小鼠胃泌素(Gastrin)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂盒仅供研究使用
检测范围:1.25 pg/ml-80 pg/ml
最低检测限:0.31 pg/ml
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的小鼠胃泌素,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中胃泌素含量。
说明
1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实
验结果造成任何影响。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗胃泌素抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗胃泌素抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胃泌素呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1.酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2.标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)。
7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)。
8.底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。需要而未提供的试剂和器材
1.标准规格酶标仪
2.高速离心机
3.电热恒温培养箱
4.干净的试管和Eppendof管
5.系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存
1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,
取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000
g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,
或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则:
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为400 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释400 pg/ml, 200 pg/ml, 100 pg/ml, 50 pg/ml, 25 pg/ml, 12.5 pg/ml, 6.25 pg/ml.,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。
如配制200 pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)400 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则:
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,
余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl(取1μl
生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,
200μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液)
100μl,37℃,60分钟。
5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,
200μl/每孔,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标
准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔显色不明显,即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加
入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后
15分钟以内进行检测。
实验备注
1.用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到
管底。
2.每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶
液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上
盖或覆膜。
4.未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体
工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5.建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml 注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
2.洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
3.一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5.如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释
倍数。
6.在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
7.底物请避光保存。
8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
elisa试剂盒 Elisa试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒IgM 抗体ELISA检测。 目录 1elisa试剂盒简介 2优点 3回收率 4发展 5使用方法 6制备方法 7影响 8检测原理 9操作步骤 10试剂器材 elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。 然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2优点 一、高效、灵敏、特异的抗体; 二、稳定的重复性和可靠性; 三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体; 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型; 五、节省实验经费。
大鼠皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析试剂盒 使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中皮质醇(Cortisol)含量。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗皮质醇(Cortisol)抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗皮质醇(Cortisol)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇(Cortisol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。ELISA法 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板:一块(96孔) 2. 标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上, 然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为180 ng/ml,做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀释成180 ng/ml,90 ng/ml,45 ng/ml,22.5 ng/ml,11.25 ng/ml, 5.63 ng/ml,2.82 ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,临用前15分钟内配制。 如配制90 ng/ml标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 180 ng/ml的上述标准品加入含有 0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液:1×20ml。 4. 检测稀释液A:1×10ml。 5. 检测稀释液B:1×10ml。 6. 检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释,稀释前根据预先计算 好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶 液A。 8. 底物溶液:1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 11. 覆膜:5张 12. 使用说明书:1份 自备物品 1. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热) 2. 微量加液器及吸头,EP管 3. 蒸馏水或去离子水,全新滤纸
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断人(Human)瘦素(LEP)ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被瘦素(LEP)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素(LEP)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪(450nm) 2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。
产品设计报告 根据市场需求以及用户需求和比赛要求,此次我组设计了如图所示的鼠标 1,整体说明 首先,由于鼠标已经完全趋于稳定成熟的阶段,所以在技术方面已经没有大的突破,而此时,设计就是为了能让鼠标符合人机工程,能给人一种别样的感受。随着电脑的普及,鼠标已经成了日常用品,一个好的鼠标能给人带来舒适的感觉,能让人产生一定的好感。整体上采用白色的上外壳和象征着皇室贵族气质的金黄色下表面来定义整个鼠标的主色调,显得淡雅,大气。此次设计的主题为中国风,所以在其中加上中国元素是必不可少的。 2,各部分介绍 (1)上表面 上表面采用了ABS工程塑料,整个壳体曲线流畅,设计遵循人体工程学,在很大程度上避免了鼠标手的出现,长期使用鼠标对手造成的伤害是很大的,所以此次设计的鼠标这一方面是一重点。中间有一个中国结的指示灯,该指示灯在不工作时和机身一样完全是白色
