微生物菌种的分离纯化、培养、鉴定及保藏实验

实验微生物菌种的分离纯化、培养、鉴定及保藏

一、实验目的和要求

1.了解微生物的分离纯化方法。

2.学习检测水中大肠菌群的方法。

3.学习微生物的保藏及鉴定方法。

4.熟悉革兰氏染

二、实验原理

多管发酵法

多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。

1.初发酵试验

水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。48小时后仍不产气的为阴性结果。

2.平板分离

初发酵管24至48小时内产酸产气的均需在复红亚硫酸钠琼脂（远藤氏培养基）或伊红美蓝琼脂，平板上划线分离菌落。

3.复发酵试验

以上大肠菌群阳性菌落，经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，通过此试验再进一步证实。原理与初发酵试验相同，经24小时培养产酸产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。

三、实验器材及试剂

1.水样

污水样本

2、培养基及试剂：二甲苯、苯酚、琼脂粉、香柏油、乳糖胆盐液体培养基、伊红美蓝琼脂（EMB）、营养琼脂培养基、革兰氏一液、革兰氏二液、革兰氏三液、革兰氏四液。

3、器材及耗材:双目显微镜、恒温培养箱、恒温干燥箱、洁净工作台、紫外线灯管、紫外线灭菌手推车、接种环、试管、酒精灯、滤纸、擦镜纸、载玻片、打火机、棉花、滴瓶、长塑料篓、纱布、吸耳球、产气管、培养皿、移液管等

四、实验方法及步骤

1.第一天

实验前的准备

1）配制3支乳糖胆盐液体培养基，每支10mL，并加入产气管。配置营养琼脂培养基，灌装进2支试管中，配置200mL伊红美兰培养基150mL,于121℃高温

高压灭菌20分钟，后放进恒温干燥箱。

2）包扎5套培养皿，包扎6根1mL、1根10mL移液管和3支滴管。于121℃高压灭菌锅中灭菌20分钟。

3）称取一定量的液体石蜡，约为锥形瓶的三分之一。于121℃高温高压灭菌20分钟。

4）称取1.8克氯化钠，溶于200mL水中，于121℃高温高压灭菌20分钟。

2.第二天

1）将3支试管根据取样地的不同贴好标签，写好姓名学号，在取样处现场在每支试管中滴加3-4滴水样，37℃培养24小时。

3.第三天

1）取出培养过的水样，取产气最多的一支备用。

2）从试管中取1mL加入到9mL无菌水中，再依次稀释100、1000直至100000倍。

3）将5个梯度的稀释样以划线分离法和平板涂布法接在培养基的表面，于37℃培养24小时。

4.第四天

挑取颜色较深的菌落

1）制片：取一块干净的载玻片，各靠一小滴无菌水，以无菌操作规程分别挑取大肠杆菌和枯草杆菌少量，涂布于对应的载玻片上与无菌水混匀，涂成极薄的菌膜。自然干燥后再通过酒精灯进行热固定。

2）初染：于菌膜上滴加结晶紫染液，以盖满菌膜为宜，染色1-2 min后倾去染液，用蒸馏水轻轻冲洗至流下无色为止，甩去载玻片上的残余水。

3）媒染：滴加碘液染色1-2min，用蒸馏水冲洗干净。

4）脱色：滴加95%酒精液脱色30秒钟（准确计时），用蒸馏水冲洗干净。

5）复染：滴加蕃红液染色1-2min，用蒸馏水冲洗干净最后自然干燥。

6）镜检

7）将生长良好的菌落接种在斜面培养基上，37℃培养24小时。

5.第五天

微生物的保藏

（一）斜面低温保藏法：

此法为最常用的一种。一般霉菌；放线菌和有芽孢的细菌可保存2～4个月，酵母菌可保存2个月，无芽孢的细菌最好每周移接一次。操作过程如下：1）接种：将要保藏的菌种接入斜面培养基上，试管上贴好标签，写上菌种名称，时间。

2）培养：各类菌按其所需温度和时间进行培养。

3）保藏：选取生长健壮的菌种，于其试管带棉塞的上半部用灭菌的牛皮纸包扎好，以防棉塞受潮感染杂菌。置于4℃冰箱中保藏。

（二）液体石腊保藏法：

此法可用不分解石腊的菌种保藏。保存时间是半年至一年。放线菌；霉菌和产芽孢菌可保藏二年。液体石腊可防止培养基水分的蒸发，而引起的菌种死亡。同时可阻止氧气进入，防止好氧菌的生长。从而延长菌种保藏的时间。但需注意的是试管必须直立放置，并且不便携带。操作过程如下：

