硫酸铵沉淀蛋白质方法

硫酸铵沉淀蛋白质方法硫酸铵沉淀蛋白质方法是一种常用的蛋白质纯化方法，通常被用于分离和浓缩蛋白质。本文将从硫酸铵沉淀蛋白质的原理、步骤、优缺点及注意事项等方面进行介绍。

一、硫酸铵沉淀蛋白质原理

硫酸铵沉淀蛋白质法是根据不同蛋白质在一定盐度和pH 值下的溶解度差异而进行的蛋白质分离、富集和纯化方法。在适宜的浓度下，硫酸铵可使一些蛋白质（多为大分子蛋白质）发生酸性沉淀，而不影响小分子的低分子量蛋白质。这是因为硫酸铵分子从溶液与蛋白质结合，降低蛋白质的有效离子浓度，使蛋白质失去溶解度而发生沉淀。

二、硫酸铵沉淀蛋白质步骤

硫酸铵沉淀蛋白质的步骤大致分为预处理、沉淀和洗涤、脱盐和保存等步骤。

1. 预处理

将待纯化的样品通过超声波或搅拌等方法打散，去除杂质，并加入适量的缓冲液进行 pH 值的调节。调节 pH 值的考虑因素包括离子强度、盐度、亲水性等。

2. 沉淀和洗涤

加入硫酸铵至搅拌后样品中，反复搅拌，将待纯化的蛋白质沉淀出来。这其中的具体步骤可在下文中详细介绍。

待沉淀后进行洗涤处理，以去除杂质和溶质，获得较纯的蛋白质。

3. 脱盐和保存

向蛋白质样品中加入脱盐液，进行脱盐，使蛋白质完全溶解。将蛋白质溶液过滤并保存。

三、硫酸铵沉淀蛋白质优缺点

优点：

1. 适用性广，大多数蛋白质都可以通过硫酸铵沉淀方法来纯化。

2. 操作简单，不需要高级技术和设备。

3. 此方法不会破坏蛋白质的天然结构和功能性。

缺点：

1. 蛋白质沉淀不纯，沉淀物中可能含有许多不同的蛋白质，同时有许多不溶性物质，需要进行再次分离。

2. 操作难度在某些情况下会受到蛋白质和样品特性的限制。

四、硫酸铵沉淀蛋白质注意事项

1. 操作中需严格控制缓冲液的 pH 值，保证硫酸铵完全溶解。

2. 反复搅拌时需小心操作，以免造成样品的脱失。

3. 沉淀和洗涤处理时需要保持低温，以孕育样品质量。

4. 注意沉淀物的分离和收集，防止样品中的不溶性溶质附着在上面。

5. 注意保存样品至干燥处。

总之，硫酸铵沉淀法作为一种常用的蛋白质纯化方法，可以广泛应用于生物化学、分子生物学等领域，并且还可以与其他分离和分析方法协同运用，提高分离纯化效果。

硫酸铵分级沉淀

一，基本原理 硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。 二，试剂及仪器 1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等 2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 4 3. 饱和硫酸铵溶液（SAS ） 4. 蒸馏水 5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠) 6. 透析袋 7. 超速离心机 8. pH 计 9. 磁力搅拌器 三，操作步骤 以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% — 50% 。 （一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ） 1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 ° C ）. 2.其它不同饱和度铵溶液的配制 （二）沉淀 1.样品（如腹水）20 000 ′ g 离心30 min ，除去细胞碎片； 2.保留上清液并测量体积； 3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （

4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 ° C ），使蛋白质充分沉淀。（三）透析 1.蛋白质溶液10 000 ′ g 离心30 min （4 ° C ）。弃上清保留沉淀； 2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对 PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 ° C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨； 3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。 四，应用提示 （一）先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。 1.边搅拌边慢慢加SAS 到样品溶液中，使浓度为0.5:1 (v/v) ； 2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或过夜（4 ° C ）； 3.3000 ′ g 离心30 min （4 ° C ），保留上清液；上清液再加SAS 到0.5:1(v/v) ，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS ，同前透析，除去硫酸氨； 4.上清液再加SAS 到0.5:1 (v/v) ，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS ，同前透析，除去硫酸氨； 5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效（二）为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1 ）；硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。 今天作的实验是利用硫酸铵沉淀蛋白质，从之前作过的经验知道，这一个步骤是有名的烦，要慢慢用敲的把硫酸铵缓缓的加入蛋白质溶液中。 相关的原理可以在庄荣辉学习网站中找到，与盐溶刚好相反，在蛋白质溶液中加入硫酸铵，会使得蛋白质的溶解度下降，因而沉淀出来。因为硫酸铵所解离的离子容很大，所带的电子数也多(NH4+, SO42-)，因此当其溶入水中时，会吸引大量水分子与这些离子水合。 蛋白质分子表面多少有一些较不具极性的区域，水分子会在这些非极性区的表面聚集，形成类似『水笼』的构造(请见下图)，以便把蛋白质溶入水中。一旦蛋白质溶液加入硫酸铵，后者吸引了大量水分子，使水笼无法有效隔离蛋白质的非极性区，造成这些非极性区之间的吸引，因而沉淀下来。因此，分子表面上若有越多的非极性区域，就越容易用硫酸铵沉淀下来。 在计算所添加的硫酸铵的重量方面，找到了一个不错的网站——硫酸铵计算机 这个网页上可以靠着输入实验温度、溶液体积、想要到达的百分浓度以及初始的百分浓度这四个数值，就可以得到需要添加的硫酸铵克数，以及在加入固体硫酸铵后所增加的体积，算是一个很不错的网站。 此外另一个比较值得提的，是我有用两种方式加入硫酸铵，第一种是固体的硫酸铵模碎加入，另一种是将硫酸铵溶成饱和溶液再加入，各有各的优缺点，比较如下： 1.造成蛋白质变质的程度：固体的硫酸铵>硫酸铵饱和溶液 利用硫酸铵饱和溶液真的超棒，滴入的速度可以很快而不造成变质(没试过用倒入的)。不像固体的硫酸铵只能磨碎慢慢加入，速度一快蛋白质就坏了(溶液有致密的白色气泡产生)。 2.操作的容易度：硫酸铵饱和溶液>>固体的硫酸铵 固体硫酸铵最大的缺点就是操作不容易，要一直敲敲敲又不能太快，所以当你要溶解的蛋白质很多时，这是很累的步骤。然而硫酸铵饱和溶液比较麻烦只有在配制部分，要先加热让它饱合后，回到操作温度让它过饱和，最后用滤纸把硫酸铵结晶去掉。

硫酸铵沉淀蛋白质方法

硫酸铵沉淀蛋白质方法硫酸铵沉淀蛋白质方法是一种常用的蛋白质纯化方法，通常被用于分离和浓缩蛋白质。本文将从硫酸铵沉淀蛋白质的原理、步骤、优缺点及注意事项等方面进行介绍。 一、硫酸铵沉淀蛋白质原理 硫酸铵沉淀蛋白质法是根据不同蛋白质在一定盐度和pH 值下的溶解度差异而进行的蛋白质分离、富集和纯化方法。在适宜的浓度下，硫酸铵可使一些蛋白质（多为大分子蛋白质）发生酸性沉淀，而不影响小分子的低分子量蛋白质。这是因为硫酸铵分子从溶液与蛋白质结合，降低蛋白质的有效离子浓度，使蛋白质失去溶解度而发生沉淀。 二、硫酸铵沉淀蛋白质步骤 硫酸铵沉淀蛋白质的步骤大致分为预处理、沉淀和洗涤、脱盐和保存等步骤。 1. 预处理 将待纯化的样品通过超声波或搅拌等方法打散，去除杂质，并加入适量的缓冲液进行 pH 值的调节。调节 pH 值的考虑因素包括离子强度、盐度、亲水性等。 2. 沉淀和洗涤

