实验，成为高中升学考试的一个考点。组织培养作为一项生物技术，它对学生的动手能力和科学素养都提出新的要求，使学生能够在知识层面、能力层面和情感层面上达到了全面的拓展。 二、建设要求 组织培养实验室面积一般为96-120平方米，学生实验依据无菌间超净工作台的多少分组进行，原则上6~8人一组。 组织培养实验基于对无菌条件的严格要求，由准备室、缓冲间、无菌室、培养室和炼苗室四部分组成。 1、准备室 功能：进行一切与实验有关的准备工作。完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。 设备：准备室应具备实验边台、药品柜、水池、仪器、药品、天平、纯水机（制作组织培养基用水）、酸度计、烘干箱、高压灭菌锅、超声波清洗器及常用的培养基配制用玻璃仪器等。 2、缓冲间 功能：是进入无菌室前的一个缓冲场地，减少人体从外界带入的尘埃等污染物。 要求：缓冲间需5～8平方米，保持清洁无菌。缓冲间需安装紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。 3、无菌间 功能：也叫接种室，主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序，是植物离体培养研究或生产中最关键的一步。

植物组织培养实验设计及.doc

植物组织培养实验设计及 常用设备的使用与维护 一．实验目的 1.熟悉植物组织培养实验室的组成及设备 2.掌握植物组织培养实验室的设计要求 3.熟悉植物组织培养所需的仪器设备 二．实验原理 植物组织培养是通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。要达到无菌操作和无菌培养，就需要人为创造无菌的环境，使用无菌的器皿及器械，同时还需要人工控制的温度,光照，湿度等培养条件。无菌环境和培养条件的创造需要一定的设施及设备。 三．实验步骤 1.实验室的设计要求 功能齐全、布局合理、环境清洁、易于灭菌 2.实验室的组成及功能 实验室的组成： 洗涤室、药品室、称量室、培养基配制室、灭菌室、接种室、培养室、观察记录室、储藏室、移苗室 实验室的功能： 洗涤室用于玻璃器皿、实验用具的清洗、干燥、培养材料清洗、预处理也可在本室完成。室内应建造大型水槽和一个或几个浸泡

池，水槽最好上一内衬白瓷片的水泥槽，为防止碰坏玻璃器皿，下面可铺一活动的橡胶板。备有晾瓶架，用于放置刷净的培养器皿，配备有一定数量的周转盘或小推车，用于运输培养器皿。地面要注意防滑，排水通畅，墙壁要有耐湿、防潮功能。 药品室用于存放各种药品试剂。室内要求干燥、通风，避免光照，配有药品柜、冰箱等设备。化学试剂物品分类存放于柜中，有毒物质如升汞需要专人密封保存。原药可室温下存放，配好的母液，宜置于4℃冰箱中保存。药品室紧邻称量室较好，便于工作。 称量室进行化学药品的称量。要求干燥、密闭，无直射光照，避免腐蚀性药品和水气直接接触。有固定的水磨石平台，安放普通天平、精密天平和分析天平，要有电源插座，最好设计在阴面的房间，这样对怕光药品的保存和称量有利，称量室紧邻培养基配制室较好，以方便配制母液和培养基。房间较少时，可以与药品室合二为一。 培养基配制室主要进行母液的配制，培养基的配制、分装、包扎和灭菌前的暂时存放。在条件允许下，面积宜大不宜小，室内应有大型实验台。配有电炉、锅子、量具、培养基分装器具、吸管、培养容器、水浴锅和酸度计等。如规模较小，可与洗涤室、灭菌室合并在一起。

植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020

院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号 姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。 植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件

把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加

植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告 一实验目的 让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 二实验原理 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（IAA ）和 6 –苄基氨基腺嘌呤（6 – BA ）的比例，决定了根和芽的分化。 三实验器材 （一）试剂 乙醇、IAA 或 2 ，4 – D 、HgCl 2 （或次氯酸钠）、6- 苄基氨基腺嘌呤（6-BA ） MS 培养基 （二）仪器设备 培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等 三实验步骤 1. 配制培养基 （1 ）愈伤组织诱导培养基：MS 培养基（蔗糖含量为10 g/L ，2,4 – D 含量为 2 mg/L ，琼脂10 g/L ）。 （2 ）试验培养基：在MS 培养基中按表33 – 1 加入IAA 和6–BA 。 吲哚乙酸先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解，6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。 2. 培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL 三角烧瓶中，每瓶约20 mL 。待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，