1）液体石腊的灭菌：将液体石腊装入锥形瓶中，量不超出锥形瓶体积的1/3，

塞上棉塞，包扎好后，进行高压蒸汽灭菌二次（120℃30分钟）。再在110～120℃干燥箱中蒸发掉蒸汽灭菌时带入的水分。此时石腊透明清亮状。经检验确定无菌后备用。

2）菌种培养：将所需的菌种经培养后，选取健状的保藏。

3）加石腊油：用无菌管吸取石腊油加入菌种试管中，以高出菌种斜面顶点1cm为宜。少了会因培养基露出油面，而使培养基变干造成菌死亡。

4）收藏：试管上部用牛皮纸包扎好，垂直立于冰箱中4℃。

5）恢复使用：当要使用菌种时。倾出石腊油。此石腊油可再灭菌重复使用。接种培养。由于菌体外粘有油。第一次的菌生长缓慢，性状恢复不是很好。所以要再移植一次才能得到良好的菌种。

五、实验结果记录及计算：

1）乳糖胆盐培养基产气结果记录：

2）伊红美蓝琼脂培养基培养结果记录：

3）镜检结果记录：

六、实验结果分析及问题讨论：

环境工程微生物学实验八 细菌纯种分离、培养和接种技术

南昌大学实验报告 学生姓名：学号：专业班级： 实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩： 实验八细菌纯种分离、培养和接种技术 一、实验目的： 1、学习从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾、堆肥等）中分离、培养微生物，掌握一些常用的分离和纯化微生物的方法； 2、学会几种接种技术。 二、实验基本原理： 自然界中的微生物总是杂居在一起，即使一粒土或一滴水中也生存着多种微生物。要研究其中的某一种微生物，首先必须将它分离出来。 受污染的土壤或水体中，微生物的数量和污染物的降解之间存在着显著的关系.为了提高污染物降解速率,常需接种一些能降解目标污染物的高效菌。从经过富集、驯化培养的样品中筛选目标菌株，往往是获得高效降解菌的有效方法。 根据目标微生物特定的营养要求，设计相应的选择培养基。是快速高效获得目标菌的关键步骤。 土壤是微生物生活的大本营，有“微生物的天然培养基”之称，同其他生物环境相比它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离纯化的到许多有价值的菌株，事实上，生产、工程上很多有益菌株都是从土壤中分离得到的。 从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。微生物纯种分类的方法有很多，常用的方法有两类一类是单细胞挑取法，采用这种方法能获得微生物的克隆纯种，但对仪器条件要求较高，一般实验室不能进行。另一类是单菌落分离（平板分离法），该方法简便是微生物学实验中常采用的的方法。通过形成单菌落获得纯种的方法有平板划线法、平板浇注（稀释混合平板法）、平板表面涂布法。 此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括两方面：

微生物实验

微生物基础试验 实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒 一、实验目的 1、掌握配制培养基的一般方法和步骤；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法； 2、了解培养基的配制原理；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法。 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。 三、试剂与器材 1、器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。 2、试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 四、实验内容 1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温摇床→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、关键步骤及注意事项 1、要严格按配方配制。 2、调pH不要过头。 3、干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC以下放物、取物。 4、高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。 5、过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。 六、思考题 1、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？ 2、在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么？ 3、培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么？ 4、培养基的配制原则是什么？ 实验二土壤中微生物分离纯化培养

实验六七食品微生物培养基的制备和灭菌微生物的分离培养和菌种保藏

实验六 微生物培养基的制备和灭菌 实验项目性质：综合实验 所属课程名称：《微生物学实验》 实验计划学时：5学时 一、实验目的 1.了解并掌握培养基的配制、分装方法； 2.掌握各种实验室灭菌方法及技术。 二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 三、实验材料 1、器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。 2、药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。 3、流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 四、实验步骤 1 培养基的制备 1.1 称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 1.2 溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。

土壤中细菌分离纯化和鉴定

土壤中细菌分离、纯化和鉴定 摘要：在自然条件下，微生物常常在各种生态系统中群居杂聚。为了研究某种微生物的特性，或者大量培养和利用某一种微生物，必须事先从有关的生态环境中分离出所需的菌株，获得纯培养。获得纯培养的方法称为微生物的纯种分离法。这一过程称为微生物的分离纯化。本文将提取泥土中所包含的微生物，并且分离、纯化，最后对其微生物种类进行鉴定。 关键字：泥土细菌分离纯化鉴定 1、实验材料： 分离细菌的材料： 样品：新鲜土样 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、淀粉琼脂培养基、马铃薯蔗糖培养基（10mL）。 无菌水：带有玻璃珠装有45mL无菌水的三角瓶、装有9mL无菌水的试管。 其他：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、台天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴、标签纸、胶水、水泡锅。 试剂：5000U/mL链霉素液，%重铬酸钾液。 细菌纯化鉴定材料:

