EDTA抗凝剂简易配制法
EDTA抗凝剂简易配制法
【关键词】饱和;抗凝;溶解度
常用EDTA-Na 2 抗凝剂的浓度是15g/L,每0.4ml干燥后可抗凝5ml血液 [1] 。EDTA-Na 2 的溶解度较大,22℃时可达11.1克,其有效抗凝浓度为1~2mg/ml,通过计算得知100ul(约两滴)饱和溶液可抗凝5~10ml血液,由于EDTA-Na 2 的溶解度受Nac1影响不大,为防止溶血在实践中我们用500毫升生理盐水加56克EDTA-Na 2 配制成饱和溶液,每份标本滴加3~5滴直接使用,取得了令人满意的效果。
1.材料和方法
1.1对象:1999年~2007年潍坊市无偿献血者。
1.2试剂:ELISA试剂盒HBsAg购自厦门新创和上海科华公司,抗-HCV购自厦门新创和上海科华公司,抗-HIV购自北京吉比艾和北京万泰公司,TP-ELISA购自北京中生和吉比艾公司,ALT活性试剂盒购自北京中生和浙江东瓯公司。
1.3仪器:TECAN全自动酶免加样器,FAME全自动酶免分析系统。
1.4方法:配制方法将EDTA-Na 2 粉末直接加入到生理盐水瓶内边加边摇匀直到瓶子底部有少许晶体不能再溶解为止,静置稳定片刻后即为EDTA-Na 2 饱和溶液。本溶液用普通塑料滴管滴加2~3滴即可,当血液沿试
管内壁下流时由于冲击作用自动与抗凝剂混合均匀勿需再人为摇匀。每人留取两份标本,一份用本法抗凝,一份非抗凝,两份标本用同一种试剂和方法检验,阳性者均做双孔复试。抗-HIV阳性标本是向同一个人的两份等量标本中加入等量抗-HIV阳性对照物制得。将得到的结果对比分析。所有操作均按试剂盒说明书和仪器操作规程严格进行。
2.结果(见表1)
表1抗凝和非抗凝标本的检验结果比较
注:各组阳性标本中均包含10例弱阳性标本。
3.讨论
3.1由(上表可看出)抗凝标本和非抗凝标本检验结果完全相符,二者之间无差异。
3.2乙二胺四乙酸盐对血细胞和血小板形态影响很小,适用于一般血液学检查,稍微过量不影响检验结果。在使用中如果抗凝效果不佳可多加一滴,冬天温度低EDTA盐饱和度减小,可适当加温或者多加1~2滴来提高抗凝效果。从理论上讲2滴饱和溶液可抗凝5~10ml血液,在实践中我们发现个别标本抗凝效果不很理想,加3-5滴可取得最佳效果,最多不能超过8滴。
3.3本方法我站一直使用多年,实际配制时可称取56克EDTA-Na 2 粉末装入一次性纸杯或剪开的塑料瓶中作好标记,用作好标记的自制容器量取56克稍多一点的EDTA-Na 2 粉末直接加到500毫升生理盐水中配制成饱和溶液,
实践证明简便易行、结果准确,同样也可用于其他ELISA检验和大部分以血浆为标本的检验项目。
参考文献
[1]赵桂芝.临床检验.北京:人民卫生出版社,2001.7.