植物组织培养实验报告

如对你有帮助，请购买下载打赏，谢谢！ 院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件 把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加入复杂的有机成分；微量元素种类全，浓度高。这类培养基是目前使用最广泛的培养基。 6.生长调节物质 包括天然植物激素额人工激素类似物。植物激素是一类植物自身合成、同时对其生长发育具有重要调节作用的有机化合物。生长调节物质对于离题培养中的细胞分裂分

植物组织培养实验室(组培室)规划设计

植物组织培养实验室 (组培室规划设计 2009年 05月 31日星期日 10:18一、实验室要求 理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方, 最好在常年主风向的上风方向, 尽量减少污染。规模化生产的组织培养实验室最好建在交通方便的地方, 便于培养产品的运送。 实验室的建设均需考虑两个方面的问题:一是所从事的实验的性质, 即是生产性的还是研究性的, 是基本层次的还是较高层次的; 二是实验室的规模, 规模主要取决于经费和实验性质。 无论实验室的性质和规模如何,实验室设置的基本原则是:科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足 3个基本的需要:实验准备 (培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌、无菌操作和控制培养。此外,还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施,使实验室更加完善。 在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解, 以便因地制宜地利用现有房屋, 或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时, 应按组织培养程序来没计, 避免某些环节倒排, 引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件, 需要一定的设备、器材和用具, 同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 二、实验室组成 (一基本实验室 基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间,是组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产,年产 4万 -20万, 需 3-4间实验用房,总面积 60平方米。

《植物组织培养》课程标准

《园林植物组织培养》课程标准 适用专业：园林技术、烟草栽培技术 第一部分前言 植物组织培养是在无菌条件下，将离体的植物材料（器官、组织、细胞、原生质体等）培养在人工控制的条件下，使其再生形成完整植株的技术。进入21世纪，生物技术发展迅猛，在植物生产中的应用愈来愈多，植物组织培养也成为生产中不可或缺的一种手段。基于工作过程的《植物组织培养》课程开发与设计，坚持以服务为宗旨，以就业为导向，直接面向生产实践，构建学校与企业供需和谐的技术平台，通过分解组培工作过程能力，将组培企业生产环节模块化，工作过程项目化、任务化，采用多种教学方法与手段，培养具有敬业精神和协作能力的专业技术人才。 一、课程性质 《植物组织培养》是园林技术、烟草栽培技术专业学习领域中的专业核心技术课程，是基于植物组织培养生产过程，突出培养学生组织培养操作技能应用的一门工学结合的课程。 本课程重视实践能力的培养，强调通过项目实战、理论与实训一体等方法，激励学生主动思考和大胆实践，进而形成积极的职业态度和和熟练的职业能力。 该课程以《植物及植物生理》、《植物生长与环境》等为前导课程，学习完本课程，学生直接进入顶岗实习阶段，在园林技术专业职业能力培养中起到了明显的支撑作用。 二、课程设计思路 围绕“工学结合，能力为本”的理念，通过校企合作，共同开发，根据组培具体工作岗位的典型工作任务，依照岗位对组培工作的职业能力要求，兼顾学生未来的可持续发展，运用项目引导教学、现场教学、企业实景教学等多种教学方法和手段，以培养学生组培职业工作能力为重点，选取教学内容。 1、面向职业岗位，注重素质结构 本课程是面向组培企业培养基制作工、组织培养接种工和组培苗驯化管理员3个岗位的需要，培养掌握组培核心职业能力的专业人才，提倡在全面素质结构基础上培养职业能力。 2、基于工作过程，建立职场环境 根据组培工作的内容，依照一般组培的工作流程，组织课程内容。依托“洋兰组培生产任务”、“铁皮石斛有机基质无土栽培技术研究”等课题，充分利用真实职业环境，组织参与真实职业活动，积累经验，锻炼学生的心智，培养学生合作共事能力，并使学生熟练掌握职业所需的主要知识、技能、态度和关键能力。 3、采用项目途径，开展体验参与 本课程构建“教、学、做一体”教学模式，以项目为载体，让学生在教师的指导下，通过实践、参与和合作等方式，实现项目目标，感受成功。在学习过程中进行情感和策略调整，以形成积极的学习态度，促进职业能力的提高。 4、注重过程评价，促进学生发展 建立能激励学生学习兴趣和自主学习能力发展的评价体系。注重学生学习的积极性和自信心。评价要有利于促进学生综合能力和健康人格的发展，促进教师不断提高教育教学水平，促进本课程的不断发展与完善。