染色剂：草酸铵结晶紫染色液、路哥氏碘液、95%酒精、番红染色液。培养基：淀粉培养基、石蕊牛乳培养基、真菌培养基、试管斜面。试剂：碘液。 其它：试管、三角瓶、移液管、接种针、接种环、培养皿。 2、实验步骤 制备土壤稀释液： 1、称取土壤5g，放入45mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即为稀释10－1的土壤悬液。 2、另取装有9mL无菌水试管5支，用记号笔编上10－2、10－ 3、10－ 4、10－ 5、10－6。取已稀释成10－1的土壤液，振荡后静止，用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入10－2的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－2土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－4、10－5、10－6土壤稀释液。 平板划线法： 1、取已熔化的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿，制成平板。 2、凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10－5或10－6）在平板上划线。 3、（1）连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。

微生物菌种的分离纯化、培养、鉴定及保藏实验

实验微生物菌种的分离纯化、培养、鉴定及保藏 一、实验目的和要求 1.了解微生物的分离纯化方法。 2.学习检测水中大肠菌群的方法。 3.学习微生物的保藏及鉴定方法。 4.熟悉革兰氏染 二、实验原理 多管发酵法 多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。 1.初发酵试验 水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。48小时后仍不产气的为阴性结果。 2.平板分离 初发酵管24至48小时内产酸产气的均需在复红亚硫酸钠琼脂（远藤氏培养基）或伊红美蓝琼脂，平板上划线分离菌落。 3.复发酵试验 以上大肠菌群阳性菌落，经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，通过此试验再进一步证实。原理与初发酵试验相同，经24小时培养产酸产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。 三、实验器材及试剂 1.水样 污水样本 2、培养基及试剂：二甲苯、苯酚、琼脂粉、香柏油、乳糖胆盐液体培养基、伊红美蓝琼脂（EMB）、营养琼脂培养基、革兰氏一液、革兰氏二液、革兰氏三液、革兰氏四液。 3、器材及耗材:双目显微镜、恒温培养箱、恒温干燥箱、洁净工作台、紫外线灯管、紫外线灭菌手推车、接种环、试管、酒精灯、滤纸、擦镜纸、载玻片、打火机、棉花、滴瓶、长塑料篓、纱布、吸耳球、产气管、培养皿、移液管等 四、实验方法及步骤 1.第一天 实验前的准备 1）配制3支乳糖胆盐液体培养基，每支10mL，并加入产气管。配置营养琼脂培养基，灌装进2支试管中，配置200mL伊红美兰培养基150mL,于121℃高温

环境中微生物的检测和分离纯化实验报告

环境中微生物的检测和分离纯化 一．实验原理 1.微生物的分离与纯化 土壤中含有丰富的微生物，可以从中分离纯化得到很多有价值的菌株。 微生物常用的分离方法是平板分离法，根据某种微生物对生长条件的不同要求供给它适宜的培养环境，再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微生物，直到得到纯菌株。 2.平板菌落计数法 将待测样品经适当稀释后，其中微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中含的菌落数。 二．实验材料与试剂 1.土壤稀释溶液 2.取液器（1000ml 1支），培养箱，培养皿（12个），无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂 棒，接种环，1000ml无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架。 三．实验步骤 （一）.无菌平板制备 1.采用叠皿法把牛肉冻蛋白膏培养基倒入灭好菌的培养皿中，制作无菌平板 （二）.周围环境中微生物的检测 2.取一平板，分成6个区，做好标记。同一个人同一根手指头按如下要求用力一致进 行操作：分别用未洗过的手指头，自来水打湿的手指头，自来水认真洗过的手指头，洗手液洗过一遍的手指头，洗过两遍的，洗手液洗过又用酒精棉球消毒后的手指头 在六个区上涂抹。（平板1） 3.取一平板，分区，分别用使用过的纸巾，硬币，旧纸币，餐卡在不同区拖动。（平 板2） 4.在培养基上方抖动头发数次。（平板3） 5.取一平板，分区，用无菌接种环分别蘸一滴自来水，河水，豆浆在不同区划线。（平 板4） 6.用无菌牙签取一点牙垢在培养基上划线。（平板5） 7.取两个平板，一个打开在实验台上放置30分钟，另一个在酒精灯火焰边打开皿盖1 分钟。（平板6） 8.取一平板，打开盖，咳几下。（平板7） （三）.从土壤中分离微生物 1.采土样 2.制备土壤稀溶液 3.涂布 吸取100ml稀释好的土壤稀溶液，较均匀地滴在平板上，再用无菌涂棒涂布均匀，涂1—2分钟 4.培养 将培养基平板倒置于37℃下培养24小时 5.菌落计数 四．实验结果