加入硫酸铵至搅拌后样品中，反复搅拌，将待纯化的蛋白质沉淀出来。这其中的具体步骤可在下文中详细介绍。 待沉淀后进行洗涤处理，以去除杂质和溶质，获得较纯的蛋白质。 3. 脱盐和保存 向蛋白质样品中加入脱盐液，进行脱盐，使蛋白质完全溶解。将蛋白质溶液过滤并保存。 三、硫酸铵沉淀蛋白质优缺点 优点： 1. 适用性广，大多数蛋白质都可以通过硫酸铵沉淀方法来纯化。 2. 操作简单，不需要高级技术和设备。 3. 此方法不会破坏蛋白质的天然结构和功能性。 缺点： 1. 蛋白质沉淀不纯，沉淀物中可能含有许多不同的蛋白质，同时有许多不溶性物质，需要进行再次分离。 2. 操作难度在某些情况下会受到蛋白质和样品特性的限制。 四、硫酸铵沉淀蛋白质注意事项 1. 操作中需严格控制缓冲液的 pH 值，保证硫酸铵完全溶解。

硫酸铵沉淀

硫酸铵沉淀： 有生物活性的蛋白一般在做硫胺沉淀的时候要小心一点。最保险的做法是，把硫酸铵配成饱和溶液，把蛋白溶液置于冰浴上，再把饱和硫胺溶液一滴一滴的加到你的蛋白溶液中，最好边加边搅拌，避免局部硫胺浓度过高，但搅拌的时候注意不要搅出气泡。按照你的比例加完之后，最好放冰箱静置至少2h，充分沉淀后离心即可。 4M的硫酸铵pH值为4.6，在这个酸度下可能会有一些蛋白质变性，要小心。硫酸铵会破坏蛋白质水化层，最好是缓和地加入。边加入边搅拌，如果在磁力搅拌器上搅拌，小漩涡中心有很多泡沫就表示蛋白质变性，使得溶液粘度增加，泡沫难破，那就很难保证你的蛋白质有没有变性了。 溶解度，在一定温度下，某固态物质在100g溶剂中达到饱和状态时所溶解的质量， 其单位是“g/100g水”。在未注明的情况下，通常溶解度指的是物质在水里的溶解度。 溶液饱和度(化学) 某种溶液的饱和度是指在100g该溶液中溶质在溶液中所占质量分数.一般情况下，一种溶液的饱和度在同一温度下不会变.要想使不饱和溶液 饱和度增加可以选择增加溶质.在刚好有晶体析出的时候就是溶液刚好饱 和的时候.溶液饱和度不会出现100% 加固体比较好，加得越慢越好。如果加快了，会造成局部浓度过大，造成意想不到的沉淀。

硫酸铵沉淀的时候应该要注意pH值的变化，就我的实验来说，一株产淀粉酶曲霉固态发酵之后用超纯水浸泡离心，得到含有酶的上清液的pH值为6.5，但是淀粉酶能耐受pH4.5，为了去除更多杂质蛋白质，我把硫酸铵浓度调节到2摩尔每升的同时会控制pH值为4.5，4度过夜之后离心取上清液再调节到pH值7.0，4度放置，离心，又去除一部分杂质蛋白质，上清液直接用pH7.0的疏水层析系统来纯化。 一个纤维素酶的纯化我也用类似的方法，只不过第一步是用4.0。 硫酸铵是酸式盐，2M时pH值约为5，4M时更低，用来沉淀蛋白质的时候情况就更复杂了，所以最好知道自己需要的蛋白质的耐受情况，不要搞死了。 透析之前要选用一个不影响自己想要的蛋白质的pH值，硫酸铵沉淀和透析都要保持一致，才能使损失减少。透析时候产生的沉淀不知道是不是你想要的蛋白质，不过下次做最好谨慎一点，做我说过的预备实验。 分段盐析的方法 对分离目的蛋白的盐析，最好采用分段盐析。由于不同的蛋白质其溶解度与等电点不同，沉淀时所需的pH值与离子强度也不相同，改变盐的 浓度与溶液的pH值，可将混合液中的蛋白质分批盐析分开，这种分离蛋 白质的方法称为分段盐析法(fractional saltingout)。如半饱和硫酸铵

蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法

蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析 还能想起那些在荧屏中曾经震撼过我们，具有超能力的英雄么？ 蜘蛛侠，敏捷，灵活迅速飞流直下，忽闪直冲高楼； 绿巨人浩克，力量，速度，耐力，在我们的想象力中膨胀； 还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的美国队长…… 幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物背景出身的我们，总归要锻炼出属于自己的实验技能，即便是相同的实验步骤，每个人做出来的结果也不尽相同，差别在哪？反复练习，用心总结出属于自己的心得，转化为自己的实验“超能力”吧。本文总结了蛋白纯化硫酸铵沉淀详细的实验原理、步骤，供大家参考。 -------锻炼属于我们自己的实验“超能力”之一 我是超级蜘蛛精 看我有劲儿不？ 冲啊，我是美国队长 而我是一只冷静的科研小蜗牛 这次，我们所要分享的便是一种很常见，但是也很重要的蛋白质纯化方法：硫酸铵沉淀蛋白法，一起走进实验室吧。 硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术。蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度

增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的

结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4+、SO42-离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性，因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。 各种不同蛋白质盐析需要不同浓度的硫酸铵溶液。在实验中建议配置不同梯度浓度的硫酸铵溶液来确定蛋白质沉淀所需的最佳浓度。 （1）参照如下表格配置不同浓度的硫酸铵溶液； 例如，在25 ℃条件下，配置饱和度为100 %的硫酸铵溶液，称取767 g的硫酸铵固体，边搅拌边加入到1 L的蒸馏水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸调节pH 到7.0。 （2）沉淀蛋白 将样品离心，去除沉淀，保留上清液并测量体积；一边搅拌一边慢慢的加入硫酸

硫酸铵分级纯化蛋白质原理操作(仅供参照)

硫酸铵分级纯化蛋白质原理操作 硫酸铵分级沉淀蛋白质原理与操作 一，基本原理 硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。 二，试剂及仪器 1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等 2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 4

3. 饱和硫酸铵溶液（SAS ） 4. 蒸馏水 5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠) 6. 透析袋 7. 超速离心机 8. pH 计 9. 磁力搅拌器 三，操作步骤 以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。 （一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ） 1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 °C ）.

2.其它不同饱和度铵溶液的配制 （二）沉淀 1.样品（如腹水）20 000 ′g 离心30 min ，除去细胞碎片； 2.保留上清液并测量体积； 3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （ 4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 °C ），使蛋白质充分沉淀。 （三）透析 1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min （4 °C ）。弃上清保留沉淀； 2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对 PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 °C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨； 3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。 四，应用提示 （一）先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。 1.边搅拌边慢慢加SAS 到样品溶液中，使浓度为0.5:1 (v/v) ； 2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时或过夜（ 4 ° C ）； 3.3000 ′g 离心30 min （4 °C ），保留上清液；上清液再加SAS

硫酸铵沉淀法

抗体的纯化( 硫酸铵沉淀法） 一，基本原理 硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。 二，试剂及仪器 1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等 2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 4 3. 饱和硫酸铵溶液（SAS ） 4. 蒸馏水 5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠) 6. 透析袋 7. 超速离心机 8. pH 计 9. 磁力搅拌器 三，操作步骤 以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ） 1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 °C ）. 2.其它不同饱和度铵溶液的配制 （二）沉淀 1.样品（如腹水）20 000 ′g 离心30 min ，除去细胞碎片； 2.保留上清液并测量体积； 3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （ 4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 °C ），使蛋白质充分沉淀。（三）透析 1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min （4 °C ）。弃上清保留沉淀； 2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对 PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 °C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨； 3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。 四，应用提示 （一）先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。 1.边搅拌边慢慢加SAS 到样品溶液中，使浓度为0.5:1 (v/v) ；

蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法

蛋白纯化硫酸铵沉淀盐 析法 The manuscript was revised on the evening of 2021

蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析 还能想起那些在荧屏中曾经震撼过我们，具有超能力的英雄么？ 蜘蛛侠，敏捷，灵活迅速飞流直下，忽闪直冲高楼； 绿巨人浩克，力量，速度，耐力，在我们的想象力中膨胀； 还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的美国队长…… 幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物背景出身的我们，总归要锻炼出属于自己的实验技能，即便是相同的实验步骤，每个人做出来的结果也不尽相同，差别在哪？反复练习，用心总结出属于自己的心得，转化为自己的实验“超能力”吧。本文总结了蛋白纯化硫酸铵沉淀详细的实验原理、步骤，供大家参考。 -------锻炼属于我们自己的实验“超能力”之一 我是超级蜘蛛精 看我有劲儿不？ 冲啊，我是美国队 而我是一只冷静的科研小蜗牛