最新常用抗凝剂的配制和使用
常用抗凝剂的配制及用法 在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。 一、肝素 （1）肝素抗凝作用原理 肝素的抗凝作用很强 ,作死亡复苏等实验时 ,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。 注意事项：做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！ （2）配制和用量 纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液（按Img等于125U, 10~20U能抗1 ml血液计）。但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0. 1毫升于试管内，100°C烘干，每管能抗凝5?10ml血液。也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁, 直接抽血至注射器内而使血液不凝。在动物实验作全身抗凝时, 一般剂量为：大白鼠 2. 5?3. 0mg/200?300g 体质量，兔 10mg／kg 体质量，狗 5?10mg／kg 体质量。肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。市售的肝素钠溶液每毫升含肝素 12500U,相当于100mg 二、草酸盐合剂 （1 ）原理 草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3： 2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。 （2）配制方法及用量 草酸铵1. 2g、草酸钾0. 8g、福尔马林1. 0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂 0. 1ml （即相当草酸铵1. 2mg草酸钾0. 8mg）。根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。如取0. 5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。 （3）注意事项 草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。 三、枸櫞酸钠 常配成3?5%水溶液。也可直接加粉剂，每毫升血加 3?5mg即可达到抗凝目的。 枸櫞酸钠可使钙失去活性，防止凝血。但其抗凝作用较差，碱性较强，不宜作化学检验之用。仅可用于红细胞沉降速度测定。急性血压测定实验所用枸櫞酸钠为5? 6％溶液。 四、草酸钾 （一）原理和注意事项 草酸钾为最常用的抗凝剂。其与血液混合后可迅速与血液中的钙离子结合，形成不溶解的草酸钙，
抗凝剂的使用
几种常用抗凝剂的合理使用 应用物理或化学方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。能够阻止血液凝固的化学试剂或物质，称为抗凝剂或抗凝物质。抗凝剂的种类很多，性质各异。因此，必须根据检验目的恰当选择，才能获得预期效果。现将我院临床检验常用抗凝剂的种类及使用方法简介如下。 一、枸橼酸钠：枸橼酸钠可与血液中钙离子形成可溶性螯合物从而阻止血液凝固。常用于临床检验中凝血象的检查，其使用浓度为109mmol/l，例如我实验室APTT、PT的检查，抗凝剂与血液比例为1：9。也用于血沉的测定，抗凝剂与血液比例为1：4。 二、乙二胺四乙酸盐（EDTA）：EDTA的二钠、二钾和三钾盐，均可与血中钙离子形成螯合物，从而阻止血液凝固。通常配成15g/l水溶液，用于实验室使用。EDTA盐对血小板形态和血细胞形态影响很小，因此适用于血液常规检查，特别是血小板计数，但影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，故不适于做凝血象检查和血小板功能试验。此外，此抗凝剂特别适用于红细胞比积测定，室温放置48小时红细胞体积不变。因此，我实验室EDTA—K2抗凝的全血用于血常规检查。 三、肝素：肝素与抗凝血酶Ⅱ一起，低浓度时抑制凝血因子IXa5、PF3之间的作用，加强抗凝血酶Ⅲ（AT—Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用。因此，肝素具有抗凝能力强，不影响血细胞体积，不易溶血等优点，是一种较好的抗凝剂。可用于红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞比积测定和多种生化分析，也是抗血栓药物之一。但过量肝素可引起白细胞聚集和血小板减少，故不适用于白细胞分类和血小板计数，更不能用于凝血象检查。由于肝素抗凝时间短，久置易失效，价格昂贵，所以凡能使用普通抗凝剂者，一般不用肝素。如用肝素抗凝的血液，就应在短时间内完成检测。我实验室血流变检测和血气分析用肝素作为抗凝剂。 四、草酸钠：草酸钠可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。草酸钠通常用 0.1mmol/l浓度，与血液按1：9比例使用，主要用于凝血象检查。现在我实验室已淘汰。