土壤中微生物的分离与鉴定实验报告

Sdu微生物大实验 土壤微生物的分离纯化与鉴定 【实验目的】 1、从各地区土壤中筛选含几丁质酶的真菌及含果胶酶的菌株； 2、通过从土壤中分离纯化菌株，掌握培养基的制备与灭菌技术、微生物的筛选、分离纯化方 法和无菌操作技术。 3、复习以前学过的各种染色方法，掌握生理生化试验的原理与方法。 4、掌握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。 【实验原理】 1、微生物的分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称 为微生物的分离与纯化。此次实验采取平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：a.选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部分不需要的微生物。 b.微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。 2、霉菌：霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段 分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本实验采用载玻片培养观察法。 3、果胶酶筛选培养基：配制以果胶为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利 用果胶的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产果胶酶的菌株。刚果红（Congo Red,简称CR）是一种染料，它可与果胶形成红色复合物，但并不和果胶水解后的产物发生这种显色反应，在含有果胶的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的果胶形成红色复合物。当果胶被果胶分解菌分泌的果胶酶分解后，刚果红-果胶的复合物就将无法形成，从而在培养基中形成以果胶分解菌为中心的透明圈，这样我们就可以通过是否产生透明圈来筛选果胶分解菌。 4、几丁质酶筛选培养基：配制以几丁质为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分 解利用几丁质的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产几丁质酶的菌株。因为几丁质不能溶解于培养基，故在固体培养基平板上表现为浑浊，若菌株能够产生几丁质酶，

土壤微生物的分离培养技术实验报告

重庆大学研究生专业实验教学 实验报告书 实验课程名称： 实验指导教师： 学院： 专业及类别： 学号： 姓名： 实验日期： 成绩：

重庆大学研究生院制 一、实验目的 1、了解分离与纯化微生物的基本原理及方法； 2、了解倒平板配制土豆培养基的方法与平板划线分离的基本操作技术；； 3、学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能； 4、初步观察来自土壤中的几类微生物的菌落形态特征，并能判断菌的类型。 二、实验原理 1、培养基的种类 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别、保存各种微生物或积累代谢产物。一般的培养基应包含适合微生物生长的6大营养素即水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子。培养基的种类很多，根据培养成分的不同可分为天然培养基、合成培养基与半合成培养基；根据物理状态的不同又可分为液体培养基和固体培养基。微生物的分离、纯化、记数等方面的研究常常使用的就是固体培养基。本实验就是使用的固体培养基。 已配制好的培养基必须立即灭菌，如来不及灭菌，应暂存冰箱，以防止其中微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基酸碱度所带来不利影响。 培养基的原材料来源十分广泛，本实验采用的原材料为土豆。 2、接种方法与无菌接种

将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。接种的关键是要严格的进行无菌操作。微生物的接种方法很多，划线接种、三点接种、穿刺接种、混浇接种与涂布接种是几种常用的接种方法。 划线接种是最常用的接种方法，即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可以达到接种的目的。常用的接种工具为接种环、针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。 三点接种是把少量的微生物接种在平板表面，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察研究它们的形态。研究霉菌形态时就常用此法。 穿刺接种是用针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺。该法常用于厌氧菌种的保藏或微生物的动力研究。 混浇接种是先将待接的微生物放入培养皿中再倒入冷却至45℃左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就被稀释了。待平板凝固后，置于适宜温度下培养，就可以长出单个菌落的微生物。 涂布接种是将菌液倒入平板上，再用涂布棒在表面迅速的作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可以长出单个菌落的微生物。 本实验采用的是划线接种。为了防止接种时引入其它微生物，整个操作过程均需在无菌操作台上进行，还需对操作员的双手进行酒精消毒，每次划线前都需灼烧接种环，接种时才打开培养皿且不能全部打开，接种完马上关上。 三、实验器材 1、仪器 培养皿、量筒、滴管、吸水纸、烧杯、三角瓶、酒精灯、玻璃棒、接种环、15ml离心管、试管架、镊子、电磁炉、锅、恒温培养箱、高温灭菌锅、无菌操作台、酒精灯、天平、滤纸等。 2、材料

土壤微生物的分离和纯化实验报告

土壤微生物的分离和纯化实验报告 摘要 本实验以镍离子作为纯化培养基，利用离子交换介质对细菌进行纯化，以筛选出较为纯化的细菌株。本实验在4种离子强度（0.05M，0.1M，0.2M，0.3M）条件下，比较发酵性状态（游离镍离子浓度）下，测试样本的细菌含量。结果表明，在游离镍离子浓度高的条件下，细菌含量会减少，细菌的质量也会更高。 1、引言 土壤细菌是土壤中的重要微生物，可以改善土壤的生态环境，增强土壤的抗逆性，从而促进土壤的健康发展。为了更好地研究土壤微生物的功能，有必要分离和纯化土壤中的细菌，以便进一步的研究。本实验以镍离子作为纯化培养基，结合离子交换介质，以高纯度细菌取得细菌的纯化株系。 2、实验步骤 （1）细菌样本准备：采集土壤样本，进行消毒，在琼脂糖培养基中接种； （2）离子交换介质制备：采用镍离子作为离子交换介质，分别在0.05M，0.1M，0.2M，0.3M离子强度条件下制备离子交换介质； （3）离子交换：将离子介质加入土壤液液分离细菌，离子介质被细菌吸收，细菌的活性被浓缩，可以获得较纯的细菌株，（4）纯化细菌：将细菌纯化物放入培养瓶进行培养，经过重复接种，最终获得纯化细菌株；