的,但是一旦电脑运行起来,指示灯就会显示红色,并且只要使用就会一直亮着,如果离开电脑时间过长,指示灯就会一闪一闪的,这样提示他人电脑还在运作,没事的话可以及时关上电脑。鼠标上表面的两个按键采用了中国式的橱窗,两个按键就像两个窗口一样,边框略微凸起一到两毫米。这样便于控制鼠标。 (2)底部 底部同样采用轻便的ABS工程塑料。表面采用磨砂处理,在使用的时候不至于出现打滑的情况,。而侧面两边则是祥云的图样,祥云部分稍微突出鼠标身体一到两毫米,这样也可以增大摩擦,避免给使用者带来不便。 (3)按键 此次设计的鼠标主要功能就是按键,该鼠标一共有6个按键,上面四个,左边2个。首先,鼠标的左右两键是按照正常的鼠标按键来设计的,只是曲面的设计更加贴近手势,更加符合人机工程。而上表面的另外两个按键,一个是开关,一个用来检测的按键,两个按键都比较硬,按的时候会比其他的按键费力一些,开关按键当然是来开关鼠标的,鼠标虽小但是仍是耗电的东西,在不常使用的时候或者电脑待机的时候完全可以关掉鼠标等下次使用的时候再次打开。而检测按键则是可以在一定程度上检测出鼠标是否出现某些问题。至于左边的两个按键就和现在的鼠标多出来的功能按键一样。 方案一 方案一的鼠标,命名为“镜.墨.北斗星”,如图所示:
人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA检测试剂 盒说明书 本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆 樊克生物专业供应: 使用目的: 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)含量。 试验原理: CX3CR1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知CX3CR1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将CX3CR1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合 的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中CX3CR1的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品:80ng/ml 1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型 标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型 生物素标记的抗CX3CR1抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型 洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀 释 底物A 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 底物B 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型 自备材料 1.蒸馏水。 2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3.振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
认知电脑 电脑的主要设备包括: 显示器 显示器开关,用来打开显示器,通常显示器打开状态下为开关指示灯(位于显示器开关旁边或显示器后方)亮着,显示器关闭状态开关指示灯则为熄灭。 电 脑 显示器 音箱 键盘 鼠标 主机 输出设备 输入设备 显示器开关
主机开关 主机重启开关 电脑主机如上图示主要有2个开关按钮,主机开关(通常为个头较大位于上方的开关按钮)用于作为电脑主机的开关,主机重启按钮(通常为个头较小位于较下方的开关按钮)用于作为电脑出现死机故障无法正常关机或重启的开关按钮,通常也叫短路开关。 键盘 键盘,电脑的重要输入设备之一,用于信息和操作录入的重要输入设备。
鼠标也作为电脑的重要输入设备,如上图所示,通常的鼠标主要有左键,滚动滑轮键, 右键这三个功能键组成。左右键的操作方式主要有:单击,双击,按住不放拖动鼠标等操作。 左键单击的作用:选中、连接、按钮的按入(像我们通常按电视遥控器按钮一样,打开了按钮显示的对应功能)。 左键双击的作用:打开windows 桌面的功能图标对应的功能。 注:通常2次敲击左键的间隔要尽可能小点,要快,否则电脑只认为你是做了2 次左键单击事件(只是对图标进行了2次选中操作),而不认为你是做1次左键双击事件,就不能达到你想要的打开这个功能的操作。如果出现上述的点击不够快的情况,只需重复回一次正确的双击操作就可以打开对应你所点击的图标功能。 右键单击的作用:打开你所点击的地方的高级菜单(高级功能菜单中有对你所点击的地方的大部分功能操作选项,通常有打开、改名即重命名、复制、删除、属性设置等功能)。右键单击弹出高级菜单后,将光标移进高级功能菜单里面,可以看见光标所在的菜单选项背景色改变为蓝色,这时你只要左键单击一下就可以进入这项功能。 注:如果失误右键点击弹出了高级菜单,只需将光标移到空白的地方(没文字,没图标,没按钮的地方)左键单击一次就可以退出并关闭高级菜单。 右键双击的作用:通常不使用右键双击,所以在不做详细介绍。 滚动滑轮的作用:通常文档或网页显示器不能一屏显示完,所以通常有部分在下方,这时我们想看下面的内容,就要将下面的内容拖上来看,这时就要使用滚动滑轮了。 滚轮向下滑动:页面向上拖动可以看到下面的内容。 滚轮向上滑动:页面向下拖动可以看到上面的内容。 左键 右键 滚动滑轮