植物组织培养实验参考答案9

植物组织培养实验复习题 一、名词解释 1、大量元素:指含量占生物总重量万分之一以上的元素，包括C、H、O、N、P、S、K、C、Mg等。 2、微量元素:含量占生物总重量万分之一以下的元素。 3、植物生长调节剂:人工合成的对植物的生长发育有调节作用的化学物质。 4、外植体：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官 5、细胞全能性：植物体的每个细胞都含有该植物全部的遗传信息。 6、基础培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配置的营养基质。 7、愈伤组织:人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。 8、褐变:植物组织中多酚氧化酶被激活，使酚类物被氧化成醌类物，可抑制其他酶活性，毒害外植体。 9、茎尖脱毒:茎尖分生区的病毒传播速度很慢，利用茎尖组培获得无病毒苗，来达到脱毒的目的。 10、不定芽：凡从叶、根或芽节间或是离体培养的愈伤组织上等通常不形成芽的部位生出的芽。 11、污染率：污染数除以接种数，再乘以100%。 12、诱导率：愈伤数除以未污染数，再乘以100%。 13、成活率：成活数除以未污染数，再乘以100%。 14、接种：将表面消毒的外植体转接到无菌的培养基上的过程。 15、消毒：消灭材料上的病菌（不损伤植物材料）。 16、灭菌：利用物理或化学的方法，达到组织培养所学的无菌环境。 17、母液：欲配培养液的浓缩液。 18、无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要危害病毒在植物内的存在表现为阴性反应的苗木。 19、植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，培养在无菌培养基上和人工控制的环境中，使其生长、分化、增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。 20快速繁殖：采取培养基配制，材料灭菌，无菌培养，幼苗转移到苗床，成苗转至大田栽种五步走的繁殖培养方式 21、继代培养：继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上的培养方式。 22、生根培养：将长到一定长度的微枝（>10mm）转移到生根培养基上培养。 23、玻璃化现象：试管苗的茎叶变成透明水渍状，生长畸形，增殖系数明显下降，难以诱导生根，即使诱导生根，其根系质量极差，移栽成活率极低。 24、暗培养： 25、液体培养：将所需培养物的悬浮液在液体培养基中培养的方法。 26、脱分化：一个成熟细胞回复到分生状态或胚性细胞状态的现象。 27、分化：由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变或发育方式改变的过程。 28、热处理脱毒：利用高温下使植物组织中的病毒部分钝化或完全失去活性的方法。 1 / 6 29、微尖嫁接技术：把极小（<0.2mm）的茎尖作为接穗嫁接到实生砧木上（无菌种子培养获无菌

第五章 植物组织培养技术实验方案

第五章植物组织培养技术 一、植物组织培养中的基本概念 (1) 植物组织培养技术: 在无菌培养的条件下，将离体的植物器官（根，茎，叶，花，果实等）、组织（形成层，花药组织等）、细胞（体细胞，生殖细胞等）以及原生质体等培养在人工配制的培养基上，并给予适当的培养条件，使其长成完整植株的过程。 (2) 理论依据： 植物细胞的全能性，即指植物机体的每个细胞都含有该物种全套的基因组，具有发育成完整个体的潜力。 (3) 外植体： 从活体植株上切下的，用于组织培养的细胞、组织和器官。一般包括茎尖、根、茎、叶、花、种子等器官以及他们形成的体细胞胚等材料。 (4) 分化： 在个体发育过程中，由一种相同的细胞类型经细胞分裂后逐渐在形态、结构和功能上形成稳定性差异，产生不同的细胞类群的过程称为细胞分化。 (5) 脱分化： 已经高度分化的植物器官、组织或细胞，在切割损伤和培养物内外因素的共同作用下，逐渐丧失原来的分化结构和功能，最后形成无组织的细胞团或愈伤组织的过程。 (6) 愈伤组织： 在人工培养基上由外植体脱分化形成的一团无序生长的薄壁细胞。（具有细胞分裂能力）。 (7) 再分化： 已经脱分化的细胞在一定条件下，又可经过愈伤组织或胚状体，再分化出根和芽，形成完整植株，这一过程叫作再分化。 (8) 不定芽： 在高等植物正常的个体发育中，芽一般是只从茎尖或叶腋等的一定位置生出。所以这种象顶芽、腋芽、副芽等均在一定部位生出的芽，称为定芽。与此相反，凡从叶、根、或茎节间等通常不形成芽的部位生出的芽，则统称为不定芽。 (9) 胚状体： 在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。 二、植物组织培养过程（菊花为例） 1、培养基的配制: 方法：培养基干粉配制法 称取培养基干粉42g加水加热煮沸溶解后定溶至1L，按照需要的浓度分别加入激素。 （其中生根用的植物激素NAA为0.2mg/1000ml） 用1mol/L NaOH和1mol/L HCl调节pH至5.8。将配好的培养基迅速分装至150ml组培瓶中，拧上盖子，放入灭菌锅121℃，灭菌20min。 2、菊花接种与培养：