（5）细菌测定：采用镍离子浓度测定细菌含量，测试样本的细菌含量。 3、实验结果 实验结果如表1所示： 表 1 细菌含量测定结果 游离镍离子浓度（M）t细菌含量 0.05t 62.5% 0.1t 40.0% 0.2t 12.5% 0.3t 6.3% 4、实验讨论 从实验结果可以看出，随着游离镍离子浓度的增加，细菌含量会减少，从而达到较高的纯度。其原因是离子交换介质中的镍离子与细菌表面的酶活性位点结合，以抑制细菌的活性，使菌体停止生长和繁殖，最终达到纯化株的目的。 5、结论 本实验使用镍离子作为纯化培养基，结合离子交换介质，以高纯度细菌取得细菌的纯化株系。实验结果表明，在游离镍离子浓度高的条件下，细菌含量会减少，细菌的质量也会更高。

微生物的分离和纯化实验报告

微生物的分离和纯化实验报告 实验目的： 本实验旨在探究微生物分离和纯化的方法，经过分离和纯化后，得到单一纯种菌液。同时，也能够使学生了解微生物分离和纯化的基本原理，并掌握常见的微生物分离和纯化方法。 实验原理： 微生物的分离和纯化是一项非常重要的工作。在微生物的研究和生产中，首先需要得到单一纯种菌液，因为纯种菌液才能进行严格的实验控制和可靠的测定。微生物分离的方法一般包括增殖法、培养法、过滤法、离心法等。而纯化的方法则一般有染色法、板块法、过筛法等多种方法。 本实验中的分离和纯化工作采用了增殖法和染色法。增殖法是指利用菌落增殖的现象来分离单一纯种菌，而染色法则是指通过不同的着色方法，将微生物区分为不同的种类，从而进行微生物分离和纯化的方法。常用的染色方法有革兰染色、抗酸染色等。在本实验中，我们采用了革兰染色这一经典的染色方法。 实验步骤： 1、制备分离培养基

配制分离液，以波尔多液、胰蛋白胨、葡萄糖制成培养基，并加入20ug/ml氯霉素。 2、分离样品 取所需数量样品，经过适当的处理，比如切碎、摇匀等，制备样板。 3、制备菌液 将样品加入分离培养基中，然后在恒温摇床上震荡培养24小时，形成单一菌种的细菌培养液。 4、革兰染色 将接种在玻璃片上的菌液进行革兰染色。 a、在玻璃片上制作菌液薄膜。 b、将薄膜上的细菌经过固定，用碘液水洗，以去色。 c、淋加革兰染色溶液，使之染色。 d、过水洗、双氧水漂洗，洗去多余革兰染色剂和已触及的碘素。 e、使用显微镜观察。 5、单一菌种分离 通过以上实验过程，我们可已得到单一纯种菌液，而且还可以将它们放入固体培养基中培养，以便于观察和下一步实验。 实验结果：

2实验二微生物的分离、纯化与微生物的培养特征

实验三微生物的分离、纯化与微生物的培 养特征 一、实验目的 (一)掌握几种分离、纯化微生物的基本操作技术。 (二)了解不同微生物培养在斜面上和液体、固体培养基中的特征。 (三)进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作接种技术。 二、实验原理 在自然界中，微生物的种类很多，数量很大，为了获得单个菌体，首先必须把要分离的材料进行适当的释放，按其生长所需要的条件，使其在平板上，由一个菌体繁殖成单个菌落，这样，就能从中挑选出所需要的纯种。挑选出的菌种一般应分别接种到试管斜面上，然后，在平板上反复进行分离培养，最后可获得纯种。 微生物的培养特征是指微生物培养在培养基上所表现出的群体形态和生 长情况。一般可用斜面、液体和固体培养基来检验不同微生物的培养特征。利用这些特征，可以作为它们的种类鉴定和识别纯培养是否污染的参考。 三、实验器材 （一）土壤样品 （二）培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 （三）用具 无菌培养皿、无菌移液管、试管、无菌水、酒精灯、接种环、接种针、火柴、恒温箱、灭菌锅等。 四、实验步骤 细菌纯种分离的方法有两种：稀释平板法和平板划线法。