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试 剂盒 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒 产品规格:96T/48T。 供应商:上海乔羽生物有限公司 上海乔羽有限公司,有elisa试剂盒,抗体,培养基 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒其主要特点如下 专一性强:抗原与抗体的免疫反应是专一反应,而免疫酶技术以免疫反应为基础,所检测的对象是抗原(或抗体),使用的抗体除标记了酶以外,与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。 灵敏度高:由于抗体联结上了酶,因此,借助于酶与底物的显色反应,显示抗原与抗体的结合,大大提高了检测的灵敏性,使检测水平接近放射免疫测定法。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 1.标准品复溶:试剂盒提供6管标准品,每管已标定浓度,并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动助其溶解,使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。 2.20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒试剂的准备: 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 ELISA试剂盒的优势: 全面——混合8 种不同的常见抗原,对自身免疫性疾病进行全面筛查。
解读胃泌素释放肽前体(ProGRP) 一、临床意义: 胃泌素释放肽是一种重要的调节分子,和人体许多生理功能、病理状态有关。它是一种胃肠激素,是哺乳动物同源的两栖动物蛙皮素,最初从猪胃粘膜中分离,广泛分布于哺乳动物的神经系统、胃肠道和呼吸道。 随着信号肽解离,它的148个氨基酸的前蛋白原进一步分解生成27个氨基酸的胃泌素释放肽和68个氨基酸的胃泌素释放肽前体(ProGRP)。由于胃泌素释放肽的半衰期很短,只有两分钟,不可能在血液中检测到,因此研发出一种检测胃泌素释放肽前体的测定法,一个羧基端区域,常见于三种类型的人胃泌素释放肽前体剪接变体。 胃泌素释放肽前体和神经元特异性烯醇化酶是与神经内分泌源组织和肿瘤有关的两种分子。胃泌素释放肽前体水平升高见于多种神经内分泌源肿瘤,包括:小细胞肺癌、类癌、具有神经内分泌功能的未分化大细胞肺癌、甲状腺髓样癌、其他神经内分泌恶性肿瘤以及具有神经内分泌功能的不依赖雄激素的前列腺癌亚组。 1.良性疾病中的ProGRP: 文献报道ProGRP血清浓度在2-50pg/ml时为正常。但是,在一项对包括肝脏疾病在内的良性疾病(肾功能不全除外)病人的研究中,有2.5%的病人ProGRP血清水平>50pg/ml。所有病人ProGRP均<80pg/ml。肾功能不全是导致这一肿瘤标志物水平升高的唯一原因。 2.肺癌中的ProGRP: ProGRP是小细胞肺癌特异性的肿瘤标志物,但其水平升高还可见于一小部分非小细胞肺癌病人。这些病人的ProGRP浓度明显低于小细胞肺癌病人。ProGRP血清浓度与肿瘤浸润程度有关,ProGRP>150pg/ml时提示小细胞肺癌的可能性>93%。 3.ProGRP在鉴别肺癌中的应用: ProGRP对鉴别小细胞肺癌和非小细胞肺癌非常有用。血清NSE还能为肺癌的组织学诊断提供额外信息。 ProGRP血清水平升高主要见于小细胞肺癌或神经内分泌肿瘤。ProGRP在分化良好的神经内分泌肿瘤中浓度升高常提示原发性肿瘤并且生存几率较低。在不伴随肾功能不全的其他恶性肿瘤病人也常出现ProGRP浓度轻度升高,但99.7%的病人浓度<100pg/ml。 4. ProGRP在监测小细胞肺癌病人中的应用: ProGRP有助于监测接受治疗的小细胞肺癌病人,有助于检出复发病例。建议在诊断小细胞肺癌时选择ProGRP作为肿瘤标志物。支持依据包括:1、ProGRP在小细胞肺癌中的灵敏度以及在其他恶性肿瘤中的特异性;2、在除肾功能不全的大部分疾病中ProGRP检出正常;3、
小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号:E-EL-M0314 (本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!) 声明:尊敬的客户,感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料,采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Col I浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分!如有疑问,请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。 *: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整)
检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠Col I抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的Col I会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠Col I抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠Col I抗体与结合在包被抗体上的小鼠Col I结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色,加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值,Col I浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线求出标本中Col I的浓度。 标本收集: 1.血清:全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集 血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。 