常用抗凝剂的配制及用法
在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。之答禄夫天创作 一、肝素 （1）肝素抗凝作用原理 肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,经常使用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。 （2）配制和用量 纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U， 10~20U能抗1 ml血液计)。但由于肝素制剂的纯度高低以及其保管时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg／kg体质量，狗5～10mg／kg体质量。肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不成采取肝素。市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。
二、草酸盐合剂 （1）原理 草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积坚持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。 （2）配制方法及用量 草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg，草酸钾0．8mg)。根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。如取0．5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。 （3）注意事项 草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必须的钙离子，而达到抗凝目的。用时注意加的量应适中，不克不及过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。不适用于血液内钙或钾的测定，也不克不及用于血液非蛋白氮测定。 三、枸櫞酸钠 常配成3～5%水溶液。也可直接加粉剂，每毫升血加3～5mg，即可达到抗凝目的。
常用抗凝剂的配置、用法和选择
常用抗凝剂的配置、用法和选择常用抗凝剂大致分为三类，一类为化学药品。其作用为消除钙离子作用。使血液中的钙转变成可溶性的，但不离子化的络合物，药物如枸橼酸钠，草盐酸和二乙胺四乙酸二钠等。另一类为生物制剂，如肝素，其作用是阻止凝血酶的生成，从而抗凝。第三类为离子交换剂，系采用物理性方法防治血液凝固。 1•枸橼酸钠(Sodium citrate)：溶于水，不溶于醇。可直接用本品粉末，每ml血液加3~5mg,用于红细胞沉降率测定。按30mg/ml的枸橼酸钠溶液 1 份，血液9 份比例混合剂可使血液不凝固。 因本贫碱性较强，可用枸橼酸调节pH 接近7.0，所含成份为枸橼酸钠56mg/ml，枸橼酸5mg/ml和葡萄糖29mg/ml，成为复方枸橼酸钠抗凝剂，常用于各种动物连接血压计时的抗凝。现用的枸橼酸钠有两种： (1)枸橼酸三钠(Trisodium citrare):有两种结晶水含量不同的成品，一种是2Na3C e H5O7 • IIH2O,其与血浆成等渗浓度为 3.8%;另一种是 Na3C6H5O9・2H2O与血浆成等渗浓度为3.2% (2.5%~4.0%),均为碱性，枸橼酸或其盐与钙作用生成可溶性络合物，当制成 2.5%溶液时，Ph 为7.5。最低的抗凝浓度为0.2%，一般在血液中的最终浓度应为 0.4%~0.6%，是长久以来国际上最通用的抗凝剂。 ( 2) 枸橼酸二钠( Disodium citrare) :因其中含有大量的枸橼酸离子，属于酸性的枸橼酸。 3.5%溶液的pH 为 4.5，其优点是：简化了配置保存液的处方及其配制手续；防止高压消毒时葡萄糖的焦化现象，但大量输血时，枸橼酸钠可能产生毒性反应。 2. 