(一)稀释平板涂布法 1.取样用无菌锥形瓶到现场取一定量的土壤（或活性污泥或湖水），迅速带回实验室。 2．稀释土样称1克土样，在火焰旁加到有99mL无菌水和少许玻璃珠的三角烧瓶内，将瓶子依左右方向振荡数十次（或在振荡器上振荡分散），使土样与水充分混合，将菌分散，土样中的菌被稀释了100倍，土壤悬液的稀释度为10-2。在火焰处打开无菌移液管的纸套（或用微量加样器装上无菌的塑料吸嘴），用无菌移液管吸取土壤悬液1mL，加到一个盛有9mL无菌水的试管内，稀释1000倍制成稀释度为10-3的土壤悬液，将此移液管在试管内反复吹洗3次，然后取出，通过火焰，再插入纸套内，以备再用。轻轻摇动试管，使菌液均匀。再用刚才用过的移液管，插入试管内，反复吹洗3次，然后取出 1mL菌液，加到另一支盛有9mL无菌水的试管中，制成稀释度为10-4的土壤悬液，反复吸吹3 次，同法作一系列的稀释，得到10-5、10-6的土壤稀释液，稀释完后，由最小的稀释液（10-6）开始吸取0.2mL加到编号为10-6的平板培养基中，用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，再依次分别从10-5、10-4试管中各吸取0.2mL稀释液，加到相应编号的培养皿内，每次吸取时，移液管都要在稀释液中反复吹洗几次。两个平行。平板培养基静置5min，倒置于30℃培养24~48h后观察结果，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物，若有其他杂菌混杂，就要再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。 实验图-6 稀释后平板分离细菌单菌落 (二)平板划线分离法

细菌的分离纯化和接种实验

环工综合实验细菌的分离纯化和接种实验 实验报告 环境科学与工程学院实验中心

实验原理问答题： 1.为什么湖水用10－4、10－5、10－6稀释液进行平板稀释分离而不用更高或者更低的浓度？ 答：因为在这三个浓度范围内能尽量使样品中的微生物分散开，使其成单个个体/细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个个体生长而成的，从而方便计数。 2.为什么平板培养皿要倒置放入恒温箱中进行培养? 答：第一，为了防止重力对菌落的生成产生影响；第二，为了防止培养基中的水分蒸发后凝结在壁上，滴落后影响菌的生长和形态观察；第三，防止培养基干涸。 3.微生物常用接种方式有哪些？进行微生物接种应该注意哪些方面？ 答：⑴划线接种，涂布接种，穿刺接种，三点接种，浇混接种，液体接种，注射接种，活体接种等。 ⑵接种用具及培养基等均需灭菌处理，接种过程必须在煤气灯旁进行，接种环、玻璃涂棒等器具要过火处理，把所要用到的器材和菌种培养基有序编号放置，操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品的接触，往培养基是划线或点菌时动作要轻以防把培养基划破等。 四、实验步骤 1.制备细菌稀释液： 使用5ml移液管加4.5ml无菌水放入贴有10-3、10-4、10-5、10-6标签的小试管中，用一根1ml的无菌移液管吸取10-2的湖水稀释液0.5ml放入贴有10-3标签的小试

六、思考题 1.氧化亚铁硫杆菌（Thiobacillusferrooxidans,T.f ）为生物冶金重要菌种，属微生物中原核生物界、化能营养原核生物门、细菌纲、硫化细菌科、硫杆菌属。广泛存在于土壤、海水、淡水、垃圾、硫磺泉和沉积硫内，尤以金属硫化矿和煤矿等酸性矿坑水（pH<4）中最为常见。其化能自养，专性好氧，嗜酸，革兰氏阴性，，主要利用利用CO2为碳源，并吸收氮、磷等无机营养来合成自身细胞。请思考其分离纯化的方法和步骤。 答：采取酸性矿坑水或实验室浸矿培养液作为菌液，在实验室用9K或Leathen 培养基反复分离纯化。 具体方法一：取菌液10mL，加入盛有100mL灭菌9K或Leathen液体培养基的250mL锥形瓶中，在30℃,120r/min的空气浴恒温摇床中培养，直至锥形瓶中的溶液变为红棕色，一般需4天。反复几次。然后采用固体培养基稀释涂布平板法分离纯化菌种以获得纯培养。在9K固体培养基上7～10天出现圆形凸起状小菌落（d≈1mm），将单独小菌落挑起，每个小菌落分别接种到装有5mL液体培养基的小试管中，以棉球封口，培养条件同上，直到小试管的液体颜色也变成红棕色。重复在液体培养基中扩大培养和在平板上反复分离，最后分离出优良菌株。 具体方法二：取菌液1mL，用pH=2.5的稀硫酸按每次稀释10倍，依次稀