这次，我们所要分享的便是一种很常见，但是也很重要的蛋白质纯化方法：硫酸铵沉淀蛋白法，一起走进实验室吧。 硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术。蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4+、SO42-离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性，因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。 各种不同蛋白质盐析需要不同浓度的硫酸铵溶液。在实验中建议配置不同梯度浓度的硫酸铵溶液来确定蛋白质沉淀所需的最佳浓度。 （1）参照如下表格配置不同浓度的硫酸铵溶液； 例如，在25 ℃条件下，配置饱和度为100 %的硫酸铵溶液，称取767 g的硫酸铵固体，边搅拌边加入到1 L的蒸馏水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸调节pH到。 （2）沉淀蛋白

饱和硫酸铵析出的蛋白质

饱和硫酸铵析出的蛋白质 蛋白质是生命中至关重要的分子之一，它们在细胞功能、结构和代谢中发挥着重要的作用。因此，研究蛋白质的性质和特征对于理解生物学过程和开发药物具有重要意义。饱和硫酸铵析出是一种常用的蛋白质分离和富集方法，其基本原理是利用硫酸铵的饱和溶液对蛋白质进行沉淀。 饱和硫酸铵析出法是一种物理分离方法，通过控制溶液中硫酸铵的浓度来使蛋白质发生沉淀。一般而言，蛋白质在高浓度的硫酸铵溶液中溶解度较低，当硫酸铵浓度超过饱和度时，蛋白质会发生沉淀。因此，可以通过逐渐加入硫酸铵饱和溶液的方法来将蛋白质从溶液中分离出来。 饱和硫酸铵析出法的操作步骤相对简单，但是需要注意一些关键因素以确保实验的成功。首先，溶液的pH值是一个重要的参数，一般来说，蛋白质在酸性条件下更容易沉淀。其次，溶液的温度也会影响到实验的结果，一般而言，在低温下进行实验可以提高蛋白质的沉淀效率。此外，硫酸铵的加入速度也需要控制，过快的加入可能导致蛋白质的析出不完全。 饱和硫酸铵析出法的优点之一是可以同时富集多种蛋白质，从而减少后续步骤的操作。此外，该方法对于大部分蛋白质都适用，并且可以在常规实验室条件下进行。然而，由于蛋白质的性质和溶液条

件的不同，该方法可能存在一定的局限性。因此，在实验中需要根据具体的研究目的和样品特点选择合适的分离方法。 除了饱和硫酸铵析出法，还有许多其他的蛋白质富集和分离方法，如离心、凝胶过滤、电泳和亲和层析等。这些方法各有优劣，可以根据研究需求和实验条件选择合适的方法。此外，结合不同的分离方法也可以提高分离效果和纯度。 饱和硫酸铵析出是一种常用的蛋白质分离和富集方法，通过控制硫酸铵溶液的浓度来使蛋白质发生沉淀。该方法操作简单，适用范围广，但在实验中需要注意一些关键因素。对于蛋白质的研究和分析，选择合适的分离方法是非常重要的，可以根据具体的研究目的和样品特点选择合适的方法。蛋白质的研究将有助于我们深入了解生物学过程和开发相关应用。

蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法

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蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法法 还能想起那些在荧屏中曾经震撼过我们，具有超能力的英雄么？ 蜘蛛侠，敏捷，灵活迅速飞流直下，忽闪直冲高楼； 绿巨人浩克，力量，速度，耐力，在我们的想象力中膨胀； 还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的美国队长…… 幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物背景出身的我们，总归要锻炼出属于自己的实验技能，即便是相同的实验步骤，每个人做出来的结果也不尽相同，差别在哪？反复练习，用心总结出属于自己的心得，转化为自己的实验“超能力”吧。本文总结了蛋白纯化硫酸铵沉淀详细的实验原理、步骤，供大家参考。 -------锻炼属于我们自己的实验“超能力”之一 我是超级蜘蛛精 看我有劲儿不？ 而我是一只冷静的科研小蜗牛 冲啊，我是美国队长 这次，我们所要分享的便是一种很常见，但是也很重要的蛋白质纯化方法：硫酸铵沉淀蛋白法，一起走进实验室吧。 硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术。蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4+、SO42-离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性，因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。