2.血浆:抗凝剂推荐使用EDTA.Na2,标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可 检测。避免使用溶血,高血脂标本。 3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞 会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟,取上清检测。 4.细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5.其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测 (具体处理方法可参考:https://www.sodocs.net/doc/f46432192.html,/news2.asp?tid=477 ) 6.标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。 7.标本收集后若不及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃/-80℃冰箱内,避免反复冻融, 1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释(建议先做 预实验,以确定稀释倍数)。 试验所需自备物品: 1.酶标仪(450nm波长滤光片) 2.高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3.37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水 4.吸水纸
威炫游戏鼠驱动_v1.0操作说明 一:软件功能介绍 双击图标,打开威炫游戏鼠驱动安装包_v1.0 软件。 注:●该版本软件宏定义,请使用USB 键盘进行录制。 ※支援游戏鼠五种模式设定& 模式切换 ※支援游戏鼠鼠标按键设定 ※支援游戏鼠鼠标高级设定 ※支援游戏鼠宏定义设定 ※支援游戏鼠呼吸灯设定 二:软件界面说明 1.打开软件后,软件界面显示如下: 当软件识别到游戏鼠后,软件的操作选项,由灰色转为亮色。 2. 如果软件无法识别到游戏鼠,请在PC 机的“设备管理器”,查看是否有“HID-compliant Mouse”字样,显示界面如下: 3. 如果没有“HID-compliant Mouse”字样,请检查游戏鼠硬件。
三:游戏鼠五种模式设定&切换介绍 软件支援五种模式设定:基本鼠标,Windows8,游戏模式,多媒体模式,办公模式。 1). 选中模式后,软件分别显示五种模式的参数,界面显示如下: 基本鼠标模式Windows模式游戏模式 多媒体模式办公模式 2). 当前模式参数修改好后,请点击“”按钮,来保存当前模式的参数配置;否则无 法保存&设定当前模式的参数。 3). 当五种模式里都设定有“模式切换”按键时,则通过该按键实现五种模式的切换。 建议将模式切换按键设置成同一个按键,方便操作 4).此五种模式在设定时全存于鼠标IC 中,玩家可在脱离设定软件时在五种模式之间切换,可移 值性强(即:已设定好五种模式的鼠标在移到另一台电脑使用时只需按此鼠标上定义的模式键切换即可在五种模式之间切换),在五种模式切换时呼吸灯闪烁,即:第一模式呼吸灯闪一下(基本
鼠标模式),第二模式呼吸灯闪二下(Windows8 模式),第三模式呼吸灯闪三下(游戏模式),第四模式呼吸灯闪四下(多媒体模式),第五模式呼吸灯闪五下(办公模式)此五种模式也可根据客户需求自行配置。 四:游戏鼠按键参数设定介绍: 游戏鼠按键参数详细介绍如下: 1). 左键点击软件界面上1-6 按钮,对Key1-Key6 进行自定义功能选择。 2). 软件支援的自定义按键有以下: 鼠标按键:左键,中键,右键,后退,前进,左摆,右摆 游戏配置:左键双击,左键三连发,左键四连发,左键五连发,宏定义 办公命令:复制,粘贴,剪切,全选,查找,新建,打印,保存,邮件 多媒体命令:播放器,播放/暂停,停止,音量-,音量+,上一曲,下一曲,静音 上网命令:WWW Home,WWW Search,WWW Back,WWW Forward,WWW Stop, WWW Refresh,WWW Favorites Windows8 命令:搜索,共享,设备,设置,程式窗返回,程式窗清单浏览,分割页面, 应用程式功能表 操作系统命令:切换窗口,关闭窗口,资源管理器,运行,显示桌面,锁定计算机,开始菜 单键 其它命令:DPI+,DPI-,DPI,呼吸灯开关 模式切换: 按键关: 3). 定义好按键参数后,点击“”来保存数据。 五:游戏鼠高级参数设定介绍:
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆 樊克生物专业供应: 使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG)含量。 试验原理: 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合 的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品:80ng/ml 1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型 标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型 洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀 释 底物A 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 底物B 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型 自备材料 1.蒸馏水。 2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3.振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