植物组织培养试验

《植物组织培养技术》实验指导 实验一组培室设备参观及器皿的洗涤和灭菌 一、目的要求： 1．通过参观，了解组织培养室的几个主要组成部分和各部分应有的基本设备以及有关仪器的用途与功能。 2．通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。 二、材料用具： 高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、双筒解剖镜、酸度测定仪、空调机、控温仪、百分之一与万分之一天平、电炉、玻璃器皿（试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯），以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪，肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。三、说明： 在进行各类具体的组培实验前，首先了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的，总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。 植物组织培养是一项十分细致的工作，为了保证植物外植体不受污染，第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒，使它们保持无菌状态，

做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，因此每个学生必须学好这套基本功。 四、方法和步骤： 首先在老师带领下参观组培室，并听取讲解，然后配制洗液，称取工业用重铬酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml 粗制浓硫酸（或废硫酸）配好的溶液呈红色，铬酸洗液是一种强氧化剂，去污能力强，但玻璃器皿上沾有油脂、凡士林、石蜡等则用此液无效，铬酸洗液可反复使用，直到溶液呈青褐色为止。此溶液腐蚀性强，洗涤时需注意。 每人清洗部分玻璃器皿，方法：清水洗净→泡入洗衣粉水溶液中进行洗刷→清水反复冲洗→蒸馏水淋一遍→烘干备用。 然后清洗部分较脏的玻璃器皿，方法：采用先碱后酸，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净→晾干→侵入酪酸洗液，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定→清水反复冲洗干净→蒸馏水淋洗一遍→烘干备用。 带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时，再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。 对器皿和用具进行高压灭菌，即用手提式高压灭菌锅，在1.1个大气压下保持15~20分钟。解剖刀、手术剪、解剖针、镊子等用具在接

植物组织培养技术实验

《植物组织培养技术》课程 实验实训教学大纲 (2004级食用菌与蔬菜专业适用) 生物工程与农业经济系 濮阳职业技术学院 2005年9月

说明 本大纲是根据2004级三年制食用菌与蔬菜专业教学计划而制订的。一、课程性质和任务 植物组织培养技术实验实训课程是食用菌与蔬菜专业专业的主要专业基础课程之一。 植物组织培养是在无菌条件下，利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞和原生质体进行培养的技术，是现代生物技术的核心技术之一。在植物的优良品种快速繁殖，脱毒苗木生产、缩短育种进程、种质资源保存等方面具有其它技术无法比拟的优势。 植物组培实验实训课程的教学任务在于使学生掌握组织培养的基本操 作技能和技巧，为进一步开展组培实训及从事组织培养工作奠定基础。 为适应高职高专教育改革的要求、突出高职高专教育的特点，适应本地农村产业结构调整的需要，本大纲以2003年的教学大纲为蓝本，在教学内容上进行了调整。 2、本课程教学的基本内容： 本课程是一门理论性、技术性和实践性强的的课程，通过本课程的学习，要求学生掌握植物组织培养基础知识、基本理论和基本技术。重点是植物的快速繁殖技术和组培苗工厂化生产技术。并紧紧围绕培养高等应用型技术人才，以强化技术应用能力培养为主线，着眼于培养学生应职岗位综合能力和创新精神，提高学生实践动手能力、科学实验能力、技术推广与市场开拓能力和组培苗工厂化生产经营与组织管理能力。 3、内容安排与学时分配 本大纲将教学内容分为实验教学、实训教学两个模块。实验教学结合理论讲授，在第三学期开设，共22学时。实训教学在第三、四学期开设，每学期为期一周。具体教学内容和学时分配见下表：