蛋白质的沉淀的方法

蛋白质的沉淀的方法 蛋白质的沉淀是蛋白质研究和纯化中非常常见的步骤。蛋白质沉淀的方法有很多种，下面将介绍其中常见的几种方法，并详细说明其原理和操作步骤。 1. 醇类沉淀法： 醇类沉淀法是一种最常见和简便的蛋白质沉淀方法。根据醇类溶液与水的相溶性差异，可以选择合适的醇类使蛋白质沉淀。常用的醇类有乙醇和异丙醇。其原理是在高浓度的醇类溶液中，蛋白质的水合层被破坏，从而使蛋白质失去水溶性沉淀。 操作步骤： (1) 加入适量的醇类溶液到待沉淀的蛋白质溶液中。 (2) 缓慢搅拌溶液，使醇类均匀混合。 (3) 静置溶液一段时间，一般为15-30分钟，使蛋白质完全沉淀。 (4) 用高速离心机将溶液离心，一般为10000-15000 rpm离心5-10分钟。 (5) 倒掉上清液，并用冷浸提剂洗涤沉淀，去除醇类残留。 (6) 轻轻吸去沉淀上的上清液，避免损坏沉淀。 2. 硫酸铵沉淀法： 硫酸铵沉淀法是一种常用于大量蛋白质纯化的方法。硫酸铵具有一定的盐度效应和溶解度效应，可以使蛋白质发生逆相转化，失去溶解性，从而沉淀下来。 操作步骤： (1) 按照一定比例向待沉淀的蛋白质溶液中加入浓度逐渐增大的硫酸铵溶液，并

持续搅拌。 (2) 离心沉淀物，一般为15000 rpm离心10-15分钟。 (3) 去掉上清液，并使用一定量的冷浸提剂洗涤沉淀，去除硫酸铵残留。 (4) 轻轻吸去沉淀上的上清液，避免损坏沉淀。 3. 酸性沉淀法： 酸性沉淀法常用于酸性蛋白质溶液的纯化和富集。通过调节溶液的pH值使蛋白质失去溶解性，并沉淀下来。 操作步骤： (1) 将待沉淀的蛋白质溶液调节为适当的酸性，一般为pH值在4-5之间。 (2) 缓慢搅拌溶液，使溶液均匀混合。 (3) 静置溶液一段时间，一般为30分钟以上，使蛋白质完全沉淀。 (4) 离心沉淀物，一般为10000-15000 rpm离心5-10分钟。 (5) 去掉上清液，并用冷浸提剂洗涤沉淀，去除酸性残留。 (6) 轻轻吸去沉淀上的上清液，避免损坏沉淀。 蛋白质沉淀的方法还有很多种，如盐沉淀法、有机溶剂沉淀法等，根据不同的蛋白质性质和需求选择适合的方法。值得注意的是，沉淀方法虽然能够快速分离和富集蛋白质，但也存在一定程度上蛋白质损伤和纯度降低的问题。因此，在进行蛋白质沉淀时应根据具体实验需求和样品性质选择合适的方法，并结合其他分离和富集技术进行综合利用，以提高纯度和稳定性。

硫酸铵分级沉淀的原理【硫酸铵分级沉淀原理及实验方案】

硫酸铵分级沉淀的原理【硫酸铵分级沉淀 原理及实验方案】 一，基本原理 硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用 此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用 方法。乳酸盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏 蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从氢氧化钠中沉淀出来。 各种脂肪酸的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来氢氧化钾 沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使弯果而应用最为广范。 二，试剂及仪器 1 . 组织培养上清液、血清成品或腹水等 2. 硫酸铵（ NH 4 ） SO 4 3. 饱和硫酸铵溶液（ SAS ） 4. 蒸馏水 5. PBS( 含 0.2g /L 叠氮钠 ) 6. 透析袋 7. 超速离心机 8. pH 计 9. 磁力搅拌器 三，操作步骤