KINBAS宏定义鼠标设置说明书(通用版) 1.找到安装文件,双击此图示开始安装,按照提示一步步操作即可。下载地址在宝贝详情页,或找客服索取链接 2.鼠标支持LOL编程软件游戏宏,无需繁琐操作,一键设置(光速QA、酒桶E闪,盲僧R闪、盲僧4眼W瞬、盲僧2眼W瞬、猴子EAQ、皓月QR皇子二连、牛头二连,需要注意的是逆战和CF 这两个游戏屏蔽宏定义功能,在这两款游戏中可能暂时无法使用宏定义功能 一、基本设置:本自定义程序分三部分:基本设置;高级设置;呼吸灯设置 以设置5号键(看下图)宏功能为例,按下图大的蓝色数字123依次点击) 再点击大的蓝色数字4旁的“应用”按钮后,盲僧R闪功能设置成功 2.其它宏功能也是这样来按上面蓝色数字1 2 3步设置后,点第4步左边的应用两
个字,就设置成功了, 3.如果设置后按键功能需要恢复,点一下程序下面的“出厂设置”就可以恢复默认按 键功能了,或者退出我们的应该程序后,按键功能恢复默认 二.高级设置:录制自己需要的宏,这里的操作相对复杂一些(请根据步骤操作,用多几天,用熟悉了,设置也就不难了) 根据下图:运行软件,见下图数字数字操作指引:1点高级设置2在宏名称项中输入"测试宏"3点新增按钮,4.点录制,5,此时按下键盘你需要的操作(比如连续按下DDD),6此时第4步的录制变成了停止按钮,请点停止,7点保存按钮,录制完成 8点基本设置按此说明书的第1页基本设置使用方法里,选择自己刚才录制好的“测试宏”即可,请注意,(如果录制宏后没点停止,键盘此时在系统的操作是没反应的) 备注: 三.宏定义最多可设置12项,如超出,可删除平常少用快捷功能,再添加!另外,根据网速不同,可能有些宏需要调整,功能才得以实现。 四.呼吸灯设置:
第八章胃肠胰内分泌疾病 第一节胃肠胰激素治疗 消化道内分泌细胞的分类与分布第六节胰高糖素瘤 胃肠道激素及其生理作用病理与病理生理 胰岛的胚胎发生与形态特征临床表现 胰腺的血管、淋巴管与神经诊断与鉴别诊断 胰岛腺泡门脉系统治疗 胰腺内分泌与外分泌的关系第七节生长抑素瘤 组织学与组织化学特点病理 第二节胃肠胰激素分泌肿瘤的诊断与治临床表现 疗原则诊断 胃肠胰激素分泌肿瘤治疗与预后 诊断第八节胃肠胰的其他神经内分泌肿瘤 治疗原则胰多肽瘤 第三节胰岛素瘤与婴幼儿持续高胰岛素混合性胰岛内分泌肿瘤 性低血糖症其他神经内分泌肿瘤 胰岛素瘤无功能性胰岛细胞瘤 婴幼儿持续高胰岛素性低血糖症治疗 第四节胃泌素瘤第九节类癌瘤与类癌综合症 病因、病理与发病机制病理与病理生理 临床表现临床表现 诊断诊断 治疗治疗 第五节血管活性肠肽瘤第十节生长抑素、胰高糖素及其类似物的病因与病理生理临床应用 病理生长抑素类似物的临床应用 临床表现胰高糖素与胰高糖素样肽1的临床应用 诊断与鉴别诊断 第一节胃肠胰激素 消化道和消化腺体(如肝、胰等消化腺)的激素分泌特点和分泌功能各不相同,激素分泌细胞多数单独或成簇地散在分布于消化道管腔壁和胰腺。根据这些细胞分布的部位和所分泌合成激素的功能分为两类,一类称为APUD细胞;能合成多肽和(或)具有生物活性的胺类物质并能脱羧,细胞发源于胚胎期的外胚层(神经嵴),较广泛地存在于身体的各器官中。其中以中枢神经、内分泌腺体和胃肠胰中最突出,故又称神经内分泌细胞。胃肠道的APUD细胞分泌的激素和胺类物质大多数因在血循环中半衰期很短(<3min),故不能成为有
效的循环激素,如舒血管肠肽(VIP)、P物质、生长抑素(somatostatin, SS)、胆囊收缩素(CCK)、胃泌素释放肽(GRP)、脑啡肽,但它们可以作为神经介质或旁分泌激素作用于消化道局部。而另一类分泌多肽的细胞——胃肠道上皮细胞,除胰岛细胞聚集在一起外,余均分别散布于胃肠道粘膜上皮之间,由于细胞的基底部分有许多分泌颗粒,储存激素,故又称为基底颗粒细胞。这类细胞可分为两种:①开放型细胞:其胞体略呈锥形或烧瓶形。细胞基底部宽,颈部窄,顶端有微绒毛伸入胃肠腔中,这些微绒毛类似于化学感受器,能感受胃肠道食糜的化学、物理刺激,在被刺激时细胞内的颗粒释放激素,激素从基底部进入周围毛细血管,经血循环到达靶细胞。②关闭型细胞(闭合型细胞):多呈圆形,无微绒毛且与胃肠腔无直接联系,可在神经及其他内分泌细胞的调节下分泌释放激素。应用含银盐的染料可将内分泌细胞染为肠嗜铬细胞及嗜银细胞。肠嗜铬细胞摄取银盐后,使之沉积在细胞颗粒上,嗜银细胞需在还原剂的条件下才能摄取银盐,消化道内分泌细胞多是嗜银细胞[1]。应用免疫组织化学方法可发现各种细胞的特异性标志物,从而确定该细胞特异分泌的激素。 另一方面,胰腺中含有大量的胰岛细胞及胰岛外的神经内分泌细胞,这些细胞多数组成细胞团,并形成复杂的岛状结构,其主要功能是调节体内的碳水化合物代谢,维持血糖的正常浓度(详见后述及第三篇第一章)。 【消化道内分泌细胞的分类与分布】 消化道内分泌细胞种类繁多,常以单个细胞形式夹杂在胃肠上皮内,有时亦可三五成群,含有不同产物的细胞可分布在同一部位。一般来说,一种类型的细胞只产生一种肽,但也有的细胞可同时含有二种或二种以上的肽,如G细胞既能分泌胃泌素,又存在ACTH免疫活性物质,也产生5-羟色胺和内啡肽。同时,同一种细胞中,也可见肽类与胺类物质共存。如,EC细胞既分泌P物质,也产生5-羟色胺,这可解释为什么有些消化道发生的细胞增生或肿瘤时出现几种激素增多的现象。同时,近年发现,胃肠胰中的一些激素在脑组织中也存在,而原先在脑内发现的肽类激素也存在于胃肠胰中。这种双重分布的肽类激素称脑-肠肽(brain-gut peptide),到目前为止,已知的脑-肠肽有P物质、胆囊收缩素、促胰液素、生长抑素、神经降压素、脑啡肽和内啡肽及促甲状腺激素释放激素(TRH)等。 在消化道内分泌细胞产生近20余种化学结构明确的激素中可分为三大类:①胃肠激素; ②胃肠神经肽;③胃肠道生长因子。它们的分泌受中枢神经系统区的肽能神经元与自主神经共同调控[2,3],详见第一篇第五章第一节表2-7-1。 【胃肠道激素及其生理作用】 在众多的胃肠激素中,下列几种在调节胃肠功能及协同其他的激素对于物质代谢中起着非常重要的作用。 一、胃泌素 为多肽类激素,分子量大多在2~5kD之间,目前所知胃泌素有五种分子形式:①小胃泌素,由17个氨基酸残基组成,是胃窦胃泌素的主要形式;②大胃泌素,由34个氨基酸残