草酸钾(Potassium oxalate)和草酸钠(Sodium oxalate):草酸溶于水，微溶于醇，具有溶解度大，抗凝作用强的特点。体外抗凝时1ml 血液用草酸钾1~2ml,微量检验用血较少时，可配成20mg/ml溶液。也可根据需要，用100mg/ml 草酸钾溶液放入试管中摇动，使其分散浸湿管壁周围，置60C烘箱内烤干。草酸钾溶液0.1ml (相当于固体10mg)可阻抗5ml血液凝固。烘烤温度若超过80C，可使草酸钾分解成碳酸钾而失去抗凝作用。由于本品抗凝系于血液内的钙离子结合形成不溶性草酸钙而阻止血凝，故含钾、钙的血样不能用其作抗凝剂。此外，草酸钾对乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶及淀粉酶也有抑制作用。 草酸钠抗凝作用于草酸钾相似常用于凝血因子的测定；不适用于含钠、钙的血样检查。 3. 二乙胺四乙酸二钠 ( Disodium ethylenediaminetera-acetate,EDTA-2Na)
血液抗凝剂配制的疑问
EDTA抗凝剂配制的疑问？ 各位战友好！我要配制EDTA抗凝剂，查了一下资料，有人说EDTA浓度应该是15gEDTA加到100ml水中；有人说EDTA浓度应该是15gEDTA加到1000ml水中。请各位指点，到底EDTA的浓度应该是多少？ 每1ml血液中应该加入多少EDTA抗凝剂呢？ 谢谢！ 我找到一个资料，贴在这里，各位发表一下看法！ 常用血液抗凝剂的应用 更多相关新闻时间:2009-11-5 14:37:12,点击:578 实验室中常用的抗凝剂有肝素、乙二胺四乙酸盐（EDTA盐）、枸橼酸盐、草酸盐等4种，实际应用中要根据不同的需要进行选择，才能获得理想的效果。现将它们的应用特点分述如下： 一、肝素 抗凝是用于血液化学成分检测的首选抗凝剂。肝素是一种含有硫酸基团的粘多糖，是分散相物质平均分子质量为15000。其抗凝原理主要是通过与抗凝血酶Ⅲ结合引起抗凝血酶Ⅲ构型发生变化，加速凝血酶-凝血酶复合体形成而产生抗凝作用。此外，肝素还能借助血浆辅助因子（肝素辅助因子Ⅱ）来抑制凝血酶。常用肝素抗凝剂是肝素的钠、钾、锂、铵盐，其中以肝素锂最好，但其价格较贵，钠、钾盐会增加血液中的钠、钾含量，铵盐会增加尿素氮的含量。通常用肝素抗凝的剂量为10.0～12.5 IU/ml血液。 肝素对血液成分干扰较少，不影响红细胞体积，不引起溶血，适用于做红细胞渗透性试验、血气、血浆渗透量、红细胞压积及普通生化测定。但肝素具有抗凝血酶作用，不适合做血凝试验。另外，肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少，所以不适合做白细胞分类和血小板计数，更不能用于止血检验。此外，肝素抗凝血不能用于制作血涂片，因为Wright 染色后出现深蓝色背景，影响显微镜减产。肝素抗凝血应于短时间内使用，否则放置过久血液又可凝固。 二、乙二胺四乙酸盐(EDTA盐) EDTA能与血液中Ca2+结合成螯合物，凝血过程被阻断，血液不能发生凝固。EDTA 盐有钾、钠、锂盐，国际血液学标准化委员会推荐使用的是EDTA-K2，其溶解度最高，抗凝速度最快。EDTA盐通常配成质量分数是15%的水溶液，每ml血液加1.2mgEDTA,即每5ml血液加0.04ml 15%EDTA溶液。EDTA盐可在100℃下干燥，抗凝作用不变。 此抗凝剂不影响白细胞计数及大小，对红细胞形态影响最小，并且可以抑制血小板的聚集，适用于一般血液学检测。但如果抗凝剂浓度过高，渗透压上升，会造成细胞皱缩。EDTA溶液pH与盐类关系较大，低pH可使细胞膨胀。EDTA-K2可使红细胞体积轻度膨胀，采血后短时间内平均血小板体积非常不稳定半小时后趋于稳定。EDTA-K2使Ca2+、Mg2+下降，同时使肌酸激酶、碱性磷酸酶降低，EDTA-K2的最佳浓度为1.5mg/ml血液，如果血少，中性粒细胞会肿胀分叶消失，血小板会肿胀、崩解，产生正常血小板的碎片，使分析结果产生错误。EDTA由于能抑制或干涉纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合，不适于血凝和血小板功能检测，也不适用于钙、钾、钠及含氮物质的测定。此外，EDTA能影响某些
血液抗凝剂的特点及应用