以腹水或组织培养选种上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各 种不同的免疫球蛋白所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分 离抗体的硫酸铵饱和度为 33% — 50% 。 （一）配制饱和硫酸铵溶液（ SAS ） 1.将 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 边蒸馏边慢慢加到 1 升蒸馏水中。用氨水或硫酸吴萸到硫酸pH7.0 。此即饱和度为 100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 ° C ）. 2.其它不同饱和度铵溶液的酿制 （二）沉淀 1.样品（如腹水）20 000 ′ g 离心 30 min ，除去细胞碎片； 2.保留上清液并测量体积； 3.烘烤边搅拌边慢慢加入等体积的 SAS 到上清液中，终浓度为 1 ： 1 （ 4.将溶液磁力放在磁力搅拌器上所搅拌 6 小时或搅拌过夜（ 4 ° C ），使大分子充分沉淀。 （三）透析 1.蛋白质溶液10 000 ′ g 离心 30 min （4 ° C ）。弃上清 保留沉淀； 2.将沉淀溶于少量（ 10-20ml ） PBS -0.2g /L 叠氮钠中。沉淀 溶解后放入透析袋对 PBS -0.2g /L 叠氮钠透析 24-48 小时（4 ° C ），每隔 3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨； 3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。 四，应用提示

蛋白质盐析实验注意事项及实验步骤

蛋白质盐析实验注意事项及实验步骤 蛋白质盐析实验注意事项及实验步骤 一、注意事项： 1. 盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度，溶液pH 值越接近蛋白的等电点，蛋白质越容易沉淀。 2. 盐析一般用的硫酸铵，容易吸潮，因而在使用前，一般先磨碎，平铺放入烤箱内60摄氏度烘干后再称量，这样更准确。 3. 在加入盐时应该缓慢均匀，搅拌也要缓慢，越到后来速度应该更注意缓慢，如果出现一些未溶解的盐，应该等其完全溶解后再加盐，以免引起局部的盐浓度过高，导致酶失活。 4. 盐析后最好搅拌40分钟到一个小时而且再在冰浴中 放置一段时间。3.5为了避免盐对酶的影响，一般脱盐处理后再测酶活性。 5. 盐析后的蛋白质最好尽快脱盐处理，以免变性，透析较慢，一般可用超滤或者G-25，G-50 处理。 6. 一般粗提物蛋白完全沉淀是在硫酸铵浓度在70%左右。 二、实验步骤： 蛋白质盐析常用的中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其中应用最多的硫酸铵，由下表可以看出：它的优点是温度系数小而溶解度大(20度时饱和

溶液为754克/升;0度时饱和溶解度为706克/升)，在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来;另外硫酸铵分段盐析效果也比其他盐好，不易引起蛋白质变性。硫酸铵溶液的pH常在4.5-5.5之间，当用其他pH值进行盐析时，需用硫酸或氨水调节。 表1 几种盐在不同温度下的溶解度(克/100毫升水) 0℃ 20℃ 80℃ 100 ℃ (NH4)2SO4 70.6 75.4 95.3 103 Na2SO4 4.9 18.9 43.3 42.2 NaH2PO4 1.6

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硫酸铵沉淀： 有生物活性的蛋白一般在做硫胺沉淀的时候要小心一点。最保险的做法是，把硫酸铵配成饱和溶液，把蛋白溶液置于冰浴上，再把饱和硫胺溶液一滴一滴的加到你的蛋白溶液中，最好边加边搅拌，避免局部硫胺浓度过高，但搅拌的时候注意不要搅出气泡。按照你的比例加完之后，最好放冰箱静置至少2h，充分沉淀后离心即可。 4M的硫酸铵pH值为4.6，在这个酸度下可能会有一些蛋白质变性，要小心。硫酸铵会破坏蛋白质水化层，最好是缓和地加入。边加入边搅拌，如果在磁力搅拌器上搅拌，小漩涡中心有很多泡沫就表示蛋白质变性，使得溶液粘度增加，泡沫难破，那就很难保证你的蛋白质有没有变性了。 溶解度，在一定温度下，某固态物质在100g溶剂中达到饱和状态时所溶解的质 示，其单位是“g/100g水”。在未注明的情况下，通常溶解度指的是物质在水里的溶解度。 溶液饱和度(化学) 某种溶液的饱和度是指在100g该溶液中溶质在溶液中所占质量分数.一般情况下，一种溶液的饱和度在同一温度下不会变.要想使不饱和溶液饱和度增加可以选择增加溶质.在刚好有晶体析出的时候就是溶液刚好饱和的时候.溶液饱和度不会出现100% 加固体比较好，加得越慢越好。如果加快了，会造成局部浓度过大，造成意想不到的沉淀。