1、elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。ELISA 可用于测定抗原,也可用于测定抗体。 然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2 优点 一、高效、灵敏、特异的抗体; 二、稳定的重复性和可靠性; 三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体; 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型; 五、节省实验经费。 3 回收率 elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL 被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L,则认为回收率为99%。 4 发展 临床测定技术的发展主要在于方法学的发展,而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前,分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识,其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的,它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举,并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。 5 使用方法 (1)血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。 (2)血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 (3)细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 (4)组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清
键盘鼠标同步器说明书 一.简介 键盘鼠标同步器主要实现将键盘鼠标信号同步的传输到各个受控的计算机,为了保证数据同步性,以纯硬件的方式将键盘鼠标并行发送到受控的计算机,达到精确的同步效果。同步器支持PS2键盘鼠标输入,USB信号输出,USB输出接到各个受控计算机,受控计算机可以独立的关机,冷启,热启。同步器电源直接由计算机提供,同步器在使用时不需要安装任何额外的软件或驱动。同步器键盘支持连发功能,可以同时设置小于7个连发键。支持键盘的两种切换功能,通过切换,可以实现控制任意单台或几台计算机。同步器鼠标支持三种工作模式。 ***安装方法: 请务必按照这个顺序安装 开机状态--》必须先连接键鼠到同步器--》最后再连接同步器到电脑 二.键盘功能: 切换功能一 这种方式切换可以实现任一台可控电脑有效,或全部都有效。 切换方法:小键盘上的*按键盘+ 小键盘上的0-6 (以一控六为例) 按住小键盘上的* 键,再按一下小键盘上的1键,切换到第一台电脑,键盘鼠标只对第一台电脑有效。 按住小键盘上的* 键,再按一下小键盘上的2键,切换到第一台电脑,键盘鼠标只对第二台电脑有效。 按住小键盘上的* 键,再按一下小键盘上的3键,切换到第一台电脑,键盘鼠标只对第三台电脑有效。 按住小键盘上的* 键,再按一下小键盘上的4键,切换到第一台电脑,键盘鼠标只对第四台电脑有效。 按住小键盘上的* 键,再按一下小键盘上的5键,切换到第一台电脑,键盘鼠标只对第五台电脑有效。 按住小键盘上的* 键,再按一下小键盘上的6键,切换到第一台电脑,键盘鼠标只对第六台电脑有效。 按住小键盘上的* 键,再按一下小键盘上的0 键,键盘鼠标对所有电脑都有效。 注:切换时可以看对应的指示灯,对应路的指示灯点亮的电脑控制有效。 c.切换功能二(此功能专门用户才有!) 这种方式切换可以实现控制任意接入的多台电脑同步控制,可以配合切换功能一,灵活控制多台电脑同步。 切换方法:PageUp按键+ 功能键F1 -----F6(以一控六为例) 按住PageUp键,再按一下F1键,对应第一台电脑无效,不影响其它控制电脑状态。 按住PageUp键,再按一下F2键,对应第二台电脑无效,不影响其它控制电脑状态。 按住PageUp键,再按一下F3键,对应第三台电脑无效,不影响其它控制电脑状态。 按住PageUp键,再按一下F4键,对应第四台电脑无效,不影响其它控制电脑状态。 按住PageUp键,再按一下F5键,对应第五台电脑无效,不影响其它控制电脑状态。 按住PageUp键,再按一下F6键,对应第六台电脑无效,不影响其它控制电脑状态。
Wistar大鼠EAE模型的制备 作者:刘颖刘华辛晋敏马太花梁丽云马存根摘要目的:检测EAE中起关键趋化作用的MCP-1的表达,探讨山西医科大学动物室的Wistar大鼠诱导实验性变态反应脑脊髓炎动物模型。方法:采用免疫诱导方法制备EAE模型并HE染色,同时用原位杂交法检测EAE 大鼠MCP-1的表达。结果:免疫后12d~17d,发病鼠出现EAE临床症状,HE染色,光镜下可见血管周炎性浸润,MCP-1的表达明显增加。结论:山西医科大学Wistar大鼠成功的诱导实验性变态反应脑脊髓模型是可信、可用的。 关键词完全抗原;Wistar大鼠;EAE;MCP-1 多发性硬化(Multiple Sclerosis,MS)是中枢神经系统(CentralNervous System,CNS)的炎性脱髓鞘疾病,多发于20岁~40岁女性,大多数患者的病程为复发和缓解交替,在复发期常出现视力受损、肢体无力、平衡失调、麻木、感觉异常、口齿不清、眩晕、大小便机能失调等症状。MS病因和发病机制复杂,一般认为与免疫、病毒感染、遗传等因素有关。实验性变态反应性脑脊髓炎(ExperimentalAu-toimmune Encephalomyelitis,EAE)的病理变化及发病机制与急性MS极其相似,因此,成功的建立EAE模型对MS的研究有很重要的意义。本实验的研究可为后期的研究工作提供基础。 1 材料与方法 1.1 试验材料Wistar大鼠:购自山西医科大学动物实验室。原位杂交试剂盒:购于武汉博士德生物制品公司。