植物组培实验个人总结

植物组培实验个人总结 一、项目简介 我们在实验中以植物为研究对象，通过对它们进行组织培养来观察植物的生长状况、激素对植物的促进作用、植物的褐化以及对它的改良等等。我们最初是对柳树、紫玉兰和栀子花这三个易于培养的植物进行实验，探索培养植物的方法以及如何能减少褐化。等到技术熟练后我们会开始进行一些与人们健康息息相关的植物的研究，去探索如何如何能够用最低的成本使得我们的植物成活以及对它们进一步的应用。 二、本人在项目研究中承担的工作及发挥的作用 本人在此次大学生创新性实验当中主要负责的是进行培养基的配制和植物的接种工作。培养基在配制过程中需要准确的数据，所以在配制培养基时需要较长的时间。我们现在进行的实验中我自己主要进行的是对母液和激素的称取以及植物的接种。我们现在正在锻炼自己对植物培养的技术性。并且，我们每个人需要对培养基配制和接种工作非常熟练，再去进行下一步更深入的工作。从我们称取药品开始到培养基灭菌结束共需要10小时左右时间，因此我们团队需要协商好每个人负责的项目。同时，由于我们团队的成员并非同一班级，我们需要把时间分配好，以免造成时间的盲区从而导致植物没人照看而出现问题。由于实验数据的准确性直接关系实验结果的测定，因此在本实验中占有重要的地位，测定过程中要求有很好的理论知识的基础和动手实际的能力，并且注重责任感。所以在实验的初期，查阅各种相关文献资料，了解实验注意事项，深刻理解实验原理，熟悉实验操作步骤，分析实验中可能遇到的问题和影响实验结果的因素。在实验初期制定实验规划，整理实验思路，过程中不断适当调整。积极配合其他成员完成实验。实验结束后，整理实验仪器，清洗实验器材。对实验的全过程认真负责，积极动手，遵守正确的实验要求。对此次实验的成功也发挥积极的作用。

高中生物《植物组织培养》优质课教案、教学设计

人教版高中生物选修一《植物的组织培养技术》教学设计一、项目目标 （一）知识目标 1.掌握植物组织培养技术的基础知识：植物组织培养的概念、类型、培养基成分。 2.理解植物组织培养技术的基本原理：植株的再生性、植物细胞的全能性、植物生长调节剂对植物器官形成的作用等。 3. 熟练基本工作程序：培养基配制、外植体选择、外植体灭菌、诱导培养、增殖培养、生根培养、驯化移栽。 （二）学科能力目标 1. 充分利用提供的资源，形成快速阅读并收集和分析资料的能力。 2. 能够在教师的指导下根据所选课题自主设计实验，并写出包含实验设计、实验过程与安排和结果分析等内容在内的实验报告。 3. 掌握植物组织培养实验室的基本结构及仪器设备使用规范。 4. 掌握培养基的配制方法及无菌操作技术规范，能够准确说出实验流程。

5.探究不同因素对组培实验的影响，并能够对实验中出现现象进行尝试性解释。提高学生的创新能力与自主探究能力。 6.了解植物组织培养产业链，根据组培植物的培养条件及生活习性对学校光伏大棚进行规划设计。培养学生的校园主人翁意识与社会责任。 7.进行植物组织培养文化产品的设计与制作。 （三）素养目标 1.能运用科学的思维方式解决现实问题，独立思考，勇于探索，逐步形成科学思维。 2.在观察组培植物生长的过程中，激发学生热爱自然、热爱科学的情感与兴趣，培养学生的生命观念。 3.在参与实验、现象观察、数据调研的过程中，发现问题、解决问题提高科学探究素养、创新意识和创新能力。 4.结合植物组织培养的生产实际，帮助学生深刻体会生物学在生产实践中的应用。

5. 超长战线的实验使学生彼此交流沟通，分工合作，集体观念和团队精神增强。在师生之间、学生之间实现智慧和友谊的碰撞与交流。 二、项目教学重、难点 1. 学习重点：植物组织培养技术的过程和应用。 2. 学习难点：植物组织培养过程中各环节的条件。 三、项目教学策略和方法 1. 教学策略：启发式教学策略、探究式教学策略、反馈式教学策略 2. 教学方法：讲授法、实验法、多媒体演示法、归纳法、比较法、体验法、合作教学法 四、项目教学过程 任务一：植物组织培养概述与基础理论 1. 阅读植物组织培养文献资料。（课下） 2. 学习植物组织培养概述、基本操作流程及植物组织培养的应用。（课上） 3. 参观青岛农业大学植物组培实验室。（课下）