硫酸铵沉淀的时候应该要注意pH值的变化，就我的实验来说，一株产淀粉酶曲霉固态发酵之后用超纯水浸泡离心，得到含有酶的上清液的pH值为6.5，但是淀粉酶能耐受pH4.5，为了去除更多杂质蛋白质，我把硫酸铵浓度调节到2摩尔每升的同时会控制pH值为 4.5，4度过夜之后离心取上清液再调节到pH值7.0，4度放置，离心，又去除一部分杂质蛋白质，上清液直接用pH7.0的疏水层析系统来纯化。 一个纤维素酶的纯化我也用类似的方法，只不过第一步是用4.0。 硫酸铵是酸式盐，2M时pH值约为5，4M时更低，用来沉淀蛋白质的时候情况就更复杂了，所以最好知道自己需要的蛋白质的耐受情况，不要搞死了。 透析之前要选用一个不影响自己想要的蛋白质的pH值，硫酸铵沉淀和透析都要保持一致，才能使损失减少。透析时候产生的沉淀不知道是不是你想要的蛋白质，不过下次做最好谨慎一点，做我说过的预备实验。 分段盐析的方法 对分离目的蛋白的盐析，最好采用分段盐析。由于不同的蛋白质其溶解度与等电点不同，沉淀时所需的pH值与离子强度也不相同，改变盐的浓度

硫酸铵盐析

硫酸铵盐析 1.盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度，溶液pH值越接近蛋白的等电点， 蛋白质越容易沉淀。 2.盐析一般用的硫酸铵，容易吸潮，因而在使用前，一般先磨碎，平铺放入 烤箱内60摄氏度烘干后再称量，这样更准确。 3.在加入盐时应该缓慢均匀，搅拌也要缓慢，越到后来速度应该更注意缓慢， 如果出现一些未溶解的盐，应该等其完全溶解后再加盐，以免引起局部的盐浓度过高，导致酶失活。 4.盐析后最好搅拌40分钟到一个小时而且再在冰浴中放置一段时间。3.5 为了避免盐对酶的影响，一般脱盐处理后再测酶活性。 5.盐析后的蛋白质最好尽快脱盐处理，以免变性，透析较慢，一般可用超滤 或者G-25，G-50 处理。 6.一般粗提物蛋白完全沉淀是在硫酸铵浓度在70%左右。 盐析法 ①原理：盐析法对于许多非电解质的分离纯化都是适合的，也是蛋白质和酶提纯工作应用最早，至今仍广泛使用的方法。其原理是蛋白质、酶在低盐浓度下的溶解质随着盐液浓度升高而增加（此时称为盐溶）；当盐浓度不断上升时，蛋白质和酶的溶解度又以不同程度下降并先后析出，称为蛋白质的盐析。这一现象是由于蛋白质分子内及分子间电荷的极性基团有着静电引力，当水中加入少量盐类时，由于盐类离子与水分子对蛋白质分子上的极性基团的影响，使蛋白质在水中溶解度增大。但盐浓度增加到一定程度时，蛋白质表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质就相互聚集而沉淀析出。盐析法就根据不同蛋白质和酶在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的方法。 ②盐的选择：蛋白质盐析常用中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其中应用最广的是硫酸铵，其优点是温度系数小而溶解度大（25℃时饱和溶解度为4.1mol/L,即767g/L;0℃时饱和溶解度为3.9mol/L，即676g/L），在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来，而且硫酸铵价廉易得，分段效果比其他盐好，不容易引起蛋白质变性。应用硫酸铵时，对蛋白氮的测定有干扰，缓冲能力比较差，故有时也应用硫酸钠，如盐析免疫球蛋白，用硫酸钠的效果也不错，硫酸钠的缺点是30℃以上溶解度太低。其他的中性盐如磷酸钠的盐析作用比硫酸铵好，但也由于溶解度太低，受温度影响大，故应用不广。