1.2 方法 1.2.1 完全抗原的制备:取液体石蜡40mL,羊毛脂20g混合、加热并融化制得不完全弗氏佐剂(In-complete Freund'sAdjuvant,IFA),分装入10mL小瓶,高压灭菌后4℃冰箱保存。健康350g~450g左右雌性豚鼠用3%戊巴比妥45mg/kg腹腔注射至四肢瘫软。无菌状态下,剪开胸腔、剥离心包,0.01mol/L PBS左心室灌注直至肝脏变白;迅速取其脑脊髓,小心剥离脑脊膜后称重,加入等量生理盐水,制成50%(W/V)匀浆。同时融化IFA,1mL IFA加入约10mg的M.bovisBCG即制得CFA。将CFA与GPSCH等体积混合,用注射器反复抽推,制成油包水乳液,制成完全抗原,放置冰上备用。 1.2.2 模型制备:将健康、雌性Wistar大鼠30只,随机分成正常对照组、佐剂组和EAE组,三组大鼠左后肢足垫皮下分别注射完全抗原0.4mL/只,百日咳原液0.05mL/只(含5.0×10 9 个菌体)。记免疫当日为零天,每天称重,采用双盲法两人进行临床症状评分,取平均值,临床评分2分为发病动物,临床评分采用通用的五分评分法,即:0分无症状,1分动物尾部肌张力降低,2分动物尾部麻痹+后肢肌张力低,3分尾麻痹+后肢肌张力重度低,4分尾麻痹+四肢麻痹,5分频死状态。发病动物只数/实验动物只数为发病率。免疫后12d~17d,3%戊巴比妥钠45mg/kg腹腔注射,至四肢瘫软,无菌状态下,剪开胸腔剥离心包,0.01mol/L PBS左心室灌注至肝脏变白;4%多聚甲醛灌流至尾部僵直,解剖迅速取其大脑视交叉前后2mm组织、小脑和脑桥部、脊髓颈腰膨大处,再用4%多聚甲醛固定半小时,做常规石蜡包埋、切
人P16ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人P16的含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人P16水平。用纯化的人P16抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入P16,再与HRP标记的P16抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的P16呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人P16浓度。 样本处理及要求: 1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上 清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。 3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程 中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
临床骨科杂志 一、发表说明 本团队专注于论文写作与发表服务,擅长案例分析、编程仿真、图表绘制、理论分析等,论文写作、发表300起,具体价格信息联系: 本团队并非任何杂志编辑中心,本中心是专业代发论文的机构,与各个杂志社具有长期良好的合作关系,也就是我们通过我们的特殊渠道将论文送给杂志社我们特定的内部人处理论文,保证较高的上稿率,以解决投稿人投稿后焦急的等待与石沉大海的结局。通过我们可以较为容易达到发表的目地,当然,论文的质量也是重要的基础。 二、期刊简介如下 本杂志是国内外公开发行的骨科专业学术性期刊,国家科技部中国科技论文统计源期刊。面向临床骨科医生、相关学科医生和研究人员,以临床研究为基石,以新技术、新方法、新思想为引导,普及与提高相结合。本刊注重科学性、创新性、实用性,文章内容翔实、图文并茂、格式规范,可读性强。 临床论著 一期病灶清除植骨融合内固定治疗跳跃性胸腰椎结核实验与临床 兔脂肪干细胞直接修复陈旧性全层兔膝关节软骨缺损综述 肩袖损伤修复技术的研究现状方法与应用 锁定钢板固定治疗老年股骨转子间骨折
临床论著 后路寰枢椎椎弓根钉固定融合治疗寰枢椎不稳或脱位方法与应用 重建钢板结合自体植骨治疗粉碎性锁骨骨折临床论著 保留颈后方韧带复合体对颈椎后路单开门椎板成形术椎板开门角度的影响方法与应用 股骨干骨折内固定术后并发急性感染的外科治疗临床论著 不同方法治疗桡骨远端C型骨折的疗效比较方法与应用 腓骨远端爪型钢板治疗外踝骨折的疗效观察临床论著 锁定加压钢板结合植骨术治疗胫骨平台骨折方法与应用 关节镜下带线锚钉紧缩内侧支持带治疗急性髌骨脱位临床论著 股骨近端外侧锁定钢板治疗Russell-TaylorⅡB型股骨转子下骨折方法与应用 腰椎滑脱症的手术治疗体会临床论著 超关节外固定架结合内固定治疗PilonⅢ型骨折方法与应用 带线锚钉修复跟腱断裂实验与临床 组织工程化凝胶诱导股骨头坏死血管化的实验研究方法与应用 空心加压螺钉内固定治疗锁骨骨折综述 脊柱内固定术后切口深部感染诊断与治疗进展方法与应用 微创内固定系统治疗股骨髁间髁上粉碎性骨折投稿须知 投稿须知 临床论著 一期后路病灶清除植骨融合钉棒固定治疗L5~S1结核方法与应用 DVR解剖型接骨板结合注射型人工骨治疗桡骨远端不稳定性骨折临床论著微创经肌间隙入路结合伤椎固定治疗胸腰椎爆裂骨折方法与应用 带线铆钉结合克氏针多轴固定治疗肩锁关节脱位临床论著