微生物的分离和纯化

微生物的分离和纯化 一、基本原理 在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。 为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。 土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量和种类都是极其多样的，因此，土壤是我们开发利用微生物资源的重要基地，可以从其中分离、纯化到许多有用的菌株。 二、器材 高氏1号琼脂培养基，肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基，盛9ml无菌水的试管，盛90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，10％酚，无菌培养皿，链霉素，土样等。 三、操作步骤 1．稀释涂布平板法 （1）倒平板将肉膏蛋白胨培养基、高氏1号琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基溶化，待冷至55—60℃时，向高氏1号琼脂培养基中加入10％酚数滴，向马丁氏培养基中加入链霉素溶液，使每毫升培养基中含链霉素30μg。然后分别倒平板，每种培养基倒三皿，其方法是右手持盛培养基的试管或三角烧瓶，置火焰旁边，左手拿平皿并松动试管塞或瓶塞，用手掌边缘和小指、无名指夹住拔出，如果试管内或三角烧瓶内的培养基一次可用完，则管塞或瓶塞不必夹在手指中。试管（瓶）口在火焰上灭菌，然后左手将培养皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待凝后即成平板。也可将平皿放在火焰附近的桌面上，用左手的食指和中指夹住管塞并打开培养皿，再注入培养基，摇匀后制成平板，如图Ⅶ-1所示。最好是将平板放室温2—3天，或 37℃培养24小时，检查无菌落及皿盖无冷凝水后再使用。 （2）制备土壤稀释液称取土样10g，放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇约20分钟，使土样与水充分混合，将菌分散。用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液注入盛有9ml无菌水的试管中，吹吸三次，使充分混匀。然后再用一支1ml无菌吸管从此试管中吸取1ml注入另一盛有9ml无菌水的试管中，以此类推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6各种稀释度的土壤溶液。 （3）涂布将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-4、10-5和10-6三种稀释度，然后用三支1ml无菌吸管分别由10-4、10-5和10-6三管土壤稀释液中各吸取0．2ml对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，如图Ⅶ-2所示。 （4）培养将高氏1号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置于28℃温室中培养3—5日，肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2—3日。 （5）挑菌将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到上述三种培养基的斜面上，分别置28℃和37℃温室中培养，待菌苔长出后，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物，若有其他杂菌混杂，就要再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。整个分离过程见图Ⅶ-3。 2．稀释混合平板法 此法与稀释涂布平板法基本相同，无菌操作也一样，所不同的是先分别吸取0．5ml10-4、10-5、10-6稀释度的土壤悬液对号放入平皿，然后再倒入溶化后冷却到45℃左右的培养基，边倒入边摇匀，使样品中的微生物与培养基混合均匀，待冷凝成平板后，分别倒置于28℃和37℃温室中培养后，再挑取单个菌落，直至获得纯培养。

微生物菌种的分离和纯化方法

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。 1、用固体培养基分离和纯化 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据.大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。所谓平板，即培养平板的简称,它是指固体培养基倒入无菌平皿,冷却凝固后，盛固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基,每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行,100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段. 1。1 稀释倒平板法 首先把微生物悬液作一系列的稀释(如1：10、1:100、1：1000、1：10000），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养. 1.2 涂布平板法 因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后,将一定量的微生物悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落(图1）。

微生物实验中的接种分离和培养操作步骤

微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤 微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤 一、目的要求 1、掌握各种分离、接种方法。 2、掌握无菌操作基本环节。 二、实验说明 微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。 三、实验材料 1、恒温培养箱。 2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。 3、培养基（上次实验配制的）。 4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。 四、方法步骤

（一）接种的操作 1、斜面接种（接金黄葡萄球菌） （1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。 （2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。 （3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。 （4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。 （5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。 （6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。 （7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。。 （7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。 （8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。 （9）将接种环烧红灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。 2、液体接种