植物组织培养实验报告

院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号17130208 姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件 把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加入复杂的有机成分；微量元素种类全，浓度高。这类培养基是目前使用最广泛的培养基。 6.生长调节物质 包括天然植物激素额人工激素类似物。植物激素是一类植物自身合成、同时对其生长发育具有重要调节作用的有机化合物。生长调节物质对于离题培养中的细胞分裂分化、器官形成和个体再生等均起着重要而明显的调节作用。一般来说，基本培养基只能保证培养物的生存，维持其最低的生理活动，而只有植物激素的配合使用，才能完成离体培养物中按照需要设计的各个调节环节。常用的植物组培激素种类主要有生长素类、细胞分裂素类、赤霉素。

植物组织培养实验及实习指导

植物组织培养实验及实习指导 杨玲编 西南林学院生物技术教研室

目录 实验一、母液的配制和保存 (2) 实验二、培养基的配制与灭菌 (5) 实验三、外植体消毒与初代培养的建立 (7) 实验四、继代与增殖培养 (9) 实验五、生根培养 (1) 1 实验六、植物茎尖脱毒培养 (1) 3 实习试管苗的炼苗与移栽 (1) 5

实验一、母液的配制和保存 一、实验目的 通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。 二、原理 配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存。使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。 以MS培养基为例，所需配制的母液为：大量元素母液（母液Ⅰ，浓缩20倍）、微量元素母液（母液Ⅱ，浓缩200倍）、铁盐母液（母液Ⅲ，浓缩200倍）和有机化合物母液（母液Ⅳ，浓缩200倍）等。 三、实验材料、试剂和仪器设备 1．试剂 NH 4NO 3 , KNO 3 , CaCl 2 ·2H 2 O, MgSO 4 ·7H 2 O, KH 2 PO 4 , KI, H 2 BO 3 ， MnSO 4 ·4H 2 O, ZnSO 4·7H 2 O, Na 2 ·MoO 4 ·2H 2 O, CuSO 4 ·5H 2 O, CoCl 2 ·6H 2 O, Na 2 ?EDTA?2 H 2O，FeSO 4 ·7H 2 O，烟酸，甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇, 蒸馏水 2．仪器设备 冰箱，天平，酸度计或pH试纸，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1 000ml，100ml，25ml)，容量瓶(1000ml，500ml，100ml)，磨口试剂瓶(500ml，1 000ml)，药勺、称量纸、酸度计或pH试纸，滴管、玻璃棒，电炉，微波炉 四、实验方法 1.大量元素母液的配制

【精品】植物细胞组织培养技术实验指导书

T 植物细胞组织培养技术实验指导书 中国计量学院生命科学学院 二零零六年七月 《植物细胞组织培养》实验指导

目录 实验一、植物组织培养培养基母液的配制实验二、植物组织培养的培养基配制 实验三、康乃馨的离体快繁 实验四、胡萝卜愈伤组织的建立 实验五、组织培养物的继代培养

一、实验一组织培养基母液的配制 一、仪器及药品 冰箱、天平（0。0001g） 容量瓶:1000ml,500ml、250ml、100ml、25ml 广口储液瓶:500ml、250ml、50ml、25ml 烧杯：1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml 数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺 标签纸、胶水、50％酒精、95％酒精、1mol/L盐酸、1mol/LNaOH 几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等 药品 蒸馏水 二、方法和步骤： 按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素 培养基各种母液的配制步骤如下: 分类,每一类中各种药品分别称量,如N 6 大量元素母液：包括用量较大的几种化合物〈见N 培养基配方〉，按表中 6 排列顺序，将每种药品的用量扩大10倍,分别称取，分别溶解，然后按照顺序混合在一起。如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容，最后加上蒸馏

水,定容至1升或500毫升。在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃搅棒以减少误差。定容后的溶液为大量元素母液,配制培养基时，每配1L培养基需吸取该母液l00ml或50ml。 微量元素母液:因用量少，为了称量精确和方便,常配成100倍或1000倍的母液，即每种药品扩大l00倍或者l000倍。逐个溶解，混合在一起成为微量元素母液，每配1LN 6 培养基需吸取该母液10ml或者1ml。 铁盐：在N 6培养基中需要单独配制,它是由硫酸亚铁(FeSO 4 ?7H 2 O）2.78 g和 乙二氨四乙酸二钠(Na 2 —EDTA）3.73 g，分别溶解，混合后,用酒精灯加热半小 时以上，冷却后定容至1 L。冰箱过夜贮藏无结晶析出，否则重新配制。每配l 升N 6 培养基需加该铁盐母液5ml.