实验室常用血液抗凝剂的特点及应用 在实验室检验中，有许多检测项目的血液标本是需要抗凝才可以检测的。而抗凝剂种类较多，实际应用中要根据不同的需要进行选择，才能获得理想的效果。实验室中常用的抗凝剂有肝素、乙二胺四乙酸盐（EDTA盐）、枸橼酸盐、草酸盐等4种，现将它们的特点及应用分别叙述如下： 一、肝素 抗凝是用于血液化学成分检测的首选抗凝剂。肝素是一种含有硫酸基团的粘多糖，是分散相物质平均分子质量为15000。其抗凝原理主要是通过与抗凝血酶Ⅲ结合引起抗凝血酶Ⅲ构型发生变化，加速凝血酶-凝血酶复合体形成而产生抗凝作用。此外，肝素还能借助血浆辅助因子（肝素辅助因子Ⅱ）来抑制凝血酶。常用肝素抗凝剂是肝素的钠、钾、锂、铵盐，其中以肝素锂最好，但其价格较贵，钠、钾盐会增加血液中的钠、钾含量，铵盐会增加尿素氮的含量。通常用肝素抗凝的剂量为10.0～12.5 IU/ml血液。 肝素对血液成分干扰较少，不影响红细胞体积，不引起溶血，适用于做红细胞渗透性试验、血气、血浆渗透量、红细胞压积及普通生化测定。但肝素具有抗凝血酶作用，不适合做血凝试验。另外，肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少，所以不适合做白细胞分类和血小板计数，更不能用于止血检验。此外，肝素抗凝血不能用于制作血涂片，因为Wright染色后出现深蓝色背景，影响显微镜减产。肝素抗凝血应于短时间内使用，否则放置过久血液又可凝固。 二、乙二胺四乙酸盐(EDTA盐) EDTA能与血液中Ca2+结合成螯合物，凝血过程被阻断，血液不能发生凝固。EDTA盐有钾、钠、锂盐，国际血液学标准化委员会推荐使用的是EDTA-K2，其溶解度最高，抗凝速度最快。EDTA盐通常配成质量分数是15%的水溶液，每ml血液加1.2mgEDTA,即每5ml血液加0.04ml 15%EDTA溶液。EDTA盐可在100℃下干燥，抗凝作用不变。 此抗凝剂不影响白细胞计数及大小，对红细胞形态影响最小，并且可以抑制血小板的聚集，适用于一般血液学检测。但如果抗凝剂浓度过高，渗透压上升，会造成细胞皱缩。EDTA溶液pH与盐类关系较大，低pH可使细胞膨胀。EDTA-K2可使红细胞体积轻度膨胀，采血后短时间内平均血小板体积非常不稳定半小时后趋于稳定。EDTA-K2使 Ca2+、Mg2+下降，同时使肌酸激酶、碱性磷酸酶降低，EDTA-K2的最佳浓度为1.5mg/ml血液，如果血少，中性粒细胞会肿胀分叶消失，血小板会肿胀、崩解，产生正常血小板的碎片，使分析结果产生错误。EDTA由于能抑制或干涉纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合，不适于血凝和血小板功能检测，也不适用于钙、钾、钠及含氮物质的测定。此外，EDTA能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子，故不适合制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。 三、枸橼酸盐 枸橼酸盐主要是枸橼酸钠，其抗凝原理是能与血液中的Ca2+结合形成螯合物，使Ca2+失去凝血功能，凝血过程被阻断，从而阻止血液凝固。枸橼酸钠有Na3C6H5O7·2H2O和2Na3C6H5O7·11H2O两种晶体，通常用前者配成3.8%或3.2%的水溶液，与血液按照1:9体积混合。 大部分凝血试验都可用枸橼酸钠抗凝，它有助于Ⅴ因子和Ⅷ因子的稳定，并且对平均血小板体积及其他凝血因子影响较小，可用于血小板功能分析。枸橼酸钠细胞毒性较小，也是输血中血液保养液的成分之一。但是，枸橼酸钠6mg才能抗凝1ml血液，碱性强，不适用于血液化验和生化测验。 四、草酸盐 草酸盐也是常用的抗凝剂，优点是溶解度大，作用原理是溶解后解离的草酸根与标本中的Ca2+形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血功能，凝血过程被阻断。常用的草酸盐抗凝剂种类有草酸钠、草酸钾和草酸铵，草酸钠的常用浓度为O.1 mol/L，与血液按1:9比例使用。但是，高浓度k+或Na+易使血细胞脱水皱缩，而草酸铵则可使血细胞膨胀，故测定血细胞比容时用草酸铵与草酸钾或草酸钠两者适当比例混合的抗凝剂，恰好不影响红细胞的形态和体积。常用于血液生化测定，但不适用于K+、Ca 2+的测定。由于生成草酸钙沉淀，红细胞会出现锯齿状，白细胞出现空泡，淋巴细胞及单核细胞会变形，不宜做血片检查。草酸盐可使血小板聚集，并影响白细胞形态，不能用于白细胞和血小板分类计数。 附录四常用抗凝剂的配制及用法 在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。 一、肝素 （1）肝素抗凝作用原理 肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。
最新常用抗凝剂的配制和使用