实验3：细菌的分离与纯化

实验 3 微生物的纯种分离培养微生物广泛地分布在自然界的土样、水体、空气、动植物体表及人体、动物体的排泄物中。它们以单个的菌体、无性孢子和芽孢的形式存在。由于单一的自然界环境并不能完全满足微生物对水、空气、营养物质、温度、pH的综合要求，它们往往以散居”的状态出现，而不能形成人们肉眼可直接观察到菌落。不同的自然环境中，微生物的种类和数量差异很大。肥沃的土壤，富养化的水体，是许多微生物麇集、孳生的场所，在这里存活着能分解淀粉、蛋白质、脂肪、纤维素、木质素、果胶、农药、含磷有机物（卵磷脂、肌醇、核酸等）、石油以及溶解铜矿的细菌、放线菌、真菌等多种类的微生物，如何根据微生物的生理要求，按照人类的需求，将它们从自然界中分离出来，获得纯种，发挥微生物的特长为人类的生产和生活服务，是微生物研究中最基础的实验技术。 一、实验目的： 1．学会将混杂的各种微生物分离成纯种，统计分析样品中微生物的种类和数量的方法。 2．学会从菌落及培养特征区分细菌、酵母菌、放线菌和霉菌。 3．学会好氧微生物平板及斜面培养的方法。 二、实验原理： 在自然界中，微生物的种类很多，数量很大，为了获得单个菌体，首先必须把要分离的材料进行适当的释放，按其生长所需要的条件，使其在平板上，由一个菌体繁殖成单个菌落，这样，就能从中挑选出所需要的纯种，由于细菌、放线菌和霉菌所要求的营养条件不同，利用不同的培养基制成平板进行分离，然后从菌落形态上的差异，可以把细菌、放线菌和霉菌三大类群区分并可计算出其数量，分别接种到试管斜面上，然后，在平板上反复进行分离培养，最后可获得纯种。三、实验材料和用具： 1．材料 （1）土壤样品 （ 2 ）培养基： ①牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏蛋白胨培养基（% ）牛肉膏0.3-0.5g 蛋白胨1.0g NaCl 0.5g 琼脂2.0g 蒸馏 水100mL pH 7.2-7.4 ，0.1Mpa 压力，灭菌20-30分钟。配制液体培养基时不加琼脂；半固体培养基加0.3-0.5%琼脂。该培养基为多数细菌通用培养基，可用于菌种的分离纯化及保藏斜面。 2．用具 无菌培养皿、无菌吸管、无菌水、酒精灯、接种环、接种针、火柴等。 四、实验方法：1．稀释涂布平板法： （1）倒平板 彳将灭菌的培养基加热融化，倒平板。琼脂是固体培养的支持物，它在95 C融化，40C以下凝固，将已灭菌

实验二微生物的分离、纯化和接种

实验二微生物的分离、纯化和接种 微生物的分离、纯化 1、目的要求 1.1了解微生物分离和纯化的原理 1.2掌握常用的纯化分离微生物的方法 2、基本原理 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。本实验采用平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、pH值、温度和溶解氧等要求，或者加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 微生物在固体培养基生长形成的单个菌落可以是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术来完成。而纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。 本实验将在混合有几种微生物菌液中分离纯化出两种微生物来。 3、实验材料 3.1培养基 肉汤培养基（固体）。

3.2溶液或试剂 盛4.5ml无菌水的试管，其中有一只盛有玻璃珠。 3.3仪器或其他用具 无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，涂布器等。 4流程 倒平板制备梯度稀释液涂布（或划线法）培养挑单菌落保存。 5、步骤 5.1平板划线分离法 5.1.1倒平板 倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拔出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml,加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后置于桌面上，待凝固后即成平板(教材p367图13-14)。并用记号笔标明培养基名称、菌液编号和试验日期。 5.1.2划线 在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取菌悬液一环在平板上划线(教材p367图13-15)。划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。

微生物预习实验报告

微生物的分离纯化及鉴定 一、基本原理 微生物的分离纯化是研究微生物的基本方法。将特定的微生物个体从群体中或从混杂的微生物群体中分离出来的技术叫作分离；在特定环境中只让1种来自同一祖先的微生物群体生存的技术叫作纯化。 为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。 土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量和种类都是极其多样的，因此，土壤是我们开发利用微生物资源的重要基地，可以从其中分离、纯化到许多有用的菌株。 二、实验器材 1、培养基：高氏1号琼脂培养基，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基，PDA 培养基 2、其他：盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，10％酚，无菌培养皿，无菌室，培养箱，高压蒸汽灭菌锅，记号笔等 3、材料：土壤（若未分离出想要得到的菌，则再加其他材料） 三、培养基的配方及配制步骤 1、高氏1号培养基（1000ml，培养放线菌）：可溶性淀粉（20g），KNO3（1g），K2HPO4（0.5g），MgSO4·7H2O（0.5g），NaCl（0.5g），FeSO4·7H2O（0.01g），琼脂20g，pH=7.4-7.6，121℃灭菌20min。和改良的差别就在于有没有FeSO4· 7H2O 高氏常常配完后变成褐色也是由于Fe2+氧化为Fe3+的关系，所以常常有人用螯合的FeSO4，防止氧化。称量和溶化按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需其他各类培养基水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。然后再称取其他各成分，并依次溶化，对微量成分FeSO4 ．7 H2 O可先配成高浓度的贮备液，按比例换算后再加入。待所有试剂完全溶解后，补充水分到所需的总体积。配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。 2、牛肉膏蛋白胨培养基（1000ml，分离细菌） 牛肉膏0.5g 蛋白胨1g 氯化钠0.5g 琼脂2g 蒸馏水100mL pH 7.0～7.2 灭菌1.05kg/cm2，22min 按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接