______________________________________________________________________________________________________________ 常用抗凝剂的配制及用法 在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。 一、肝素 （1）肝素抗凝作用原理 肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。 注意事项：做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！ （2）配制和用量 纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml血液计)。但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg／kg体质量，狗5～10mg／kg体质量。肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。 二、草酸盐合剂 （1）原理 草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。 （2）配制方法及用量 草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg，草酸钾0．8mg)。根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。如取0．5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。 （3）注意事项 草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。
血细胞的分离实验技术
血细胞的分离实验技术 采血 （一）材料与试剂 1．抗凝剂 （1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻挡凝血酶原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻挡血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1 000U/ml，市售肝素多为100U~126U／mg。 （2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是一种螯合剂。用生理盐水配制成4％的溶液备用。 （3）阿氏液（Alsever液），配方如下： 枸橼酸钠（Na3 C6 H5 O7 5H2 O）0.80g 枸橼酸0.0325g 葡萄糖2.05g 氯化钠0.42g H2 O 加至100.00ml 混匀溶解后，114.3℃高压蒸汽灭菌10min备用。 阿氏液中既含有枸橼酸钠抗凝剂，又含有细胞生存的养分，所以它既可做抗凝剂，又可做血细胞的保存液。 2．针头依据不同动物和采血部位，采纳不同型号的针头，用前必需灭菌或消毒。
3．采血容器注射器或三角瓶等。 4．采血动物。 （二）操作方法 1．采血法各种动物采血方法不一。马、牛、羊等大动物一般从 颈静脉采血，猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血，家禽由翼下静 脉或心脏采血，兔由心脏或耳静脉采血，犬由颈静脉或四肢静脉采血，豚鼠由心脏采血，小白鼠则可断尾或剪断腋下血管或剪断眼球 采血。 2．抗凝采集血液最关键的问题是抗凝，采纳什么方法进行抗凝，则依据试验的要求和条件而定。最常用的方法如下： （1）肝素抗凝：采血时，使每ml血液含15U~20U肝素即可。计 算采集的血液量，按1 000U/ml的量加入肝素，直接放入采血容器中，采血时，边采血边轻轻摇动，使抗凝剂和血液混匀。对于采少 量的血液或小动物采血，可直接用注射器抽取肯定量的肝素液，再 采血直接抗凝。 （2）EDTA抗凝：采血前，用灭菌生理盐水将EDTA配制成4％溶液，然后按预采血液的量，以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液 体量于采血容器内。采血，并不断摇动采血容器，使之混匀。 （3）玻璃珠法：预先将适量的玻璃珠（依据采血量多少而定）清 洗后，装入采血容器中，灭菌后备用。采血过程中，边采边摇采血瓶，以使小玻璃珠在血液中滚动，以机械地除去纤维蛋白，使血液
常用抗凝剂的配制及用法
在医学实验中常需动物的全身抗凝,采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗 凝剂抗凝;对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质; 一、肝素 1肝素抗凝作用原理 肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂,肝素的 抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力,阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用,从而使血液不发生凝固; 2配制和用量 纯的肝素10mg能抗凝65~125ml血液按lmg等于125U,10~20U能抗1ml血液计;但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等,因而其抗凝效果也不相同; 一般可配成1％肝素生理盐溶液,用时取0．1毫升于试管内,100℃烘干,每管能抗凝5～10ml血液;也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁,直接抽血至注射器内而使血液不凝;在动物实验作全身抗凝时,一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～3 00g体质量,兔10mg／kg体质量,狗5～10mg／kg体质量;肝素可改变蛋白质等电点,因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时,不可采用肝素;市售的肝素 钠溶液每毫升含肝素12500U,相当于100mg; 二、草酸盐合剂 1原理 草酸胺能使血细胞略为膨大,而草酸钾能使血细胞微缩小,因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置,可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖;此抗凝剂最适于作红细胞比积测定;
2配制方法及用量 草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml即相当草酸铵1．2mg,草酸钾0．8mg;根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用;如取0．5ml于试管,烘干后每管可使5ml血不凝固; 3注意事项 草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子,而达到抗凝目的;用时注意加的量应适中,不能过多,以免妨碍去蛋白质血滤液的制取;不适用于血液内钙或钾的测定,也不能用于血液非蛋白氮测定; 三、枸橼酸钠 常配成3～5%水溶液;也可直接加粉剂,每毫升血加3～5mg,即可达到抗凝目的; 枸橼酸钠可使钙失去活性,防止凝血;但其抗凝作用较差,碱性较强,不宜作化学检验之用;仅可用于红细胞沉降速度测定;急性血压测定实验所用枸橼酸钠为5～6％溶液; 四、草酸钾 一原理和注意事项 草酸钾为最常用的抗凝剂;其与血液混合后可迅速与血液中的钙离子结合,形成不溶解的草酸钙,使血液不凝固;常用于非蛋白氮测定,但不适用于测定钾和钙;草 酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性,故应注意; 二配制及使用方法
EDTA抗凝剂简易配制法
EDTA抗凝剂简易配制法 【关键词】饱和;抗凝;溶解度 常用EDTA-Na 2 抗凝剂的浓度是15g/L,每0.4ml干燥后可抗凝5ml血液 [1] 。EDTA-Na 2 的溶解度较大,22℃时可达11.1克,其有效抗凝浓度为1~2mg/ml,通过计算得知100ul(约两滴)饱和溶液可抗凝5~10ml血液,由于EDTA-Na 2 的溶解度受Nac1影响不大,为防止溶血在实践中我们用500毫升生理盐水加56克EDTA-Na 2 配制成饱和溶液,每份标本滴加3~5滴直接使用,取得了令人满意的效果。 1.材料和方法 1.1对象:1999年~2007年潍坊市无偿献血者。 1.2试剂:ELISA试剂盒HBsAg购自厦门新创和上海科华公司,抗-HCV购自厦门新创和上海科华公司,抗-HIV购自北京吉比艾和北京万泰公司,TP-ELISA购自北京中生和吉比艾公司,ALT活性试剂盒购自北京中生和浙江东瓯公司。 1.3仪器:TECAN全自动酶免加样器,FAME全自动酶免分析系统。 1.4方法:配制方法将EDTA-Na 2 粉末直接加入到生理盐水瓶内边加边摇匀直到瓶子底部有少许晶体不能再溶解为止,静置稳定片刻后即为EDTA-Na 2 饱和溶液。本溶液用普通塑料滴管滴加2~3滴即可,当血液沿试 管内壁下流时由于冲击作用自动与抗凝剂混合均匀勿需再人为摇匀。每人留取两份标本,一份用本法抗凝,一份非抗凝,两份标本用同一种试剂和方法检验,阳性者均做双孔复试。抗-HIV阳性标本是向同一个人的两份等量标本中加入等量抗-HIV阳性对照物制得。将得到的结果对比分析。所有操作均按试剂盒说明书和仪器操作规程严格进行。 2.结果(见表1)